專利名稱：一種聯(lián)合分離純化熊果酸和寡聚原花色素的工藝及用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生化分離技術(shù)領(lǐng)域。
二.
背景技術(shù)：
山楂寡聚原花色素技術(shù)見發(fā)明專利[11]公開號CN1357382A，熊果酸的提取工藝已有專利申請，申請?zhí)枮?00310111479.8，其方法是從女貞葉中提取熊果酸。但從山楂中直接提取熊果酸的方法未見報導(dǎo)或?qū)＠?，而用山楂為原料?lián)合提取熊果酸和寡聚原花色素兩種物質(zhì)的方法也未見報導(dǎo)。熊果酸(Ursolic acid)又名烏索酸、烏蘇酸，屬三萜類化合物，它在自然界分布很廣，如杜鵑花科植物熊果的葉、果實；玄參科毛泡桐的葉，以及木樨科植物女貞的葉、薔薇科的山楂的果實中均已發(fā)現(xiàn)，含大量熊果酸。熊果酸具有鎮(zhèn)靜、抗炎、抗菌、抗糖尿病、抗?jié)?、降低血脂的作用。?jù)《中國藥物雜志》1997年6卷2期報導(dǎo)，它不僅對多種致癌、促癌物有抵抗作用，而且對多種惡性腫瘤細(xì)胞例如P388和L1210白血病細(xì)胞、A549人肺腺細(xì)胞有抑制生長作用，能誘導(dǎo)F9畸胎瘤細(xì)胞分化和抗血管生成作用。
三.

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明需要解決的問題是從山楂中聯(lián)合提取寡聚原花色素和熊果酸兩種物質(zhì)，并利用兩者關(guān)系互補(bǔ)作用制成片劑、膠囊、咀嚼片、口服液等。作為抗氧化、降血脂、降血糖、抗?jié)?、抗菌、抗炎的保健食品，進(jìn)一步純化可制成藥品。
本發(fā)明技術(shù)方案1、熊果酸和寡聚原花色素提取工藝山楂洗凈，加入95％乙醇1-2倍體積，搗碎，間歇攪拌浸取12-24小時，過濾、濾渣再用95％乙醇提取一次，過濾，合并濾液，濾液蒸餾去乙醇后，冷藏12-24小時，解凍后離心，上清液含原花色素，用聚酰胺柱吸附、水洗去雜質(zhì)，60％乙醇洗脫，洗脫液蒸去乙醇，噴霧干燥，得寡聚原花色素干粉，純度達(dá)80％以上。離心沉淀物，用蒸餾水洗2-3次，取出60℃烘干得熊果酸干粉，純度達(dá)80％以上。。
2、原花色素的測定-鹽酸-正丁醇法。
本方法利用原花色素在鹽酸-正丁醇溶液中加熱生成花色素，其在525nm產(chǎn)生特征性光吸收，以光吸收值大小參比標(biāo)準(zhǔn)曲線來確定原花色素的含量[Butler L.GJ.Agric Food Chem.1982，30，1090-1094。配制含有30％鹽酸-正丁醇50ml，備用。分別取參比標(biāo)準(zhǔn)液1mg/ml 25μl、50μl、75μl、100μl，4mg/ml 50μl，加1.4ml鹽酸-正丁醇溶液，加水使總體積到1.5ml，以錫箔封試管口，100℃加熱30分鐘，冷卻后，在波長為525nm比色，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。OPC樣品配成1mg/ml，取0.1ml按同法測定525nm光吸收，對照標(biāo)準(zhǔn)曲線分別計算各組的原花色素含量。
3、熊果酸測定-高氯酸-香草醛法。
依據(jù)熊果酸在高氯酸作用下能與香草醛產(chǎn)生顏色反應(yīng)，在546nm處有最大吸收。山楂熊果酸含量可通過參比熊果酸標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算含量和純度。
熊果酸標(biāo)準(zhǔn)品，精確配制1mg/ml，取0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5ml，分別置5ml容量瓶，100℃烘干，冷卻后，每瓶加0.5ml 5％香草醛0.8ml高氯酸，搖勻置60℃水浴保溫10分鐘，取出后，用乙酸定容至5ml，搖勻后，546nm測定光吸收值，以濃度對光吸收值作標(biāo)準(zhǔn)曲線。山楂熊果酸樣品同法配制1mg/ml樣品液，取0.1、0.2、0.3ml分別置5ml容量瓶100℃烘干后，加0.5ml 5％香草醛0.8ml高氯酸60℃水浴保溫10分鐘后，加乙酸至刻度，546nm測定光吸收值。對比標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品每毫克的熊果酸含量。
本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，其有益效果是在一種原料山楂中，可以一次提取兩種有效產(chǎn)物，提高了原料的利用率，降低了產(chǎn)品的成本，而且兩種產(chǎn)物在抗腫瘤藥和保健品應(yīng)用方面都有良好的前景，可制成片劑、膠囊、咀嚼片、口服液系列制劑，在制備降血脂保健食品中應(yīng)用。
四.具體實施方案取新鮮山楂2000克，加入95％乙醇勻漿，共加乙醇2400ml，浸泡12小時，過濾，得濾液2760ml，渣子再加入2400ml 95％乙醇放置12小時，過濾，得濾液2500ml，合并濾液得5260ml，減壓蒸去乙醇，得溶液1000ml，放置冷藏柜12小時。取出離心，得上清液。
