專利名稱：組蛋白脫乙?；傅囊种苿┑闹谱鞣椒?br> 背景技術(shù)：
細(xì)胞核中的DNA作為致密染色質(zhì)結(jié)構(gòu)的級(jí)系存在。
染色質(zhì)中的基本重復(fù)單元為核粒。核粒由細(xì)胞核中蛋白質(zhì)的組蛋白八聚體組成，在細(xì)胞核周圍DNA被該八聚體包覆兩層。DNA在細(xì)胞核中的有序包裝在基因調(diào)節(jié)的功能方面起著重要作用。對(duì)組蛋白的共價(jià)修飾在改變?nèi)旧|(zhì)高級(jí)結(jié)構(gòu)和功能以及最終基因表達(dá)中起著關(guān)鍵性的作用。組蛋白的共價(jià)修飾，比如乙?；ㄟ^酶介導(dǎo)的過程發(fā)生。
通過抑制核酶組蛋白脫乙?；?HDAC)來調(diào)節(jié)基因表達(dá)是數(shù)種可能影響染色質(zhì)活性的調(diào)節(jié)機(jī)制中的一種。組蛋白核乙?；膭?dòng)態(tài)體內(nèi)穩(wěn)態(tài)可以通過對(duì)抗酶組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶(HAT)和組蛋白脫乙?；?HDAC)的活性來進(jìn)行調(diào)節(jié)。非轉(zhuǎn)錄活性染色質(zhì)可以通過具有低濃度乙?；M蛋白的核粒得到表征。乙酰化降低了組蛋白的正電荷，從而擴(kuò)大了核粒結(jié)構(gòu)和促進(jìn)了轉(zhuǎn)錄因子與DNA的相互作用。乙酰基的除去復(fù)原正電荷，壓縮核粒的結(jié)構(gòu)。組蛋白的乙?；磻?yīng)可以活化DNA轉(zhuǎn)錄作用，增強(qiáng)基因表達(dá)。組蛋白脫乙?；缚梢阅孓D(zhuǎn)該過程并且可以用來壓制基因表達(dá)。參見，例如Grunstein，Nature 389，349-352(1997)；Pazin等人，Cell 89，325-328(1997)；Wade等人，TrendsBiochem.Sci.22，128-132(1997)； 和Wolffe，Science 272，371-372(1996)。
發(fā)明概述本發(fā)明涉及作為組蛋白脫乙酰基酶(HDAC)的抑制劑的異羥肟酸衍生物。本發(fā)明化合物可以用于治療細(xì)胞增殖疾病，包括癌癥。本發(fā)明化合物還可以用于治療神經(jīng)變性疾病、精神分裂癥和中風(fēng)以及其它疾病。此外，本發(fā)明化合物具有抗原生動(dòng)物的性能。
發(fā)明詳述本發(fā)明化合物可以用于抑制組蛋白脫乙?；浮１景l(fā)明的第一實(shí)施方案為式I所示的化合物
其中a為0或者1；b為0或者1；m為0、1或者2；n為0、1、2、3、4或者5；和p為0、1、2或者3； 為環(huán)烷基、芳基、雜環(huán)基或者 X為C＝O或者S(O)2；R1選自H和(C1-C6)烷基；R2獨(dú)立地選自氧代、OH、(C＝O)aOb(C2-C10)烯基、(C＝O)aOb(C2-C10)炔基、NO2、(C＝O)aOb(C1-C6)烷基、CN、(C＝O)aOb(C3-C10)環(huán)烷基、鹵素、(C＝O)a-N(Ra)2、CF3、OH、NH-S(O)m-Ra、(C＝O)aOb-雜環(huán)基、(C＝O)aOb-芳基、S(O)m-Ra、NH(C＝O)Ra、N＝N-芳基-N(Ra)2、(C1-C6)烷基-芳基和雜環(huán)基，其中所述烷基、烯基、炔基、環(huán)烷基、芳基和雜環(huán)基任選地被1～3個(gè)Rb所取代；Ra獨(dú)立地選自H和(C1-C6)烷基；Rb獨(dú)立地選自氧代、NO2、N(Ra)2、OH、CN、鹵素、CF3和(C1-C6)烷基；或者其藥學(xué)上可接受的鹽或者立體異構(gòu)體。
本發(fā)明的第二實(shí)施方案為式I所示的化合物；其中 為苯基、雜環(huán)基或者 p為0或者1；R1為CH3；
并且所有的取代基和變量如第一實(shí)施方案中所定義；或者其藥學(xué)上可接受的鹽或者立體異構(gòu)體。
本發(fā)明的第三實(shí)施方案為式I所示的化合物；其中R2獨(dú)立地選自NO2、(C＝O)aOb(C1-C6)烷基、CN、(C＝O)aOb(C3-C10)環(huán)烷基、鹵素、(C＝O)a-N(Ra)2、CF3、OH、NH-S(O)m-Ra、(C＝O)a-雜環(huán)基、(C＝O)a-芳基、S(O)m-Ra、NH(C＝O)Ra、N＝N-芳基-N(Ra)2、(C1-C6)烷基-芳基和雜環(huán)基，所述烷基、環(huán)烷基、芳基和雜環(huán)基任選地被1～3個(gè)Rb所取代；Ra獨(dú)立地選自H和(C1-C6)烷基；Rb獨(dú)立地選自鹵素，CF3和(C1-C6)烷基；并且所有取代基和變量如第二實(shí)施方案中所定義；或者其藥學(xué)上可接受的鹽或者立體異構(gòu)體。
本發(fā)明化合物可以具有不對(duì)稱中心、手性軸和手性面(如E.L. Eliel和S.H.Wilen，Stereochemistry of Carbon Compounds，John Wiley &Sons，New York，1994，pages 1119-1190中所述)，并且可以作為外消旋體、外消旋混合物和作為單個(gè)非對(duì)映異構(gòu)體以及所有可能的異構(gòu)體及其混合物(包括光學(xué)異構(gòu)體)存在，所有上述立體異構(gòu)體都包括在本發(fā)明之內(nèi)。此外，在此公開的化合物可以作為互變異構(gòu)體存在，并且兩種互變異構(gòu)形式都包括在本發(fā)明范圍之內(nèi)，即便其中僅僅描述了一種互變結(jié)構(gòu)。
當(dāng)任何變量(例如，R1和R2等等)在任何結(jié)構(gòu)中出現(xiàn)多于一次時(shí)，在各次出現(xiàn)時(shí)其定義獨(dú)立于所有其它出現(xiàn)時(shí)的定義。并且，只有當(dāng)組合能夠產(chǎn)生穩(wěn)定的化合物時(shí)，取代基和變量的組合才是允許的。從取代基中畫入環(huán)系統(tǒng)中的線表示所示鍵可以連接在任何可取代的環(huán)原子上。如果所述環(huán)系統(tǒng)為多環(huán)系統(tǒng)，在此意指該鍵僅僅連接在最接近的環(huán)上的任何適宜碳原子上。
應(yīng)當(dāng)理解，本發(fā)明化合物上的取代基和取代模式可以由本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員進(jìn)行選擇，從而提供化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定并且通過本領(lǐng)域熟知的工藝以及如下所述方法由易于獲得的原料可以輕易得到合成的化合物。如果取代基自身被多于一個(gè)基團(tuán)取代，應(yīng)當(dāng)理解，所述多個(gè)基團(tuán)可以在相同碳原子上或者在不同碳原子上，只要能獲得穩(wěn)定結(jié)構(gòu)即可。應(yīng)當(dāng)將措詞“任選地被一個(gè)或者多個(gè)取代基取代”理解為等同于措詞“任選地被至少一個(gè)取代基取代”，并且在優(yōu)選實(shí)施方案的情形中具有0～3個(gè)取代基。
本文中使用的“烷基”意指包括具有指定數(shù)目碳原子的支鏈和直鏈飽和脂族烴基。例如，C1～C10，如在“C1～C10烷基”中定義為包括在直鏈或者支鏈結(jié)構(gòu)中所有1、2、3、4、5、6、7、8、9或者10個(gè)碳原子的基團(tuán)。例如，“C1～C10烷基”具體包括甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、叔丁基、異丁基、戊基、己基、庚基、辛基、壬基和癸基等等。
術(shù)語“環(huán)烷基”是指具有指定數(shù)目碳原子的單環(huán)、二環(huán)或者多環(huán)飽和脂族烴基。例如，“環(huán)烷基”包括環(huán)丙基、甲基-環(huán)丙基、2，2-二甲基-環(huán)丁基、2-乙基-環(huán)戊基和環(huán)己基等等。在本發(fā)明實(shí)施方案中，術(shù)語“環(huán)烷基”包括以上剛剛描述的基團(tuán)，并且另外包括單環(huán)不飽和脂族烴基。例如，在此實(shí)施方案中所定義的”環(huán)烷基“包括環(huán)丙基、甲基-環(huán)丙基、2，2-二甲基-環(huán)丁基、2-乙基-環(huán)戊基、環(huán)己基、環(huán)戊烯基、環(huán)丁烯基和7，7-二甲基二環(huán)[2.2.1]庚基等等。
術(shù)語“亞烷基”是指具有指定數(shù)目碳原子的烴類二基。例如，“亞烷基”包括-CH2-和-CH2CH2-等等。
“烷氧基”表示經(jīng)氧橋連接的具有指定數(shù)目碳原子的環(huán)烷基或者非環(huán)烷基。由此，“烷氧基”包含以上烷基和環(huán)烷基的定義。
如果碳原子數(shù)目沒有明確說明，那么術(shù)語“烯基”是指含有2～10個(gè)碳原子和至少一個(gè)碳碳雙鍵的直鏈、支鏈或者環(huán)狀非芳香烴基。優(yōu)選存在一個(gè)碳碳雙鍵，并且可以存在至多四個(gè)非芳香碳碳雙鍵。由此，“C2-C6烯基”是指具有2～6個(gè)碳原子的烯基。烯基包括乙烯基、丙烯基、丁烯基、2-甲基丁烯基和環(huán)己烯基。烯基的直鏈、支鏈或者環(huán)部分可以含有雙鍵，并且如果表明為取代的烯基，那么可以被取代。
術(shù)語“炔基”是指含有2～10個(gè)碳原子和至少一個(gè)碳碳三鍵的直鏈、支鏈或者環(huán)狀烴基。其中可以存在至多三個(gè)碳碳三鍵。由此，“C2-C6炔基”是指具有2～6個(gè)碳原子的炔基。所述炔基包括乙炔基、丙炔基、丁炔基和3-甲基丁炔基等等。炔基的直鏈、支鏈或者環(huán)部分可以含有三鍵，并且如果表明為取代的炔基，那么其可以被取代。
在某些情形中，可以將取代基限定為具有包括零在內(nèi)的一定范圍的碳原子，比如(C0-C6)亞烷基-芳基。如果將芳基定義為苯基，那么該定義將包括苯基自身以及-CH2Ph、-CH2CH2Ph、和-CH(CH3)CH2CH(CH3)Ph等等。
本文中使用的“芳基”是指任何穩(wěn)定的在每個(gè)環(huán)中有至多7個(gè)原子的單環(huán)或者雙環(huán)碳環(huán)，其中至少一個(gè)環(huán)是芳香環(huán)。上述芳基的實(shí)例包括苯基、萘基、四氫萘基、2，3-二氫化茚基和聯(lián)苯基。在芳基取代基是二環(huán)并且一個(gè)環(huán)是非芳香環(huán)的情形中，可以理解，所述連接通過芳香環(huán)進(jìn)行。
在本文中使用的術(shù)語“雜環(huán)”或者“雜環(huán)基”表示4～10元芳香或者非芳香雜環(huán)，其中含有1～4個(gè)選自O(shè)、N和S的雜原子，并且其中包括雙環(huán)基團(tuán)。由此，“雜環(huán)基”包括以上提及的雜芳基以及其二氫和四氫類似物?！半s環(huán)基”的其它實(shí)例包括但不限于以下苯并咪唑基、苯并呋喃基、苯并呋咱基、苯并吡唑基、苯并三唑基、苯并噻吩基、苯并唑基、咔唑基、咔啉基、噌啉基、呋喃基、咪唑基、二氫吲哚基、吲哚基、吲哚嗪基(indolazinyl)、吲唑基、異苯并呋喃基、異氮雜茚基、異喹啉基、異噻唑基、異唑基、萘嘧啶基、二唑基、唑基、唑啉、異唑啉、氧雜環(huán)丁烷基、吡喃基、吡嗪基、吡唑基、噠嗪基、吡啶并吡啶基、噠嗪基、吡啶基、嘧啶基、吡咯基、喹唑啉基、喹啉基、喹喔啉基、四氫吡喃基、四氫噻喃基、四氫異喹啉基、四唑基、四唑并吡啶基、噻二唑基、噻唑基、噻吩基、三唑基、氮雜環(huán)丁烷基、1，4-二氧雜環(huán)己烷基、六氫氮雜?；⑦哙夯?、哌啶基、吡啶-2-酮基、吡咯烷基、嗎啉基、硫代嗎啉基、二氫苯并咪唑基、二氫苯并呋喃基、二氫苯并噻吩基、二氫苯并唑基、二氫呋喃基、二氫咪唑基、二氫吲哚基、二氫異唑基、二氫異噻唑基、二氫二唑基、二氫吡嗪基、二氫吡唑基、二氫吡啶基、二氫嘧啶基、二氫吡咯基、二氫喹啉基、二氫四唑基、二氫噻二唑基、二氫噻唑基、二氫噻吩基、二氫三唑基、二氫氮雜環(huán)丁烷基、亞甲基二氧基苯甲酰基、四氫呋喃基和四氫噻吩基及其N-氧化物。雜環(huán)基取代基可以經(jīng)碳原子或者雜原子進(jìn)行連接。如熟練的技術(shù)人員所理解，本文中使用的“鹵”或者“鹵素”意指包括氯(Cl)、氟(F)、溴(Br)和碘(I)。
在一種實(shí)施方案中，
為苯基、雜環(huán)基或者 在一種實(shí)施方案中，p為0或者1。
在另一實(shí)施方案中，p為0。
在一種實(shí)施方案中，X為C＝O。
在另一實(shí)施方案中，X為S(O)2。
在一種實(shí)施方案中R1為H。
在另一實(shí)施方案中，R1為CH3。
