一種檢測藥物中痕量鹽酸羥胺的測定方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種檢測藥物中痕量鹽酸羥胺的測定方法，本發(fā)明的樣品處理為取一定量的藥物加水或者有機(jī)溶劑溶解后經(jīng)活化的C18固相萃取柱過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液。分析方法采用離子色譜法，采用柱后補(bǔ)液衍生的方法，用CS16陽離子交換色譜柱，淋洗液為甲基磺酸溶液，柱后補(bǔ)液為氫氧化鈉或氫氧化鉀溶液。本發(fā)明的主要優(yōu)點有：1）本方法無需對鹽酸羥胺進(jìn)行衍生化反應(yīng)，采取直接測定的方法，操作簡單，有效的避免干擾；2）樣品前期處理采用C18固相萃取柱過濾，可以有效除去相關(guān)有機(jī)物，減少對陽離子交換色譜柱的傷害和對測定產(chǎn)生的干擾；3）樣品取樣量少，檢測靈敏度提高了一個數(shù)量級，重現(xiàn)性好。
【專利說明】一種檢測藥物中痕量鹽酸羥胺的測定方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于分析化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一種檢測藥物中痕量鹽酸羥胺的測定方法。【背景技術(shù)】
[0002]鹽酸羥胺主要用作還原劑和顯像劑，有機(jī)合成中用于制備肟，也用作合成抗癌藥(羥基脲)、磺胺藥(新諾明)和農(nóng)藥(滅多威)的原料。近年來用于合成抗生素如:阿奇霉素，克拉霉素，羅紅霉素等藥物。
[0003]鹽酸羥胺具有遺傳毒性和致基因突變作用，檢測其在藥物中的殘留、控制其限度是確保用藥安全、有效，保證藥物質(zhì)量的一個重要方面。關(guān)于鹽酸羥胺的測定，目前主要有氧化還原滴定法、酸堿滴定法和分光光度法等，上述方法均需要對鹽酸羥胺進(jìn)行衍生化反應(yīng)間接測定鹽酸羥胺的含量，操作復(fù)雜，相關(guān)共存離子容易對測定產(chǎn)生干擾，且其靈敏度較低，取樣量較大。因此急需研發(fā)一種操作簡單，靈敏度高的測定方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]發(fā)明目的:為了克服現(xiàn)有技術(shù)中存在的不足，本發(fā)明提供一種檢測藥物中痕量鹽酸羥胺的測定方法。
[0005]技術(shù)方案:為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供的一種檢測藥物中痕量鹽酸羥胺的測定方法，所述測定方法包括如下步驟:
(1)供試樣品的制備:稱取一定含量的樣品藥物，加入水或者有機(jī)溶解后經(jīng)活化的C18固相萃取柱過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液；
(2)對照品貯備液的制備:取鹽酸羥胺，用與溶解供試品相同的溶劑溶解并稀釋成得到鹽酸羥胺溶液；
(3)離子色譜法，采用柱后補(bǔ)液衍生的方法，用CS16陽離子交換色譜柱；淋洗液為甲基磺酸溶液，柱后補(bǔ)液為堿性溶液；檢測器為安培檢測器，以Au為電極，Ag-AgCl電極為參比電極，波形為Carbohydrates,柱溫為室溫；
(4)打開Chromeleon工作站,進(jìn)入在線工作站,設(shè)置參比電極,選擇波形,設(shè)置流速柱
溫，走基線；
(5)進(jìn)樣:當(dāng)基線平穩(wěn)時，開始進(jìn)樣，采集分析結(jié)束后，即出峰結(jié)束后，停止采樣；定量分析采用外標(biāo)法，將對照品貯備液配制不同濃度的對照品溶液進(jìn)樣，檢測結(jié)果，得到鹽酸羥胺的峰面積，并繪制出峰面積；在與對照品貯備液相同的進(jìn)樣條件下進(jìn)供試品溶液，得到鹽酸羥胺的峰面積，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上就可得知相應(yīng)的濃度。
