專(zhuān)利名稱(chēng)：含替加氟的卵磷脂類(lèi)化合物及其合成的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
含替加氟的卵磷脂類(lèi)化合物及其合成，涉及一種核苷類(lèi)物質(zhì)，具體是替加氟的磷脂衍生物。
背景技術(shù)：
磷脂對(duì)癌組織具有靶向載體地作用。核苷類(lèi)藥物對(duì)癌癥和艾滋病具有一定的療效，但是它們還存在一些不足。如5-氟脲嘧啶活性大，但毒副作用也很大；而替加氟毒副作用雖然小，但是療效卻較低。為了提高其療效，降低其毒性，對(duì)其結(jié)構(gòu)修飾一直是研究的熱點(diǎn)。而將它轉(zhuǎn)化為以磷脂作載體的綴合物前藥是研究的一個(gè)重點(diǎn)。卵磷脂是一類(lèi)具有重要生理活性的天然產(chǎn)物，它的類(lèi)似物具有抗癌活性，但是分子中同時(shí)包含有卵磷脂結(jié)構(gòu)及磷脂核苷綴合物結(jié)構(gòu)的化合物未見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道。由于它的分子中具有多種功能基，合成并研究它們的活性，對(duì)磷脂核苷類(lèi)新藥的創(chuàng)制將會(huì)具有一定的指導(dǎo)意義。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于合成一種含卵磷脂結(jié)構(gòu)及磷脂核苷綴合物結(jié)構(gòu)的化合物以其解決核苷類(lèi)藥物療效低，毒性大等問(wèn)題。
實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的的技術(shù)方案是，本發(fā)明的化合物是一種如通式所示的含替加氟的卵磷脂類(lèi)化合物
該化合物的合成方法為
下面進(jìn)一步詳述本發(fā)明
合成的含替加氟的卵磷脂類(lèi)化合物用Yanaco CHN CORDER MT-3型自動(dòng)元素分析儀和Yanaco融點(diǎn)儀進(jìn)行分析測(cè)定，其理化數(shù)據(jù)和元數(shù)分析結(jié)果見(jiàn)表1。
表1.4a～c物理性質(zhì)數(shù)據(jù)和元素分析
元素分析分析值(計(jì)算值)％
序號(hào). 分子式 n比移值Rf1*狀態(tài) 收率
％ 碳?xì)? 氮
4a C35H65FN3O7PS 20.40 粘稠 48 58.25(58.43) 9.02(9.07) 5.83(5.81)
4b C36H67FN3O7PS 30.42 粘稠 40 58.77(58.76) 9.14(9.20) 5.73(5.70)
4c C39H73FN3O7PS 60.42 粘稠 46 60.23(61.17) 9.40(9.50) 5.42(5.37)
說(shuō)明測(cè)定比移值Rf所用的流動(dòng)相是氯仿/甲醇(9∶1)。
用BRUKER AC-P200HE型儀測(cè)定該化合物的核磁共振氫譜，結(jié)果見(jiàn)表2，
表2.4a～c核磁共振氫譜如下
注1H NMR(以TMS為內(nèi)標(biāo))和31P NMR(85％H3PO4為外標(biāo))。
我們選擇了n＝2的化合物(4a)進(jìn)行了對(duì)人體膀胱癌細(xì)胞PGA1的抑制作用的體外試驗(yàn)，本試驗(yàn)選用體外連續(xù)培養(yǎng)的膀胱細(xì)胞癌細(xì)胞株；細(xì)胞株由天津腫瘤研究所引進(jìn)。細(xì)胞培養(yǎng)于含10％胎牛血清的DMEM高糖培養(yǎng)基，37℃、5％CO2條件下；細(xì)胞倍增時(shí)間為24～30h。以(2a)，(3a)和5-氟脲嘧啶及替加氟作參照?；衔?4a)是以水作溶劑，其余化合物以DMSO作溶劑；結(jié)果見(jiàn)表3。
表3化合物4a對(duì)膀胱癌細(xì)胞的抑制作用
化合物半數(shù)置死量IC50
濃度單位微克/
每毫升μg.mL-1
5-氟脲嘧啶 1.0
替加氟100
2a250
3a125
4a66
從表3中可知對(duì)人體膀胱癌細(xì)胞PGA1的抑制作用大小是(4a)＞＞(3a)＞(2a)。
