專(zhuān)利名稱(chēng)：一種蛋白酶抑制劑基因及其編碼的蛋白質(zhì)的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明公開(kāi)了一種蛋白酶抑制劑基因DNA序列及其編碼蛋白質(zhì)序列，屬于基因工程領(lǐng)域和蛋白工程領(lǐng)域。具體地講，涉及植物抗蟲(chóng)性、抗逆性的關(guān)鍵基因和酶，也涉及醫(yī)學(xué)、生物化學(xué)中的蛋白酶抑制劑生產(chǎn)應(yīng)用。
背景技術(shù)：
蛋白酶抑制劑基因在植物抗蟲(chóng)性、醫(yī)藥領(lǐng)域等方面的重要作用已經(jīng)為人們普遍接受。它可以用于提高植物的抗蟲(chóng)性，使農(nóng)作物減少產(chǎn)量損失15％以上；也可以用于治療胰腺炎、抗腫瘤、防治腦血管疾病、心臟外科等醫(yī)藥方面。
分類(lèi)上，蛋白酶抑制劑基因家族可劃分為4類(lèi)，絲氨酸蛋白酶抑制劑基因、金屬蛋白酶抑制劑基因、半胱氨酸蛋白酶抑制劑基因、天冬氨酸蛋白酶抑制劑基因(Ryan，1992)，主要分布在4個(gè)科(Graminaceae，Leguminosae，Solanaceae，Crucifera)中。十字花科的蛋白酶抑制劑基因?qū)儆诮z氨酸類(lèi)型，具有與非十字花科物種的同功能基因所表達(dá)的蛋白酶結(jié)構(gòu)不同。播娘蒿的蛋白酶抑制劑基因?qū)儆谑只平z氨酸蛋白酶抑制劑基因。十字花科蛋白酶抑制劑既能夠抑制胰蛋白酶，又能夠抑制糜蛋白酶。檢索權(quán)威性數(shù)據(jù)庫(kù)NCBI(www.ncbi.nlm.nih.gov)可知目前十字花科物種中，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了9個(gè)蛋白酶抑制劑基因，它們分別是ATTI1-7、RTI、MTI-2，這些相似序列的基因已經(jīng)申報(bào)的專(zhuān)利(參見(jiàn)文獻(xiàn)Clauss M.J.，and Mitchell-Olds T.，2004.Functinal divergence in tandemly duplicated Arabodopsis thaliana trypsin inhibitorgenes.Genetics 1661419-1436)。
我們?cè)谶@個(gè)雙子葉雜草植物播娘蒿中，首先發(fā)現(xiàn)了蛋白酶抑制劑基因。

發(fā)明內(nèi)容
技術(shù)問(wèn)題 本發(fā)明的目的在于公開(kāi)一種蛋白酶抑制劑基因及其編碼蛋白，該基因來(lái)自播娘蒿，可作為目的基因?qū)胫参?，提高抗蟲(chóng)性，進(jìn)行植物品種改良；也可以應(yīng)用于蛋白工程，生產(chǎn)蛋白酶抑制劑制品。
技術(shù)方案本發(fā)明蛋白酶抑制劑基因(DsTI-1)，其核苷酸序列SEQ ID NO.1為GAGAGAAGATGGTCATGGCAATGAAGTCTGTTTCTACCTTCGCCATCTTTTGCATTCTCTTTTTGGTTATCTTTGAAACGTCTGAGATAGAAGCGCAGCTGCAGGAAAGACAATGCCTCAAAGAATATGGCGGTGATGTTGGTTTCAGCTTTTGTGCACCTCGAATATTCCCATCGTTCTGTGATCGGAACTGCCGTAACAACAAGGGGGCGAAAGGTGGAATATGCCGTTGGGAACAGAACAACGCTATTGGTGTTAGATGCTTATGTGACTTTTGCGGAGAAGAGCCTTCTAATCTGATTCTAAGTCGTATTTGAATCTTGCATGTGTCATGGTTTATGTGATAAGAAAGGTAAAATGGTCCACGTAATGTTATAATAATGAAGTTAAATTAAGAATAACGAAACGCAAGACTTTGCTTGTGTGAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA上述蛋白酶抑制劑基因(DsTI-1)來(lái)自播娘蒿，其編碼的蛋白質(zhì)，來(lái)自播娘蒿，具有活性位點(diǎn)環(huán)序列CAPRIFP，也具有N端分泌信號(hào)肽，屬于蛋白酶抑制劑的前體蛋白。
