板青顆粒質(zhì)量控制方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種板青顆粒質(zhì)量控制方法，為使用HPLC色譜法同時(shí)測(cè)定精氨酸和靛玉紅含量，包括以下步驟:分別制備精氨酸和靛玉紅的標(biāo)準(zhǔn)樣品和板青顆粒的供試樣品；經(jīng)HPLC色譜層析法處理，比較計(jì)算獲得板青顆粒的供試樣品中的精氨酸和靛玉紅的含量。本發(fā)明的板青顆粒含量的控制方法操作簡單，實(shí)現(xiàn)了對(duì)有效成分種類復(fù)雜的中藥產(chǎn)品中有效成分量化控制要求，使產(chǎn)品的質(zhì)量水平提升，實(shí)踐證明將使用本發(fā)明的方法將板青顆粒中精氨酸的含量的限度定為每克顆粒中不少于12.5mg/g，靛玉紅為0.12mg/g，可以做為板青顆粒的質(zhì)量控制的標(biāo)準(zhǔn)。
【專利說明】板青顆粒質(zhì)量控制方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種板青顆粒質(zhì)量控制方法，特別是指一種通過測(cè)定板青顆粒中精氨酸和靛玉紅含量，實(shí)現(xiàn)板青顆粒的質(zhì)量控制的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]板青顆粒是一種常見的獸藥方，藥方含板藍(lán)根、大青葉等成分，具有清熱解毒、消腫散結(jié)、強(qiáng)心利尿利膽、抗菌消炎、抗病毒，增強(qiáng)免疫力等功效。主要用于防治豬流行性感冒、高熱癥、繁殖與呼吸綜合征、細(xì)小病毒病、出血性敗血癥、丹毒、鏈球菌病、副傷寒、病毒性腸炎、附紅細(xì)胞體病、偽狂犬病、仔豬斷奶多系統(tǒng)衰竭綜合癥等免疫抑制病，另外，對(duì)治療由病毒引起的鴨病毒性肝炎、鴨瘟、雛番鴨細(xì)小病毒病、小鵝瘟等疾病也有很好的療效。本品可快速提高機(jī)體免疫力，促進(jìn)抗體形成，作為保健佳品，可長期使用。
[0003]關(guān)于板青顆粒的質(zhì)量控制只有《中華人民共和國獸藥典》2010版二部標(biāo)準(zhǔn)，其中記載:“板青顆粒[處方]板藍(lán)根600g大青葉900g[制法]以上2味，加水煎煮2次，每次I小時(shí)，合并煎液，濾過，濾液濃縮至稠膏狀，加蔗糖、糊精適量，混勻，制成顆粒，干燥，制成1500g，即得。[性狀]本品為淺黃色或黃褐色顆粒；味甜，微苦。[鑒別](I)取本品0.5g，加水5ml，使溶解，靜置，取上清液點(diǎn)于濾紙上，晾干，置紫外光燈(365nm)下觀察，斑點(diǎn)顯藍(lán)色熒光。(2)取本品研細(xì)的粉末0.5g，加稀乙醇20ml，超聲處理10分鐘，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)酉∫掖糏ml使溶解，做為供試品溶液。另取精氨酸對(duì)照品，加稀乙醇制成每Iml含0.5mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(附錄32頁)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各2 μ 1，分另IJ點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以正丁醇-冰醋酸-水(15:7:7)為展開劑，展開，取出，熱風(fēng)吹干，噴以茚三酮試液，在105°C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色斑點(diǎn)。[檢查]應(yīng)符合顆粒劑項(xiàng)下有關(guān)的各項(xiàng)規(guī)定(附錄8頁)。[檢查]應(yīng)符合顆粒劑項(xiàng)下有關(guān)的各項(xiàng)規(guī)定(附錄8頁)。[功能]清熱解毒，涼血。[主治]風(fēng)熱感冒，咽喉腫痛，熱病發(fā)斑等溫?zé)嵝约膊?。[用法用量]馬、牛50g;雞0.5g。[貯藏]密封，防潮?！鄙鲜觥吨腥A人民共和國獸藥典》2010版二部中板青顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)只對(duì)板青顆粒中的精氨酸進(jìn)行鑒別，沒有含量測(cè)定項(xiàng)。因此，對(duì)板青顆粒的質(zhì)量控制難以達(dá)到量化的標(biāo)準(zhǔn)。