[0006]進(jìn)一步地，甲基磺酸溶液為25-35mmol/L，流速為0.8-1.2mL/min。
[0007]進(jìn)一步地，柱后補(bǔ)液的堿性溶液為氫氧化鈉或氫氧化鉀溶液的一種或幾種，濃度為 200 mmol/T-500 mmol/L。
[0008]進(jìn)一步地，C18固相萃取柱使用前需至少3倍柱體積的甲醇活化。
[0009]進(jìn)一步地，柱后補(bǔ)液的流速為0.2-0.5 mL/min。[0010]進(jìn)一步地，經(jīng)柱后補(bǔ)液后，溶液的pH值在10-14之間。
[0011]進(jìn)一步地，所述步驟(5)中的進(jìn)樣量為15-50 μ L。
[0012]進(jìn)一步地，所述CS16陽離子交換柱的規(guī)格為0.5Χ 250mm。
[0013]有益效果:本發(fā)明相對于現(xiàn)有技術(shù)而言，具有以下優(yōu)勢:
(I)勿需對鹽酸羥胺進(jìn)行衍生化反應(yīng)來間接測定鹽酸羥胺的含量，操作簡單，克服了現(xiàn)有技術(shù)中相關(guān)共存離子容易對測定產(chǎn)生干擾的技術(shù)問題。
[0014](2)樣品前期處理采用C18固相萃取柱過濾，可以有效除去相關(guān)有機(jī)物，減少對陽離子交換色譜柱的傷害和對測定產(chǎn)生的干擾。
[0015]( 3 )樣品取樣量少，檢測靈敏度提高了 一個數(shù)量級，重現(xiàn)性好。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0016]圖1為實施例1空白溶劑的離子色譜圖。
[0017]圖2為實施例1鹽酸羥胺0.5ppm對照品溶液的離子色譜圖。
[0018]圖3為實施例1為供試品利培酮溶液的離子色譜圖。
[0019]圖4為實施例1含0.5ppm鹽酸羥胺對照品的利培酮溶液離子色譜圖。
[0020]圖5為實施例1鹽酸羥胺濃度與峰面積的變化曲線。其中橫軸為鹽酸羥胺濃度(ppm),縱軸為峰面積(nC*min)。
【具體實施方式】
[0021]下面結(jié)合附圖對本發(fā)明作更進(jìn)一步的說明。
[0022]本發(fā)明的具體實施例中取抗精神病藥利培酮作為供試樣品。
[0023]實施例1
一種檢測藥物中痕量鹽酸羥胺的測定方法，所述測定方法包括如下步驟:
供試樣品的制備:取利培酮0.1g加4mL甲醇溶解后，用水稀釋成每ImL含IOmg的溶液經(jīng)活化的C18固相萃取柱過濾后，即得。
[0024]對照品貯備液的制備:取鹽酸羥胺適量，用40%甲醇溶解并稀釋成每ImL含IOppm的鹽酸羥胺溶液。
[0025]對照品溶液的制備:吸取對照品貯備液2.5mL至50mL量瓶中，用40%甲醇溶解并稀釋成每ImL含0.5ppm的鹽酸輕胺對照品溶液。
[0026]0.5ppm鹽酸羥胺對照品的利培酮溶液的制備:取利培酮0.1g至IOmL量瓶中加4mL甲醇溶解后，吸取對照品貯備液0.5mL至此容量瓶中，用40%甲醇溶液稀釋并定容至刻度，搖勻及得。
[0027]離子色譜法，采用柱后補(bǔ)液衍生的方法，用CS16陽離子交換色譜柱(0.5X 250mm);淋洗液為30mmol/L甲基磺酸溶液,流速為1.0mL/min,柱后補(bǔ)液為300mmol/L氫氧化鈉溶液，流速為0.3mL/min。檢測器為安培檢測器，以Au為電極,Ag-AgCl電極為參比電極，波形為Carbohydrates,柱溫為室溫,進(jìn)樣量為25 μ L。
[0028]打開Chromeleon工作站,進(jìn)入在線工作站,輸入恰當(dāng)?shù)奈淖趾蛥?shù),走基線。
[0029]當(dāng)基線平穩(wěn)時，開始進(jìn)樣，采集分析結(jié)束后，即出峰結(jié)束后，停止采樣。
