專(zhuān)利名稱(chēng)：一種氧化蘇木色精液及其制備方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種化學(xué)試劑，特別是一種氧化蘇木色精液及其制備方法和用途。
蘇木色精液是一種組織細(xì)胞學(xué)用染色試劑，廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)臨床病理診斷、生物形態(tài)學(xué)教學(xué)與研究領(lǐng)域，以往配制蘇木色精液所需的氧化蘇木色精為固體產(chǎn)品，其加工工藝復(fù)雜，需要時(shí)臨時(shí)配制，使用不便，試劑染色選擇性較差，核與間質(zhì)成份分化不清，而且其穩(wěn)定性不理想，保存期較短，因此有必要提供一種穩(wěn)定性好的氧化蘇木色精液。
本發(fā)明的目的是提供一種氧化蘇木色精液及其制備方法和用途，氧化蘇木色精液與媒染液混合得到蘇木色精液是組織細(xì)胞學(xué)用染色試劑，本發(fā)明制備氧化蘇木色精液的方法簡(jiǎn)便，可實(shí)現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)，產(chǎn)品穩(wěn)定性好，制得蘇木色精試劑具有較強(qiáng)的細(xì)胞核親和特異性。
為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取以下設(shè)計(jì)方案這種氧化蘇木色精液為深棕紅色的透明液體，以常規(guī)薄層層析法檢查時(shí)呈單一的深棕紅色斑點(diǎn)，層析液配方為95％乙醇82毫升，冰醋酸18毫升，層析硅膠為薄層層析硅膠G(60型)。
氧化蘇木色精液的工藝包括蘇木色精的乙醇溶液中加入碘酸鹽，加溫沸騰回流反應(yīng)，所述的蘇木色精乙醇溶液的濃度為10—25％重量百分，配制上述溶液的乙醇濃度在80—97％之間，碘酸鹽的用量與原料蘇木色精重量之比為1—4∶10，所述加溫回流反應(yīng)至反應(yīng)液呈深棕紅色透明液體，可用常規(guī)薄層層析法檢查反應(yīng)程度，至呈單一的深棕紅色斑點(diǎn)時(shí)，終止反應(yīng)，過(guò)濾后在濾液中加入丙三醇，丙三醇∶乙醇=1∶1—2(體積比)。
以氧化蘇木色精液配制蘇木色精液，所述蘇木色精液中有媒染液，媒染液為無(wú)機(jī)鹽溶液或有機(jī)鹽溶液或磷鉬酸或磷鎢酸。
一種氧化蘇木色精液配制的蘇木色精液，該蘇木色精液中含1—5份氧化蘇木色精液，6—10份媒染液(體積比)，所述媒染液的組成為蒸餾水 2000—4000毫升丙三醇 100—500毫升95％乙醇1000—3000毫升E冰醋酸 200—500毫升12水硫酸鋁鉀或12水硫酸鋁銨的用量控制在占上述幾種液體混合液濃度的0.01-0.21M之間。
本發(fā)明提供的蘇術(shù)色精液(含媒染液)中的氧化蘇木色精的分子式 本發(fā)明優(yōu)點(diǎn)本發(fā)明制備氧化蘇木色精液的方法簡(jiǎn)便，可實(shí)現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)，產(chǎn)品穩(wěn)定性好，制得蘇木色精試劑具有較強(qiáng)的細(xì)胞核親和特異性。
下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明。