[0004]板青顆粒是一種含多組分復(fù)雜成分的獸藥復(fù)方中藥，由于成分復(fù)雜，造成含量不易控制，使中藥的安全性和有效性受到影響，而且板青顆粒是一種含多組分復(fù)雜成分的獸藥復(fù)方中藥，如不能進(jìn)行有效成分的質(zhì)控，很難保證藥品質(zhì)量。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]有鑒于此，本發(fā)明的主要目的在于提供一種使用HPLC色譜法同時(shí)測(cè)定精氨酸和靛玉紅含量的方法，以實(shí)現(xiàn)對(duì)板青顆粒的質(zhì)量控制。
[0006]即本發(fā)明提供了一種板青顆粒質(zhì)量控制方法，為使用HPLC色譜法同時(shí)測(cè)定精氨酸和靛玉紅含量。[0007]優(yōu)選地，本發(fā)明所述的質(zhì)量控制方法，包括以下步驟:
[0008]A、分別制備精氨酸和靛玉紅的標(biāo)準(zhǔn)樣品；
[0009]B、制備板青顆粒的供試樣品；
[0010]C、將所述的精氨酸和靛玉紅的標(biāo)準(zhǔn)樣品、和板青顆粒的供試樣品分別經(jīng)HPLC色譜層析法處理，比較計(jì)算獲得板青顆粒的供試樣品中的精氨酸和靛玉紅的含量。
[0011]即本發(fā)明是通過將黃芪苷的標(biāo)準(zhǔn)樣品和大黃素的標(biāo)準(zhǔn)樣品、和板青顆粒的供試樣品分別經(jīng)HPLC色譜層析法處理，以獲得黃芪苷的標(biāo)準(zhǔn)樣品和大黃素的標(biāo)準(zhǔn)樣品的標(biāo)準(zhǔn)曲線后，與板青顆粒的供試樣品經(jīng)HPLC色譜層析法處理的色譜曲線對(duì)照，以獲得板青顆粒的供試樣品中的精氨酸和靛玉紅的含量。
[0012]為了充分釋放板青顆粒的供試樣品，可以使用有機(jī)溶劑進(jìn)行提取；更優(yōu)選地，使用乙醇進(jìn)行提??；更優(yōu)選地，使用80%的乙醇對(duì)板青顆粒的供試樣品進(jìn)行提?。灰部梢允褂帽绢I(lǐng)域常用的其他任何有機(jī)溶劑提取。
[0013]為了充分釋放板青顆粒的供試樣品，還可以使用加熱回流處理的方法對(duì)板青顆粒的供試樣品進(jìn)行處理；優(yōu)選地，可以對(duì)板青顆粒進(jìn)行研磨處理或超聲震蕩處理；也可以使用本領(lǐng)域常用的其他提取方法對(duì)板青顆粒的供試樣品進(jìn)行處理。
[0014]本發(fā)明的板青顆粒質(zhì)量控制方法中，使用了 HPLC色譜法對(duì)黃芪苷的標(biāo)準(zhǔn)樣品和大黃素的標(biāo)準(zhǔn)樣品、和板青顆粒的供試樣品進(jìn)行處理，其中，HPLC色譜法中使用的色譜柱為反相層析柱；優(yōu)選地，HPLC色譜法中使用的色譜柱為C18,更優(yōu)選地，HPLC色譜法中使用的色譜柱為 Agilent-C18O
[0015]優(yōu)選地，所述的HPLC色譜層析法中使用的流動(dòng)相為磷酸鹽緩沖液-乙腈；更優(yōu)選地，為磷酸鹽緩沖液-乙腈=35:75 ;最優(yōu)選地，為磷酸鹽緩沖液(0.02mol/L磷酸二氫鉀，磷酸調(diào) pH=3.0)-乙腈=35:75o
[0016]優(yōu)選地，本發(fā)明的HPLC色譜層析法中的流速:lml/min ;檢測(cè)波長:254nm;柱溫:30。。。
[0017]由上可以看出，本發(fā)明提供了一種HPLC色譜法測(cè)定法，同時(shí)測(cè)定板青顆粒中的精氨酸和靛玉紅的含量，以用于板青顆粒的質(zhì)量控制。
[0018]發(fā)明效果
