專利名稱：一種純化長春瑞賓的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種長春瑞賓純化工藝。特別涉及一種利用負(fù)壓上行層析方式純化長春瑞賓的方法。
背景技術(shù)：
長春瑞賓是美國食品藥品監(jiān)督管理局(FDA)批準(zhǔn)的治療晚期非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)患者的藥物，將單制劑的長春瑞賓與順鉑合用成為不可切除的晚期的非小細(xì)胞性肺癌患者的一線治療藥物，在治療乳腺癌、淋巴癌、卵巢癌方面也是首選藥物，其市場價格昂貴。目前市場來源主要通過化學(xué)合成途徑來獲得，純度都不是很高，本發(fā)明針對這一問題，尋找出了一種可進(jìn)行大規(guī)模生產(chǎn)的純化方法，因此具有很好的開發(fā)前景。
1974年，長春瑞賓由法國學(xué)者Potier合成，于1985年試用于臨床治療。據(jù)文獻(xiàn)報道，Mangeney P，Andriamialisoa RZ等用不同方法合成長春瑞賓及其鹽，而其分離純化方面的研究未見報道。目前，我國長春瑞賓的合成研究也有了很大的突破，林永江等將國外報道的合成工藝進(jìn)行了改進(jìn)，使操作更加適合于生產(chǎn)；中國藥科大學(xué)的尤啟冬教授等承擔(dān)的“長春瑞賓合成新工藝及工業(yè)化研究”項目獲得江蘇省科學(xué)技術(shù)進(jìn)步三等獎。分離純化方面，林永江等將合成的長春瑞賓粗品進(jìn)行兩次正壓柱層析分離，得產(chǎn)物HPLC歸一化純度達(dá)98％以上，但其存在純化量少，效率低，周期長等缺點，無法進(jìn)行工業(yè)化生產(chǎn)。
本發(fā)明采用快速、簡單、易操作的負(fù)壓上行柱層析方法來純化長春瑞賓粗品，對純度較高部分進(jìn)行切割后洗脫得到純度較高的長春瑞賓。該純化方法可大大縮短純化周期，節(jié)省溶劑用量，可以彌補(bǔ)傳統(tǒng)的正壓下行柱層析周期長、溶劑用量大等不足。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的在于提供一種工藝流程簡單、生產(chǎn)周期短、成本低、純度高的長春瑞賓純化新工藝。
為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是長春瑞賓粗品經(jīng)干硅膠柱進(jìn)行負(fù)壓上行展開后，進(jìn)行分段切割、洗脫，洗脫液經(jīng)過濾、濃縮得濃縮液，將濃縮液滴入水中析晶，離心，干燥后得高純度的長春瑞賓。
本發(fā)明的優(yōu)點1、具有工藝流程簡單，生產(chǎn)周期短，溶劑用量少，可進(jìn)行工業(yè)化生產(chǎn)等優(yōu)點；2、長春瑞賓純度在95％以上；3、取代了傳統(tǒng)的常壓下行、減壓下行、加壓下行柱層析等純化方法，應(yīng)用負(fù)壓震蕩灌柱裝置干法制備硅膠柱和負(fù)壓上行柱層析方法對長春瑞賓粗品進(jìn)行純化。
