專利名稱：杠柳毒苷的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種治療急、慢性充血性心力衰竭的強(qiáng)心苷的制備方法。
背景技術(shù)：
香加皮是蘿藦科植物杠柳的干燥根皮，近年來香加皮常用于治療急、慢性充血性心力衰竭(CHF)。香加皮有毒，過量服用能產(chǎn)生不良反應(yīng)，臨床上也有致死報(bào)告。2000年版的《中華人民共和國(guó)藥典》中香加皮的含量測(cè)定項(xiàng)下采用4-甲氧基水楊醛為HPLC法測(cè)定用對(duì)照品，但是到目前為止并無4-甲氧基水楊醛具有相關(guān)藥理作用的報(bào)道。杠柳毒苷(periplocin)即杠柳苷G(結(jié)構(gòu)式見下)是香加皮中的一種強(qiáng)心苷成分，與香加皮的臨床療效密切相關(guān)，因此以杠柳毒苷作為香加皮治療CHF的質(zhì)控指標(biāo)較為合理。但是目前無法從國(guó)內(nèi)外市場(chǎng)購得杠柳毒苷對(duì)照品。
杠柳毒苷C36H56O131969年日本學(xué)者從香加皮中分離出杠柳毒苷并確定了結(jié)構(gòu)(Seiichi Sakama et al.On theStructure of Glycoside G and K of Bei-Wujiapi.Chem.Pharm.Bull，1969，17(10)2183.)，他采用的方法為甲醇或乙醇提取，提取液濃縮后用苯萃取，苯萃后的水層用水飽和的正丁醇萃取，正丁醇部位濃縮后反復(fù)經(jīng)硅膠柱層析，最后得到杠柳毒苷單體(產(chǎn)率0.02％)。1989年胡英杰(胡英杰，木全章.滇杠柳的化學(xué)成分.云南植物研[J].1989，11(4)465～479)從杠柳的同屬植物滇杠柳(黑龍骨)也分離出杠柳毒苷，采用方法為95％乙醇回流提取，醇提取物經(jīng)石油醚脫脂后，用丙酮回流提取，丙酮可溶部位經(jīng)硅膠柱層析和RP-8硅膠反相柱層析，得到杠柳毒苷(產(chǎn)率0.023％)。
到目前為止所采用的杠柳毒苷的制備方法，有的是對(duì)原料用95％乙醇回流提取，對(duì)藥材的提取不完全，并且提取出的低極性雜質(zhì)多，不利于杠柳毒苷單體的分離；有的要經(jīng)反復(fù)硅膠柱層析，即費(fèi)溶劑又費(fèi)時(shí)間，產(chǎn)率低，成本較高。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供一種杠柳毒苷的制備方法。
本發(fā)明的技術(shù)方案概括如下(1)香加皮藥材的提取以體積百分比濃度為40％～80％的乙醇或40％～100％甲醇為提取溶劑，對(duì)香加皮進(jìn)行提取，提取后蒸去溶劑，加水過濾或離心，得澄清的香加皮水溶液；(2)大孔樹脂吸附分離香加皮水溶液經(jīng)大孔樹脂吸附，用10％～95％乙醇梯度洗脫，收集各洗脫部位，濃縮后分別進(jìn)行薄層層析，用強(qiáng)心苷專用顯色劑顯色，收集合并含有強(qiáng)心苷的部位；(3)高效液相制備分離將強(qiáng)心苷部位用反相色譜柱進(jìn)行高效液相制備，以體積比為30～60∶70～40的甲醇∶水，或15～40∶85～60的乙腈∶水為流動(dòng)相，同步采用紫外檢測(cè)器于217～220nm監(jiān)視流出曲線以指導(dǎo)產(chǎn)品收集，收集液經(jīng)濃縮干燥后得到杠柳毒苷。
香加皮藥材的提取溶劑乙醇優(yōu)選的濃度為50％～70％，最佳濃度為60％。
所述大孔樹脂為非極性大孔樹脂或弱極性大孔樹脂。
所述非極性大孔樹脂是以苯乙烯或乙基苯乙烯或α-甲基苯乙烯為骨架的大孔樹脂。
所述弱極性大孔樹脂是以苯乙烯為骨架的大孔樹脂。