在一種實(shí)施方案中，R2獨(dú)立地選自氧代、OH、(C＝O)aOb(C2-C10)烯基、(C＝O)aOb(C2-C10)炔基、NO2、(C＝O)aOb(C1-C6)烷基、CN、(C＝O)aOb(C3-C10)環(huán)烷基、鹵素、(C＝O)a-N(Ra)2、CF3、OH、NH-S(O)m-Ra、(C＝O)aOb-雜環(huán)基、(C＝O)aOb-芳基、S(O)m-Ra、NH(C＝O)Ra、N＝N-芳基-N(Ra)2、(C1-C6)烷基-芳基和雜環(huán)基， 所述烷基、烯基、炔基、環(huán)烷基、芳基和雜環(huán)基任選地被1～3個(gè)Rb所取代。
在另一實(shí)施方案中，R2獨(dú)立地選自NO2、(C＝O)aOb(C1-C6)烷基、CN、(C3-C10)環(huán)烷基、鹵素、(C＝O)a-N(Ra)2、CF3、OH、NH-S(O)m-Ra、(C＝O)aOb-雜環(huán)基、(C＝O)aOh-芳基、S(O)m-Ra、NH(C＝O)Ra、N＝N-芳基-N(Ra)2、(C1-C6)烷基-芳基和雜環(huán)基，所述烷基、環(huán)烷基、芳基和雜環(huán)基任選地被1～3個(gè)Rb所取代。在另一實(shí)施方案中，當(dāng)R2為芳基時(shí)，所述芳基為苯基。在另一實(shí)施方案中，當(dāng)R2為雜環(huán)基時(shí)，所述雜環(huán)基選自 和 在一種實(shí)施方案中，Rb獨(dú)立地選自氧代、NO2、N(Ra)2、OH、CN鹵素、CF3和(C1-C6)烷基。
在另一實(shí)施方案中，Rb獨(dú)立地選自鹵素、CF3和(C1-C6)烷基。
本發(fā)明包括游離形式的式I化合物以及其藥學(xué)上可接受的鹽和立體異構(gòu)體。在此例證說明的一些具體化合物為胺化合物的質(zhì)子化鹽。術(shù)語“游離形式”是指為非鹽形式的胺化合物。本發(fā)明所包含的藥學(xué)上可接受的鹽不僅包括針對(duì)在此所述具體化合物而例證說明的鹽，而且包括游離形式的式I化合物的所有一般藥學(xué)上可接受的鹽。所述化合物具體鹽的游離形式可以通過應(yīng)用本領(lǐng)域已知的工藝進(jìn)行分離。例如，上述游離形式可以通過用適宜的稀堿水溶液處理所述鹽而重新得到，所述稀堿水溶液比如是稀NaOH、碳酸鉀、氨水和碳酸氫鈉水溶液。所述游離形式在某些物理性能上可以與其相應(yīng)的鹽形式存在某些不同，比如在極性溶劑中的溶解度，但是基于本發(fā)明目的，其酸和堿鹽是其它與其相應(yīng)的游離形式藥學(xué)上等同的鹽。
本發(fā)明化合物藥學(xué)上可接受的鹽，可以由含有堿性或者酸性部分的本發(fā)明化合物利用常規(guī)化學(xué)方法進(jìn)行合成。通常，堿性化合物的鹽或者通過離子交換色譜法得到制備，或者通過在適當(dāng)溶劑或者多種溶劑組合中，使游離堿與化學(xué)計(jì)算量或者與過量的形成期望鹽的無機(jī)酸或有機(jī)酸反應(yīng)得到制備。類似地，酸性化合物的鹽通過與適宜的無機(jī)或者有機(jī)堿反應(yīng)得到形成。
由此，本發(fā)明化合物藥學(xué)上可接受的鹽包括通過使本發(fā)明堿性化合物與無機(jī)或者有機(jī)酸反應(yīng)而形成的本發(fā)明化合物的常規(guī)無毒鹽。例如，常規(guī)的無毒鹽包括由無機(jī)酸得到的鹽，例如鹽酸鹽、氫溴酸鹽、硫鹽、胺磺?；}、磷鹽和氮鹽等等，以及由有機(jī)酸制備的鹽，例如醋酸鹽、丙酸鹽、琥珀酸鹽、乙醇酸鹽、硬脂酸鹽、乳酸鹽、蘋果酸鹽、酒石酸鹽、檸檬酸鹽、抗壞血酸鹽、雙羥萘酸鹽、馬來酸鹽、羥基馬來酸鹽、苯基馬來酸鹽、谷氨酸鹽、安息香酸鹽、水楊酸鹽、磺酰胺酸鹽、2-乙酰氧基-安息香酸鹽、富馬酸鹽、甲苯磺酸鹽、甲磺酸鹽、乙基二磺酸鹽、草酸鹽、羥乙磺酸鹽和三氟乙酸鹽等等。
當(dāng)本發(fā)明化合物為酸性化合物時(shí)，適宜的“藥學(xué)上可接受的鹽”是指由藥學(xué)上可接受的無毒堿(包括無機(jī)堿和有機(jī)堿)制備得到的鹽。由無機(jī)堿衍生得到的鹽包括鋁鹽、銨鹽、鈣鹽、銅鹽、三價(jià)鐵鹽、二價(jià)鐵鹽、鋰鹽、鎂鹽、錳鹽、亞錳鹽、鉀鹽、鈉鹽和鋅鹽等等。特別優(yōu)選銨、鈣、鎂、鉀和鈉鹽。由藥學(xué)上可接受的有機(jī)無毒堿衍生得到的鹽包括伯胺鹽、仲胺鹽、叔胺鹽、取代胺鹽(包括天然存在的取代胺)、環(huán)胺鹽和陽離子交換樹脂鹽，比如精氨酸、甜菜堿咖啡因、膽堿、N5N1-二芐基乙二胺、二乙基胺、2-二乙氨基乙醇、2-二甲氨基乙醇、乙醇胺、乙二胺、N-乙基嗎啉、N-乙基哌啶、葡糖胺、葡糖胺、組氨酸、哈胺、異丙胺、賴氨酸、甲基葡萄糖胺、嗎啉、哌嗪、哌啶、聚胺樹脂、普魯卡因、嘌呤、可可堿、三乙胺、三甲胺、三丙胺和氨基丁三醇等等的鹽。
如上所述藥學(xué)上可接受的鹽以及其它一般藥學(xué)上可接受的鹽的制備由Berg等人，″Pharmaceutical Salts″，J.Pharm.Sci.，1977，661-19，進(jìn)行了更為全面的描述。
還應(yīng)當(dāng)指出，本發(fā)明化合物潛在地為內(nèi)鹽或者兩性離子，因?yàn)樵谏項(xiàng)l件下，化合物中的去質(zhì)子的酸性部分(比如羧基)可以成為陰離子，隨后此電荷可以面對(duì)質(zhì)子化陽離子電荷或者烷基化堿性部分(比如季氮原子)在內(nèi)部得到平衡。
除了其它文獻(xiàn)中已知或者在試驗(yàn)方法中例證說明的標(biāo)準(zhǔn)操作之外，本發(fā)明化合物可以通過利用以下方案中所示反應(yīng)進(jìn)行制備。由此，以下例證性方案并不受所列舉化合物或者任何基于例證說明目的而使用的具體取代基的限制。以下方案中所示的取代基序號(hào)并不必然與權(quán)利要求中所用序號(hào)相關(guān)，通常為了清楚起見，顯示了單個(gè)取代基與所述化合物相連，其中在上文式I定義中允許有多個(gè)取代基。
反應(yīng)方案如方案1所示，本發(fā)明的磺酰胺化合物可以由適當(dāng)?shù)膶?duì)氨基苯甲酸衍生物1，通過使用所描繪的通用化學(xué)路線容易地得到制備。這些對(duì)氨基苯甲酸衍生物或者可以由商家購買到或者可以由本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)化學(xué)過程進(jìn)行制備。
方案1 在一種這樣的方法中，如上所示，衍生物1可以通過與適當(dāng)?shù)谋Ｗo(hù)基(比如BoC2O)反應(yīng)而得到N-保護(hù)(適宜的保護(hù)基描述在ProtectingGroups in Organic Synthesis，3rd Edition，Greene，T.W.和Wuts，P.G.M.；Wiley Interscience，1999和Kocienski，P.J.Protecting Groups，Thieme，1994中)，隨后進(jìn)行堿水解，從而得到相應(yīng)的羧酸，隨后，在偶聯(lián)劑(比如DCC或者EDC)存在下，該羧酸可以與適當(dāng)?shù)腛-保護(hù)的(比如用芐基、叔丁基、THP或者叔丁基二甲基甲硅烷基保護(hù)的)羥胺衍生物反應(yīng)，從而形成相應(yīng)的異羥肟酸酯。將羧酸(和酸衍生物)與氨基組分偶聯(lián)形成羧酰胺的方法是本領(lǐng)域中所熟知的，適宜的方法描述于例如March，J.Advanced Organic Chemistry，3rd edition，JohnWiley & Sons，1985，pp.370-376中。隨后，可以在酸性條件下，使用強(qiáng)酸(比如，三氟乙酸)將N-保護(hù)基除去，從而得到異羥肟酸衍生物2，該化合物可以在適宜的堿存在下與適當(dāng)?shù)幕酋Ｂ确磻?yīng)，從而得到磺酰胺3。最后，可以將O-保護(hù)基除去，從而得到本發(fā)明標(biāo)題4化合物。另外，1可以與適當(dāng)?shù)幕酋Ｂ确磻?yīng)，從而形成磺酰胺衍生物5。隨后，可以將羧酸衍生物6(由5得到)轉(zhuǎn)化為所描繪的化合物4。
方案2 如方案2中所描繪的，在適宜的堿存在下，磺酰胺5可以與適當(dāng)?shù)耐榛噭┓磻?yīng)，從而得到酯7。由酯7得到的酸8可以轉(zhuǎn)化為期望的異羥肟酸酯9。在一些情形中，對(duì)最終合成分子進(jìn)行進(jìn)一步合成操作可以形成其它類似物。芳香磺酰氯或者可以商家購買到或者可以利用本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員已知的多種方法輕易得到制備[如Org.Proc.Res.Development(2003)，7(6)，921-924；Tett.Lett.(2003)，44(21)，4153-4256；J.Org.Chem.(2003)，68(14)，5525-5573；Bioorg.Med.Chem.(2002)，10(11)，3529-3544；Tetrahedron(2003)，59(8)，1317-1325；J.Heterocyclic Chem.(2002)，39(5)，1055-1059；J.Med.Chem.(2002)，45(5)，1086-1097中所述]。
方案3 如方案3中所示，本發(fā)明酰胺化合物可以通過以下方式得到合成如按照所示的方案，使化合物2與適當(dāng)?shù)孽Ｂ然蛘唪人岱磻?yīng)，從而得到化合物10，通過除去保護(hù)基可以得到標(biāo)題的異羥肟酸酯11。所述異羥肟酸酯1還可以由化合物1，根據(jù)方案3中所描繪的方式進(jìn)行制備。相應(yīng)的N-取代酰胺化合物16可以由化合物12進(jìn)行制備，如方案4中所描繪的。
方案4
應(yīng)用本發(fā)明化合物在多種應(yīng)用中發(fā)現(xiàn)了用途。本發(fā)明化合物是可以用于治療癌癥以及其它疾病的組蛋白脫乙?；?HDAC)的抑制劑。HDACs催化從蛋白質(zhì)(包括組蛋白)的賴氨酸殘基上除去乙?；?，并且HDAC抑制劑顯示了不同的生物學(xué)功能，包括影響基因表達(dá)、細(xì)胞分化、細(xì)胞周期進(jìn)程、生長停滯和/或細(xì)胞程序死亡。參見J.Med.Chem.2003，465097和Curr.Med.Chem.2003，102343。
本發(fā)明化合物可以用于治療細(xì)胞增殖疾病。可以通過在此提供的方法和組合物治療的疾病狀態(tài)包括但不限于癌癥(在下文中進(jìn)行進(jìn)一步描述)、神經(jīng)變性疾病、精神分裂癥和中風(fēng)。
認(rèn)為本文中提供的化合物、組合物和方法特別可以用于治療癌癥，包括實(shí)體腫瘤，比如皮膚癌、乳腺癌、腦瘤、宮頸癌、睪丸癌等等。特別是，可以通過本發(fā)明化合物、組合物和方法治療的癌癥包括但不限于心臟(血管肉瘤、纖維肉瘤、橫紋肌肉瘤、脂肉瘤)、粘液瘤、橫紋肌瘤、纖維瘤、脂肪瘤和畸態(tài)瘤；肺支氣管癌(鱗狀上皮細(xì)胞、未分化的小細(xì)胞、未分化的大細(xì)胞、惡性腺瘤)、細(xì)支氣管癌、支氣管腺瘤、肉瘤、淋巴瘤、軟骨瘤錯(cuò)構(gòu)瘤、間皮瘤；胃腸食道(鱗狀細(xì)胞癌、惡性腺瘤、平滑肌肉瘤、淋巴瘤)、胃(癌、淋巴瘤、平滑肌肉瘤)、胰腺胰腺(導(dǎo)管惡性腺瘤、胰島瘤、胰升血糖素瘤、胃泌素瘤、類癌瘤、血管活性腸肽瘤)、小腸(惡性腺瘤、淋巴瘤、類癌瘤、卡波西惡性腫瘤、平滑肌瘤、血管瘤、脂肪瘤纖維神經(jīng)瘤、纖維瘤)、大腸(惡性腺瘤、管腺瘤、絨毛狀腺瘤、錯(cuò)構(gòu)瘤、平滑肌瘤)；泌尿生殖道腎(惡性腺瘤、韋母氏瘤[腎母細(xì)胞瘤]、淋巴瘤、血癌)、膀胱和尿道(鱗狀細(xì)胞癌、轉(zhuǎn)移細(xì)胞癌、惡性腺瘤)、前列腺(惡性腺瘤、肉瘤)、睪丸(精原細(xì)胞瘤、畸態(tài)瘤、胚胎性癌、畸胎癌、絨毛膜癌、肉瘤、間質(zhì)細(xì)胞癌、纖維瘤、纖維腺瘤、腺瘤樣瘤、脂肪瘤)；肝肝癌(肝細(xì)胞癌)、膽管細(xì)胞癌、肝胚細(xì)胞瘤、血管肉瘤、肝細(xì)胞腺瘤、血管瘤；骨骼骨原性肉瘤(骨肉瘤)、纖維肉瘤、惡性纖維組織細(xì)胞瘤、軟骨肉瘤、尤因氏肉瘤、惡性淋巴瘤(網(wǎng)狀細(xì)胞肉瘤)、多發(fā)性骨髓瘤、惡性巨細(xì)胞瘤、脊索癌、osteochronfroma(骨軟骨性外生骨疣)、良性軟骨瘤、成軟骨細(xì)胞瘤、軟骨粘液樣纖維瘤、骨樣骨瘤和巨細(xì)胞瘤；神經(jīng)系統(tǒng)頭骨(骨瘤、血管瘤、肉芽瘤、黃瘤、佩吉特氏病)、腦膜(腦膜瘤、meningiosarcoma、神經(jīng)膠質(zhì)瘤)、大腦(星形細(xì)胞瘤、成神經(jīng)管細(xì)胞瘤、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、室管膜瘤、胚組織瘤[松果狀瘤]、惡性膠質(zhì)瘤多型、少枝膠質(zhì)瘤、神經(jīng)鞘瘤、成視網(wǎng)膜細(xì)胞瘤、先天性腫瘤)、脊髓纖維神經(jīng)瘤、腦膜瘤、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、肉瘤)；婦科子宮(子宮內(nèi)膜癌)、宮頸(宮頸癌、預(yù)腫瘤子宮頸非典型增生)、卵巢(卵巢癌[漿液性囊腺癌、粘液性囊腺癌、一般性癌癥]、肉芽瘤-膜細(xì)胞腫瘤、卵巢塞-萊二氏細(xì)胞瘤、無性細(xì)胞瘤、卵巢未成熟畸胎瘤)、外陰(鱗狀細(xì)胞癌、上皮內(nèi)癌、惡性腺瘤、纖維肉瘤、黑素瘤)、陰道(明細(xì)胞癌、鱗狀細(xì)胞癌、葡萄樣肉瘤(胚胎性橫紋肌肉瘤))、輸卵管(癌)；血液血液(骨髓性白血病[急性和慢性]、急性淋巴母細(xì)胞性白血病、慢性淋巴細(xì)胞性白血病、骨髓及外骨髓增殖病、多發(fā)性骨髓瘤、脊髓發(fā)育不良綜合征)淋巴肉芽腫病、非何杰金氏淋巴瘤[惡性淋巴瘤]；皮膚惡性黑色素瘤、基底細(xì)胞癌、鱗狀細(xì)胞癌、卡波西惡性腫瘤、發(fā)育不良痣、脂肪瘤、血管瘤、皮膚纖維瘤、瘢痕瘤、牛皮癬；和腎上腺成神經(jīng)細(xì)胞瘤。由此，如上所給出的術(shù)語“癌細(xì)胞”包括受任何上述等同癥狀折磨的細(xì)胞。