[0030]在上述條件下分別進(jìn)40%的甲醇溶液作為空白溶液，結(jié)果見圖1，進(jìn)鹽酸羥胺0.5ppm對照品溶液結(jié)果見圖2，進(jìn)供試品溶液結(jié)果見圖3，進(jìn)含0.5ppm鹽酸羥胺對照品的利培酮溶液結(jié)果見圖4。
[0031]定量分析采用外標(biāo)法，將對照品貯備液配制成一系列濃度的對照品溶液進(jìn)樣，得到鹽酸羥胺的峰面積，并繪制出峰面積——組分濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果見圖5。將供試品溶液中鹽酸羥胺的峰面積帶入圖5標(biāo)準(zhǔn)曲線，即可得到供試品中鹽酸羥胺的濃度。
[0032]實施例2
一種檢測藥物中痕量鹽酸羥胺的測定方法，所述測定方法包括如下步驟:
供試樣品的制備:取羥基脲0.1g加水溶解后，用水稀釋成每ImL含IOmg的溶液經(jīng)活化的C18固相萃取柱過濾后，即得。
[0033]對照品貯備液的制備:取鹽酸羥胺適量，加水溶解并稀釋成每ImL含IOppm的鹽酸羥胺溶液。
[0034]離子色譜法，采用柱后補(bǔ)液衍生的方法，用CS16陽離子交換色譜柱(0.5X 250mm);淋洗液為35mmol/L甲基磺酸溶液,流速為1.2mL/min,柱后補(bǔ)液為500mmol/L氫氧化鉀溶液，流速為0.2mL/min。檢測器為安培檢測器，以Au為電極,Ag-AgCl電極為參比電極，波形為Carbohydrates,柱溫為室溫,進(jìn)樣量為15 μ L。
[0035]打開Chromeleon工作站,進(jìn)入在線工作站,輸入恰當(dāng)?shù)奈淖趾蛥?shù),走基線。
[0036]當(dāng)基線平穩(wěn)時，開始進(jìn)樣，采集分析結(jié)束后，即出峰結(jié)束后，停止采樣。定量分析采用外標(biāo)法，去對照品貯備液配制不同濃度的對照品溶液進(jìn)樣，檢測結(jié)果，得到鹽酸羥胺的峰面積，并繪制出峰面積一組分濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
[0037]在相同條件下進(jìn)供試品溶液，得到鹽酸羥胺的峰面積，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上就可得知相應(yīng)的濃度。
[0038]實施例3
一種檢測藥物中痕量鹽酸羥胺的測定方法，所述測定方法包括如下步驟:
供試樣品的制備:取羅紅霉素0.1g加5mL乙醇溶解后，用水稀釋成每ImL含IOmg的溶液經(jīng)活化的C18固相萃取柱過濾后，即得
對照品貯備液的制備:取鹽酸羥胺適量，加50%乙醇溶解并稀釋成每ImL含IOppm的鹽酸羥胺溶液。
[0039]離子色譜法，采用柱后補(bǔ)液衍生的方法，用CS16陽離子交換色譜柱(0.5X 250mm);淋洗液為25mmol/L甲基磺酸溶液,流速為0.8mL/min,柱后補(bǔ)液為200mmol/L氫氧化鉀溶液，流速為0.5mL/min。檢測器為安培檢測器，以Au為電極,Ag-AgCl電極為參比電極，波形為Carbohydrates,柱溫為室溫,進(jìn)樣量為25 μ L。
[0040]打開Chromeleon工作站,進(jìn)入在線工作站,輸入恰當(dāng)?shù)奈淖趾蛥?shù),走基線。
[0041 ]當(dāng)基線平穩(wěn)時，開始進(jìn)樣，采集分析結(jié)束后，即出峰結(jié)束后，停止采樣。定量分析采用外標(biāo)法，去對照品貯備液配制不同濃度的對照品溶液進(jìn)樣，檢測結(jié)果，得到鹽酸羥胺的峰面積，并繪制出峰面積一組分濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
[0042]在相同條件下進(jìn)供試品溶液，得到鹽酸羥胺的峰面積，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上就可得知相應(yīng)的濃度。
