CDR3,并且其中該輕鏈多膚包括具有氨基酸序列"化rGlyArg SerSerAsnlieGlyAlaGlyTyrAspValHis"(沈QIDNO: 16)的輕鏈CDRl、具有氨基 酸序列"GlyAsnSerAsnArgProSer"(沈QIDNO: 17)的輕鏈CDR2、和具有氨基酸序列 "GinSerTyrAspSerSerLeuSerGlySerVal"(SEQIDNO: 18)的輕鏈CDR3。
[0044] 在又另一實施例中，抗體結(jié)合至IGFII，具有對IGFI的交叉反應(yīng)性，并且是單克 隆人類抗體，該單克隆人類抗體包括具有氨基酸序列SEQIDNO:5的重鏈多膚和具有氨基 酸序列SEQIDNO: 6的輕鏈多膚。在其他實施例中，抗體結(jié)合至IGFII，具有對IGFI的 交叉反應(yīng)性，并且是單克隆人類抗體，該單克隆人類抗體包括重鏈多膚和輕鏈多膚，其中該 重鏈多膚包括具有氨基酸序列"SerTyrAsplieAsn"(SEQIDNO: 19)的重鏈CDR1、具 有氨基酸序列"了巧MetAsnProAsnSerGlyAsnHirGlyTyrAlaGinLysPheGin Gly"(沈QIDNO:20)的重鏈CDR2、和具有氨基酸序列"Asp化oTyrTyrTyrTyrTyrGly MetAspVal"(SEQIDNO: 21)的重鏈CDR3,并且其中該輕鏈多膚包括具有氨基酸序列"Ser GlySerSerSerAsnlieGluAsnAsnHisValSer"(SEQIDN0:22)的輕鏈CDR1、具 有氨基酸序列"AspAsnAsnLysArgProSer"(沈QIDNO: 23)的輕鏈CDR2、和具有氨基 酸序列"GlullirT巧AspllirSerLeuSerAlaGlyArgVal"(SEQIDN0:24)的輕鏈 CDR3。
[0045] 在治療性抗體中更低量的高甘露糖糖型會導(dǎo)致更低免疫原性，導(dǎo)致更好的功效。 運可W是由于產(chǎn)生針對治療性抗體的更少的自身抗體來引起。并且優(yōu)選的是，治療性抗體 目標(biāo)是中和特異性抗原或代替蛋白，導(dǎo)致更好的給藥。然而，對于觸發(fā)免疫系統(tǒng)來產(chǎn)生抗體 的治療性抗體，更高量的高甘露糖糖型會是優(yōu)選的。
[0046] 具有更低的高甘露糖水平的治療性抗體將具有更長半衰期并且可W是更有效的。 觸發(fā)免疫系統(tǒng)來產(chǎn)生抗體的治療性抗體中的高甘露糖糖型水平會是更有效的。 4.離子交換色譜
[0047] 本發(fā)明的方法可適用于離子交換色譜。
[0048] 離子交換色譜是指W下色譜過程，其中在適當(dāng)?shù)囊趾蛡鲗?dǎo)性條件下，感興趣的可 電離溶質(zhì)（例如混合物中感興趣的蛋白）與連接至（例如通過共價附接）固相離子交換材 料的帶相反電荷的配體相互作用，運樣使得與混合物中的溶質(zhì)雜質(zhì)或污染物相比，感興趣 的溶質(zhì)非特異性地與帶電荷化合物相互作用更多或更少。污染溶質(zhì)可W從離子交換材料的 柱上洗掉，或者結(jié)合至介質(zhì)或從介質(zhì)排除，比感興趣的溶質(zhì)更快或更慢。離子交換色譜確切 地包括陽離子交換的、陰離子交換的、和混合型的色譜。