它具有如下所示的氨基酸序列SEQ ID NO.2MVMAMKSVSTFAIFCILFLVIFETSEIEAQLQERQCLKEYGGDVGFSFCAPRIFPSFCDRNCRNNKGAKGGICRWEQNNAIGVRCLCDFCGEEPSNLILSRI有益效果1、本發(fā)明公開(kāi)了一種蛋白酶抑制劑基因(DSTI-1基因)及其所編碼的蛋白質(zhì)。蛋白酶抑制劑基因?yàn)殡p子葉植物播娘蒿中的首次報(bào)道，有望應(yīng)用于生物途徑生產(chǎn)蛋白酶抑制劑。該基因來(lái)自播娘蒿(Descurainia sophia web.)，可作為目的基因?qū)胫参?，提高植物抗蟲(chóng)性，以進(jìn)行植物品種改良。所編碼的蛋白質(zhì)具有抗蟲(chóng)功能。
2、本發(fā)明人提供的DSTI-1基因功能是具有抑制蛋白酶活性的作用。mRNA表達(dá)分析表明DSTI-1基因無(wú)論在播娘蒿幼苗，還是生長(zhǎng)、成熟期，都受蟲(chóng)害、傷害、逆境誘導(dǎo)而表達(dá)增強(qiáng)。
3、本發(fā)明的DSTI-1基因來(lái)自播娘蒿，具有適合于播娘蒿、油菜、擬南芥等雙子葉植物表達(dá)的優(yōu)化密碼子，其基因工程受體植物除了單子葉植物，如水稻、玉米、小麥等之外，更加適合于大豆、棉花、煙草等雙子葉植物。
4、利用本發(fā)明DSTI-1基因作為目的基因構(gòu)建植物表達(dá)載體，其中可用任何一種啟動(dòng)子，例如花椰菜花葉病毒(CAMV)35S啟動(dòng)子、Ubiquitin啟動(dòng)子或其它啟動(dòng)子，該表達(dá)載體中必要時(shí)可包括增強(qiáng)子，不論是轉(zhuǎn)錄增強(qiáng)子或翻譯增強(qiáng)子。為了簡(jiǎn)化轉(zhuǎn)化細(xì)胞的鑒定可使用選擇性標(biāo)記包括對(duì)抗生素抗性的酶，也可利用顏色變化(例如B-葡糖醛酸糖苷酶GUS)或發(fā)光(例如熒光素酶)來(lái)識(shí)別的化合物的酶類(lèi)，也可用無(wú)標(biāo)記選擇。所用的表達(dá)載體可使用Ti質(zhì)粒，Ri質(zhì)粒，植物病毒載體等。轉(zhuǎn)化方法可用經(jīng)農(nóng)桿菌介導(dǎo)法、基因槍法、花粉管通道法或其它方法轉(zhuǎn)化植物。
5、DSTI-1基因編碼產(chǎn)物不僅能夠抑制胰蛋白酶的活性，而且能夠抑制糜蛋白酶的活性，因此也可能應(yīng)用蛋白質(zhì)工程，以便生產(chǎn)蛋白酶抑制劑，應(yīng)用于醫(yī)學(xué)、生化研究等方面。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1選用野生雜草植物播娘蒿“tx-1”(田間雜草，收集于江蘇泰興市農(nóng)村，命名為tx-1)。選用成熟期角果，采用SMART技術(shù)構(gòu)建cDNA全長(zhǎng)文庫(kù)。構(gòu)建過(guò)程為提取播娘蒿角果總RNA，經(jīng)Oligotex試劑盒純化得到mRNA。利用含Sfi B酶切位點(diǎn)的CDS/3′PCR引物合成cDNA第一條鏈，而含Sfi A酶切位點(diǎn)的SMART寡核苷酸作為cDNA第一條鏈在mRNA 5’端延伸出去的模板。通過(guò)LD-PCR合成雙鏈cDNA，經(jīng)蛋白酶K消化、Sfi(A&B)酶切、過(guò)CHROMA PIN 400柱分級(jí)分離除去400bp以下的小分子，將其連接到λTriplEx2載體上，進(jìn)行包裝，即獲得播娘蒿角果cDNA原始文庫(kù)。大腸桿菌XL1-Blue平皿測(cè)定和PCR快速鑒定表明該文庫(kù)的原始滴度為1.49×106pfu/ml，重組率為91.24％，擴(kuò)增后文庫(kù)滴度為1.15×109pfu/ml。
隨機(jī)挑取10個(gè)噬菌斑，PCR擴(kuò)增插入片段，其長(zhǎng)度在800bp～2kb之間，說(shuō)明構(gòu)建的文庫(kù)質(zhì)量較高，能夠滿足ESTs文庫(kù)構(gòu)建及從文庫(kù)中分離篩選重要基因等研究工作的需要。至此成功地構(gòu)建了第一個(gè)播娘蒿角果cDNA文庫(kù)，為播娘蒿優(yōu)異基因克隆和系統(tǒng)研究播娘蒿抗逆分子機(jī)理奠定了基礎(chǔ)。