在步驟(2)與步驟(3)之間也可對(duì)強(qiáng)心苷部位進(jìn)行硅膠柱層析分離將強(qiáng)心苷部位上樣后，用體積比為11∶1～6∶1的水飽和乙酸乙酯∶甲醇，或65∶3～65∶20的氯仿∶甲醇梯度洗脫，洗脫液各個(gè)流分分別進(jìn)行薄層層析，用強(qiáng)心苷專用顯色劑顯色，收集合并含有強(qiáng)心苷的流分。
在步驟(3)之后也可對(duì)杠柳毒苷進(jìn)行重結(jié)晶，所用溶劑為甲醇或乙醇或乙酸乙酯，得杠柳毒苷晶體。
用本發(fā)明的“一種杠柳毒苷的制備方法”所制備的杠柳毒苷經(jīng)UV、IR、13C-NMR、MS分析確認(rèn)為杠柳毒苷；經(jīng)TLC、HPLC(PDA檢測(cè)器)檢測(cè)本品純度達(dá)98.8％，所得產(chǎn)品可達(dá)含量測(cè)定用中藥化學(xué)對(duì)照品的要求。而且用本發(fā)明方法制備杠柳毒苷，藥材提取完全，產(chǎn)率高；有機(jī)溶劑用量少。


圖1為本發(fā)明制備的杠柳毒苷的IR圖譜。
圖2為本發(fā)明制備的杠柳毒苷的C13-NMR圖譜，表1為C13-NMR數(shù)據(jù)。
圖3為本發(fā)明制備的杠柳毒苷的MS圖譜。
圖4為本發(fā)明制備的杠柳毒苷的三維色譜圖。
具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說明實(shí)施例1(1)香加皮藥材的提取500g香加皮加4000mL體積百分比濃度為40％乙醇溶液，回流提取3次，每次2小時(shí)，合并提取液，減壓濃縮至約500mL，加500mL水稀釋后過濾，得澄清的香加皮水溶液；(2)大孔樹脂吸附分離將香加皮水溶液用已經(jīng)預(yù)處理好的AB-8大孔樹脂(南開大學(xué)化工廠生產(chǎn))吸附，用10％～95％乙醇梯度洗脫，收集各洗脫部位，減壓蒸干溶劑，殘?jiān)右掖既芙?，分別進(jìn)行薄層層析，用氯仿∶甲醇∶水＝65∶30∶10的下層為展開劑，3，5-二硝基苯甲酸試劑顯色，結(jié)果顯示部位3～5(40％～60％乙醇洗脫部位)中有紫紅色斑點(diǎn)，將其合并，得強(qiáng)心苷部位；(3)硅膠柱層析分離160～200目層析硅膠300克用乙酸乙酯濕法裝柱，強(qiáng)心苷部位干法上樣，用體積比為11∶1～6∶1的乙酸乙酯∶甲醇梯度洗脫，每200mL洗脫液為一份，各個(gè)流分分別減壓蒸干溶劑加乙醇溶解后，進(jìn)行薄層層析，用強(qiáng)心苷專用顯色劑顯色，收集合并含有強(qiáng)心苷的流分，結(jié)果顯示流分2～6中有強(qiáng)心苷成分；(4)高效液相制備分離將2～6流分用微孔濾膜(0.45μm)過濾后進(jìn)行高效液相制備分離，色譜柱C18反相色譜柱(Hypersil，5μm，10×250mm)；色譜條件流動(dòng)相為甲醇∶水＝30∶70；流速2.5mL/min；同步采用紫外檢測(cè)器于220nm監(jiān)視流出曲線以指導(dǎo)產(chǎn)品收集，得到杠柳毒苷收集液。
(5)重結(jié)晶將收集液減壓濃縮，揮干溶劑，加2mL甲醇，轉(zhuǎn)移至結(jié)晶皿中，放入干燥器內(nèi)(CaCl2干燥劑)，逐漸析出白色針狀結(jié)晶，將結(jié)晶過濾出來，如此反復(fù)3次，干燥后共得結(jié)晶412mg，產(chǎn)率為0.08％。
(6)結(jié)構(gòu)與純度檢測(cè)結(jié)構(gòu)確認(rèn)A.紫外掃描UVmax(EtOH)＝218nm(具有Δα，β五元內(nèi)酯環(huán)強(qiáng)心苷的特征吸收)。