具體實施方案下面對本發(fā)明的實施方案作進(jìn)一步詳細(xì)描述用負(fù)壓震蕩灌柱裝置干法制備硅膠柱，柱長為45cm～55cm，直徑為3cm～5cm，柱材為空心PVC柱，上下或水平負(fù)壓震蕩灌注硅膠，震蕩頻率為50～100次/min，負(fù)壓為0.06～0.1MPa，硅膠為400～800目已活化硅膠，活化方法為烘箱105℃活化1～5h或微波爐高火活化3次，每次3min；將此硅膠柱進(jìn)行負(fù)壓上行展開，底部進(jìn)液，用高度差或自吸方式上行展開，負(fù)壓為0.06～0.1MPa，展開劑為三氯甲烷∶甲醇＝250∶18～325∶18或四氯化碳∶甲醇＝100∶15～50∶15；將純度為50～80％的長春瑞賓粗品溶于0.3～0.7ml的展開劑中，用自動進(jìn)樣閥或注射器從柱底部注射進(jìn)樣；當(dāng)展到柱頂后，距柱底4～8cm處部向上切割8～15cm；將硅膠段用無水丙酮、無水甲醇或無水乙醇超聲或攪拌洗脫2～5次，洗脫劑用量為150～500ml/次，洗脫時間為5～30min/次；洗脫液用0.22μm的中空纖維或微孔濾膜進(jìn)行負(fù)壓抽濾，采用負(fù)壓為0.06～0.1MPa；將洗脫液進(jìn)行低溫負(fù)壓濃縮，溫度為30～50℃，負(fù)壓為0.06～0.1MPa；然后將濃縮液滴入其3～15倍的蒸餾水或雙蒸水中，析出白色絮狀結(jié)晶，離心后得白色沉淀；將此白色沉淀進(jìn)行冷凍干燥或真空干燥，得白色絮狀長春瑞賓。
實施例1取長50cm、直徑為3cm的空心PVC柱用負(fù)壓震蕩灌柱裝置干法灌入活化硅膠，上下震蕩，頻率為70次/min，硅膠活化方式為烘箱105℃活化1.5h；將硅膠柱上端連接負(fù)壓層析裝置，下端連接展開劑裝置，將展開劑容器吊在柱上端，產(chǎn)生高度差，進(jìn)行負(fù)壓上行展開，展開劑為三氯甲烷∶甲醇＝300∶18，底部用注射器注射進(jìn)樣，樣品為0.4g70％的長春瑞賓粗品溶于0.4ml的展開劑中的溶液；展到柱頂后，切割距柱底端8cm處向上10cm部分，用250ml無水乙醇超聲洗脫3次，每次10min，合并洗脫液；洗脫液用0.22μm的中空纖維進(jìn)行負(fù)壓抽濾后，在40℃下進(jìn)行負(fù)壓濃縮，得濃縮液3ml滴入30ml雙蒸水中，析出白色絮狀沉淀，離心后冷凍干燥，得純度為98％的長春瑞賓112mg。
實施例2取長45cm、直徑為3cm的空心PVC柱用負(fù)壓震蕩灌柱裝置干法灌入活化硅膠，上下加水平震蕩，頻率為80次/min，活化方式為烘箱105℃活化3h；將硅膠柱上端連接負(fù)壓層析裝置，下端連接展開劑裝置，將展開劑容器吊在柱上端，產(chǎn)生高度差，進(jìn)行負(fù)壓上行展開，展開劑為三氯甲烷∶甲醇＝250∶18，底部用自動進(jìn)樣閥進(jìn)樣，樣品為0.3g77％的長春瑞賓粗品溶于0.3ml的展開劑中的溶液；展到柱頂后，切割距柱底端4cm處向上10cm部分，用300ml無水甲醇超聲洗脫2次，每次20min，合并洗脫液；洗脫液用0.22μm的中空纖維進(jìn)行負(fù)壓抽濾后，在35℃下進(jìn)行負(fù)壓濃縮，得濃縮液3ml滴入40ml雙蒸水中，析出白色絮狀沉淀，離心后冷凍干燥，得純度為96％的長春瑞賓99mg。
實施例3取長55cm、直徑為3cm的空心PVC柱用負(fù)壓震蕩灌柱裝置于法灌入活化硅膠，上下震蕩，頻率為90次/min，活化方式為微波爐高火活化3次，每次3min；將硅膠柱上端連接負(fù)壓層析裝置，下端連接展開劑裝置，展開劑容器與硅膠柱處在同一水平，通過負(fù)壓作用自動吸入展開劑，進(jìn)行負(fù)壓上行展開，展開劑為四氯化碳∶甲醇＝100∶20，底部用自動進(jìn)樣閥進(jìn)樣，樣品為0.5g70％的長春瑞賓粗品溶于0.5ml的展開劑中的溶液；展到柱頂后，切割距柱底端6cm處向上12cm部分，用350ml無水甲醇攪拌洗脫2次，每次15min，得洗脫液；洗脫液用0.22μm的微孔濾膜進(jìn)行負(fù)壓抽濾后，在45℃下進(jìn)行負(fù)壓濃縮，得濃縮液3ml滴入50ml雙蒸水中，析出白色絮狀沉淀，離心后真空干燥，溫度為40℃，得純度為95％的長春瑞賓158mg。
