一種靜電噴射復(fù)合薄膜及其制備方法與應(yīng)用
【專利摘要】本發(fā)明公開一種靜電噴射復(fù)合薄膜及其制備方法與應(yīng)用。本發(fā)明通過靜電紡絲先在滾筒接收器紡一層PVDF納米纖維薄膜做支撐材料，然后通過靜電噴霧法噴一層Cur?PLA微球，得到雙層膜；再通過靜電紡絲法在雙層膜上紡一層Enro?PLA納米纖維膜，干燥，得到靜電噴射復(fù)合薄膜。本發(fā)明通過在聚乳酸纖維和微球上載藥，實現(xiàn)了電紡膜的生物活性、抗菌性，較同類產(chǎn)品比較而言，PLA微球和PLA纖維組成的親水面，釋放藥物能力不單一，抗菌性能更為廣泛，與皮膚表面接觸面積更加大；而且以PVDF作為外層以隔絕水汽及菌類的入侵。本發(fā)明制備方法簡單，生產(chǎn)成本低，可以實現(xiàn)規(guī)模化生產(chǎn)，便于推廣應(yīng)用，最終產(chǎn)品完全能夠滿足各種臨床需求。
【專利說明】
-種靜電噴射復(fù)合薄膜及其制備方法與應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于材料領(lǐng)域，特別設(shè)及一種靜電噴射復(fù)合薄膜及其制備方法與應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 當(dāng)前在我國各種醫(yī)療機構(gòu)還大量使用傳統(tǒng)的紗布敷料，運種敷料容易變干，更換 頻繁，浪費大量的棉紗資源，也給病人帶來痛苦。因此，加大技術(shù)含量高的功能性敷料的研 發(fā)，W提高治療效果、加快傷口愈合、減輕廢棄敷料對環(huán)境的污染，成為科研工作者急迫的 任務(wù)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明的首要目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的缺點與不足，提供一種靜電噴射復(fù)合薄膜 的制備方法。
[0004] 本發(fā)明的另一目的在于提供通過上述制備方法得到的靜電噴射復(fù)合薄膜。
[0005] 本發(fā)明的再一目的在于提供所述靜電噴射復(fù)合薄膜的應(yīng)用。
[0006] 本發(fā)明的目的通過下述技術(shù)方案實現(xiàn):一種靜電噴射復(fù)合薄膜的制備方法，包括 如下步驟：
[0007] 通過靜電紡絲先在滾筒接收器紡一層PVDF納米纖維薄膜做支撐材料，然后通過靜 電噴霧法噴一層化r-PLA微球，得到雙層膜;再通過靜電紡絲法在雙層膜上紡一層化ro-PLA 納米纖維膜，干燥，得到靜電噴射復(fù)合薄膜。
[000引所述的化r-PLA微球中化r和PLA按質(zhì)量比15:85配比。
[0009] 所述的化ro-PLA納米纖維膜中化ro和PLA按質(zhì)量比20:80配比。
[0010] 所述的PVDF納米纖維薄膜的紡絲條件優(yōu)選為：
[001。 PVDF紡絲溶液中PVDF的濃度為質(zhì)量體積比6~14 % ;更優(yōu)選為質(zhì)量體積比8~ 14%;
[0012] 電壓為15~25KV;更優(yōu)選為15KV;
[0013] 接收距離為IOcm~15cm;更優(yōu)選為15cm;
[0014] 流速為 0.5mL/h。
[0015] 所述的PVDF紡絲溶液的紡絲用量優(yōu)選為10~20ml;更優(yōu)選為15~20ml。
[0016] 所述的PVDF紡絲溶液中的溶劑優(yōu)選為丙酬和二甲基乙酷胺按質(zhì)量比1:1配比得到 的混合溶劑。
[0017] 所述的PVDF紡絲溶液優(yōu)選為通過如下方法配制得到:將PVDF粉末溶于有機溶劑A 中，將所得溶液攬拌溶解，再超聲溶解，得到均一溶液，接著靜置消泡，得到PVDF紡絲溶液。