B.IR分析主要吸收為3600～3200(-OH)，1782，1741，1631(β-取代-Δα，β-γ-內(nèi)酯)，1077，1044cm-1。圖譜見附圖1。
C.C13-NMR數(shù)據(jù)與胡英杰，木全章.滇杠柳的化學(xué)成分.云南植物研[J].1989，11(4)465～479所公布的一致。數(shù)據(jù)見表1，圖譜見圖2。
D.MS分析m/z697.4(M+)，534.1(M+-C6H10O5)。圖譜見附圖3。
經(jīng)分析確認(rèn)為杠柳毒苷。
純度分析A.TLC在高效硅膠板上點(diǎn)樣0.3μg、3μg、30μg，氯仿∶甲醇；水＝65∶30∶10下層展開，分別用3，5-二硝基苯甲酸及10％H2SO4顯色，均只見單一紅色及黑色斑點(diǎn)。
B.經(jīng)HPLC(PDA)檢測(cè)，純度達(dá)98.8％。見附圖4，在圖中，保留時(shí)間12分鐘的峰為杠柳毒苷峰。
表1 所制備杠柳毒苷的13C-NMR數(shù)據(jù)甙元碳數(shù)杠柳毒苷自制品糖基碳數(shù) 杠柳毒苷 11 25.9 25.96 1’ 97.3 97.322 26.3 26.33 2’ 36.6 36.563 73.6 73.64 3’ 77.8 77.94 35.3 35.35 4’ 82.6 82.885 75.2 75.32 5’ 69.4 69.486 35.4 35.42 6’ 18.5 18.617 24.2 24.28 OMe 58.5 58.58 40.9 40.91 1” 106.3 106.489 39.2 39.17 2” 75.9 75.9710 41.1 41.13 3” 78.2 78.3811 21.9 21.95 4” 71.9 71.7612 39.9 39.85 5” 78.2 78.3213 49.9 49.91 6” 62.8 62.9614 84.6 84.5815 33 33.0616 27.2 27.217 51.2 51.2518 16 16.119 17.1 17.1720 175.9 175.8621 73.6 73.6622 117.6 117.6423 174.4 174.45實(shí)施例2(1)香加皮藥材的提取500g香加皮加3000mL體積百分比濃度為80％乙醇溶液，回流提取3次，每次2小時(shí)，合并提取液，減壓濃縮至約500mL，加800mL水稀釋后過濾，得澄清的香加皮水溶液；(2)大孔樹脂吸附分離將香加皮水溶液用已經(jīng)預(yù)處理好的D101(天津農(nóng)藥廠生產(chǎn))大孔樹脂吸附，用10％～95％乙醇梯度洗脫，收集各洗脫部位，減壓蒸干溶劑，殘?jiān)右掖既芙猓謩e進(jìn)行薄層層析。用氯仿∶甲醇∶水＝65∶30∶10的下層為展開劑，3，5-二硝基苯甲酸試劑顯色，結(jié)果顯示部位3～5(40％～60％乙醇洗脫部位)中有紫紅色斑點(diǎn)，將其合并，得強(qiáng)心苷部位；(3)高效液相制備分離將強(qiáng)心苷部位用微孔濾膜(0.45μm)過濾后進(jìn)行HPLC制備分離。色譜柱C18反相色譜柱(Hypersil，5μm，10×250mm)；色譜條件流動(dòng)相為甲醇∶水＝40∶60，流速2.5mL/min；同步采用紫外檢測(cè)器于217nm監(jiān)視流出曲線以指導(dǎo)產(chǎn)品收集，得到杠柳毒苷收集液；
將收集液減壓濃縮，揮干溶劑，干燥后得杠柳毒苷495mg，產(chǎn)率為0.10％。