實(shí)施例1一、稱(chēng)取蘇木色精固體粉末20克，溶解于80％乙醇100毫升中，充分?jǐn)嚢柰耆芙?，加入碘酸鈉粉末4克，室溫下充分?jǐn)嚢瑁瑢⒎磻?yīng)混懸液倒入回流反應(yīng)器中，加熱沸騰，回流時(shí)間2小時(shí)，這時(shí)反應(yīng)液呈深棕紅色的透明液，以玻璃吸管吸取反應(yīng)液在白色定量濾紙上涂布，呈現(xiàn)深咖啡色，也可用常規(guī)薄層層析法檢查反應(yīng)程度，至呈單一的深棕紅色斑點(diǎn)(層析液配方為95％乙醇82ml、冰醋酸18ml，層析硅膠為薄層層析硅膠G(60型)，即可終止反應(yīng)。自然冷卻至室溫，過(guò)濾，取得濾液，取丙三醇80毫升加入濾液中，充分?jǐn)嚢杌旌系煤紴V液，即氧化蘇木色精液。本工藝中采用加熱沸騰回流目的是為了加速氧化反應(yīng)速率，并且去除過(guò)量的碘酸鹽。
二、媒染液制備取蒸餾水4000毫升，加入12水硫酸鋁鉀或12水硫酸鋁銨500克，充分溶解，依次加入95％乙醇3000毫升，丙三醇500毫升，冰醋酸500毫升，混勻而得。
三、蘇木色精液配制取氧化蘇木色精液4份加入媒染液7份，充分?jǐn)嚢杌靹蚨?。它為較深的橙紅色透明液體，均勻、掛壁性強(qiáng)，PH值2—4。
本發(fā)明提供的氧化蘇木色精液還可以與其他公知的無(wú)機(jī)鹽或有機(jī)鹽溶液(媒染液)配合使用，例如將實(shí)施例1中硫酸鋁鉀換成硫酸鐵銨或硫酸鋁或氯化鋁。還有其他媒染劑，例如三氯化鐵或醋酸鐵溶液等。還有與磷鎢酸或磷鉬酸配合使用，用于神經(jīng)細(xì)胞染色等。
實(shí)施例2一、稱(chēng)取蘇木色精固體粉末10克，溶解于95％乙醇100毫升中，充分?jǐn)嚢柰耆芙?，加入碘酸鉀粉?克，室溫下充分?jǐn)嚢?，將上述混懸液倒入回流反?yīng)器中，加熱至沸騰，回流3小時(shí)，其他工序同實(shí)施例1。
二、媒染液制備取蒸餾水2000/毫升，加入12水硫酸鋁鉀250克，充分溶解，依次加入丙三醇100毫升，95％乙醇1000毫升，冰醋酸200/毫升，混勻。
三、蘇木色精液配制取氧化蘇木色精液3份加入媒染液7份，充分?jǐn)嚢杌靹蚨谩?br> 本發(fā)明提供的蘇木色精液(內(nèi)含媒染液)用于細(xì)胞涂片染色、組織切片染色、組織化學(xué)細(xì)胞核復(fù)染。上述試驗(yàn)的相關(guān)試劑有0.5％伊紅染液，0.01M氯化銨返藍(lán)液，0.01M檸檬酸分化液。
按常規(guī)蘇木精伊紅染色(HE)方法對(duì)細(xì)胞涂片染色，結(jié)果是細(xì)胞核呈現(xiàn)清晰層次分明的藍(lán)黑色，細(xì)胞質(zhì)呈靚麗的伊紅色、粘液呈層次分明的粉紅色；按常規(guī)方法對(duì)切片染色，結(jié)果是細(xì)胞核呈現(xiàn)清晰層次分明的藍(lán)黑色，細(xì)胞質(zhì)呈靚麗的紅色，間質(zhì)纖維呈層次豐富的淡紅色(見(jiàn)

圖1)。
按常規(guī)方法對(duì)組織化學(xué)細(xì)胞核復(fù)染，結(jié)果是依染色時(shí)間不同細(xì)胞核呈現(xiàn)深、淺不一的藍(lán)黑色，細(xì)胞核輪廓清晰、明確。
本發(fā)明蘇木色精液(含媒染液)的染色性能試驗(yàn)方法1、石臘切片入二甲苯脫臘二次，每次10分鐘。