上述結(jié)果表明化合物(3a～c)通過(guò)結(jié)構(gòu)修飾后產(chǎn)生的(4a～c)，抗癌活性增強(qiáng)了。
開(kāi)環(huán)是有機(jī)反應(yīng)中的一類(lèi)重要反應(yīng)。在合成天然產(chǎn)物及其衍生物方面有巨大應(yīng)用，卵磷脂的合成是通過(guò)1.3.2-二氧磷雜環(huán)戊烷的開(kāi)環(huán)，我們?cè)O(shè)計(jì)以卵磷脂類(lèi)似物作載體的替加氟前藥通過(guò)環(huán)甘油磷脂的開(kāi)環(huán)來(lái)合成。
六乙基亞磷酰三胺作磷?；噭┯捎诰哂蟹磻?yīng)條件溫和，選擇性高而在磷脂化合物合成中得到廣泛地應(yīng)用。我們?cè)噲D用它與替加氟及1-十六烷基甘油來(lái)合成替加氟環(huán)甘油磷脂。但是，實(shí)驗(yàn)表明它們?cè)诨亓鞯谋街?，以碘作催化劑不反?yīng)，這是由于氟脲嘧啶環(huán)上的N3位置有較為大空間位阻。為此，我們將替加氟轉(zhuǎn)化為含有官能團(tuán)羥基的衍生物。以乙腈作溶劑，在NaHCO3存在下，過(guò)量氯代醇與替加氟在80℃時(shí)反應(yīng)12h，幾乎得到定量的羥烷基替加氟。
TLC跟蹤分析表明羥烷基替加氟與六乙基亞磷酰三胺在上述條件下能進(jìn)行有效的反應(yīng)，繼而與1-十六烷基甘油及硫作用，經(jīng)一鍋法合成得到環(huán)甘油硫代磷脂羥烷基替加氟綴合物?；衔?3a～c)的31P NMR表現(xiàn)為強(qiáng)度相等的雙峰，甘油骨架CH的1H NMR也表現(xiàn)為兩組，這是因?yàn)榉磻?yīng)產(chǎn)物是由兩組非對(duì)映構(gòu)體組成。
化合物(3a～c)與三乙胺發(fā)生開(kāi)環(huán)反應(yīng)在室溫下即能進(jìn)行，得目標(biāo)分子(4a～c)。
反應(yīng)機(jī)理及化合物(4a～c)的結(jié)構(gòu)確證
化合物(4a～c)的31P NMR表現(xiàn)為強(qiáng)度相等的雙峰，甘油骨架CH的1HNMR也表現(xiàn)為兩組，這是因?yàn)樗姆肿又幸灿袃蓚€(gè)手性中心，反應(yīng)產(chǎn)物也是由兩組非對(duì)映構(gòu)體細(xì)成。核苷中的手性碳原子在反應(yīng)過(guò)程中保持不變，對(duì)磷原子和甘油骨架上的手性碳原子的立體構(gòu)型沒(méi)有誘導(dǎo)作用。
開(kāi)環(huán)反應(yīng)的位置在甘油骨架上位阻較小的C19上，通過(guò)比較化合物(3a～c)與(4a～c)的DEPT圖譜證實(shí)，因?yàn)樵诜磻?yīng)前后13C18 NMR幾乎一致在上述化合物中的氟脲嘧啶環(huán)上1H與19F及19F與13C發(fā)生耦合，耦合常數(shù)分別為JF-H＝6.07Hz，JF-C＝140Hz。
目標(biāo)分子中的其他部分結(jié)構(gòu)可通過(guò)下列事實(shí)得到確證①磷硫雙鍵的確定目標(biāo)分子的31P NMR值為δ62.2，62.8ppm，表明產(chǎn)物為典型的下列結(jié)構(gòu)
②(CH3CH2)3N基團(tuán)的確定從產(chǎn)物的1H NMR譜知，它除了具有與原料相同的1H NMR值外，在δ1.15處有一個(gè)三重峰，在δ2.47處有一個(gè)四重峰；對(duì)照產(chǎn)物與原料的13C NMR譜知，產(chǎn)物在δ8.34處有一條譜線(xiàn)，在δ45.34處有一條譜線(xiàn)；從產(chǎn)物的DEPT譜上看出，除了具與原料相同的(CH2)15CH3，CHOP，還有CH3CH2N(δ8.325)，CH3CH2N(45.231)。上述事實(shí)都表明目標(biāo)分子中含有(CH3CH2)3N基團(tuán)。
其開(kāi)環(huán)反應(yīng)機(jī)理可以認(rèn)為是親核試劑(A)進(jìn)攻甘油骨架上位阻較小碳原子的側(cè)面而形成目標(biāo)產(chǎn)物。
A＝三乙胺，Nu＝羥烷基替加氟
化合物(4a～c)與(3a～c)相比，性質(zhì)有較大區(qū)別(3a～c)不溶于水而僅溶于有機(jī)溶劑，而(4a～c)在室溫下在100g水中可溶解1.2g，與乙醇、CH2Cl2和苯等有機(jī)溶劑混溶；(4a～c)具有多種抗癌功能基。