實(shí)施例3(1)香加皮藥材的提取500g香加皮加3500mL體積百分比濃度為50％乙醇溶液，回流提取2次，每次3小時(shí)，合并提取液，減壓濃縮至約400mL，加1000mL水過濾，得澄清的香加皮水溶液；(2)大孔樹脂吸附分離將香加皮水溶液用已經(jīng)預(yù)處理好的Dm2(天津南開大學(xué)化工廠生產(chǎn))大孔樹脂吸附，用10％～95％乙醇梯度洗脫，收集各洗脫部位，減壓蒸干溶劑，殘?jiān)右掖既芙猓謩e進(jìn)行薄層層析，用氯仿∶甲醇∶水＝65∶30∶10的下層為展開劑，3，5-二硝基苯甲酸試劑顯色，結(jié)果顯示部位3～5(40％～60％乙醇洗脫部位)中有紫紅色斑點(diǎn)，將其合并，得強(qiáng)心苷部位；(3)高效液相制備分離將強(qiáng)心苷部位用微孔濾膜(0.45μm)過濾后進(jìn)行HPLC制備分離，色譜柱C18反相色譜柱(Hypersil ODS，5μm，10×250mm)；色譜條件流動(dòng)相為甲醇∶水＝50∶50，流速2.5mL/min；同步采用紫外檢測(cè)器于220nm監(jiān)視流出曲線以指導(dǎo)產(chǎn)品收集，得到杠柳毒苷收集液；將收集液減壓濃縮，揮于溶劑，干燥后得杠柳毒苷。
實(shí)施例4(1)香加皮藥材的提取500g香加皮加2500mL體積百分比濃度為70％乙醇溶液，回流提取1小時(shí)，提取4次，合并提取液，減壓濃縮至800mL，加300mL水過濾，得澄清的香加皮水溶液；(2)大孔樹脂吸附分離將香加皮水溶液用已經(jīng)預(yù)處理好的HPD100大孔樹脂(滄州寶恩化工有限公司生產(chǎn))吸附，用10％～95％乙醇梯度洗脫，收集各洗脫部位，減壓蒸于溶劑，殘?jiān)右掖既芙?，分別進(jìn)行薄層層析，用氯仿∶甲醇∶水＝65∶30∶10的下層為展開劑，3，5-二硝基苯甲酸試劑顯色，結(jié)果顯示部位3～5(40％～60％乙醇洗脫部位)中有紫紅色斑點(diǎn)，將其合并，得強(qiáng)心苷部位；(3)高效液相制備分離將強(qiáng)心苷部位用微孔濾膜(0.45μm)過濾后進(jìn)行HPLC制備分離，色譜柱C18反相色譜柱(Hypersil ODS，5μm，10×250mm)；色譜條件流動(dòng)相為乙腈∶水＝15∶85，流速2.5mL/min；同步采用紫外檢測(cè)器于217nm監(jiān)視流出曲線以指導(dǎo)產(chǎn)品收集，得到杠柳毒苷。
實(shí)施例5(1)香加皮藥材的提取500g香加皮加8000mL體積百分比濃度為40％甲醇溶液進(jìn)行滲漉提取，將提取液減壓濃縮至約400mL，加700mL水稀釋后過濾，得澄清的香加皮水溶液；(2)大孔樹脂吸附分離將香加皮水溶液用已經(jīng)預(yù)處理好的D2(南開大學(xué)化工廠生產(chǎn))大孔樹脂吸附，用10％～95％乙醇梯度洗脫，收集各洗脫部位，減壓蒸干溶劑，殘?jiān)右掖既芙?，分別進(jìn)行薄層層析，用氯仿∶甲醇∶水＝65∶30∶10的下層為展開劑，3，5-二硝基苯甲酸試劑顯色，結(jié)果顯示部位3～5(40％～60％乙醇洗脫部位)中有紫紅色斑點(diǎn)，將其合并，得強(qiáng)心苷部位；
(3)高效液相制備分離將強(qiáng)心苷部位用微孔濾膜(0.45μm)過濾后進(jìn)行HPLC制備分離，色譜柱C8反相色譜柱(Hypersil ODS，5μm，10×250mm)；色譜條件流動(dòng)相為乙腈∶水＝40∶60，流速2.0mL/min；同步采用紫外檢測(cè)器于217nm監(jiān)視流出曲線以指導(dǎo)產(chǎn)品收集，得到杠柳毒苷收集液；(4)重結(jié)晶將收集液減壓濃縮，揮干溶劑，加2mL甲醇，轉(zhuǎn)移至結(jié)晶皿中，放入干燥器內(nèi)(CaCl2干燥劑)，逐漸析出白色針狀結(jié)晶，將結(jié)晶濾出，洗滌后干燥。