[0018] 所述的有機溶劑A優(yōu)選為丙酬和二甲基乙酷胺按質(zhì)量比1:1配比得到的混合溶劑。
[0019] 所述的攬拌溶解的時間優(yōu)選為化。
[0020] 所述的超聲溶解的時間優(yōu)選為化。
[0021] 所述的靜置的時間優(yōu)選為24h。
[0022] 所述的超聲的條件優(yōu)選為功率為120W，頻率為40,000化。
[0023] 所述的化r/PLA微球的紡絲條件優(yōu)選為：
[0024] 化r/PLA紡絲溶液中PLA的濃度為質(zhì)量體積1~5% ;更優(yōu)選為質(zhì)量體積比3~5% ; [00巧]化r/PLA紡絲溶液中化r的濃度按化r: PLA =質(zhì)量比15:85計；
[0026] 電壓為10~17KV;更優(yōu)選為10~15KV;
[0027] 接收距離為IOcm~15cm;
[002引流速為0.5mL/h。
[00巧]所述的化r/PLA紡絲溶液的紡絲用量優(yōu)選為10~20ml;更優(yōu)選為15~20ml。
[0030]所述的化r/PLA紡絲溶液中的溶劑優(yōu)選為氯仿。
[0031 ]所述的化r/PLA紡絲溶液優(yōu)選為通過如下方法配制得到:將PLA溶于有機溶劑B中， 再加入化r;將所得溶液攬拌溶解，再超聲溶解，得到均一溶液，接著靜置消泡，得到Cur/PLA 紡絲溶液。
[0032] 所述的有機溶劑B優(yōu)選為氯仿。
[0033] 所述的攬拌溶解的時間優(yōu)選為化。
[0034] 所述的超聲溶解的時間優(yōu)選為化。
[0035] 所述的靜置的時間優(yōu)選為2地。
[0036] 所述的超聲的條件優(yōu)選為功率為120W，頻率為40,000化。
[0037] 所述的化ro/PLA納米纖維的紡絲條件優(yōu)選為：
[0038] Enro/PLA紡絲溶液中化A的濃度為質(zhì)量體積6~14%;更優(yōu)選為質(zhì)量體積比10~ 14%;
[0039] 化ro/PLA紡絲溶液中化ro的濃度按化ro :PLA =質(zhì)量比20:80計；
[0040] 電壓為10~17KV;更優(yōu)選為10~15KV;最優(yōu)選為15KV;
[0041] 接收距離為IOcm~15cm;
[0042] 流速為 0.5mL/h。
[0043] 所述的化ro/PLA紡絲溶液的紡絲用量優(yōu)選為10~20ml;更優(yōu)選為15~20ml。
[0044] 所述的化ro/PLA紡絲溶液中的溶劑優(yōu)選為丙酬和二甲基乙酷胺按質(zhì)量比1:1配比 得到的混合溶劑。
[0045] 所述的Enro/PLA紡絲溶液優(yōu)選為通過如下方法配制得到：將化A溶于有機溶劑C 中，再加入化ro;將所得溶液攬拌溶解，再超聲溶解，得到均一溶液，接著靜置消泡，得到 化ro/PLA紡絲溶液。
[0046] 所述的有機溶劑C優(yōu)選為丙酬和二甲基乙酷胺按質(zhì)量比1:1配比得到的混合溶劑。
[0047] 所述的攬拌溶解的時間優(yōu)選為化。
[004引所述的超聲溶解的時間優(yōu)選為化。
[0049] 所述的靜置的時間優(yōu)選為24h。
[0050] 所述的超聲的條件優(yōu)選為功率為120W，頻率為40,000化。
[0化1]上述紡絲條件均在室溫條件下進(jìn)行。室溫指的是15~30°C，優(yōu)選為20~25°C。
[0052] -種靜電噴射復(fù)合薄膜，通過上述制備方法得到。
[0053] 所述的靜電噴射復(fù)合薄膜在制備醫(yī)用敷料中的應(yīng)用。
[0化4] 其中所述的：