[0049] 陽離子交換介質(zhì)是指一種固相，該固相帶負(fù)電荷，并且具有用于與經(jīng)過或通過該 固相的水性溶液中的陽離子進行交換的游離陽離子?？蒞使用附接至適合形成陽離子交換 介質(zhì)的固相的任何帶負(fù)電荷配體，例如，如W下描述的簇酸鹽、橫酸鹽等?？缮藤彽年栯x子 交換介質(zhì)包括但不局限于例如具有W下基團的那些：基于橫酸鹽的基團，（例如來自通用 電氣生命科學(xué)公司（GEHealthcare)的MonoS、Minis、Source15S和 30S、SPSe地arose FastFlow、SPSe地aroseHi曲Performance，來自東曹（Tosoh)公司的Toyopearl SP-650S和SP-650M，來自伯樂度ioRad)公司的Macro-PrepHi曲S，來自頗爾技術(shù)（Pall Technologies)公司的CeramicHyperD5，TrisacrylM和LSSP和SpherodexLSSF〇 ; 基于橫乙基的基團（例如來自EMD公司的化actogelSE，來自應(yīng)用生物系統(tǒng)公司（Applied Biosystems)的PO民OS"S-和POROS"S-20);基于橫丙基的基團（例如來自東曹公司的 TSKGelSP5PW和SP-5PW-HR，來自TSKGelSP5PW和SP-5PW-HR的POROSKHS-20 和 服-50);基于橫基異下基的基團（來自EMD公司的化actogelEMDSO.sub. 3);基于橫基乙 氧基的基團（例如來自沃特曼（Whatman)公司的SE52、沈53和Express-IonS)，基于簇甲 基的基團（例如來自通用電氣生命科學(xué)公司（GEHealthcare)的CMSe地aroseFastFlow, 來自拜爾控實驗室度ioc虹omL油s)公司的Hy化ocellCM,來自伯樂公司的Macro-Prep CM,來自頗爾技術(shù)公司的CeramicHyperDQVUTrisac巧1M0\1、化13日(3巧1LSCM,來自密理 博（Millipore)公司的MatrxCellufineC500和C200,來自沃特曼公司的CM52、CM32、CM23 和ExpressIonC，來自東曹公司的ToyopearlCM-650S、CM-650M和CM-650C);基于橫酸和 簇酸的基團（例如來自J.T.貝克度aker)公司的BAKERB0NDCarbo巧-Sul化n);基于簇酸 的基團（例如來自J.T貝克公司的WPCBX，來自陶氏液體分離值OWLiquidS巧arations) 公司的D0WEXMC-3,來自西格瑪-奧德里奇公司（Sigma-Al化ich)的D0WEX弱陽離子交換 劑、和太洋化成值iaion)弱陽離子交換劑，和來自EMD公司的化actogelEMDC00);基于橫 酸的基團（例如來自拜爾控實驗室公司的Hy化ocellSP，來自陶氏液體分離公司的D0WEX 細(xì)網(wǎng)目強酸陽離子樹脂，來自J.T.貝克公司的UNOsphere5，WPSul化nic，來自賽多利斯 (Sartorius)公司的SartobindS膜，來自西格瑪-奧德里奇公司的Amberlite強陽離子交 換劑、D0WEX強陽離子的和太洋化成強陽離子的交換劑）；W及基于正憐酸鹽的基團（例如 來自沃特曼公司的P11)。
[0050] 陰離子交換介質(zhì)是指一種固相，該固相帶正電荷，并且具有用于與經(jīng)過或通過該 固相的水性溶液中的陰離子進行交換的游離陰離子。陰離子交換介質(zhì)的官能團典型地是= 級或四級氨基，并且包括二乙氨乙基值EA巧基團、四級氨乙基團和季錠基團?；|(zhì)包括瓊 脂糖珠粒、葡聚糖珠粒、聚苯乙締珠粒、W及其他基質(zhì)?？缮藤彽模ɡ鐝陌⒛缮锟茖W(xué) (AmershamBiosciences)公司，現(xiàn)在的通用電氣生命科學(xué)公司（GEHealthcare)，W及西格 瑪-奧德里奇公司）陰離子交換介質(zhì)包括deae-sepharose、qsepharose等。其他適合的陰 離子交換色譜材料，連同用于本申請的運些材料的選擇和使用，在本領(lǐng)域中是常規(guī)的。