[0019]本發(fā)明的板青顆粒含量的控制方法操作簡單，實(shí)現(xiàn)了對(duì)有效成分種類復(fù)雜的中藥產(chǎn)品中有效成分量化控制要求，使產(chǎn)品的質(zhì)量水平提升。本發(fā)明使用了簡單的方法以控制板青顆粒中的精氨酸和靛玉紅兩種成分的含量，達(dá)到了中藥產(chǎn)品板青顆粒的質(zhì)量可控的效果；本發(fā)明的方法線性關(guān)系好，重現(xiàn)性好，將使用本發(fā)明的方法將板青顆粒中精氨酸的含量的限度定為每克顆粒中不少于12.5mg/g,靛玉紅為0.12mg/g,可以做為板青顆粒的質(zhì)量控制的標(biāo)準(zhǔn)。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0020]圖1為精氨酸對(duì)照品色譜圖；
[0021]圖2為靛玉紅對(duì)照品色譜圖；
[0022]圖3為供試品色譜圖；
[0023]圖4為陰性對(duì)照品色譜圖；[0024]圖5為精氨酸對(duì)照品色譜線性方程圖；
[0025]圖6為靛玉紅對(duì)照品色譜線性方程圖。
【具體實(shí)施方式】
[0026]本發(fā)明實(shí)施例中使用的C18柱是指反相ODS柱(十八烷基硅烷鍵合硅膠填料，Octadecylsilyl,簡稱ODS柱),通過本發(fā)明的實(shí)施例,本領(lǐng)域技術(shù)人員知曉所有的C18柱都可以用來實(shí)現(xiàn)本發(fā)明，如waters的Symmetry?C18色譜柱等都可以實(shí)現(xiàn)本發(fā)明
[0027]下面結(jié)合具體實(shí)施例來進(jìn)一步描述本發(fā)明，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和特點(diǎn)將會(huì)隨著描述更為清楚。但這些實(shí)施例僅是范例性的，并不對(duì)本發(fā)明的范圍構(gòu)成任何限制。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)該理解的是，在不偏離本發(fā)明的精神和范圍下可以對(duì)本發(fā)明技術(shù)方案的細(xì)節(jié)和形式進(jìn)行修改或替換，但這些修改和替換均落入本發(fā)明的保護(hù)范圍內(nèi)。
[0028]實(shí)施例1HPLC法同時(shí)測(cè)定板青顆粒中精氨酸、靛玉紅的含量I儀器與試劑、樣品
[0029]儀器:WaterSe2695高效液相色譜儀；UV2489紫外檢測(cè)器。
[0030]試劑:乙睛為色譜純；磷酸，磷酸二氫鉀，乙醇為分析純；水為二次重蒸水。
[0031]對(duì)照品:精氨酸(140685-200802)、靛玉紅(110717-200204)購自中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所
[0032]樣品:板青顆粒，由洛陽惠中獸藥有限公司生產(chǎn)。{[處方]板藍(lán)根600g大青葉900g[制法]以上2味，加水煎煮2次，每次I小時(shí),合并煎液,濾過,濾液濃縮至稠膏狀,力口蔗糖、糊精適量，混勻，制成顆粒，干燥，制成1500g，即得。
[0033]2色譜條件:
[0034]色譜柱:Agilent_C18(150mm Χ4.6mm, 5um)。
[0035]流動(dòng)相:磷酸鹽緩沖液(0.02mol/L磷酸二氫鉀，磷酸調(diào)ρΗ=3.0)-乙腈(35:75)
[0036]流速:lml/min;檢測(cè)波長:254nm ;柱溫:30°C。
[0037]3溶液的制備:
[0038]①對(duì)照品溶液的制備:a取精氨酸對(duì)照品適量，精密稱定，置25ml量瓶中，加入80%乙醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成每毫升含精氨酸40 μ g的對(duì)照品溶液。b取靛玉紅對(duì)照品適量，精密稱定，置25ml量瓶中，加入80%乙醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成每毫升含靛玉紅20 μ g的對(duì)照品溶液。
[0039]②供試品溶液的制備:取研細(xì)的供試品約20g，精密稱定，置圓底燒瓶中，加80%的乙醇80ml，加熱回流3h，放冷至室溫，轉(zhuǎn)移至IOOml量瓶中，加80%的乙醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。