[0055] 聚乳酸(PLA)是由多個具有一個徑基和一個簇基的乳酸分子在一起，-OH與別的分 子的-COOH脫水縮合，-COOH與別的分子的-OH脫水縮合而成，它屬于聚醋家族。它W玉米、木 芋和小麥等一些植物中提取的淀粉作為原料，再經(jīng)過一系列化學(xué)合成得到的高純度的聚合 物。來源環(huán)保的PLA是一種具有生物相容性和生物可降解性的的性能優(yōu)良的聚合物，在醫(yī)藥 領(lǐng)域應(yīng)用非常廣泛，如可作為人體內(nèi)固定材料、外科手術(shù)縫合線等;低分子聚乳酸作藥物緩 釋包裝劑可W根據(jù)給藥的途徑、釋放要求及藥物的性質(zhì)，制成特定的藥物劑型。它的生物可 降解性體現(xiàn)在使用后能被自然界中微生物完全降解，最終生成二氧化碳和水，不污染環(huán)境， 運對保護(hù)環(huán)境非常有利，而且掩埋在±壤里降解的聚乳酸塑料產(chǎn)生的二氧化碳直接進(jìn)入± 壤有機質(zhì)或者被植物吸收，不會排入空氣中，導(dǎo)致溫室效應(yīng)。
[0056] 姜黃素(Curcumin，本文簡稱為Cur)是從姜黃根莖中提取的一種黃色酸性酪類物 質(zhì)，分子式為C20出0〇6，其主鏈為不飽和脂族氨基酸及芳香族基團，微溶于水，可溶于丙酬、乙 醇和氯仿等有機溶劑。由于姜黃素色澤穩(wěn)定而且毒性很低，目前己廣泛應(yīng)用于染料和食品 添加劑中。國外從70年代就有了對姜黃素藥用價值的研究報道，具體的藥理作用包括：（1) 抗炎:姜黃素具有抗人類免疫缺陷病毒化IV)的活性，抑制HIV長末端重復(fù)序列活性、抑制病 毒復(fù)制的相關(guān)酶的功能，因此它對慢性、亞急性和急性炎癥具有抗炎作用；（2)抗癌抗腫瘤： 姜黃素不僅可W誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞調(diào)亡，而且還可W抗血管生成，此外，姜黃素還可W括抗多種 理化因素對DNA的損傷，增加體內(nèi)SOD水平并將超氧陰離子清除；（3)抗動脈粥樣硬化:姜黃 素可顯著降低甘油=醋、0-脂蛋白和血漿總膽固醇的含量；明顯抑制血小板聚集，維持正常 的纖溶性水平，進(jìn)而降低動脈粥樣硬化的發(fā)生機率；（4)抗脂質(zhì)過氧化:可作為一種細(xì)胞抗 氧化劑的姜黃素，能夠有效保護(hù)肝、腎、屯、和腦等重要臟器，進(jìn)而對抗由于出化的氧化作用造 成的腎上皮細(xì)胞的損傷；（5)抗病毒作用:姜黃素 WHIV1-LTR復(fù)譯功能為祀向，在較低濃度 下可W作為HIVl-LTR基因形成的一個有選擇性的、中等強度的抑制劑，高達(dá)70%-80%的抑 制率可W有效抑制化t與HIVl-LTR之間的相互作用從而起到抗病毒作用。
[0057] 恩諾沙星化nrof Ioxacin，本文簡稱Enro)是一種人工合成動物專用的抗菌藥，其 分子式為C細(xì)22FN3O3,屬第立代哇諾酬類制劑。恩諾沙星有廣譜殺菌作用，對靜止期和生長 期的細(xì)菌均有效，它對多種革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌，W及支原體有良好的殺滅作用， 如綠脈桿菌、大腸桿菌、沙口氏菌、志賀氏菌、克雷伯氏菌、己斯德氏菌、變形桿菌、葡萄球 菌、衣原體等有效。由于恩諾沙星是作用于細(xì)菌細(xì)胞DNA螺旋酶，可W使細(xì)菌不能形成超螺 旋，染色體受損，從而產(chǎn)生殺菌作用。因其殺菌機理與其他藥物不同，所W產(chǎn)生交叉耐藥性 的機會很小，而且恩諾沙星的毒性極小，使用治療劑量無致崎、致突變作用，臨床使用安全。
[0058] 本發(fā)明相對于現(xiàn)有技術(shù)具有如下的優(yōu)點及效果：
[0059] (1)本發(fā)明通過在親水材料聚乳酸作為貼合皮膚的材料，并添加疏水材料PVDF作 為外層W隔絕水汽及菌類的入侵。實現(xiàn)了電紡膜的雙向性能，不僅增加了電紡膜的柔初性 能，而且對于親水面可W貼在傷口面，W達(dá)到緩釋藥物的效果，并且疏水面可W防止電紡膜 因外界水分的和抱子的侵入而引發(fā)菌類滋生，而且在紡絲過程作為底面降低電場強度可W 使微球更加成功地紡成。