1、上清液加入1倍量蒸餾水，上聚酰胺柱吸附，蒸餾水洗去雜質(zhì)，60％乙醇洗脫，得乙醇洗脫液，減壓蒸去乙醇，得200ml懸濁液，凍干，得原花色素9.96克，含量89％。
2、離心沉淀物，先用蒸餾水洗沉淀物2-3次，得淺綠色沉淀，60℃烘干，得熊果酸粗品5.36克，含量85％。將粗制的熊果酸加蒸餾水，調(diào)pH11，溶解離心去除沉淀，上清液調(diào)pH3，離心得沉淀，干燥后可得95％以上的精制熊果酸。
含量和純度檢查(1)原花色素用鹽酸-正丁醇法。
本方法利用原花色素在鹽酸-正丁醇溶液中加熱生成花色素，其在525nm產(chǎn)生特征性光吸收，以光吸收值大小參比標(biāo)準(zhǔn)曲線來確定原花色素的含量[Butler L.GJ.Agric Food Chem.1982，30，1090-1094。配制含有30％鹽酸-正丁醇50ml，備用。分別取參比標(biāo)準(zhǔn)液1mg/ml 25μl、50μl、75μl、100μl，4mg/ml 50μl，加1.4ml鹽酸-正丁醇溶液，加水使總體積到1.5ml，以錫箔封試管口，100℃加熱30分鐘，冷卻后，在波長為525nm比色，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。OPC樣品配成1mg/ml，取0.1ml按同法測定525nm光吸收，對照標(biāo)準(zhǔn)曲線分別計算各組的原花色素含量。
(2)熊果酸測定用高氯酸-香草醛法。
依據(jù)熊果酸在高氯酸作用下能與香草醛產(chǎn)生顏色反應(yīng)，在546nm處有最大吸收。山楂熊果酸含量可通過參比熊果酸標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算出含量和純度。
熊果酸標(biāo)準(zhǔn)品，精確配制1mg/ml，取0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5ml，分別置5ml容量瓶，100℃烘干，冷卻后，每瓶加0.5ml 5％香草醛0.8ml高氯酸，搖勻置60℃水浴保溫10分鐘，取出后，用乙酸定容至5ml，搖勻后，546nm測定光吸收值，以濃度對光吸收值作標(biāo)準(zhǔn)曲線。山楂熊果酸樣品同法配制1mg/ml樣品液，取0.1、0.2、0.3ml分別置5ml容量瓶100℃烘干后，加0.5ml 5％香草醛0.8ml高氯酸60℃水浴保溫10分鐘后，加乙酸至刻度，546nm測定光吸收值。對比標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品每毫克的熊果酸含量。
權(quán)利要求
1.一種從山楂中聯(lián)合分離純化熊果酸和寡聚原花色素的生產(chǎn)工藝，其特征是新鮮山楂或干山楂片，洗凈、搗碎后加入食品級95％乙醇2-3倍，浸提，12-24小時，間歇攪拌過濾，濾液放置備用，渣子用同樣方式再提取一次，兩次濾液合并，減壓蒸餾去乙醇后冷藏24小時，次日離心，上清液留做寡聚原花色素，沉淀物制備熊果酸。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述生產(chǎn)工藝，其特征是生成的含寡聚原花色素上清液加入0.5-1倍蒸餾水，用聚酰胺柱吸附，先用水洗雜質(zhì)，再用60％乙醇洗脫，洗脫液去乙醇后，噴霧干燥，可得棕紅色的粉末，即為寡聚原花色素，純度達(dá)90％。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述生產(chǎn)工藝，其特征是得到的抽提沉淀物，用蒸餾水洗3-5次，離心、干燥，可得到純度約80％的熊果酸粗制品。將粗制的熊果酸加蒸餾水，調(diào)pH11，溶解離心去除沉淀，上清液調(diào)pH3，離心得沉淀，干燥后可得95％以上的精制熊果酸。
4.根據(jù)權(quán)利要求1生產(chǎn)工藝生產(chǎn)的熊果酸、寡聚原花色素，其特征是可制成片劑、膠囊、咀嚼片、口服液系列制劑，在制備降血脂保健食品中應(yīng)用。
5.根據(jù)權(quán)利要求1生產(chǎn)工藝生產(chǎn)的熊果酸、寡聚原花色素在制備治療腫瘤藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明屬于生化分離純化技術(shù)領(lǐng)域，本發(fā)明所述從山楂中分離、純化寡聚原花色素和熊果酸生產(chǎn)工藝，從新鮮山楂或干果中用乙純抽提，抽提物去乙醇后，冷藏。取出離心分離，上清液上聚酰胺柱，洗滌、洗脫、噴霧干燥，得原花色素干粉。沉淀物水洗，烘干，得熊果酸產(chǎn)品。本品可制成片劑、膠囊、咀嚼片、口服液系列制劑，為抗炎、抗菌、抗糖尿病、抗?jié)?、降血脂等的保健食品。進(jìn)一步純化可制成藥品。
文檔編號C07J63/00GK1699398SQ20051004037
公開日2005年11月23日 申請日期2005年6月3日 優(yōu)先權(quán)日2005年6月3日
發(fā)明者張鶴云, 張?zhí)? 湯國枝 申請人:南京大學(xué)