隨機(jī)挑取大量陽(yáng)性噬菌斑，經(jīng)轉(zhuǎn)換為質(zhì)粒后，采用T7 promotor引物進(jìn)行測(cè)序。從大量cDNA全長(zhǎng)序列測(cè)序結(jié)果中，獲得了蛋白酶抑制劑基因。該基因的序列完整，包括編碼區(qū)和非編碼區(qū)。BLAST的結(jié)果及分子建模結(jié)果證明從播娘蒿中新得到的基因?yàn)橐粋€(gè)蛋白酶抑制劑基因。該基因編碼產(chǎn)物具有抑制蛋白酶活性位點(diǎn)環(huán)，具有抗蟲(chóng)功能。
實(shí)施例2上述獲得播娘蒿蛋白酶抑制劑基因DsTI-1的cDNA序列SEQ ID NO.1，其編碼的蛋白質(zhì)，來(lái)自播娘蒿(Descurainia sophia)，它氨基酸序列為SEQ ID NO.2，經(jīng)在數(shù)據(jù)庫(kù)中比較它的編碼蛋白與數(shù)據(jù)庫(kù)中的蛋白酶抑制劑基因擬南芥ATTI2、白芥MTI-2、油菜RTI的氨基酸相似性分別為63％、59％、61％，與ATTI1、AATI3-7的相似性小于60％。(見(jiàn)SEQ ID NO.2)。DsTI-1的N端的信號(hào)肽序列表明DsTI-1定位于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上，與白芥、油菜、擬南芥結(jié)論是一致的。
實(shí)施例3由播娘蒿的不同組織提取RNA(RNApure kit)，經(jīng)過(guò)反轉(zhuǎn)錄cDNA作為模板，PCR擴(kuò)增。用實(shí)例1中DsTI-1 cDNA序列，設(shè)計(jì)引物P1、P2P15-TGTTTCTACCTTCGCCATCT-3；P25-CAAAGTCTTGCGTTTCGTTA-3PCR反應(yīng)條件10×PCR buffer，5μl；2mM dNTP，1.5μl；引物各1μl；模板，2μl；Taq DNA聚合酶，1μl；最后加滅菌的ddH2O至總體積達(dá)50μl；PCR反應(yīng)程序94℃預(yù)變性5min；變性溫度為94℃，時(shí)間50s，復(fù)性溫度為53℃，時(shí)間為50s，延伸溫度為72℃，時(shí)間50s，33個(gè)循環(huán)；再72℃延伸10min。
半定量RT-PCR分析播娘蒿地上部的表達(dá)，結(jié)果表明，播娘蒿地上部在蟲(chóng)害、傷害誘導(dǎo)條件下，6h顯著增強(qiáng)表達(dá)，經(jīng)灰度掃描分析，其mRNA表達(dá)量為對(duì)照的3倍以上。說(shuō)明DsTI-1的表達(dá)與蟲(chóng)害、傷害有關(guān)。該基因正常情況下，在角果和種子中表達(dá)。
實(shí)驗(yàn)例4根據(jù)實(shí)施例1得到的DsTI-1的全長(zhǎng)序列，使用組成型啟動(dòng)子35S，構(gòu)建轉(zhuǎn)化DsTI-1基因的載體，這里的基因是去掉了N端信號(hào)肽和C端8個(gè)氨基酸的目的片段。
設(shè)計(jì)以下分別帶有Sac1，BamH1酶切位點(diǎn)的一對(duì)引物，用來(lái)去掉DsTI-1基因的N端信號(hào)肽和C端8個(gè)氨基酸。下游引物將原序列TCT突變?yōu)門(mén)AA產(chǎn)生一個(gè)終止子。