2、切片入無(wú)水乙醇脫苯二次，每次5分鐘。
3、切片入95％乙醇脫苯二次，5分鐘。
4、略控干乙醇，入蘇木色精液(含媒染液)20分鐘。
5、水涮洗2秒。
6、入0.01M檸檬酸水溶液分化2秒。
7、水涮洗。
8、入0.01M氯化銨快速返藍(lán)液10—30秒9、水涮洗。
10、95％乙醇脫水一次2分鐘11、無(wú)水乙醇脫水二次，每次2分鐘12、二甲苯脫乙醇透明二次。每次2分鐘，中性光學(xué)樹(shù)脂膠封固，加蓋玻璃蓋物片。
13、結(jié)果在40—100倍光學(xué)顯微鏡下觀察細(xì)胞核被特異性染色，呈現(xiàn)細(xì)膩而清晰層次分明的藍(lán)黑色，組織間質(zhì)膠原纖維無(wú)色。
權(quán)利要求
1.一種氧化蘇木色精液，其特征在于它為深棕紅色的透明液體，以常規(guī)薄層層析法檢查時(shí)呈單一的深棕紅色斑點(diǎn)，層析液配方為95％乙醇82毫升，冰醋酸18毫升，層析硅膠為薄層層析硅膠G(60型)。
2.一種制備權(quán)利要求1所述的氧化蘇木色精液的工藝，其特征在于它包括蘇木色精的乙醇溶液中加入碘酸鹽，加溫沸騰回流反應(yīng)，所述的蘇木色精乙醇溶液的濃度為10—25％重量百分，配制上述溶液的乙醇濃度在80—97％之間，碘酸鹽的用量與原料蘇木色精重量之比為1—4∶10，所述加溫回流反應(yīng)至反應(yīng)液呈深棕紅色透明液體，而且以常規(guī)薄層層析法檢查時(shí)呈單一的深棕紅色斑點(diǎn)時(shí)，終止反應(yīng)，過(guò)濾后在濾液中加入丙三醇，丙三醇乙醇=1∶1—2(體積比)。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備權(quán)利要求1所述的氧化蘇木色精液的工藝，其特征在于所述的碘酸鹽為碘酸鈉或碘酸鉀。
4.一種用權(quán)利要求1所述的氧化蘇木色精液配制的蘇木色精液，其特征在于所述蘇木色精液中有媒染液，媒染液為無(wú)機(jī)鹽溶液或有機(jī)鹽溶液或磷鉬酸或磷鎢酸。
5.根據(jù)用權(quán)利要求4所述的氧化蘇木色精液配制的蘇木色精液，其特征在于該蘇木色精液中含1—5份氧化蘇木色精液，6—10份媒染液(體積比)，所述媒染液的組成為蒸餾水 2000—4000毫升丙三醇 100—500毫升95％乙醇1000—3000毫升E冰醋酸 200—500毫升12水硫酸鋁鉀或12水硫酸鋁銨的用量控制在占上述幾種液體混合液濃度的0.01-0.21M之間。
全文摘要
一種氧化蘇木色精液及其制備方法和用途,所述氧化蘇木色精液為深棕紅色的透明液體,制備氧化蘇木色精液的方法包括:向原料蘇木色精乙醇液中加入碘酸鹽,經(jīng)加溫沸騰回流反應(yīng),過(guò)濾,濾液中加入丙三醇而得。本發(fā)明加工方法簡(jiǎn)便,它與媒染液配制得到的含媒染液的蘇木色精液具有較強(qiáng)的細(xì)胞核親和特異性,可使細(xì)胞核呈現(xiàn)細(xì)膩而清晰層次分明的藍(lán)黑顏色,組織間質(zhì)膠原纖維無(wú)色。并且,蘇木色精液穩(wěn)定性好,易保存。
文檔編號(hào)C07D311/94GK1328259SQ0010914
公開(kāi)日2001年12月26日 申請(qǐng)日期2000年6月12日 優(yōu)先權(quán)日2000年6月12日
發(fā)明者朝亞京 申請(qǐng)人:韓亞京