具體實(shí)施例方式
1、含替加氟的卵磷脂類(lèi)化合物的合成
將無(wú)水三乙胺13.05克(150mmol)，化合物(3)0.619克(1.0mmol)，無(wú)水苯10ml混合，在室溫下攪拌4d(攪拌速度為800轉(zhuǎn)/分鐘)，旋轉(zhuǎn)去掉溶劑苯和剩余的三乙胺，將殘余物進(jìn)行快速色譜分離(CH3Cl-CH3OH＝9∶1)。按表1中比移值收集。
2、抗腫瘤活性測(cè)定
首先以DMSO為溶劑將化合物4a和對(duì)照物樣品分別稀釋為10，0.1mg.ml-1，再分別取10ul加入到完全培養(yǎng)基1ml中，使之在實(shí)驗(yàn)中的終濃度為100ug.ml-1、1mg.ml-1。同時(shí)以不加樣品的DMSO為實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性對(duì)照。
以完全培養(yǎng)基為溶劑，分別配制成100，10和1ug.ml-1，作為實(shí)驗(yàn)使用。同時(shí)以完全培養(yǎng)基作為陰性對(duì)照。
細(xì)胞鋪板與觀察計(jì)數(shù)取生長(zhǎng)處于對(duì)數(shù)期的PG1A細(xì)胞，用0.02％EDTA消化液將細(xì)胞從種子瓶中消化下來(lái)，制備成細(xì)胞濃度為1.5×104個(gè)/ml的細(xì)胞懸液，將細(xì)胞懸液接種于24孔板，1ml/孔，正常培養(yǎng)24h后，吸取培養(yǎng)基，換入各組含有測(cè)試樣品的培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。
給藥后，并分別于給藥后24、48、72、96、120h觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)，同時(shí)消化各組仍處于生長(zhǎng)狀態(tài)的活細(xì)胞，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。得出樣品對(duì)癌細(xì)胞的抑制作用結(jié)果。在不同時(shí)段，在倒置顯微鏡下，可清晰的觀察到對(duì)照組細(xì)胞生長(zhǎng)正常。細(xì)胞排列緊密，呈對(duì)數(shù)生長(zhǎng)狀態(tài)。以DMSO為溶劑組由于DMSO對(duì)細(xì)胞有一定的毒副作用，因此在實(shí)驗(yàn)中設(shè)置空白組。在給藥組，細(xì)胞分裂指數(shù)相(為惡性腫瘤細(xì)胞分裂指數(shù)狀態(tài))下降。隨藥物濃度的增加，其下降趨勢(shì)增大，細(xì)胞死亡增加，存活細(xì)胞出現(xiàn)縮圓、胞質(zhì)濃縮、精糙、顆粒性?xún)?nèi)涵物增加。
權(quán)利要求
1、一種含替加氟的卵磷脂類(lèi)化合物，其特征在于該化合物的通式為
式中n＝2，3，6
2、一種如權(quán)利要求1所述的含替加氟的卵磷脂類(lèi)化合物的合成方法，包括替加氟轉(zhuǎn)化成羥烷基替加氟(2)，一鍋法合成環(huán)甘油硫代磷脂羥烷基替加氟(3)，其特征在于將環(huán)甘油硫代磷脂羥烷基替加氟與三乙胺在室溫下開(kāi)環(huán)反應(yīng)得到含替加氟的卵磷脂類(lèi)化合物，反應(yīng)式為
全文摘要
含替加氟的卵磷脂類(lèi)化合物及其合成涉及一種核苷類(lèi)物質(zhì)。該化合物的結(jié)構(gòu)如通式所示化合物的合成，是將環(huán)甘油硫代磷脂羥烷基替加氟與三乙胺在室溫下開(kāi)環(huán)反應(yīng)得到；經(jīng)抗腫瘤活性測(cè)定，本發(fā)明化合物對(duì)人體膀胱癌細(xì)胞的抗癌活性增強(qiáng)，因此對(duì)替加氟結(jié)構(gòu)的修飾是創(chuàng)制療效高、毒副作用低的磷脂核苷類(lèi)新藥的有效途徑之一。
文檔編號(hào)C07F9/6558GK1405171SQ0213974
公開(kāi)日2003年3月26日 申請(qǐng)日期2002年11月7日 優(yōu)先權(quán)日2002年11月7日
發(fā)明者許新華 申請(qǐng)人:湖南大學(xué)