上游引物5---GAgagctcATGGTCATGGCAATGAAGT---3下游引物5---ATggatccTTAAGGCTCTTCTCCGCAA---3利用上述引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，將PCR產(chǎn)物電泳回收，用Sac1，BamH1兩種限制性?xún)?nèi)切酶分別酶切回收的基因片段和載體pCAM-BIA1301，回收目的基因片段和線性載體，將線性載體與目的基因片段用T4DNA連接酶在16℃下連接；轉(zhuǎn)化大腸桿菌JM109感受態(tài)細(xì)胞，在LB固體培養(yǎng)基上(含kam抗生素)涂平板，得到的抗性菌落，挑取幾個(gè)菌落經(jīng)液體LB培養(yǎng)基培養(yǎng)，分別做PCR初步鑒定，提取質(zhì)粒，用Sac1，BamH1雙酶切、進(jìn)行酶切鑒定，得到陽(yáng)性克隆。再轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌LBA4404，并進(jìn)行酶切鑒定，獲得的陽(yáng)性克隆既為攜帶外源質(zhì)粒的農(nóng)桿菌用于轉(zhuǎn)化。農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)化油菜(雙低品種，華雙3號(hào))，結(jié)果表明在幼葉中，蛋白酶抑制劑含量提高了2倍以上，老葉片中的含量提高更多。
實(shí)驗(yàn)例5按照實(shí)驗(yàn)4的基因序列，轉(zhuǎn)化酵母DS115，進(jìn)行表達(dá)研究。經(jīng)過(guò)載體構(gòu)建、轉(zhuǎn)化體篩選、SDS-PAGE、蛋白的提純、活性測(cè)定等實(shí)驗(yàn)，證明該基因不僅能夠抑制牛胰蛋白酶的活性，而且能夠抑制糜蛋白酶的活性，解離平衡常數(shù)為2×10-10和4.3×10-7，與油菜的RTI和白芥MTI-2類(lèi)似。因此，根據(jù)蛋白酶抑制劑基因的作用機(jī)理，可以認(rèn)為DsTI-1基因具有很好的抗蟲(chóng)性，其編碼的蛋白也可作為蛋白酶抑制劑在醫(yī)學(xué)等方面應(yīng)用。
本發(fā)明人從雙子葉植物播娘蒿(Descurainia sophia)中克隆了一個(gè)cDNA，編碼蛋白酶抑制劑基因，命名為DsTI-1。經(jīng)在數(shù)據(jù)庫(kù)中比較它的編碼蛋白與擬南芥、白芥、油菜的氨基酸序列有相似性，分別為63％、59％、61％。DsTI-1 cDNA全長(zhǎng)456bp，含有306bp的ORF，編碼含102個(gè)氨基酸的蛋白質(zhì)，5’-UTR為7bp，3’-UTR為142bp。DsTI-1編碼蛋白的N端信號(hào)肽序列表明其定位于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上。
mRNA表達(dá)分析表明，播娘蒿在受到蟲(chóng)害、傷害、逆境條件下DsTI-1基因表達(dá)增強(qiáng)，地上部表達(dá)量為對(duì)照的3倍以上。轉(zhuǎn)基因研究表明，將DsTI-1基因轉(zhuǎn)入油菜，轉(zhuǎn)基因植株在正常條件下的長(zhǎng)勢(shì)類(lèi)似對(duì)照，而且蛋白酶抑制劑活性高2倍以上，表明顯著提高了抗蟲(chóng)性。該基因可作為目的基因?qū)胫参?，提高植物抗蟲(chóng)性，以進(jìn)行植物品種改良。
綜上所述，本發(fā)明人提供的DsTI-1基因是首次在雙子葉植物播娘蒿中分離的新基因，其功能是生產(chǎn)蛋白酶抑制劑，提高植物抗蟲(chóng)性?？衫帽景l(fā)明DsTI-1基因作為目的基因構(gòu)建植物表達(dá)載體，其中可用任何一種啟動(dòng)子例如花椰菜花葉病毒(CAMV)35S啟動(dòng)子、Ubiquitin啟動(dòng)子或其它啟動(dòng)子，該表達(dá)載體中必要時(shí)可包括增強(qiáng)子，不論是轉(zhuǎn)錄增強(qiáng)子或翻譯增強(qiáng)子。為了簡(jiǎn)化轉(zhuǎn)化細(xì)胞的鑒定可使用選擇性標(biāo)記包括對(duì)抗生素抗性的酶，也可利用顏色變化(例如B-葡糖醛酸糖苷酶GUS)或發(fā)光(例如熒光素酶)來(lái)識(shí)別的化合物的酶類(lèi)，也可用無(wú)標(biāo)記選擇。所用的表達(dá)載體可使用Ti質(zhì)粒，Ri質(zhì)粒，植物病毒載體等。轉(zhuǎn)化方法可用經(jīng)農(nóng)桿菌介導(dǎo)法、基因槍法、花粉管通道法或其它方法轉(zhuǎn)化植物。