權(quán)利要求
1.一種將長春瑞賓粗品進(jìn)行純化的新方法，其特征在于用負(fù)壓震蕩灌柱裝置干法制備硅膠柱，將此硅膠柱進(jìn)行負(fù)壓上行展開，從柱底部進(jìn)液；注射進(jìn)樣，當(dāng)展到柱頂后，進(jìn)行分段切割；所得硅膠段用洗脫劑洗脫，洗脫液進(jìn)行過濾；得濾液進(jìn)行減壓濃縮，濃縮液滴入水中，析出結(jié)晶，離心；將沉淀進(jìn)行干燥得白色粉末。
2.按照權(quán)利要求1所述的負(fù)壓震蕩灌柱裝置干法制備硅膠柱是指柱長為45cm～55cm、直徑為3cm～5cm的空心PVC柱，經(jīng)上下或水平震蕩器進(jìn)行負(fù)壓震蕩灌注400～800目已活化硅膠，震蕩頻率為50～100次/min，采用負(fù)壓為0.06～0.1MPa，硅膠活化方法為烘箱105℃活化1～5h或微波爐高火活化3次，每次3min。
3.按照權(quán)利要求1所述的負(fù)壓上行展開是指硅膠柱上端連接負(fù)壓層析裝置，采用負(fù)壓為0.06～0.1MPa；下端連接展開劑裝置，底部進(jìn)液，用高度差或自吸方式進(jìn)行上行展開；展開劑為三氯甲烷∶甲醇＝250∶18～325∶18或四氯化碳∶甲醇＝100∶15～50∶15。
4.按照權(quán)利要求1所述的柱底部注射進(jìn)樣是指將0.3～0.6g長春瑞賓粗品溶于0.3～0.7ml的展開劑中，用自動進(jìn)樣閥或注射器注射進(jìn)樣，長春瑞賓粗品純度為50～80％。
5.按照權(quán)利要求1所述的分段切割是指距柱底端4～8cm處向上切割8～15cm。
6.按照權(quán)利要求1所述的洗脫劑洗脫是指超聲或攪拌洗脫，洗脫劑為無水丙酮、無水甲醇或無水乙醇，洗脫劑用量為150～500ml/次，洗脫時間為5～30min/次，洗脫次數(shù)為2～5次。
7.按照權(quán)利要求1所述的過濾是指用0.22μm的中空纖維或微孔濾膜進(jìn)行負(fù)壓抽濾，采用負(fù)壓為0.06～0.1MPa。
8.按照權(quán)利要求1所述的濃縮條件是溫度為30～50℃，負(fù)壓為0.06～0.1MPa。
9.按照權(quán)利要求1所述的析晶是指將濃縮液滴入其3～15倍的蒸餾水或雙蒸水中，離心后得白色沉淀。
10.按照權(quán)利要求1所述的干燥得白色粉末為用冷凍干燥機(jī)或真空干燥箱進(jìn)行低溫干燥。
全文摘要
本發(fā)明提供一種將長春瑞賓粗品進(jìn)行純化的新方法，用負(fù)壓震蕩灌柱裝置干法制備硅膠柱，將此硅膠柱上端連接負(fù)壓層析裝置，從其底部進(jìn)液；液體進(jìn)樣，進(jìn)行上行展開；當(dāng)展到柱頂后，進(jìn)行分段切割；所得硅膠段用洗脫劑洗脫，得洗脫液進(jìn)行過濾；濾液進(jìn)行低溫減壓濃縮，濃縮液滴入水中，析出結(jié)晶，離心；將沉淀進(jìn)行干燥得白色粉末。本發(fā)明方法具有工藝流程簡單，生產(chǎn)周期短，溶劑用量少，分離效率高，易于工業(yè)化生產(chǎn)等優(yōu)點，經(jīng)此方法一次純化得到的長春瑞賓純度可達(dá)到95％以上。
文檔編號C07D519/04GK1696135SQ200510009928
公開日2005年11月16日 申請日期2005年4月26日 優(yōu)先權(quán)日2005年4月26日
發(fā)明者祖元剛, 付玉杰, 張琳, 史權(quán), 劉君星, 李慶勇, 祖柏實, 曹玉杰 申請人:東北林業(yè)大學(xué), 祖元剛