本發(fā)明化合物還可以用于制備用于治療以上細(xì)胞增殖疾病(特別是癌癥)的藥物。
本發(fā)明化合物還可以用于治療神經(jīng)變性疾病，包括但不限于，與多谷氨酰胺擴(kuò)充相關(guān)的神經(jīng)變性、亨廷頓氏病、肯尼迪氏病、脊髓小腦運(yùn)動(dòng)失調(diào)、齒狀核紅核蒼白球路易斯核萎縮癥(DRPLA)、與蛋白質(zhì)聚集相關(guān)的神經(jīng)變性、Machado-Joseph′s病、阿爾茨海默氏病、帕金森氏癥、肌萎縮性側(cè)索硬化、海綿狀腦、朊病毒相關(guān)疾病和多發(fā)性腦硬化(MS)。參見WO 02/090534和WO 03/083067。
本發(fā)明化合物還可以用于制備用于治療或者預(yù)防神經(jīng)變性疾病的藥物。本發(fā)明化合物還可以用于治療或者預(yù)防精神分裂癥。參見WO02/090534。
本發(fā)明化合物還可以用于制備用于治療或者預(yù)防精神分裂癥的藥物。
本發(fā)明化合物還可以用于治療或者預(yù)防炎性疾病，包括但不限于中風(fēng)。Leoni等人，PNAS，99(5)2995-3000(2002)和Suuronen等人，J.Neurochem.87407-416(2003)。
本發(fā)明化合物還可以用于制備用于治療或者預(yù)防神經(jīng)變性疾病的藥物。本發(fā)明化合物還可以用于治療或者預(yù)防精神分裂癥。參見WO02/090534。
本發(fā)明化合物還可以用于制備用于治療或者預(yù)防精神分裂癥的藥物。
本發(fā)明化合物還可以用于治療或者預(yù)防炎性疾病，包括但不限于中風(fēng)。Leoni等人，PNAS，99(5)2995-3000(2002)和Suuronen等人，J.Neurochem.87407-416(2003)。
本發(fā)明化合物還可以用于制備用于治療或者預(yù)防炎性疾病(比如中風(fēng))的藥物。
本發(fā)明化合物還可以用于抑制平滑肌細(xì)胞增殖和/或遷移，并且由此可以用于預(yù)防和/或治療再狹窄，例如血管成形術(shù)和/或擴(kuò)張移植后再狹窄。
本發(fā)明化合物還可以用于制備用于治療或者預(yù)防再狹窄的藥物。
在一種實(shí)施方案中，通過提供在擴(kuò)張?jiān)O(shè)備中或者其上(例如，涂敷在擴(kuò)張?jiān)O(shè)備上)具有一種或者多種本發(fā)明化合物的擴(kuò)張?jiān)O(shè)備，平滑肌細(xì)胞增殖和/或遷移得到了抑制和術(shù)后再狹窄得到了預(yù)防和/或治療。所述擴(kuò)張?jiān)O(shè)備用于可控釋放本發(fā)明化合物，從而抑制平滑肌細(xì)胞增殖和/或遷移和預(yù)防和/或治療再狹窄。
狹窄和再狹窄是與血管狹窄相關(guān)的癥狀。血管狹窄通常隨時(shí)間流逝逐漸產(chǎn)生。與此相反，再狹窄與血管內(nèi)操作后的血管狹窄相關(guān)，比如氣囊血管成形術(shù)和/或擴(kuò)張移植或者血管損傷后的血管狹窄。
一般進(jìn)行氣囊血管成形術(shù)以打開狹窄的血管；擴(kuò)張通常在氣囊血管成形術(shù)之后或者與氣囊血管成形術(shù)結(jié)合進(jìn)行，以使血管保持開放。狹窄血管利用氣囊血管成形術(shù)通過以下方式進(jìn)行打開操縱氣囊尖端導(dǎo)管至狹窄位置和有效地?cái)U(kuò)張氣囊尖端以擴(kuò)大閉合的血管。為了使閉合血管保持處于開放，可以將擴(kuò)張器植入血管中以向血管開放部分提供血管內(nèi)支撐，從而限制氣囊導(dǎo)管除去之后，血管回縮到其閉合狀態(tài)的程度。再狹窄一般由血管成形術(shù)期間所受到的損傷引起，受例如氣囊擴(kuò)張、動(dòng)脈解剖或者動(dòng)脈激光蝕刻治療的影響。對(duì)于上述這些操作，取決于血管位置、損傷長度和許多其它變量，再狹窄以約30％～約60％的比例存在。這就降低了相關(guān)非侵入性氣囊血管成形術(shù)和擴(kuò)張手術(shù)的總體成功率。
再狹窄可以歸于多種因素，包括平滑肌細(xì)胞增殖(SMC)。SMC增殖由氣囊血管成形術(shù)和擴(kuò)張移植時(shí)受到的初始內(nèi)膜機(jī)械性損傷引發(fā)。該過程的特征在于，早期血小板得到活化和血栓得到形成，隨后SMC進(jìn)行恢復(fù)和遷移，并且最終細(xì)胞進(jìn)行增殖和胞外基質(zhì)進(jìn)行累積。受損傷的內(nèi)皮細(xì)胞、SMCs、血小板和巨噬細(xì)胞分泌推動(dòng)再狹窄的細(xì)胞因子和生長因子。SMC增殖表示引起新內(nèi)膜增殖的最終一般途徑。因此，目的在于抑制細(xì)胞周期內(nèi)調(diào)節(jié)結(jié)果的抗增殖療法可以構(gòu)成血管成形術(shù)之后再狹窄的最合理方法。
本發(fā)明的另一方面提供了治療原生動(dòng)物感染的方法，包括給藥遭受原生動(dòng)物感染的主體有效量的根據(jù)式(I)的抑制組蛋白脫乙?；傅幕衔?。治療有效量是足以抑制病原性原生動(dòng)物的組蛋白脫乙?；傅牧?。
本發(fā)明化合物還可以用于制備用于治療或者預(yù)防原生動(dòng)物感染的藥物。
組蛋白脫乙?；敢种苿┛梢杂米骺乖x藥。由此，本發(fā)明化合物可以用于治療人和動(dòng)物(包括家禽)中的原生動(dòng)物疾病。組蛋白脫乙?；敢种苿┛梢杂糜谝种频脑鷦?dòng)物疾病以及它們的誘發(fā)病原體包括；1)變形蟲病(雙核阿米巴屬種，痢疾內(nèi)變形蟲)；2)賈第蟲病(腸蘭伯式鞭毛蟲)；3)瘧疾(變形體種，包括間日瘧、惡性瘧、三日瘧和卵形瘧)；4)利什曼病(利什曼原蟲種，包括杜氏利什曼原蟲，熱帶利什曼原蟲，墨西哥利什曼原蟲和巴西利什曼原蟲)；5)錐蟲病和恰加斯氏病(錐蟲屬種，包括布氏錐蟲、泰氏錐蟲、羅得西亞錐蟲、岡比錐蟲、伊氏錐蟲、馬媾疫錐蟲、馬類毛癬菌(T.equinum)、剛果錐蟲、T.vivax和克魯斯氏錐蟲)；6)弓形蟲病(龔地弓形蟲)；7)新孢子蟲病(犬新孢子蟲)；8)巴貝蟲病(巴貝蟲屬種)；9)隱孢球蟲病(隱孢子蟲)；10)dysentary(結(jié)腸小袋蟲)；11)陰道炎(毛滴蟲屬種，包括滴蟲性陰道炎和胎兒三毛滴蟲)；12)球蟲病(艾美蟲屬種，包括柔嫩艾美耳球蟲、毒害艾美耳球蟲、堆型艾美耳球蟲、巨型艾美耳球蟲和布氏艾美耳球蟲、緩艾美耳球蟲、牛艾美爾球蟲、E.melagramatis和等孢球蟲種)；13)腸肝炎(組織滴蟲屬腸球菌)，和14)由微粒孢子蟲屬種、貝諾孢子蟲種、Leucocytozoan種、小孢子蟲目種、肉孢子蟲屬種、泰累爾梨漿蟲屬種和卡氏肺囊蟲引起的感染。
優(yōu)選將本發(fā)明組蛋白脫乙?；敢种苿┯糜谟蓙嗛T頂覆蟲成員引起的原生動(dòng)物感染的治療和預(yù)防中。更優(yōu)選將本發(fā)明組蛋白脫乙?；敢种苿┯糜谌撕蛣?dòng)物的瘧疾、弓形蟲病和隱孢球蟲病的治療或者預(yù)防中；和用于處理球蟲病，特別是家禽球蟲病，或者治療球蟲感染或者預(yù)防這種感染的發(fā)生。此外，雖然不是由Apicomplexan引起，但是錐蟲病可以通過組蛋白脫乙?；敢种苿┻M(jìn)行治療。
在期望將本發(fā)明的組蛋白脫乙?；敢种苿┙o藥至慢性疾病的情形中，比如預(yù)防家禽球蟲病的情形中，優(yōu)選所述組蛋白脫乙?；敢种苿?duì)原生動(dòng)物具有比宿主組蛋白脫乙?；父叩倪x擇性。由于其具有組蛋白脫乙?；敢种谱饔茫虼碎L期給藥上述選擇性抑制劑可以最小化對(duì)宿主的副作用。
根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)藥物實(shí)踐，可以將本發(fā)明化合物單獨(dú)給藥或者在藥物組合物中協(xié)同藥學(xué)上可接受的載體、賦形劑或者稀釋劑一起給藥至哺乳動(dòng)物，優(yōu)選人類?；衔锟梢钥诜o藥或者胃腸外給藥，包括靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、腹膜內(nèi)、皮下、直腸和局部給藥途徑。
含有所述活性成分的藥物組合物可以為適用于口服應(yīng)用的形式，例如，為片劑、藥片、錠劑、含水或者含有混懸劑、可分散性粉劑或者粒劑、乳劑、硬膠囊或者軟膠囊、或者糖漿劑或酏劑。設(shè)計(jì)用于口服應(yīng)用的組合物可以根據(jù)本領(lǐng)域制造藥物組合物的任何熟知方法進(jìn)行制備，并且為了提供藥學(xué)上美觀和可口的制劑，所述組合物可以含有一種或者多種選自甜味料、增香劑、著色劑和防腐劑的試劑。片劑中含有與適于片劑制造的無毒藥學(xué)上可接受的賦形劑混合的活性成分。上述這些賦形劑可以是，例如，惰性稀釋劑，比如碳酸鈣、碳酸鈉、乳糖、磷酸鈣或者磷酸鈉；造粒劑和崩解劑，例如微晶纖維素、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉、玉米淀粉或者藻酸；粘合劑，例如淀粉、凝膠、聚乙烯吡咯烷酮或者阿拉伯膠；和潤滑劑，例如硬脂酸鎂、硬脂酸或者滑石。所述片劑可以未涂層或者它們可以通過已知工藝進(jìn)行涂層以掩蔽藥物的不良味道或者延遲崩解和胃腸道吸收，并且從而提供更長時(shí)間的持續(xù)作用。例如，可以使用水溶性味道掩蔽材料(比如羥丙基-甲基纖維素或者羥丙基纖維素)或者時(shí)間延遲材料(比如乙基纖維素、乙酸丁酸纖維素)。
口服應(yīng)用的制劑還可以以硬膠囊的形式存在，其中活性成分與惰性固體稀釋劑(例如，碳酸鈣、磷酸鈣或者高嶺土)混合，或者以軟腳囊的形式混合，其中活性成分與水溶性載體(比如聚乙二醇或者油介質(zhì)(例如花生油、液體石蠟或者橄欖油))混合。
含水混懸劑中含有與適于制造含水混懸劑的賦形劑混合的活性物質(zhì)。所述賦形劑為懸浮劑，例如羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、海藻酸鈉、聚乙烯吡咯烷酮、黃蓍樹膠和阿拉伯樹膠；分散劑或者潤濕劑，可以為天然存在的磷脂，例如卵磷脂或者烯化氧與脂肪酸的縮合產(chǎn)物，例如，聚氧乙烯硬脂酸酯或者乙烯化氧與長鏈脂族醇的縮合產(chǎn)物(例如，十七烷基亞乙基氧基十六烷醇)或者乙烯化氧與衍生于脂肪酸和己糖醇的偏酯的縮合產(chǎn)物(比如聚氧化乙烯山梨醇單油酸酯)或者乙烯化氧與衍生于脂肪酸和己糖醇酸酐的偏酯的縮合產(chǎn)物(例如，聚乙烯去水山梨糖醇單油酸酯)。所述含水混懸劑還可以含有一種或者多種防腐劑(例如對(duì)羥基苯甲酸乙酯或者對(duì)羥基苯甲酸正丙酯)、一種或者多種增香劑和一種或者多種甜味劑(比如蔗糖、糖精或者天冬苯并二肽酯)。
含油混懸劑可以通過將活性成分懸浮在植物油(例如花生油、橄欖油、芝麻油或者椰子油)或者礦物油(比如液體石蠟)中而得到制備。所述含油混懸劑可以含有增稠劑，例如蜂蠟、硬石蠟或者鯨蠟醇?？梢詫⒈热缛缟纤龅奶鹞秳┖驮鱿銊┘尤肫渲幸蕴峁┛煽诘目诜苿?。這些組合物可以通過加入抗氧化劑(比如，叔丁基對(duì)羥基茴香醚或者α-生育酚)進(jìn)行保存。
適用于通過加入水制備含水混懸劑的可分散粉劑和粒劑提供與分散劑或者潤濕劑、懸浮劑以及一種或者多種防腐劑混合的活性成分。適宜的分散劑或者潤濕劑和懸浮劑為以上已經(jīng)例證說明的那些物質(zhì)。其中還可以存在其它賦形劑，比如甜味劑、調(diào)味劑和著色劑。這些組合物可以通過加入抗氧化劑(比如，抗壞血酸)進(jìn)行保存。
本發(fā)明藥物組合物還可以為水包油乳化劑形式。所述油相可以為植物油(例如橄欖油或者花生油)或者礦物油(例如液體石蠟)或者其混合物。適宜的乳化劑可以為天然存在的磷脂(例如，大豆卵磷脂)和由脂肪酸與己糖醇酸酐衍生得到的酯或者偏酯(例如，去水山梨糖醇單油酸酯)以及所述偏酯與氧化乙烯的縮合產(chǎn)物(例如，聚氧化乙烯去水山梨糖醇單油酸酯)。所述乳劑還可以含有甜味劑、增香劑、防腐劑和抗氧化劑。
糖漿劑和酏劑可以用甜味劑進(jìn)行配制，例如丙三醇、丙二醇、山梨醇或者蔗糖。上述制劑中還可以含有緩和劑、防腐劑、調(diào)味劑、著色劑和抗氧化劑。
本發(fā)明藥物組合物可以為無菌可注射含水液劑的形式。在可接受的賦形劑和溶劑中，可以使用的為水、生理鹽水和等滲氯化鈉溶液。
所述無菌可注射制劑還可以為活性成分溶于油相中的無菌可注射水包油微乳劑。例如，可以首先將活性成分溶于大豆油和卵磷脂的混合物中。然后，將上述油溶液引入到水和丙三醇混合物中并且對(duì)其進(jìn)行處理，從而形成微乳劑。