[0060] (2)本發(fā)明通過在聚乳酸纖維和微球上載藥，實現(xiàn)了電紡膜的生物活性、抗菌性， 較同類產(chǎn)品比較而言，PLA微球和PLA纖維組成的親水面，釋放藥物能力不單一，抗菌性能更 為廣泛，與皮膚表面接觸面積更加大。
[0061] (3)本發(fā)明的電紡膜親水面聚乳酸基體在人體內(nèi)具有降解性、防止組織粘連功效， 擴大了其外科手術(shù)的實際應(yīng)用空間；
[0062] (4)本發(fā)明提供的復(fù)合膜具有很好的消炎、抗菌、透氣性能，能夠促進(jìn)傷口愈合，使 用方便快捷，不需額外固定，可W完全貼合各種不平整的創(chuàng)面，給創(chuàng)面提供完整保護(hù)。
[0063] (5)本發(fā)明的制備方法，其設(shè)備要求及工藝流程簡單，生產(chǎn)成本低，可W實現(xiàn)規(guī)模 化生產(chǎn)，便于推廣應(yīng)用，最終產(chǎn)品完全能夠滿足各種臨床需求。
【附圖說明】
[0064] 圖1為實施例1制得的不同PVDF濃度紡絲的沈M圖。
[0065] 圖2為實施例2制得的不同PLA濃度紡的Cur-PLA微球的沈M圖。
[0066] 圖3為實施例3制得的不同PLA濃度紡的化ro-PLA纖維的沈M圖。
[0067] 圖4為實施例3的為細(xì)胞在復(fù)合膜PVDF底層和化ro/PLA表層增殖細(xì)胞數(shù)量圖。
[0068] 圖5為實施例4制備的復(fù)合膜的抗菌性能檢測圖。
【具體實施方式】
[0069] 下面結(jié)合實施例及附圖對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的描述，但本發(fā)明的實施方式不限 于此。
[0070] 實施例1
[0071] (1)將PVDF粉末溶于丙酬/二甲基乙酷胺DMAC(丙酬和DMAC按質(zhì)量比1:1配比）混合 溶劑中，分別配制成質(zhì)量分?jǐn)?shù)為6%、8%、10%、12%、14%的紡絲溶液。在室溫下，將溶液在 磁力攬拌器上密閉攬拌化，超聲（功率120W、頻率40，000化、）化，保證聚合物完全溶解，得到 均一溶液，溶液在室溫下靜置2地脫泡后用于后續(xù)紡絲；IOml PVDF紡絲液在15KV，接收距離 15cm，用侶錐紙做接收介質(zhì)進(jìn)行紡絲，流速為0.5mL/h;
[0072] (2)將電紡膜進(jìn)行真空抽濾干燥(干燥壓力lOmpa，干燥溫度45°C，干燥時間2地）， 去除殘余有機溶劑，真空抽濾干燥后用掃描電鏡進(jìn)行形貌分析，結(jié)果如圖1所示。
[0073] 圖1為不同濃度PVDF濃度下(6 %，8 %，10 %，12 %，14% )制備的納米纖維的SM圖 和直徑分布圖。當(dāng)PVDF濃度為6%時，雖然有少量纖維生成，但主要W珠狀物為主，成絲效果 不好，運是聚合物濃度與表面張力共同競爭作用而導(dǎo)致的。表面張力試圖降低單位質(zhì)量的 表面積，從而導(dǎo)致聚合物球或珠狀物的出現(xiàn)。隨著PVD阿農(nóng)度的增加，纖維的珠狀物的數(shù)量越 來越少，到濃度為12%和14%時，珠狀物完全消失，得到尺寸均勻表面平滑的纖維。從圖中 可W得知濃度為12%時，纖維相對平滑均勻無珠狀物，因此本發(fā)明的12%的濃度為制備 PVDF納米纖維最合適的濃度。
[0074] 實施例2
[0075] (1)將PLA顆粒溶解在氯仿中分別配成質(zhì)量分?jǐn)?shù)1%、3%、5%的紡絲液，在PLA紡絲 液中加入化r，配制成PLA與化r的質(zhì)量比為85/15。在室溫下，將溶液在磁力攬拌器上密閉攬 拌化，超聲（功率120W、頻率40，000化）2h，保證PLA聚合物和藥物完全溶解，得到透明溶液， 溶液在室溫下靜置2地脫泡后用于后續(xù)紡絲。IOml Cur-PLA紡絲液在17KV，接收距離15cm， 流速為0.5mL/h的條件下制備。