本發(fā)明的DsTI-1基因來(lái)自播娘蒿，具有適合于十字花科植物表達(dá)的優(yōu)化密碼子，其基因工程受體植物除了雙子葉植物，如大豆、棉花、煙草等之外，也適合于水稻、玉米、小麥等單子葉植物。本發(fā)明所述的一種植物蛋白酶抑制劑基因的編碼蛋白，也適合用于生產(chǎn)蛋白酶抑制劑。
本發(fā)明涉及的序列及記號(hào)分列如下(1)SEQ ID NO.1的信息(i)序列特征(A)長(zhǎng)度456bp(B)類(lèi)型核苷酸(C)鏈性單鏈
(D)拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)線性(ii)分子類(lèi)型核苷酸(iii)序列描述SEQ ID NO.12)SEQ ID NO.2的信息(i)序列特征(A)長(zhǎng)度102a.a(B)類(lèi)型氨基酸(C)鏈性單鏈(D)拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)線性(ii)分子類(lèi)型蛋白質(zhì)(iii)序列描述SEQ ID NO.2序列表<110>南京農(nóng)業(yè)大學(xué)<120>一種蛋白酶抑制劑基因及其所編碼的蛋白質(zhì)(管榮展)<141>2005-03-10<160>2<170>Patentln version 3.1<210>SEQ ID NO.1<211>456<212>DNA<213>播娘蒿[Descurainia sophia]<221>CDS<222>(9)..(314)<221>5′UTR<222>(1)..(7)<221>mRNA<222>(1)..(456)<221>polyA_site<222>(427)..(456)<221>polyA_sitel<222>(315)..(426)<400>1gagagaag atg gtc atg gca atg aag tct gtt tct acc ttc gcc atc ttt50Met Val Met Ala Met Lys Ser Val Ser Thr Phe Ala Ile Phe1 5 10tgc att ctc ttt ttg gtt atc ttt gaa acg tct gag ata gaa gcg cag 98Cys Ile Leu Phe Leu Val Ile Phe Glu Thr Ser Glu Ile Glu Ala Gln15 20 25 30ctg cag gaa aga caa tgc ctc aaa gaa tat ggc ggt gat gtt ggt ttc 146Leu Gln Glu Arg Gln Cys Leu Lys Glu Tyr Gly Gly Asp Val Gly Phe35 40 45
agc ttt tgt gca cct cga ata ttc cca tcg ttc tgt gat cgg aac tgc194Ser Phe Cys Ala Pro Arg Ile Phe Pro Ser Phe Cys Asp Arg Asn Cys50 55 60cgt aac aac aag ggg gcg aaa ggt gga ata tgc cgt tgg gaa cag aac242Arg Asn Asn Lys Gly Ala Lys Gly Gly Ile Cys Arg Trp Glu Gln Asn65 70 75aac gct att ggt gtt aga tgc tta tgt gac ttt tgc gga gaa gag cct290Asn Ala Ile Gly Val Arg Cys Leu Cys Asp Phe Cys Gly Glu Glu Pro80 85 90tct aat ctg att cta agt cgt att tgaatcttgc atgtgtcatg gtttatgtga 344Ser Asn Leu Ile Leu Ser Arg Ile95 100taagaaaggt aaaatggtcc acgtaatgtt ataataatga agttaaatta agaataacga 404aacgcaagac tttgcttgtg tgaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aa 456<210>SEQ ID