可以通過局部彈丸注射將可注射液劑或者微乳劑引入到患者血流中。另外地，可以有利的按照一定方式給藥所述液劑或者微乳劑，使得本發(fā)明化合物保持恒定循環(huán)濃度。為了保持上述恒定濃度，可以使用連續(xù)的靜脈內(nèi)遞送設(shè)備。所述設(shè)備的實(shí)例為Deltec CADD-PLUSTM型5400靜脈內(nèi)泵。
所述藥物組合物可以為用于肌內(nèi)和皮下給藥的無菌可注射含水或者含有混懸劑的形式。上述混懸劑可以根據(jù)本領(lǐng)域熟知的工藝，利用上述那些適宜的分散劑或者潤濕劑以及懸浮劑進(jìn)行配制。所述可注射的無菌制劑還可以是在無毒胃腸外可接受的稀釋劑或者溶劑中的可注射無菌液劑或者混懸劑，例如為1，3-丁二醇溶液。此外，通常將無菌、凝固油用作溶劑或者懸浮介質(zhì)。基于上述目的，任何無味的凝固油都可以使用，包括合成的單或者二甘油酯。此外，發(fā)現(xiàn)脂肪酸(比如油酸)可以用于注射劑的制備中。
式I化合物還可以以用于直腸藥物給藥的栓劑形式進(jìn)行給藥。這些制劑可以通過將藥物與適宜的無刺激性賦形劑混合得到制備，所述賦形劑在室溫下為固體但是在直腸溫度下為液體，由此它將在直腸中熔化從而釋放藥物。所述物質(zhì)包括可可脂、甘油化的明膠、氫化植物油、多種分子量的聚乙二醇和聚乙二醇脂肪酸酯的混合物。
對(duì)于局部應(yīng)用，可以使用含有式I化合物的乳膏劑、膏劑、凝膠劑、液劑或者混懸劑等等。(基于此應(yīng)用的目的，局部應(yīng)用應(yīng)當(dāng)包括含漱劑和漱口劑)。
本發(fā)明化合物可以以鼻內(nèi)形式通過局部應(yīng)用適宜的鼻內(nèi)載體和遞送設(shè)備進(jìn)行給藥，或者可以利用那些本領(lǐng)域普通技術(shù)人員熟知的皮膚表層貼片形式經(jīng)透過皮膚路線給藥。為了以透過皮膚分配系統(tǒng)的形式給藥，劑量給藥必然將持續(xù)整個(gè)給藥方案而非間歇給藥。本發(fā)明化合物還可以以使用基體的栓劑形式進(jìn)行遞送，所述基體比如為甘油化的明膠、氫化植物油、多種分子量的聚乙二醇與聚乙二醇脂肪酸酯的混合物。
當(dāng)將根據(jù)本發(fā)明的化合物給藥至人類對(duì)象時(shí)，其每日劑量通常由開藥醫(yī)師確定，同時(shí)該劑量通常根據(jù)個(gè)體患者的年齡、體重、性別和反應(yīng)以及患者癥狀的嚴(yán)重程度不同而不同。
在一種示范性應(yīng)用中，將適宜量的化合物給藥進(jìn)行癌癥治療的哺乳動(dòng)物。所述給藥以每天約0.1mg/kg體重～約60mg/kg體重的量進(jìn)行，優(yōu)選為每天約0.5mg/kg體重～約40mg/kg體重。
本發(fā)明化合物還用于與已知的治療劑和抗癌劑組合使用。例如，本發(fā)明化合物用于與已知的抗癌劑組合使用。本發(fā)明公開的化合物與其它抗癌劑或者化學(xué)治療劑的組合都在本發(fā)明范圍內(nèi)。所述試劑的實(shí)例公開于V.T.Devita和S.Hellman(編者)的Cancer Principles和Practice of Oncology，第六版(February 15，2001)，Lippincott Williams& Wilkins Publishers中。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)能夠基于藥物特性和所涉及的癌癥辨別哪些試劑的聯(lián)合有用。所述抗癌劑包括但不限于以下試劑雌激素受體調(diào)節(jié)劑、雄激素受體調(diào)節(jié)劑、類視黃醇受體調(diào)節(jié)劑、細(xì)胞毒素/細(xì)胞生長抑制劑、抗增殖劑、異戊烯基蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移酶抑制劑、HMG-CoA還原酶抑制劑和其它血管形成抑制劑、細(xì)胞增殖和存活信號(hào)抑制劑、細(xì)胞程序死亡誘發(fā)劑和干擾細(xì)胞周期檢驗(yàn)點(diǎn)的試劑。當(dāng)結(jié)合放射治療共同給藥時(shí)，本發(fā)明化合物特別有效。
在一種實(shí)施方案中，本發(fā)明化合物還用于與已知的以下抗癌劑組合使用雌激素受體調(diào)節(jié)劑、雄激素受體調(diào)節(jié)劑、類視黃醇受體調(diào)節(jié)劑、細(xì)胞毒素劑、抗增殖劑、異戊烯基蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移酶抑制劑、HMG-CoA還原酶抑制劑、HTV蛋白酶抑制劑、逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑和其它血管形成抑制劑。
“雌激素受體調(diào)節(jié)劑”是指干擾或者抑制雌激素與受體結(jié)合的化合物，與機(jī)制無關(guān)。雌激素受體調(diào)節(jié)劑的實(shí)例包含但不限于他莫昔芬、雷洛昔芬、idoxifene、LY353381、LY117081、托瑞米芬、fulvestrant、4-[7-(2，2-二甲基-1-氧代丙氧基-4-甲基-2-[4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]苯基]-2H-1-苯并吡喃-3-基]-苯基-2，2-二甲基丙酸酯、4，4′-二羥基二苯甲酮-2，4-二硝基苯基-腙和SH646。
“雄激素受體調(diào)節(jié)劑”是指干擾或者抑制雄激素與受體結(jié)合的化合物，與機(jī)制無關(guān)。雄激素受體調(diào)節(jié)劑的實(shí)例包含非那甾胺以及其它5α-還原酶抑制劑、尼魯米特、氟他米特、必卡他胺、利阿唑和阿比特龍醋酸鹽。
“類視黃醇受體調(diào)節(jié)劑”是指干擾或者抑制類視黃醇與受體結(jié)合的化合物，與機(jī)制無關(guān)。所述類視黃醇受體調(diào)節(jié)劑的實(shí)例包括蓓薩羅丁、維甲酸、13-順式視黃酸、9-順式視黃酸、α-二氟甲基鳥氨酸、ILX23-7553、反式-N-4′-羥基維甲胺和N-4-羧基維甲胺。
“細(xì)胞毒性劑/細(xì)胞生長抑制劑”是指主要通過直接干擾細(xì)胞功能或者抑制或干擾細(xì)胞有絲分裂導(dǎo)致細(xì)胞死亡或者抑制細(xì)胞增殖的化合物，包括烷基化劑、腫瘤壞死因子、嵌入劑、可低氧活化化合物、微管抑制劑/微管穩(wěn)定劑、絲分裂驅(qū)動(dòng)蛋白抑制劑、涉及絲分裂進(jìn)程的激酶抑制劑、代謝拮抗劑；生物反應(yīng)調(diào)節(jié)物；激素/抗激素治療劑、生血生長因子、單克隆抗體靶治療劑、局部異構(gòu)酶抑制劑、蛋白酶抑制劑和泛素連接酶抑制劑。
細(xì)胞毒素劑的實(shí)例包括但不限于sertenef、惡病質(zhì)素、異環(huán)磷酰胺、tasonermin、氯尼達(dá)明、卡鉑、六甲蜜胺、松龍苯芥、二溴衛(wèi)矛醇、雷莫司汀、福莫司汀、奈達(dá)鉑、奧沙利鉑、替莫唑胺、庚鉑、雌氮芥、托西英地卡尼、曲洛磷胺、尼莫司汀、二溴螺氯銨、嘌嘧替派、洛鉑、賽特鉑、profiromycin、順氯氨鉑、伊洛福芬、右異環(huán)磷酰胺、順式-胺二氯(2-甲基-吡啶)鉑、芐基鳥嘌呤、glufosfamide、GPXIOO、(反式，反式，反式)-二-mu-(己烷-1，6-二胺)-mu-[二胺-鉑(II)]二[二胺(氯)鉑(II)]四氯化物、diarizidinylspermine、三氧化二砷、1-(11-十二烷基氨基-10-羥基十一烷基)-3，7-二甲基黃嘌呤、佐柔比星、伊達(dá)比星、道諾紅菌素、比生群、米托蒽醌、吡柔比星、吡萘非特、戊柔比星、氨柔比星、antineoplaston、3′-去氨基-3′-嗎啉-13-去氧-10-羥基洋紅霉素、安那霉素、galarubicin、依利奈法德、MEN10755和4-去甲氧基-3-去氨基-3-氮雜環(huán)丙烯基-4-甲基磺?；?道諾紅菌素(參見WO 00/50032)。
可低氧活化的化合物的實(shí)例為替拉扎明。
蛋白酶體抑制劑的實(shí)例包括但不限于乳胞素和硼替佐米。
微管抑制劑/微管穩(wěn)定劑的實(shí)例包括泰素、長春地辛硫酸鹽、3’，4’-二去氫-4’-去氧-8’norvincaleukoblastine、多西他賽、力索新、海兔毒素、mivobulin羥乙基磺酸鹽、auristatin、西馬多丁、RPR109881、BMS184476、長春氟寧、自念珠藻環(huán)肽、2，3，4，5，6-五氟-N-(3-氟-4-甲氧基苯基)苯磺酰胺、脫水長春堿、N，N-二甲基-L-纈氨酰-L-纈氨酰-N-甲基-L-纈氨酰-L-脯氨?；?L-脯氨酸-叔丁基酰胺、TDX258、埃坡霉素(參見，例如美國專利Nos.6,284,781和6,288,237)和BMS188797。
一些局部異構(gòu)酶抑制劑的實(shí)例為拓?fù)涮婵怠ycaptamine、伊立替康、伊立替康、6-乙氧基丙?；?3’，4’-O-外-亞芐基-酵母菌素、9-甲氧基-N，N-二甲基-5-硝基吡唑并[3，4，5-kl]吖啶-2-(6H)丙酰胺、1-氨基-9-乙基-5-氟-2，3-二氫-9-羥基-4-甲基-1H，12H-苯并[de]吡喃并[3’，4’:b，7]-氮茚并[1，2b|喹啉-10，13(9H，15H)二酮、洛托替康、7-[2-(N-異丙氨基)乙基]-(20S)喜樹堿、BNP1350、BNPII100、BN80915、BN80942、鬼臼亞乙苷磷酸鹽、表鬼臼毒噻吩糖苷、索布佐生、2’-二甲基氨基-2’-去氧-鬼臼亞乙苷、GL331、N-[2-(二甲基氨基)乙基]-9-羥基-5，6-二甲基-6H-吡啶并[4，3-b]咔唑-1-羧酰胺、asulacrine、(5a，5aB，8aa，9b)-9-[2-[N-[2-(二甲基氨基)乙基]-N-甲基氨基]乙基]-5-[4-羥基-3，5-二甲氧基苯基]-5，5a，6，8，8a，9-六氫氟(3’，4’:6，7)萘(2，3-d)-1，3-二氧雜環(huán)戊烯-6-酮、2，3-(亞甲基二氧基)-5-甲基-7-羥基-8-甲氧基苯并[c]-菲啶、6，9-二[(2-氨乙基)氨基]苯并[g]異奎啉-5，10-二酮、5-(3-氨基丙基氨基)-7，10-二羥基-2-(2-羥基乙基氨基甲基)-6H-吡唑并[4，5，1-de]吖啶-6-酮、N-[1-[2-(二乙基氨基)乙氨基]-7-甲氧基-9-氧代-9H-噻噸-4-基甲基]甲酰胺、N-(2-(二甲基氨基)乙基)吖啶-4-羧酰胺、6-[[2-(二甲基氨基)乙基]氨基|-3-羥基-7H-茚并[2，1-c]喹啉-7-酮和dimesna。
絲分裂驅(qū)動(dòng)蛋白抑制劑，特別是人絲分裂驅(qū)動(dòng)蛋白KSP抑制劑的實(shí)例描述于PCT公開文本W(wǎng)O 01/30768、WO 01/98278、WO03/050,064、WO 03/050,122、WO 03/049,527、WO 03/049,679，、WO03/049,678和WO 03/39460和未決PCT申請(qǐng)Nos.US03/06403(提交于2003年3月4日)、US03/15861(提交于2003年5月19日)、US03/15810(提交于2003年5月19日)、US03/18482(提交于2003年6月12日)和US03/18694(提交于2003年6月12日)中。在一種實(shí)施方案中，絲分裂驅(qū)動(dòng)蛋白抑制劑包括但不限于KSP抑制劑、MKLPl抑制劑、CENP-E抑制劑、MCAK抑制劑、Kifl4抑制劑、Mphosphl抑制劑和Rab6-KEFL抑制劑。
“涉及絲分裂進(jìn)程的激酶抑制劑”包括但不限于aurora激酶抑制劑、Polo類激酶(PLK)抑制劑(特別是PLK-1抑制劑)、bub-1抑制劑和bub-R1抑制劑。
“抗增殖劑”包括反義RNA和DNA低聚核苷酸(比如G3139、ODN698、RVASKRAS、GEM231和INX3001)和代謝拮抗劑(比如依諾他濱、卡莫氟、替加氟、噴司他丁、去氧氟尿甘、三甲曲沙、氟達(dá)拉濱、卡培他濱、加洛他濱、阿糖胞苷、ocfosfate、fosteabine氫氧化鈉、雷替曲塞、paltitrexid、乙嘧替氟、噻唑呋啉、地西他濱、諾拉曲塞、培美曲塞、nelzarabine、2’-去氧-2’-甲基idenecytidine、2’-氟亞甲基-2’-脫氧胞苷、N-[5-(2，3-二氫-苯并呋喃基)磺?；鵠-N’-(3，4-二氯苯基)脲、N6-[4-去氧-4-[N2-[2(E)，4(E)-十四碳二烯酯基]甘氨酰胺基]-L-甘油基-B-L-七吡喃甘露糖基]腺嘌呤、aplidine、ecteinascidin、曲沙他濱、4-[2 2-氨基-4-氧代-4，6，7，8-四氫-3H-嘧啶并[5，4-b][1，4]噻嗪-6-基-(S)-乙基]-2，5-thienoyl-L-麩氨酸、氨基蝶呤、5-氟脲嘧啶、亞硝基羥基丙氨酸、11-乙酰基-8-(氨基甲?；趸谆?-4-甲?；?6-甲氧基-14-氧雜-1，11-二氮雜四環(huán)(7.4.1.0.0)-十四碳-2，4，6-三烯-9-基乙酸酯、苦馬豆素、洛美曲索、右雷佐生、甲硫氨酸酶、2’-氰基-2’-去氧-N4-棕櫚?；?1-B-D-阿拉伯呋喃糖基腺嘌呤胞嘧啶和3-氨基吡啶-2-甲醛縮胺基硫脲。