[0051] 混合型介質(zhì)是指典型地包含多個結(jié)合模式（像離子交換、氨鍵、和疏水相互作用） 的組合的固相材料。可商購的（例如從頗爾公司（PallCo巧oration)、通用電氣生命科學(xué) 公司（GEHealthcare)、^及伯樂公司）混合型介質(zhì)包括PPAHypercel、肥AHyperceUMEP HypercelXaptoMMC、CaptoA化ere、和NuviacPrime。如果僅利用它們的離子交換特性來 操作混合型介質(zhì)，則它們可能實現(xiàn)mans糖型的分離。
[0052]在一些實施例中，用于本發(fā)明的色譜方法的洗脫緩沖液可W包括含有鹽類（例如 氯化鋼、硫酸鋼、硫酸錠、精氨酸等）的至少一種緩沖液。該洗脫緩沖液可W包括至少一種 緩沖液類，例如巧樣酸鹽、乙酸鹽、憐酸鋼、Tris、或甘氨酸等。洗脫緩沖液可W是含有鹽類 的至少一種緩沖液和來自緩沖液類的至少一種緩沖液的組合。在3. 5和8. 0之間的抑條 件的變化還可W潛在地用于實現(xiàn)高甘露糖糖型分離。 5.從樣品除去高甘露糖糖型的方法
[0053]在本申請中描述的方法可W用于從含糖蛋白樣品中減少或除去高甘露糖糖型。在 一個實施例中，該糖蛋白是抗體。
[0054]例如，運些方法可W用作單克隆抗體的產(chǎn)生中的精制步驟（polishingSt巧）。典 型地使用培養(yǎng)的哺乳動物宿主細(xì)胞來產(chǎn)生抗體，W促進抗體的正常折疊和糖基化。近年，在 細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)方面已經(jīng)做出了顯著改進，包括在細(xì)胞培養(yǎng)基和補料策略方面的進步，導(dǎo)致 大于2g/L的高細(xì)胞培養(yǎng)滴度。細(xì)胞培養(yǎng)滴度可W是大于2g/L、大于3g/L、大于4g/L、大于 5g/l，或它們的任何分?jǐn)?shù)。從細(xì)胞培養(yǎng)基有效回收和純化抗體是抗體生產(chǎn)工藝的重要部分。 用于從大量培養(yǎng)基純化抗體的常用技術(shù)設(shè)及使用蛋白A親和色譜（是一種可W導(dǎo)致開始自 復(fù)雜細(xì)胞培養(yǎng)基的大于95%純度的高選擇性工藝）的初始純化步驟。在捕獲步驟（例如蛋 白A)W后，痕量級的工藝相關(guān)污染物，例如宿主細(xì)胞蛋白、DNA、浸出的蛋白A、內(nèi)毒素、和一 些細(xì)胞培養(yǎng)基添加劑，連同產(chǎn)物相關(guān)雜質(zhì)，例如更高分子量聚集物和更低分子量降解產(chǎn)物， 與抗體保持在一起?？蒞通過另外的色譜技術(shù)來除去運些污染物和雜質(zhì)，并且通常稱為精 制步驟，因為它們將痕量級的污染物和雜質(zhì)減少至被認(rèn)為安全用于治療性給予的水平。然 而在申請人的發(fā)現(xiàn)之前，從未將精制步驟考慮為或用作用來從單克隆抗體樣品中存在的其 他糖型中分離高甘露糖糖型的方式。
[00巧]因此，一個實施例是針對減少樣品中糖蛋白的高甘露糖糖型的量的方法，其中該 樣品包括糖蛋白的高甘露糖糖型和至少一種其他糖型，該方法包括：(a)在允許糖蛋白保 留到離子交換柱上的條件下，將樣品加載到離子交換柱上；化）使洗脫緩沖液通過該離子 交換柱，W便從該離子交換柱洗脫該糖蛋白；（C)收集從該離子交換柱上