NO.2<211>102<212>PRT<213>播娘蒿[Descurainia sophia<400>2Met Val Met Ala Met Lys Ser Val Ser Thr Phe Ala Ile Phe Cys Ile1 5 10 15Leu Phe Leu Val Ile Phe Glu Thr Ser Glu Ile Glu Ala Gln Leu Gln20 25 30Glu Arg Gln Cys Leu Lys Glu Tyr Gly Gly Asp Val Gly Phe Ser Phe35 40 45Cys Ala Pro Arg Ile Phe Pro Ser Phe Cys Asp Arg Asn Cys Arg Asn50 55 60Asn Lys Gly Ala Lys Gly Gly Ile Cys Arg Trp Glu Gln Asn Asn Ala65 70 75 80Ile Gly Val Arg Cys Leu Cys Asp Phe Cys Gly Glu Glu Pro Ser Asn85 90 95Leu Ile Leu Ser Arg Ile100
權(quán)利要求
1.一種蛋白酶抑制劑基因(DsTI-1)，來(lái)自播娘蒿(Descurainia sophia)，命名為DsTI-1基因，其核苷酸序列SEQ ID NO.1為GAGAGAAGATGGTCATGGCAATGAAGTCTGTTTCTACCTTCGCCATCTTTTGCATTCTCTTTTTGGTTATCTTTGAAACGTCTGAGATAGAAGCGCAGCTGCAGGAAAGACAATGCCTCAAAGAATATGGCGGTGATGTTGGTTTCAGCTTTTGTGCACCTCGAATATTCCCATCGTTCTGTGATCGGAACTGCCGTAACAACAAGGGGGCGAAAGGTGGAATATGCCGTTGGGAACAGAACAACGCTATTGGTGTTAGATGCTTATGTGACTTTTGCGGAGAAGAGCCTTCTAATCTGATTCTAAGTCGTATTTGAATCTTGCATGTGTCATGGTTTATGTGATAAGAAAGGTAAAATGGTCCACGTAATGTTATAATAATGAAGTTAAATTAAGAATAACGAAACGCAAGACTTTGCTTGTGTGAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA
2.權(quán)利要求1所述的一種蛋白酶抑制劑基因(DsTI-1)，來(lái)自播娘蒿(Descurainiasophia)，命名為DsTI-1基因，其編碼蛋白質(zhì)序列SEQ ID NO.2為MVMAMKSVSTFAIFCILFLVIFETSEIEAQLQERQCLKEYGGDVGFSFCAPRIFPSFCDRNCRNNKGAKGGICRWEQNNAIGVRCLCDFCGEEPSNLILSRI
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了蛋白酶抑制劑基因cDNA序列及其編碼蛋白質(zhì)序列，屬于基因工程領(lǐng)域和蛋白工程領(lǐng)域。播娘蒿蛋白酶抑制劑基因DsTI－1的cDNA序列SEQ ID NO.1及其編碼的氨基酸序列SEQ ID NO.2。本發(fā)明基因?yàn)殡p子葉植物播娘蒿中的首次報(bào)道，參與播娘蒿抗蟲(chóng)反應(yīng)，mRNA表達(dá)分析表明該基因受蟲(chóng)害、傷害誘導(dǎo)表達(dá)。轉(zhuǎn)基因?qū)嶒?yàn)證明該基因的超量表達(dá)能夠顯著提高了油菜的抗蟲(chóng)性。DsTI－1可作為目的基因?qū)胫参铮岣咧参锟瓜x(chóng)性。酵母表達(dá)產(chǎn)物具有抑制蛋白酶活性的作用，該基因和其編碼蛋白也可以應(yīng)用于醫(yī)藥和生化領(lǐng)域。
文檔編號(hào)C07K14/415GK1721537SQ20051004045
公開(kāi)日2006年1月18日 申請(qǐng)日期2005年6月9日 優(yōu)先權(quán)日2005年6月9日
發(fā)明者管榮展, 董海濱, 張紅生, 王建飛 申請(qǐng)人:南京農(nóng)業(yè)大學(xué)