單克隆抗體靶體治療劑的實(shí)例包括具有連接在癌細(xì)胞特定或者靶細(xì)胞特定單克隆抗體上的細(xì)胞毒素劑或者放射性同位素的那些治療劑。其實(shí)例包括Bexxar。
“HMG-CoA還原酶抑制劑”是指3-羥基-3-甲基戊二酰-輔酶A還原酶抑制劑?？梢詰?yīng)用的HMG-CoA還原酶抑制劑的實(shí)例包括但不限于洛伐他汀(MEVACOR；參見美國專利Nos.4,231,938、4,294,926和4,319,039)、辛伐他汀(ZOCOR；參見美國專利Nos.4,444,784、4,820,850和4,916,239)、普伐他汀(PRAVACHOL；參見美國專利Nos.4,346,227、4,537,859、4,410,629、5,030,447和5,180,589)、氟伐他汀(LESCOL；參見美國專利Nos.5,354,772、4,911,165、4,929,437、5,189,164、5,118,853、5,290,946和5,356,896)和阿伐他汀(LIPITOR；參見美國專利Nos.5,273,995、4,681,893、5,489,691和5,342,952)。這些化合物以及其它可以用于本發(fā)明方法中的HMG-CoA還原酶抑制劑的結(jié)構(gòu)式描述于M.Yalpani，“Cholesterol Lowering Drugs”，Chemistiy&工業(yè)，85～89頁(1996年2月5日)的第87頁和美國專利Nos.4,782,084與4,885,314中。在此使用的術(shù)語HMG-CoA還原酶抑制劑包含所有藥學(xué)上可接受的內(nèi)酯和開放酸形式(即，其中內(nèi)酯環(huán)開放形成游離酸)，以及具有HMG-CoA還原酶抑制活性的化合物的鹽和酯形式，并且因此上述鹽、酯、開放酸和內(nèi)酯形式的用途都包括在本發(fā)明范圍內(nèi)。
“異戊烯基蛋白轉(zhuǎn)移酶抑制劑”是指抑制任意一種異戊烯基蛋白轉(zhuǎn)移酶或者任意異戊烯基蛋白轉(zhuǎn)移酶組合物的化合物，所述異戊烯基-蛋白轉(zhuǎn)移酶包括法呢基蛋白轉(zhuǎn)移酶(FPTase)、香葉基香葉基-蛋白轉(zhuǎn)移酶類型I(GGPTase-I)和香葉基香葉基-蛋白轉(zhuǎn)移酶類型-II(GGPTase-II，還稱為Rab GGPTase)。
異戊烯基-蛋白轉(zhuǎn)移酶抑制劑的實(shí)例公開于以下公開文本和專利中WO 96/30343、WO 97/18813、WO 97/21701、WO 97/23478、WO97/38665、WO 98/28980、WO 98/29119、WO 95/32987、U.S.Pat.No.5,420,245、U.S.Pat.No.5,523,430、U.S.Pat.No.5,532,359、U.S.Pat.No.5,510,510、U.S.Pat.No.5,589,485、U.S.Pat.No.5,602,098、歐洲專利公開0 618 221、歐洲專利公開0 675 112、歐洲專利公開0 604 181、歐洲專利公開0 696 593、WO 94/19357、WO 95/08542、WO 95/11917、WO 95/12612、WO 95/12572、WO 95/10514、U.S.Pat.No.5,661,152、WO 95/10515、WO 95/10516、WO 95/24612、WO 95/34535、WO95/25086、WO 96/05529、WO 96/06138、WO 96/06193、WO 96/16443、WO 96/21701、WO 96/21456、WO 96/22278、WO 96/24611、WO96/24612、WO 96/05168、WO 96/05169、WO 96/00736、U.S.Pat.No.5,571,792、WO 96/17861、WO 96/33159、WO 96/34850、WO 96/34851、WO 96/30017、WO 96/30018、WO 96/30362、WO 96/30363、WO96/31111、WO 96/31477、WO 96/31478、WO 96/31501、WO 97/00252、WO 97/03047、WO 97/03050、WO 97/04785、WO 97/02920、WO97/17070、WO 97/23478、WO 97/26246、WO 97/30053、WO 97/44350、WO 98/02436和U.S.Pat.No.5,532,359。異戊烯基-蛋白轉(zhuǎn)移酶抑制劑對(duì)血管形成的作用的實(shí)例參見European J.of Cancer，Vol.35，No.9，pp.1394-1401(1999)。
“血管形成抑制劑”是指抑制新血管形成的化合物，與機(jī)制無關(guān)。血管形成抑制劑的實(shí)例包括但不限于酪氨酸激酶抑制劑(比如酪氨酸激酶受體FIt-1(VEGFRl)和FIk-1/KDR(VEGFR2)抑制劑、表皮源生長因子抑制劑、成纖維細(xì)胞源生長因子抑制劑或者血小板源生長因子抑制劑)、MMP(基體金屬蛋白酶)抑制劑、整聯(lián)蛋白阻斷劑、干擾素α、白細(xì)胞間介素-12、戊聚糖多硫酸鹽、環(huán)加氧酶抑制劑(包括比如阿斯匹林和布洛芬的非甾族抗炎藥(NSADDs)以及比如西利考昔和羅非考昔的環(huán)氧酶-2抑制劑)(PNAS，Vol.89，p.7384(1992)；7NCI，Vol.69，p.475(1982)；Arch.Opthalmol.，Vol.108，p.573(1990)；Anat.Rec，Vol.238，p.68(1994)；FEBS Letters，Vol.372，p.83(1995)；Clin，Orthop.Vol.313，p.76(1995)；J.MoI.Endocrinol，Vol.16，p.107(1996)；Jpn.J.Pharmacol，Vol.75，p.105(1997)；Cancer Res.，Vol.57，p.1625(1997)；Cell，Vol.93，p.705(1998)；Intl.J.MoI.Med.，Vol.2，p.715(1998)；J.Biol.Chem.，Vol.274，p.9116(1999))、甾族抗炎藥(比如皮質(zhì)類固醇激素、鹽皮質(zhì)激素、地塞米松、潑尼松、潑尼松龍、甲基強(qiáng)的松龍、倍他米松)、羧基氨基咪唑、康布瑞塔卡汀A-4、角鯊胺、6-O-氯乙酰基-羰基-煙曲霉醇、沙立度胺、血管抑素、肌鈣蛋白-1、血管緊張素II拮抗劑(參見Fernandez等人，J.Lab.Clin.Med.105141-145(1985))、和VEGF抗體(參見Nature Biotechnology，Vol.17，pp.963-968(1999年10月)；Kim等人，Nature，362，841-844(1993)；WO 00/44777；和WO00/61186)。
其它調(diào)節(jié)或者抑制血管形成并且可以與本發(fā)明化合物組合使用的治療劑包括調(diào)節(jié)或者抑制凝血和纖維蛋白溶解系統(tǒng)的試劑(參見review in Clin.Chem.La.Med.38679-692(2000))。上述調(diào)節(jié)或者抑制凝血和纖維蛋白溶解途徑的試劑的實(shí)例包括但不限于肝磷脂(參見Tliromb.Haemost.8010-23(1998))、低分子量肝磷脂和羧肽酶U抑制劑(也稱為活性可活化凝血酶纖維蛋白溶解抑制劑[TAFIa])(參見Thrombosis Res.101329-354(2001))。TAFIa抑制劑描述于PCT公開文本W(wǎng)O 03/013,526和U,S No.60/349,925(提交于2002年1月18日)中。
“干擾細(xì)胞周期檢驗(yàn)點(diǎn)的試劑”是指抑制傳感細(xì)胞周期檢驗(yàn)點(diǎn)信號(hào)的蛋白激酶，從而使癌細(xì)胞對(duì)DNA損傷劑敏感的化合物。所述始基包括ATR、ATM、Chk1和Chk2激酶抑制劑以及cdk和cdc激酶抑制劑，其具體例證為7-羥基星形孢菌素、flavopiridol、CYC202(Cyclacel)和BMS-387032。
“細(xì)胞增殖和存活信號(hào)通道抑制劑”是指抑制細(xì)胞表面受體和那些表面受體的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)級(jí)聯(lián)下游的藥物試劑。所述試劑包括EGFR抑制劑(例如吉非替尼和埃羅替尼)、ERB-2抑制劑(例如曲妥珠單抗)、IGFR抑制劑、細(xì)胞因子受體抑制劑、MET抑制劑、PI3K抑制劑(例如LY294002)、絲氨酸/蘇氨酸激酶抑制劑(包括但不限于AM抑制劑，比如公開于WO 03/086404、WO 03/086403、WO 03/086394、WO03/086279、WO 02/083675、WO 02/083139、WO 02/083140和WO02/083138中的AM抑制劑)、Raf激酶抑制劑(例如BAY-43-9006)、MEK抑制劑(例如CI-1040和PD-098059)和mTOR抑制劑(例如Wyeth CCI-779和Ariad AP23573)。所述試劑包括小分子抑制劑化合物和抗體拮抗劑。
“細(xì)胞程序死亡誘發(fā)劑”包括TNF受體家族成員(包括TRAIL受體)的活化劑。
本發(fā)明還包括與選擇性COX-2抑制劑NSAID’s的聯(lián)用?；诒菊f明書，COX-2選擇性抑制劑NSAID’s的定義為相對(duì)于COX-1，抑制COX-2的特異性至少為100倍的那些抑制劑，根據(jù)通過細(xì)胞或者微粒體測(cè)定測(cè)定的COX-2的IC50與COX-1的IC50的比例進(jìn)行衡量。所述化合物包括但不限于公開于U.S.Pat.5,474,995、U.S.Pat.5,861,419、U.S.Pat.6,001,843、U.S.Pat.6,020,343、U.S.Pat.5,409,944、U.S.Pat.5,436,265、U.S.Pat.5,536,752、U.S.Pat.5,550,142、U.S.Pat.5,604,26、U.S.5,698,584、U.S.Pat.5,710,140、WO 94/15932、U.S.Pat.5,344,991、U.S.Pat.5,134,142、U.S.Pat.5,380,738、U.S.Pat.5,393,790、U.S.Pat.5,466,823、U.S.Pat.5,633,272和U.S.Pat.5,932,598中的那些化合物，所有這些文獻(xiàn)都在此引入作為參考。
在本發(fā)明方法中特別有效地COX-2抑制劑為3-苯基-4-(4-(甲磺?；?苯基)-2-(5H)-呋喃酮；和5-氯-3-(4-甲磺?；?苯基2-(2-甲基-5-吡啶基)吡啶；或者其藥學(xué)上可接受的鹽。
已經(jīng)作為COX-2特異抑制劑公開并且由此可用于本發(fā)明中的化合物包括但不限于帕瑞昔布、CELEBREX和BEXTRA或者其藥學(xué)上可接受的鹽。
其它血管形成抑制劑的實(shí)例包括但不限于血管內(nèi)皮抑素、烏克蘭、豹蛙酶、IM862、5-甲氧基-4-[2-甲基-3-(3-甲基-2-丁烯基)oxiranyl]-1-氧雜螺[2，5]辛-6-基(氯乙?；?氨基甲酸酯、acetyldinanaline、5-氨基-1-[[3，5-二氯-4-(4-氯苯甲酰基)苯基]甲基]-1H-1，2，3-三唑-4-羧酰胺、CM101、角鯊胺、combretastatin、RPI4610、NX31838、硫酸化的五甘露糖磷酸酯、7，7-(羰基-二[亞氨基-N-甲基-4，2-吡咯]-羰基亞氨基)-二-(1，3-萘二磺酸鹽)和3-[(2，4-二甲基吡咯-5-基)亞甲基]-2-吲哚酮(SU5416)。
以上所使用的“整聯(lián)蛋白阻斷劑”是指選擇性對(duì)抗、抑制或者抵消生理配體結(jié)合至αvβ3整聯(lián)蛋白的化合物，指選擇性對(duì)抗、抑制或者抵消生理配體結(jié)合至αvβ5整聯(lián)蛋白的化合物，指選擇性對(duì)抗、抑制或者抵消生理配體結(jié)合至αvβ3整聯(lián)蛋白和αvβ5整聯(lián)蛋白的化合物，和指對(duì)抗、抑制或者抵消表達(dá)于毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞上的特定整聯(lián)蛋白的化合物。該術(shù)語還指αvβ6、αvβ8、α1β1、α2β1、α5β1、α6β1和α6β4整聯(lián)蛋白拮抗劑。該術(shù)語還指任何αvβ3、αvβ5、αvβ6、αvβ8、α1β1、α2β1、α5β1、α6β1和α6β4整聯(lián)蛋白的組合拮抗劑。