實(shí)施例6(1)香加皮藥材的提取500g香加皮加3500mL甲醇溶液，回流提取2小時(shí)，提取4次，合并提取液，減壓濃縮至約500mL，加700mL水過濾，得澄清的香加皮水溶液；(2)大孔樹脂吸附分離將香加皮水溶液用已經(jīng)預(yù)處理好的GDX-104(天津試劑二廠生產(chǎn))大孔樹脂吸附，用10％～95％乙醇梯度洗脫，收集各洗脫部位，減壓蒸干溶劑，殘?jiān)右掖既芙?，分別進(jìn)行薄層層析，用氯仿∶甲醇∶水＝65∶30∶10的下層為展開劑，3，5-二硝基苯甲酸試劑顯色，結(jié)果顯示部位3～5(40％～60％乙醇洗脫部位)中有紫紅色斑點(diǎn)，將其合并，得強(qiáng)心苷部位；(3)高效液相制備分離將強(qiáng)心苷部位用微孔濾膜(0.45μm)過濾后進(jìn)行HPLC制備分離，色譜柱(C18反相色譜柱Hypersil ODS，5μm，10×250mm)；色譜條件流動(dòng)相為乙腈∶水＝27∶73，流速2.0mL/min；同步采用紫外檢測(cè)器于217nm監(jiān)視流出曲線以指導(dǎo)產(chǎn)品收集，得到杠柳毒苷收集液；將收集液減壓濃縮，干燥后得杠柳毒苷。
實(shí)施例7(1)香加皮藥材的提取500g香加皮加3500mL體積百分比濃度為60％乙醇溶液，回流提取2小時(shí)，提取4次，合并提取液，減壓濃縮至約500mL，加700mL水過濾，得澄清的香加皮水溶液；(2)大孔樹脂吸附分離將香加皮水溶液用已經(jīng)預(yù)處理好的GDX-104(天津試劑二廠生產(chǎn))大孔樹脂吸附，用10％～95％乙醇梯度洗脫，收集各洗脫部位，減壓蒸干溶劑，殘?jiān)右掖既芙猓謩e進(jìn)行薄層層析，用氯仿∶甲醇∶水＝65∶30∶10的下層為展開劑，3，5-二硝基苯甲酸試劑顯色，結(jié)果顯示部位3～5(40％～60％乙醇洗脫部位)中有紫紅色斑點(diǎn)，將其合并，得強(qiáng)心苷部位；(3)高效液相制備分離將強(qiáng)心苷部位用微孔濾膜(0.45μm)過濾后進(jìn)行HPLC制備分離，色譜柱(C18反相色譜柱Hypersil ODS，5μm，10×250mm)；色譜條件流動(dòng)相為甲醇∶水＝38∶62，流速2.0mL/min；同步采用紫外檢測(cè)器于217nm監(jiān)視流出曲線以指導(dǎo)產(chǎn)品收集，得到杠柳毒苷收集液；將收集液減壓濃縮，干燥后得杠柳毒苷。
在實(shí)際操作時(shí)，還可以選用其它型號(hào)非極性大孔樹脂如HPD 100或HPD 300(滄州寶恩化工有限公司)；GDX-104(天津試劑二廠)；SIP-1100或SIP-1200或SIP-1300或SIP-1400(上海醫(yī)藥工業(yè)研究院)；上試101或上試102或上試401或上試402(上海試劑廠)；南大3520或D1或D2，或Dm2，或Dm5(南開大學(xué)化工廠)，等等?？梢赃x用的弱極性大孔樹脂的型號(hào)為AB-8(南開大學(xué)化工廠)；HPD 500，HPD 400(滄州寶恩化工有限公司)；D201，D301(天津農(nóng)藥廠)，國(guó)外Diaion(HP10，HP20，HP21)，Amberlite(XAD-1，XAD-2)，等等。
除了香加皮以外，也可以蘿藦科植物滇杠柳或希臘杠柳或美葉杠柳，或夾竹桃科植物毒毛旋花的種子為原料提取杠柳毒苷。
工業(yè)制備杠柳毒苷可選用的制備柱有Waters C18(20mm×250mm)，Zorbax SB-C18(9.4×250mm)等等。
權(quán)利要求