[0040]③陰性樣品的制備:取蔗糖、糊精適量，加水適量混勻，制成顆粒，干燥，即得。按供試品溶液的制備方法制備，按上述色譜條件測(cè)定。在與對(duì)照品圖譜比較可見，在對(duì)照品圖譜中精氨酸、靛玉紅的峰出現(xiàn)的位置上未見有峰出現(xiàn)(參見圖f圖4，其中，圖1為精氨酸對(duì)照品色譜圖；圖2為靛玉紅對(duì)照品色譜圖；圖3為供試品色譜圖；圖4為陰性對(duì)照品色譜圖。由圖可見，使用本發(fā)明的方法在經(jīng)過一次HPLC色譜處理即可獲得板青顆粒中的精氨酸和靛玉紅兩種成分的準(zhǔn)確含量)。
[0041]4標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備:
[0042]分別取上述對(duì)照品溶液5，10，20，30，50 μ 1，注入高效液相色譜儀，按照上述色譜條件，測(cè)定峰面積。以對(duì)照進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，以峰面積積分值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程。結(jié)果表明精氨酸在0.2~2 μ g，靛玉紅在0.1~I μ g范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。數(shù)據(jù)如下表所示。線性圖參見圖5~圖6，其中圖5為精氨酸對(duì)照品色譜線性方程圖；圖6為靛玉紅對(duì)照品色譜線性方程圖。
[0043]表1線性關(guān)系試驗(yàn)結(jié)果
[0044]
【權(quán)利要求】
1.一種板青顆粒質(zhì)量控制的方法，其特征在于，所述方法為使用HPLC色譜法同時(shí)測(cè)定板青顆粒中精氨酸和靛玉紅的含量。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，包括以下步驟: A、分別制備精氨酸和靛玉紅的標(biāo)準(zhǔn)樣品； B、制備板青顆粒的供試樣品； C、將所述的精氨酸和靛玉紅的標(biāo)準(zhǔn)樣品、和板青顆粒的供試樣品分別經(jīng)HPLC色譜層析法處理，比較計(jì)算獲得板青顆粒的供試樣品中的精氨酸和靛玉紅的含量。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述步驟B中所述的板青顆粒的供試樣品為使用乙醇作為溶劑提取獲得的。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟C中所述的HPLC色譜層析法中使用的流動(dòng)相為磷酸鹽緩沖液-乙腈。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，所述步驟C中所述的HPLC色譜層析法中流動(dòng)相比例為磷酸鹽緩沖液-乙腈=35:75。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟C中所述的HPLC色譜層析法中使用色譜柱為反相柱。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟C中所述的HPLC色譜層析法中使用色譜柱為C18。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟C中所述的HPLC色譜層析法中的流速為lml/min ;檢測(cè)波長:254nm ;柱溫:30°C。
9.根據(jù)權(quán)利要求1-8任意一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述步驟C中所述的精氨酸和靛玉紅的標(biāo)準(zhǔn)樣品、和板青顆粒的供試樣品為使用相同的HPLC色譜條件處理。
10.根據(jù)權(quán)利要求1-9任意一項(xiàng)所述的方法在板青顆粒質(zhì)量控制中的用途。
【文檔編號(hào)】G01N30/02GK103575818SQ201210269400
【公開日】2014年2月12日 申請(qǐng)日期:2012年7月30日 優(yōu)先權(quán)日:2012年7月30日
【發(fā)明者】張?jiān)S科, 劉興金, 張曉會(huì) 申請(qǐng)人:洛陽惠中獸藥有限公司