一些酪氨酸激酶抑制劑的具體實(shí)例包括N-(三氟甲基苯基)-5-甲基異唑基-4-羧酰胺、3-[(2，4-二甲基吡咯-5-基)亞甲基|吲哚-2-酮、17-(烯丙基氨基)-17-去甲氧基格爾德霉素、4-(3-氯-4-氟苯基氨基)-7-甲氧基-6-[3-(4-嗎啉基)丙氧基]喹唑啉、N-(3-乙炔基苯基)-6，7-二(2-甲氧基乙氧基)-4-喹唑啉胺、BIBX1382、2，3，9，10，11，12-六氫-10-(羥甲基)-10-羥基-9-甲基-9，12-環(huán)氧-1H-二吲哚并[1，2，3-fg:3’，2’，1’-kl]吡咯并[3，4-i][1，6]苯并二英-1-酮、SH268、染料木素、STI571、CEP2563、4-(3-氯苯基氨基)-5，6-二甲基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶甲磺酸、4-(3-溴-4-羥苯基)氨基-6，7-二甲氧基喹唑啉、4-(4’-羥苯基)氨基-6，7-二甲氧基喹唑啉、SU6668、STI571A、N-4-氯苯基-4-(4-吡啶基甲基)-1-酞嗪胺和EMD121974。在本發(fā)明方法中還包括與不是抗癌化合物的其它化合物的聯(lián)用。例如，本發(fā)明權(quán)利要求化合物與用于治療某些惡性腫瘤的PPAR-γ激動(dòng)劑和PPAR-δ激動(dòng)劑的聯(lián)用。PPAR-γ和PPAR-δ為核過氧化物酶體增殖劑活化受體γ和δ。PPAR-γ在內(nèi)皮細(xì)胞上的表達(dá)及其在血管形成中的介入已經(jīng)在文獻(xiàn)中得到了報(bào)道(參見J.Cardiovasc.Pharmacol.1998；31909-913；J.Biol.Chem.1999；2749116-9121；Invest.Ophthalmol Vis.ScL 2000；412309-2317)。最近，已經(jīng)表明PPAR-γ激動(dòng)劑在體外抑制對(duì)VEGF的血管形成響應(yīng)；曲格列酮和羅格列酮馬來酸鹽都抑制鼠中視網(wǎng)膜新血管化的發(fā)展。(Arch.Ophthamol.2001；119709-717)。PPAR-γ激動(dòng)劑和PPAR-γ/α激動(dòng)劑的實(shí)例包括但不限于噻唑烷二酮(比如DRF2725、CS-011、曲格列酮、羅格列酮和吡格列酮)、非諾貝特、吉非貝齊、氯苯丁酯、GW2570、SB219994、AR-H039242、JTT-501、MCC-555、GW2331 GW409544、NN2344、KRP297、NPOIlO、DRF4158、NN622、GI262570 PNU182716DRF552926、2-[(5，7-二丙基-3-三氟甲基-1，2-苯并異唑-6-基)氧基]-2-甲基丙酸(公開于USSN 09/782,856中)和2(R)-7-(3-(2-氯-4-(4-氟苯氧基)苯氧基)丙氧基)-2-乙基色滿-2-甲酸(公開于USSN 60/235,708和60/244,697中)。
本發(fā)明的另一實(shí)施方案為本發(fā)明公開的化合物與抗病毒劑(比如，包括9-(1，3-二羥-2-丙氧甲基)鳥嘌呤的核苷類似物)聯(lián)合用于治療癌癥的用途。參見WO 98/04290。本發(fā)明的另一實(shí)施方案為本發(fā)明公開的化合物與基因治療聯(lián)合應(yīng)用用于治療癌癥的用途。關(guān)于治療癌癥的遺傳策略綜述參見Hall等人(Am J Hum Genet 61785-789，1997)和Kufe等人(Cancer Medicine，5th Ed，pp 876-889，BC Decker，Hamilton 2000)所述?；虔煼梢杂糜谵D(zhuǎn)移任何消除基因的腫瘤。所述基因的實(shí)例包括但不限于p53，其可以經(jīng)重組病毒介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)移(例如，參見美國專利No.6,069,134)、uPA/uPAR拮抗劑(“Adenovirus-Mediated Delivery of a uPA/uPAR AntagonistSuppresses Angiogenesis-Dependent Tumor Growth and Disseminationin Mice”，Gene Therapy，August 1998；5(8)1105-13)和干擾素γ(JImmunol 2000；164217-222)進(jìn)行遞送。
本發(fā)明化合物還可以聯(lián)合固有多抗病性(MDR)抑制劑一起給藥，所述MDR特別是與轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白高水平表達(dá)相關(guān)的MDR。所述MDR抑制劑包括p-糖蛋白(P-gp)抑制劑，比如LY335979、XR9576、OC144-093、R101922、VX853和PSC833(valspodar)。
本發(fā)明化合物可以與抗嘔吐劑聯(lián)合使用，從而治療單獨(dú)使用或者與放射治療一起使用本發(fā)明化合物可以引起的惡心或者嘔吐，包括急性、延遲性、后發(fā)階段和先發(fā)嘔吐。為了預(yù)防或者治療嘔吐，本發(fā)明化合物可以與其它抗嘔吐劑聯(lián)合使用，特別是神經(jīng)激肽-1受體拮抗劑、5HT3受體拮抗劑(比如昂丹司瓊、格拉司瓊、托烷司瓊和zatisetron)、GABAB受體激動(dòng)劑(比如氯苯氨丁酸)、皮質(zhì)類固醇激素(比如地卡特隆(地塞米松)、丙酮縮去炎松、曲安西龍、Nasalide、布地奈德、Benecorten或者公開于美國專利Nos.2,789,118、2,990,401、3,048,581、3,126,375、3,929,768、3,996,359、3,928,326和3,749,712中的皮質(zhì)類固醇激素)、抗多巴胺能(比如吩噻嗪(例如普魯?shù)哙?、氟非那嗪、硫利達(dá)嗪和甲砜達(dá)嗪)滅吐靈或者屈大麻酚)。在一種實(shí)施方案中，將選自神經(jīng)激肽-1受體拮抗劑、5HT3受體拮抗劑和皮質(zhì)類固醇激素的抗嘔吐劑作為添加劑進(jìn)行給藥，用于治療或者預(yù)防通過給藥本發(fā)明化合物可以產(chǎn)生的嘔吐。
用于與本發(fā)明化合物聯(lián)合應(yīng)用的神經(jīng)激肽-1受體拮抗劑充分描述于以下文獻(xiàn)中，例如美國專利Nos.5,162,339、5,232,929、5,242,930、5,373,003、5,387,595、5,459,270、5,494,926、5,496,833、5,637,699、5,719,147中；歐洲專利公開Nos.EP 0 360 390、0 394 989、0428 434、0429 366、0430 771、0436 334、0443 132、0482 539、0498 069、0499 313、0 512 901、0 512 902、0 514 273、0 514 274、0 514 275、0 514276、0 515681、0 517 589、0 520 555、0 522 808、0 528 495、0 532 456、0 533 280、0 536 817、0 545 478、0 558 156、0 577 394、0 585 913，0 590 152、0 599538、0 610 793、0 634402、0 686 629、0 693 489、0 694 535、0 699 655、0 699 674、0707 006、0 708 101、0709 375、0709 376、0 714 891、0 723959、073 3632和0 776 893中；PCT國際專利申請(qǐng)公開Nos.WO90/05525、90/05729、91/09844、91/18899、92/01688、92/06079、92/12151、92/15585、92/17449、92/20661、92/20676、92/21677、92/22569、93/00330、93/00331、93/01159、93/01165、93/01169、93/01170、93/06099、93/09116、93/10073、93/14084、93/14113、93/18023、93/19064、93/21155、93/21181、93/23380、93/24465、94/00440、94/01402、94/02461、94/02595、94/03429、94/03445、94/04494、94/04496、94/05625、94/07843、94/08997、94/10165、94/10167、94/10168、94/10170、94/11368、94/13639、94/13663、94/14767、94/15903、94/19320、94/19323、94/20500、94/26735、94/26740、94/29309、95/02595、95/04040、95/04042、95/06645、95/07886、95/07908、95/08549、95/11880、95/14017、95/15311、95/16679、95/17382、95/18124、95/18129、95/19344、95/20575、95/21819、95/22525、95/23798、95/26338、95/28418、95/30674、95/30687、95/33744、96/05181、96/05193、96/05203、96/06094、96/07649、96/10562、96/16939、96/18643、96/20197、96/21661、96/29304、96/29317、96/29326、96/29328、96/31214、96/32385、96/37489、97/01553、97/01554、97/03066、97/08144、97/14671、97/17362、97/18206、97/19084、97/19942和97/21702中；和英國專利公開Nos.2266 529、2 268 931、2269 170、2 269 590、2 271 774、2292 144、2293 168、2 293 169和2302689中。所述化合物的制備充分公開于上述專利和公開文本中，它們都在此引入作為參考。
在一種實(shí)施方案中，用于與本發(fā)明化合物聯(lián)合應(yīng)用的神經(jīng)激肽-1受體拮抗劑選自2-(R)-(1-(R)-(3，5-二(三氟甲基)苯基)乙氧基)-3-(S)-(4-氟苯基)-4-(3-(5-氧代-1H，4H-1，2，4-三唑)甲基)嗎啉或者其藥學(xué)上可接受的鹽，該物質(zhì)描述于美國專利No.5,719,147中。本發(fā)明化合物還可以與用于治療貧血的試劑一同給藥。所述貧血治療劑為，例如連續(xù)的eythropoiesis受體活化劑(比如阿法依泊汀)。
本發(fā)明化合物還可以與用于治療中性白細(xì)胞減少的試劑一同給藥。所述中性白細(xì)胞減少治療劑為，例如，調(diào)節(jié)嗜中性白細(xì)胞(比如，人粒細(xì)胞集落刺激因子(G-CSF))形成和功能的造血生長因子。G-CSF的實(shí)例包括非格司亭。
本發(fā)明化合物還可以與免疫增強(qiáng)藥物(比如左旋咪唑、異丙肌苷和Zadaxin)一起給藥。
本發(fā)明化合物還可以與雙膦酸酯(理解為包括雙膦酸酯、二膦酸鹽、二膦酸和雙膦酸)聯(lián)合用于治療或者預(yù)防癌癥(包括骨癌)。雙膦酸酯的實(shí)例包括但不限于依膦(Didronel)、帕米磷酸(Aredia)、阿侖膦酸(Fosamax)、利塞膦酸(Actonel)、唑來磷酸(Zometa)、伊班膦酸(Boniva)、因卡膦酸或者英卡膦酸、氯屈膦酸、EB-1053、米諾膦酸、奈立膦酸、piridronate和替魯膦酸，包括其任何和所有藥學(xué)上可接受的鹽、衍生物、水合物及其混合物。
由此，本發(fā)明的范圍包括本發(fā)明權(quán)利要求的化合物與選自以下的第二種化合物的用途雌激素受體調(diào)節(jié)劑、雄激素受體調(diào)節(jié)劑、類視黃醇受體調(diào)節(jié)劑、細(xì)胞毒素/細(xì)胞生長抑制劑、抗增殖劑、異戊二烯基-蛋白轉(zhuǎn)移酶抑制劑、HMG-CoA還原酶抑制劑、HIV蛋白酶抑制劑、逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑、血管形成抑制劑、PPAR-γ激動(dòng)劑、PPAR-δ激動(dòng)劑、抗病毒劑、固有多抗病性抑制劑、抗嘔吐劑、用于治療貧血的試劑、用于治療中性白細(xì)胞減少的試劑、免疫增強(qiáng)藥物、細(xì)胞增殖和存活信號(hào)抑制劑、干擾細(xì)胞周期檢驗(yàn)點(diǎn)的試劑、細(xì)胞程序死亡誘發(fā)劑和雙膦酸酯。
與本發(fā)明化合物有關(guān)的術(shù)語“給藥”及其變形(例如，“用藥”化合物)，意思是將化合物或者化合物前藥引入到需要治療的動(dòng)物體系中。當(dāng)本發(fā)明化合物或者其前藥與一種或多種其它活性劑(例如細(xì)胞毒素劑等等)組合提供時(shí)，應(yīng)當(dāng)將“給藥”及其變形理解為包含化合物或者其前藥和其它試劑同時(shí)引入和順序引入。