[0043]以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實施方式，應(yīng)當(dāng)指出:對于本【技術(shù)領(lǐng)域】的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和潤飾，這些改進(jìn)和潤飾也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。
【權(quán)利要求】
1.一種檢測藥物中痕量鹽酸羥胺的測定方法，其特征在于：所述測定方法包括如下步驟：(1)供試樣品的制備：稱取樣品藥物，加入水或者有機(jī)溶解后經(jīng)活化的C18固相萃取柱 過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液；(2)對照品貯備液的制備：取鹽酸羥胺，用與溶解供試品相同的溶劑溶解并稀釋成得到 鹽酸羥胺溶液；(3)離子色譜法，采用柱后補(bǔ)液衍生的方法，用CS16陽離子交換色譜柱；淋洗液為甲基 磺酸溶液，柱后補(bǔ)液為堿性溶液；檢測器為安培檢測器，以Au為電極，Ag-AgCl電極為參比 電極，波形為Carbohydrates,柱溫為室溫；(4)打開Chromeleon工作站,進(jìn)入在線工作站,設(shè)置參比電極,選擇波形,設(shè)置流速柱溫，走基線；(5)進(jìn)樣：當(dāng)基線平穩(wěn)時，開始進(jìn)樣，采集分析結(jié)束后，即出峰結(jié)束后，停止采樣；定量 分析采用外標(biāo)法，將對照品貯備液配制各種濃度的對照品溶液進(jìn)樣，檢測結(jié)果，得到鹽酸羥 胺的峰面積，并繪制出峰面積；在與對照品貯備液相同的進(jìn)樣條件下進(jìn)供試品溶液，得到鹽 酸羥胺的峰面積，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上就可得知相應(yīng)的濃度。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種檢測藥物中痕量鹽酸羥胺的測定方法，其特征在于：所 述步驟（3)中的甲基磺酸溶液為25-35mmol/L，流速為O. 8-1. 2mL/min。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種檢測藥物中痕量鹽酸羥胺的測定方法，其特征在于： 柱后補(bǔ)液的堿性溶液為氫氧化鈉或氫氧化鉀溶液的一種或幾種，濃度為200 mmol/L-500 mmol/L0
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種檢測藥物中痕量鹽酸羥胺的測定方法，其特征在于：C18 固相萃取柱使用前需至少3倍柱體積的甲醇活化。
5.根據(jù)權(quán)利要求I或者4所述的檢測藥物中痕量鹽酸羥胺的測定方法，其特征在于： 柱后補(bǔ)液的流速為.O. 2-0. 5 mL/min。
6.根據(jù)權(quán)利要求4或者5所述的檢測藥物中痕量鹽酸羥胺的測定方法，其特征在于： 經(jīng)柱后補(bǔ)液后，溶液的PH值在10-14之間。
7.根據(jù)權(quán)利要求I所述的檢測藥物中痕量鹽酸羥胺的測定方法，其特征在于：所述步 驟（5)中的進(jìn)樣量為15-50 μ L。
8.根據(jù)權(quán)利要求I所述的檢測藥物中痕量鹽酸羥胺的測定方法，其特征在于：所述 CS16陽離子交換柱的規(guī)格為O. 5 X 250mm。
【文檔編號】G01N30/02GK103558318SQ201310520900
【公開日】2014年2月5日 申請日期:2013年10月29日 優(yōu)先權(quán)日:2013年10月29日
【發(fā)明者】陳國廣, 苗燕飛, 歐陽平凱 申請人:南京工業(yè)大學(xué)