1.一種杠柳毒苷的制備方法，其特征是包括如下步驟(1)香加皮藥材的提取以體積百分比濃度為40％～80％的乙醇或40％～100％的甲醇為提取溶劑，對(duì)香加皮進(jìn)行提取，提取后蒸去溶劑，加水過濾或離心，得澄清的香加皮水溶液；(2)大孔樹脂吸附分離香加皮水溶液經(jīng)大孔樹脂吸附，用10％～95％乙醇梯度洗脫，收集各洗脫部位，濃縮后分別進(jìn)行薄層層析，用強(qiáng)心苷專用顯色劑顯色，收集合并含有強(qiáng)心苷的部位；(3)高效液相制備分離將強(qiáng)心苷部位用反相色譜柱進(jìn)行高效液相制備，以體積比為30～60∶70～40的甲醇∶水，或15～40∶85～60的乙腈∶水為流動(dòng)相，同步采用紫外檢測(cè)器于217～220nm監(jiān)視流出曲線以指導(dǎo)產(chǎn)品收集，收集液經(jīng)濃縮干燥后得到杠柳毒苷。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種杠柳毒苷的制備方法，其特征是所述乙醇的濃度為50％～70％。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種杠柳毒苷的制備方法，其特征是所述乙醇的濃度為60％。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種杠柳毒苷的制備方法，其特征是所述大孔樹脂為非極性大孔樹脂或弱極性大孔樹脂。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種杠柳毒苷的制備方法，其特征是所述非極性大孔樹脂是以苯乙烯或乙基苯乙烯或α-甲基苯乙烯為骨架的大孔樹脂。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種杠柳毒苷的制備方法，其特征是所述弱極性大孔樹脂是以苯乙烯為骨架的大孔樹脂。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種杠柳毒苷的制備方法，其特征是，在步驟(2)與步驟(3)之間對(duì)強(qiáng)心苷部位進(jìn)行硅膠柱層析分離將強(qiáng)心苷部位上樣后，用體積比為11∶1～6∶1的水飽和乙酸乙酯∶甲醇，或65∶3～65∶20的氯仿∶甲醇梯度洗脫，洗脫液各個(gè)流分分別進(jìn)行薄層層析，用強(qiáng)心苷專用顯色劑顯色，收集合并含有強(qiáng)心苷的流分。
8.根據(jù)權(quán)利要求1或7所述的一種杠柳毒苷的制備方法，其特征是將杠柳毒苷用甲醇或乙醇或乙酸乙酯進(jìn)行重結(jié)晶，制得杠柳毒苷晶體。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種杠柳毒苷的制備方法，它包括如下步驟(1)香加皮藥材的提取，并制成香加皮水溶液；(2)大孔樹脂吸附分離香加皮水溶液經(jīng)大孔樹脂吸附，用10％～95％乙醇梯度洗脫，收集各洗脫部位，濃縮后分別進(jìn)行薄層層析，用顯色劑顯色，收集合并含有強(qiáng)心苷的部位；(3)高效液相制備分離將強(qiáng)心苷部位用反相色譜柱進(jìn)行高效液相制備，以體積比為30～60∶70～40的甲醇水為流動(dòng)相，同步采用紫外檢測(cè)器監(jiān)視流出曲線以指導(dǎo)產(chǎn)品收集，收集液經(jīng)濃縮干燥后得到杠柳毒苷，經(jīng)檢測(cè)，杠柳毒苷純度達(dá)98.8％，所得產(chǎn)品可達(dá)含量測(cè)定用中藥化學(xué)對(duì)照品的要求，而且用本發(fā)明方法制備杠柳毒苷，藥材提取完全，產(chǎn)率高；有機(jī)溶劑用量少。
文檔編號(hào)C07J19/00GK1594353SQ20041001996
公開日2005年3月16日 申請(qǐng)日期2004年7月12日 優(yōu)先權(quán)日2004年7月12日
發(fā)明者張伯禮, 劉虹, 高秀梅, 潘桂湘, 郭俊華, 朱曉薇 申請(qǐng)人:天津中醫(yī)學(xué)院