在本文中使用的術(shù)語“組合物”意圖包括含有指定量的指定成分的產(chǎn)品，以及任何由指定量的指定成分組合直接或者間接得到的產(chǎn)品。
本文中使用的術(shù)語“治療有效量”是指能夠在組織、系統(tǒng)、動(dòng)物或者人類中引起生物反應(yīng)或者藥物反應(yīng)的活性物質(zhì)或者藥物制劑的量，該量由研究人員、獸醫(yī)、醫(yī)療醫(yī)生或者其他臨床醫(yī)生所探索。
術(shù)語“治療癌癥”或者“癌癥的治療”是指給藥遭受癌癥癥狀折磨的哺乳動(dòng)物和指通過殺死癌細(xì)胞從而減輕癌癥癥狀的作用，并且是指癌癥生長和/或轉(zhuǎn)移受到抑制的作用。
在一種實(shí)施方案中，意欲用作第二化合物的血管形成抑制劑選自酪氨酸激酶抑制劑、表皮源生長因子抑制劑、成纖維細(xì)胞源生長因子抑制劑、血小板源生長因子抑制劑、MMP(基體金屬蛋白酶)抑制劑、整聯(lián)蛋白阻斷劑、干擾素-α、白細(xì)胞間介素-12、戊聚糖多硫酸鹽、環(huán)加氧酶抑制劑、羧酰胺基三唑、康布瑞塔卡汀A-4、角鯊胺、6-O-氯乙?；?羰基)-煙曲霉醇、沙立度胺、血管抑素、肌鈣蛋白-1或者VEGF抗體。在一種實(shí)施方案中，雌激素受體調(diào)節(jié)劑為他莫昔芬或者雷洛昔芬。
本發(fā)明權(quán)利要求還包括治療癌癥的方法，其包括協(xié)同放射治療和/或協(xié)同選自以下的化合物給藥治療有效量的式I化合物雌激素受體調(diào)節(jié)劑、雄激素受體調(diào)節(jié)劑、類視黃醇受體調(diào)節(jié)劑、細(xì)胞毒素/細(xì)胞生長抑制劑、抗增殖劑、異戊烯基-蛋白轉(zhuǎn)移酶抑制劑、HMG-CoA還原酶抑制劑、HIV蛋白酶抑制劑、逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑、血管形成抑制劑、PPAR-γ激動(dòng)劑、PPAR-δ激動(dòng)劑、抗病毒劑、固有多抗病性抑制劑、抗嘔吐劑、用于治療貧血的試劑、用于治療中性白細(xì)胞減少的試劑、免疫增強(qiáng)藥物、細(xì)胞增殖和存活信號(hào)抑制劑、干擾細(xì)胞周期檢驗(yàn)點(diǎn)的試劑、細(xì)胞程序死亡誘發(fā)劑和雙膦酸酯。
本發(fā)明的另一實(shí)施方案為治療癌癥的方法，其包括協(xié)同泰素或者曲妥珠單抗給藥治療有效量的式I化合物。本發(fā)明還包括治療或者預(yù)防癌癥的方法，包括協(xié)同COX-2抑制劑給藥治療有效量的式I化合物。
本發(fā)明還包括用于治療或者預(yù)防癌癥的藥物組合物，其包括治療有效量的式I化合物和選自以下的化合物雌激素受體調(diào)節(jié)劑、雄激素受體調(diào)節(jié)劑、類視黃醇受體調(diào)節(jié)劑、細(xì)胞毒素/細(xì)胞生長抑制劑、抗增殖劑、異戊二烯基-蛋白轉(zhuǎn)移酶抑制劑、HMG-CoA還原酶抑制劑、HIV蛋白酶抑制劑、逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑、血管形成抑制劑、PPAR-γ激動(dòng)劑、PPAR-δ激動(dòng)劑、抗病毒劑、細(xì)胞增殖和存活信號(hào)抑制劑、干擾細(xì)胞周期檢驗(yàn)點(diǎn)的試劑、細(xì)胞程序死亡誘發(fā)劑和雙膦酸酯。
根據(jù)包含在本文中的教導(dǎo)，本發(fā)明的這些和其它方面將是顯而易見的。
所有作出標(biāo)記的專利、出版物和未決專利申請(qǐng)都在此引入作為參考。
用于化學(xué)過程描述和以下實(shí)施例中的縮略語為AcOH(乙酸)；DCE(二氯甲烷)；DIBAL-H(二異丁基氫化鋁)；DIEA(二異丙基乙胺)；DME(乙二醇二甲醚)；DMAP(4，4-二甲基氨基吡啶)；DMF(二甲基甲酰胺)；DMSO(二甲基亞砜)；DTT(二硫蘇糖醇)；EDC(乙基-3(3-二甲基氨基丙基)碳化二亞胺)；EtOAc(乙酸乙酯)；FACS(熒光激活細(xì)胞分類法)；FITC(異硫氰酸熒光素)；IPTG(異丙基-β-D-硫代半乳糖苷)；LDA(二異丙基氨基鋰)；LHMDS(六甲基二硅氮化鋰)、mCPBA(間-氯過氧苯甲酸)；MS(質(zhì)譜)；NaHMDS(二(三甲基甲硅烷基)氨基鈉)；NMR(核磁共振)；PMSF(苯基甲基磺酰氟)；PyBop(1H-1，2，3-苯并三唑-1-基氧基)(三吡咯烷-1-基)膦六氟磷酸鹽)；SiO2(硅膠)；TBAI(碘化四-正丁基銨)；EA(三乙胺)；THF(四氫呋喃)；TFA(三氟乙酸)；TMSCN(三甲基甲硅烷基腈)；和TsCl(對(duì)甲苯磺酰氯)。
實(shí)施例1參見化合物序號(hào)1 步驟1 在0℃下，向?qū)Π被郊姿峒柞?0.72g，4.75mMol)的CH2Cl2(10mL)溶液中加入N-甲基嗎啉(0.079mL，7.12mMol)。攪拌15分鐘之后，在0℃下，將對(duì)硝基苯基磺酰氯(0.96g，4.33mMol)加入其中，在此溫度下將其攪拌1小時(shí)，然后在室溫下將其攪拌過夜。將上述反應(yīng)用CH2Cl2稀釋、用1N HCl和水洗滌，然后用無水MgSO4對(duì)其進(jìn)行干燥。在除去溶劑之后，通過在二氧化硅上進(jìn)行色譜分離對(duì)所得粗產(chǎn)品進(jìn)行純化，用40％EtOAc/石油醚洗脫，從而得到期望的磺酰胺。MS(ES)C14H12N2O6S，理論值336，實(shí)測(cè)值337(M+H+)。
步驟2
向從步驟1所得的酯(0.08g，0.24mMol)的甲醇(2mL)溶液中加入2N NaOH(2mL)。在室溫下將其攪拌3小時(shí)之后，將溶劑真空除去。將所得殘余物溶于水(5mL)中并且用冷1N HCl對(duì)其進(jìn)行酸化。將形成的沉淀過濾、用水洗滌并且將其風(fēng)干，從而得到期望的羧酸。
1H NMR(400MHz，d6-DMSO)δ 8.34(d，2H，J＝7.0Hz)，8.06(d，2H，J＝7.0Hz)，7.87(d，2H，J＝7.0Hz)，7.2(d，2H，J＝7.0Hz)，4.85(1H，寬s)。MS(ES)C13H10N2O6S，理論值323，實(shí)測(cè)值324(M+H+)。
步驟3 將得自于步驟2的羧酸(0.050g，0.l55mMol)和O-叔丁基二甲基甲硅烷(0.057mL，0.47mMol)混合物溶于CH2Cl2(1.5mL)中，并且將其冷卻至0C。然后將EDC(0.0.033g，0.172mMol)加入其中，在室溫下將所得混合物攪拌3小時(shí)。用CH2Cl2對(duì)上述反應(yīng)混合物進(jìn)行稀釋、在室溫下將其與2N HCl一起攪拌1小時(shí)、用水洗滌、干燥(Na2SO4)并且在減壓下對(duì)其進(jìn)行濃縮。將所得殘余物溶于THF(1mL)中并且用AcOH將其處理過夜。使用CH2Cl2/MeOH(60∶1)，在硅膠上通過柱色譜對(duì)所得粗產(chǎn)品進(jìn)行純化，從而得到標(biāo)題的異羥肟酸。
1H NMR(400MHz，d6-DMSO)δ 8.36(d，2H，J＝7.0Hz)，8.16(d，2H，J＝7.0Hz)，7.94(d，2H，J＝7.0Hz)，7.32(d，2H，J＝7.0Hz)。MS(ES)C13H11N3O6S，理論值337，實(shí)測(cè)值338(M+H+)。
實(shí)施例2參見化合物序號(hào)71
步驟1 在室溫下，將得自于實(shí)施例步驟1的酯化合物(0.21g，0.62mMol)的DMF(10mL)溶液加入到Cs2CO3(0.41g，2.5mMol)中。攪拌30分鐘之后，將MeI(0.16ml，2.66mMol)加入其中并且在該溫度下將其攪拌過夜。所得反應(yīng)混合物用水進(jìn)行稀釋并用CH2Cl2進(jìn)行提取。用水對(duì)所得有機(jī)相進(jìn)行洗滌，然后用MgSO4對(duì)其進(jìn)行干燥。在除去溶劑之后，通過在二氧化硅上進(jìn)行色譜分離對(duì)所得粗產(chǎn)品進(jìn)行純化，用30％EtOAc/石油醚洗脫，從而得到期望的磺酰胺。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ 8.36(d2，H，J＝7.0Hz)，8.0(d，2H，J＝7.0Hz)，7.8(d，2H，J＝7.0Hz)，7.24(d，2H，J＝7.0Hz)，3.92(3H，s)。MS(ES)C15H14N2O6S，理論值350，實(shí)測(cè)值351(M+H+)。
步驟2 向以上步驟1所得的酯(0.165g，0.47mMol)的MeOH(5mL)和THF(10mL)混合溶液中加入2N NaOH(5mL)。將此混合物回流1小時(shí)，然后在真空中將溶劑除去。將所得殘余物溶于水(5mL)中并且用冷1N HCl對(duì)其進(jìn)行酸化。將形成的沉淀過濾、用水洗滌并且將其風(fēng)干，從而得到期望的羧酸。MS(ES)C14H12N2O6S，理論值336，實(shí)測(cè)值337(M+H+)。
步驟3 在0℃下，向得自于以上步驟2的羧酸(0.033g，0.098mMol)的CH2Cl2(1.5mL)溶液中加入O-叔丁基羥胺(0.050g)，隨后向其中加入EDC(0.0.028g，0.146mMol)。在室溫下將上述混合物攪拌2小時(shí)，然后用CH2Cl2進(jìn)行稀釋、用水洗滌、干燥(Na2SO4)并且在減壓下對(duì)其進(jìn)行濃縮。在室溫下，用TFA將上述所得殘余物處理過夜。使用CH2Cl2/MeOH(60∶1)，在硅膠上通過柱色譜對(duì)所得粗產(chǎn)品進(jìn)行純化，從而得到標(biāo)題的異羥肟酸。
1H NMR(400MHz，d6-DMSO)δ 8.36(d，2H，J＝7.0Hz)，8.16(d，2H，J＝7.0Hz)，7.94(d，2H，J＝7.0Hz)，7.32(d，2H，J＝7.0Hz)，3.7(3H，s)。MS(ES)C14H13N3O6S，理論值351，實(shí)測(cè)值352(M+H+)。
分別使用與實(shí)施例1和2中所述方法類似的方法，對(duì)表1和2中所述的本發(fā)明以下化合物進(jìn)行制備。
表1
表2
實(shí)施例3參見化合物序號(hào)141
步驟1 在0℃下，向4-苯甲酸甲酯(1.26g，7mMol)的CH2Cl2(40mL)溶液中順序加入吡啶(1.4mL)、DMAP(0.1g)和4-硝基苯甲酰氯(1.33g，7mMol)。在室溫下將上述混合物攪拌過夜。將形成的沉淀產(chǎn)品過濾、用水和EtOAc洗滌并且在抽吸下對(duì)其進(jìn)行干燥，從而得到標(biāo)題產(chǎn)品。從濾液中可以再分離得到0.6g產(chǎn)品。MS(ES)C15H12N2O5，理論值300，實(shí)測(cè)值301(M+H+)。
步驟2 向得自于以上步驟1的酯(0.3g，1mMol)的甲醇(6mL)溶液中加入2N NaOH(2mL)。將此混合物回流1小時(shí)，然后在真空中將溶劑除去。將所得殘余物溶于水(5mL)中并且用冷1N HCl對(duì)其進(jìn)行酸化。將形成的沉淀過濾、用水洗滌并且將其風(fēng)干，從而得到期望的羧酸(0.2 g)。MS(ES)C14H10N2O5，理論值286，實(shí)測(cè)值287(M+H+)。
步驟3
在0℃下，向得自于以上步驟2的羧酸(0.1g，0.35mMol)的CH2Cl2(3mL)和DMF(0.5mL)混合溶液中加入O-叔丁基二甲基甲硅烷基羥胺(0.078g，0.53mMol)，隨后向其中加入EDC(0.11g，0.575mMol)。在室溫下將上述混合物攪拌過夜。用CH2Cl2對(duì)上述反應(yīng)混合物進(jìn)行稀釋、用水洗滌、干燥(Na2SO4)并且在減壓下對(duì)其進(jìn)行濃縮。將所得殘余物溶于THF(2mL)、乙酸(1mL)和水(1mL)的混合物中并且在室溫下將其攪拌過夜。在真空中將溶劑除去，使用CH2Cl2/MeOH(60∶1)，在硅膠上通過柱色譜對(duì)所得粗產(chǎn)品進(jìn)行純化，從而得到標(biāo)題異羥肟酸。
MS(ES)C14H11N3O5，理論值301，實(shí)測(cè)值302(M+H+)。使用與實(shí)施例3中所述方法類似的方法，對(duì)表3和4中所述的本發(fā)明以下化合物進(jìn)行制備。
表3
表4
以下所列化合物被制備成TFA鹽化合物序號(hào).2、8-9、24、28、31-34、36、41-42、46、48-49、51、53-54、57、72、78-79、94、98、101-104、106、111-112、116、118-119、121-124、127、142、146-147、152和156-157。
試驗(yàn)在試驗(yàn)中對(duì)實(shí)施例中所述和表1～4中所示本發(fā)明化合物進(jìn)行試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)它們具有HDAC抑制活性(IC50 30μM)。其它測(cè)定方法為文獻(xiàn)中已知的方法并且本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員可以容易地進(jìn)行。用于確定HDAC抑制活性的實(shí)施例和記錄公開于下。
HDAC試驗(yàn)1在96孔微板Packard Optiplate中準(zhǔn)備2.5μl化合物或者二甲亞砜(20X)。向各個(gè)孔中加入37.5μl混合物A，在振蕩的同時(shí)將其在室溫下培養(yǎng)30分鐘，然后向其中加入10μl混合物B，在振蕩的同時(shí)將其在室溫下培養(yǎng)3.5小時(shí)，隨后向其中加入10μl終止混合物，在室溫下將其培養(yǎng)30分鐘，然后在FLUOSTAR中在激發(fā)355nM發(fā)射460/40nM時(shí)進(jìn)行讀數(shù)。
最終測(cè)定條件含有Hepes(pH7.4，50mM)、丙三醇(10％)、BSA(0.1mg/ml)、Triton X100(0.01％)、發(fā)螢光的肽IRBM91(Boc-Ala-Ala-Lys[ε-Ac]-AMC；20uM)、賴氨酰末端肽酶(LEP；0.25mAu/ml)或者賴氨酰C內(nèi)切蛋白酶(LysC；4.8mU/ml)和制滴菌素A(1μM)。最終測(cè)定體積為50μl。
混合物A含有緩沖液A IX(37.5μl)、HeLa-S3細(xì)胞核提取物(20μg/ml；酌量50μl/孔)或者HDAC1(1nM；酌量50μl/孔)。
混合物B含有緩沖液A IX(10μl)和Pep IRBM91(20μM；酌量50μl/孔)。終止混合物含有緩沖液A IX(10μl)、LEP或者Lys C(0.25mAu/ml)或者4.8mU/ml；酌量60μl最終容積)和制滴菌素A(1μM；酌量60μl最終容積)。
緩沖液A 1X含有Hepes(pH7.4；50mM)、丙三醇(10％)、BSA(0.1mg/ml)和Triton X100(0.01％)。
HDAC試驗(yàn)2在96孔微板Packard Optiplate中準(zhǔn)備2.5μl化合物或者DMSO(20X)。
向各個(gè)孔中加入37.5μl混合物A，然后向其中加入10μlMixB，在振蕩的同時(shí)將其在室溫下培養(yǎng)3.5小時(shí)，隨后向其中加入25μlSPA-抗生蛋白鏈菌素微球(在緩沖液A IX中)，最后從PackardTOPCOUNT中進(jìn)行讀數(shù)。
最終測(cè)定條件含有Hepes(pH7.4，50mM)、丙三醇(10％)、BSA(0.1mg/ml)、Triton X100(0.01％)、3H生物素-PEP439(生物素-G-A-乙?；?3H]K-R-H-R-[乙酰基-3H]K-V-NH2)、SPA-抗生蛋白鏈菌素微球(2mg/ml)和HeLa S3提取物(40μg/ml)。
最終測(cè)定體積為50μl。
混合物A含有緩沖液A 2X(25μl)、HeLa-S3提取物(40μg/ml)和H2O(至37.5μl)。
混合物B含有緩沖液A 2X(5μl)、Pep 439(50nM；酌量50μl最終體積)和H2O(至10μl)。
緩沖液A 2X含有Hepes(pH7.4；100mM)、丙三醇(20％)、BSA(0.2mg/ml)和Triton X100(0.02％)。
從HELA細(xì)胞中提取的細(xì)胞核(粘連或者懸浮)記錄從HeLa S3細(xì)胞從提取的細(xì)胞核(粘連或者懸浮)記錄參考Nare等人的1999 Anal.Biochem.，267390-396。
粘連HeLa S3細(xì)胞(0.5～1×109個(gè)細(xì)胞)的細(xì)胞核制備如下用1×PBS洗滌細(xì)胞兩次，將細(xì)胞刮削入1X PBS中，用1XPBS洗滌板，收集并且在4℃下將細(xì)胞在800 xg下自旋1 0分鐘，用1X PBS洗滌細(xì)胞團(tuán)粒(對(duì)細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù))，在4℃下將細(xì)胞在800xg下自旋10分鐘，在液氮中對(duì)細(xì)胞團(tuán)粒進(jìn)行冷凍并且將其貯存在-80℃下。
懸浮HeLa S3細(xì)胞(0.5～1×109個(gè)細(xì)胞)的細(xì)胞核制備如下在4℃下，通過在800xg下離心對(duì)細(xì)胞進(jìn)行收集，用1X PBS洗滌細(xì)胞團(tuán)粒，在4℃下將細(xì)胞在800xg下自旋10分鐘，重復(fù)洗滌步驟兩次(對(duì)細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù))，在液氮中對(duì)細(xì)胞團(tuán)粒進(jìn)行冷凍并且將其貯存在-80℃下。
將細(xì)胞團(tuán)粒再懸浮于裂解緩沖液(5ml/1×108個(gè)細(xì)胞；緩沖液含有0.25M蔗糖、0.45％NP40、10mM Tris-HCl(7.5)、10mM NaCl、5mM MgCl2、0.1mM EGTA、0.5mM PMSF、完全的蛋白酶抑制劑混合物)，將其渦旋10秒和放置在冰上15分鐘，在緩沖液中進(jìn)行自旋(25ml溶解產(chǎn)物/5ml緩沖液；緩沖液含有30％蔗糖、10mM Tris-HCl(7.5)、10mM NaCl、3mM MgCl2)，在4℃下在1,300xg下在緩沖液中將其自旋10分鐘，除去上層/緩沖液，將其如上所述再懸浮于裂解緩沖液中并且如上所述在緩沖液中再對(duì)其進(jìn)行自旋，除去上層/緩沖液。
對(duì)于細(xì)胞核提取，將細(xì)胞核團(tuán)粒再懸浮于細(xì)胞核提取緩沖液(13.5ml/5ml細(xì)胞核團(tuán)粒；細(xì)胞核提取緩沖液含有50mM Hepes pH7.4，(在HDAC測(cè)定2中使用還含有0.5mM PMSF和完全的蛋白酶抑制劑混合物))中，在凍結(jié)狀態(tài)下將其超聲處理成懸浮液(1分鐘，輸出控制在4～5)，在凍結(jié)狀態(tài)下放置30分鐘，4℃下在100,000xg下將其離心1小時(shí)，保持上層處于凍結(jié)，重復(fù)超聲處理/冰/離心步驟兩次以上，將三種上清液收集在一起并且使其透析過50mM Hepes pH7.4/10％丙三醇，在液氮中將其快速凍結(jié)成適宜的等分并且將其貯存在-80℃下。
在Hela細(xì)胞中表達(dá)的FLAG-標(biāo)簽的HDACl的提取和純化方法在DMEM、補(bǔ)充有抗生素的10％胎牛血清和谷氨酰胺中，在10cm培養(yǎng)皿上，使與pCDNA3-HDACl-FLAG短暫轉(zhuǎn)染的HeLa細(xì)胞生長至80％融合。用10ml冷PBS對(duì)細(xì)胞進(jìn)行洗滌并且將其刮削入2ml PBS中。在4℃下，在800xg下將細(xì)胞離心5分鐘，用30ml PBS對(duì)其進(jìn)行洗滌并且將其再懸浮于10ml PBS中，對(duì)其進(jìn)行計(jì)數(shù)、再離心和在-80℃下對(duì)其進(jìn)行冷凍。
將冷凍的細(xì)胞團(tuán)粒再懸浮于1ml含有完全的蛋白酶抑制劑的低滲lysis緩沖液(LB20mM Hepes pH7.9，0.25mM EDTA 10％丙三醇)中并且在凍結(jié)條件下將其培養(yǎng)15分鐘，隨后在2-ml DounceB均化器中對(duì)其進(jìn)行均化作用(25次撞擊)。將150mM KCl和0.5％NP-40加入到上述勻漿中，對(duì)所得溶液進(jìn)行超聲處理30秒鐘(輸出5/6，工作循環(huán)90)并且在4℃下將其培養(yǎng)1小時(shí)。在12000rpm和4℃下進(jìn)行30分鐘離心之后，收集上清液(可溶性提取物)并且使用BIORAD測(cè)定對(duì)蛋白質(zhì)濃度進(jìn)行確定。
抗ELAG M2親合樹脂(Sigma)用TBS洗滌三次并且用LB洗滌兩次。將10μl LB-洗滌的樹脂/mg蛋白質(zhì)(2-3ug標(biāo)記的-HDACl)加入到可溶性提取物(1mL)中，并且在4℃下，在溫和混合下將其培養(yǎng)過夜。然后通過離心對(duì)樹脂進(jìn)行收集，用LB將其洗滌一次，用LB+0.1％NP40洗滌兩次并且用洗脫緩沖液(50mM Hepes pH7.4、5％丙三醇、100mM KCl、0.01％Triton X-100)洗滌兩次。
通過加入過量10倍的含有100μg/ml 3XFLAG肽(SIGMA)的洗脫緩沖液，將親合純化的HDAC從樹脂上洗脫下來。通過蛋白質(zhì)印跡分析對(duì)純化HDAC的濃度進(jìn)行確定。
權(quán)利要求
1.根據(jù)式I的化合物 其中a為0或者1；b為0或者1；m為0、1或者2；n為0、1、2、3、4或者5；和p為0、1、2或者3； 為環(huán)烷基、芳基、雜環(huán)基或者 X為C＝O或者S(O)2；R1選自H和(C1-C6)烷基；R2獨(dú)立地選自氧代、OH、(C＝O)aOb(C2-C10)烯基、(C＝O)aOb(C2-C10)炔基、NO2、(C＝O)aOb(C1-C6)烷基、CN、(C＝O)aOb(C3-C10)環(huán)烷基、鹵素、(C＝O)a-N(Ra)2、CF3、OH、NH-S(O)m-Ra、(C＝O)aOb-雜環(huán)基、(C＝O)aOb-芳基、S(O)m-Ra、NH(C＝O)Ra、N＝N-芳基-N(Ra)2、(C1-C6)烷基-芳基和雜環(huán)基，所述烷基、烯基、炔基、環(huán)烷基、芳基和雜環(huán)基任選地被1～3個(gè)Rb所取代；Ra獨(dú)立地選自H和(C1-C6)烷基；Rb獨(dú)立地選自氧代、NO2、N(Ra)2、OH、CN、鹵素、CF3和(C1-C6)烷基；或者其藥學(xué)上可接受的鹽或者立體異構(gòu)體。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的式I化合物，其中 為苯基、雜環(huán)基或者 p為0或者1；R1為CH3；并且所有取代基和變量如權(quán)利要求1中所定義；或者其藥學(xué)上可接受的鹽或者立體異構(gòu)體。
3.根據(jù)權(quán)利要求2的式I化合物；其中R2獨(dú)立地選自NO2、(C＝O)aOb(C1-C6)烷基、CN、(C3-C10)環(huán)烷基、鹵素、(C＝O)a-N(Ra)2、CF3、OH、NH-S(O)m-Ra、(C＝O)a-雜環(huán)基、(C＝O)a-芳基、S(O)m-Ra、NH(C＝O)Ra、N＝N-芳基-N(Ra)2、(C1-C6)烷基-芳基和雜環(huán)基，所述烷基、環(huán)烷基、芳基和雜環(huán)基任選地被1～3個(gè)Rb所取代；Ra獨(dú)立地選自H和(C1-C6)烷基；Rb獨(dú)立地選自鹵素、CF3和(C1-C6烷基；并且所有取代基和變量如權(quán)利要求2中所定義；或者其藥學(xué)上可接受的鹽或者立體異構(gòu)體。
4.一種含有藥物載體和分散于其中的治療有效量的權(quán)利要求1的化合物的藥物組合物。
5.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物的用途，用于制備可用于在需要治療的哺乳動(dòng)物中治療或者預(yù)防癌癥的藥物。
6.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物的用途，用于制備可用于在需要治療的哺乳動(dòng)物中治療或者預(yù)防神經(jīng)變性疾病的藥物。
7.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物的用途，用于制備可用于在需要治療的哺乳動(dòng)物中治療或者預(yù)防精神分裂癥的藥物。
8.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物的用途，用于制備可用于在需要治療的哺乳動(dòng)物中治療或者預(yù)防中風(fēng)的藥物。
9.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物的用途，用于制備可用于在需要治療的哺乳動(dòng)物中治療或者預(yù)防再狹窄的藥物。
10.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物的用途，用于制備可用于在需要治療的哺乳動(dòng)物中治療或者預(yù)防原生動(dòng)物感染的藥物。
全文摘要
本發(fā)明涉及作為組蛋白脫乙?；?HDAC)抑制劑的異羥肟酸衍生物。本發(fā)明化合物可以用于治療細(xì)胞增殖疾病，包括癌癥。此外，本發(fā)明化合物可以用于治療神經(jīng)變性疾病、精神分裂癥和中風(fēng)以及其它疾病。此外，本發(fā)明的化合物具有抗原生動(dòng)物的性能。
文檔編號(hào)C07C311/21GK1997626SQ200580023288
公開日2007年7月11日 申請(qǐng)日期2005年7月8日 優(yōu)先權(quán)日2004年7月12日
發(fā)明者P·K·查克拉瓦蒂, H·霩, J·M·馬休斯, P·T·梅因克 申請(qǐng)人:默克公司