[0076] (2)將電紡膜進(jìn)行真空抽濾干燥(干燥壓力lOmpa，干燥溫度45°C，干燥時間2地）， 去除殘余有機溶劑，真空抽濾干燥后用掃描電鏡進(jìn)行形貌分析，結(jié)果如圖2所示。
[0077]圖2為相同溶劑(氯仿），相同電噴條件下，不同濃度下的PLA微球。伴隨著濃度的升 高靜電噴霧的結(jié)果發(fā)生了從小微球一大微球一纖維串珠的變化。當(dāng)濃度為1%時，微球表面 不光滑且有明顯的破桐；當(dāng)濃度上升到3 %時，微球比較均一，分散性較好且表面光滑；當(dāng)濃 度上升到5%時，微球尺寸變大，且微球之間相互粘結(jié);靜電噴射過程中因 PLA濃度對微球的 形貌和尺寸有很大影響，濃度較低時，分子鏈之間纏結(jié)度不夠，微球表面出現(xiàn)破桐；當(dāng)濃度 增加時，逐漸形成均一微球，且微球直徑隨著粘度的增加而增大；當(dāng)濃度過大時，噴霧過程 中，主要液滴之間發(fā)生粘結(jié)生成細(xì)絲，導(dǎo)致生成串珠纖維。由此可知，當(dāng)PLA濃度為3%時，微 球形貌比較均一，且無粘結(jié)現(xiàn)象，因此本發(fā)明的3%PLA為制備微球的最佳濃度。
[007引實施例3
[0079] 將化A顆粒溶于丙酬/DMACd 混合溶劑中，分別配制成質(zhì)量分?jǐn)?shù)為6%、 10 %、14 %、16 %的電紡絲溶液。在化A紡絲溶液中加入恩諾沙星固體藥物，配制成化rO與 PLA的質(zhì)量比為20/80。在室溫下，將溶液在磁力攬拌器上密閉攬拌化，超聲(功率120W、頻率 40，000化）2h，保證化A聚合物和藥物完全溶解，得到透明溶液，溶液在室溫下靜置2地脫泡 后用于后續(xù)紡絲。IOml紡絲液在紡絲電壓為15KV，接收距離為IOcm,流速為0.5mLA的統(tǒng)一 電紡工藝的條件下制備。
[0080] 將電紡膜進(jìn)行真空抽濾干燥(干燥壓力lOmpa，干燥溫度45°C，干燥時間2地），去除 殘余有機溶劑，真空抽濾干燥后用掃描電鏡進(jìn)行形貌分析，結(jié)果如圖3所示。
[0081] 由圖3可W看出，當(dāng)濃度為6%時，只有非常少量的纖維形成，大部分為聚合物顆 粒;隨著PLA濃度增加，開始生成串珠纖維，隨著濃度進(jìn)一步增加，串珠纖維逐漸減少，纖維 直徑增加，直到濃度達(dá)到14%時，纖維中基本沒有珠狀物的存在，形成較為均一的纖維。當(dāng) 進(jìn)一步增加濃度16%時，紡絲液開始不透明，且堵住噴絲口，不能進(jìn)行電紡。當(dāng)紡絲液粘度 低時，由于聚合物分子鏈之間纏結(jié)程度不夠，不能形成連續(xù)穩(wěn)定射流，主要是W液滴的形 式，噴成小顆粒。隨著濃度的增大，紡絲液粘度也會增加，逐漸形成串珠纖維，最后形成均勻 的纖維。14%時纖維無串珠且比較均一，當(dāng)濃度為16%時，溶液不可電紡，因此選擇PLA濃度 為14%的作為制備載藥PLA納米纖維，即14%為制備PLA纖維的最佳濃度。
[0082] 實施例4
[0083] -、復(fù)合薄膜的制備
[0084] (1)將PVDF粉末溶于丙酬/DMAC(l:l，m/m)混合溶劑中，配制成質(zhì)量分?jǐn)?shù)為12%的 紡絲溶液。在室溫下，將溶液在磁力攬拌器上密閉攬拌化，超聲（功率120W、頻率40，000化） 2h，保證聚合物完全溶解，得到均一溶液，溶液在室溫下靜置2地脫泡后用于后續(xù)紡絲。
[0085] (2)將PLA顆粒溶解在氯仿中配成質(zhì)量分?jǐn)?shù)3%的紡絲液，在3%化A紡絲液中加入 Cur,配制成PLA與Cur的質(zhì)量比為85/15。在室溫下，將溶液在磁力攬拌器上密閉攬拌化，超 聲(功率120W、頻率40，000化）2h，保證PLA聚合物和藥物完全溶解，得到透明溶液，溶液在室 溫下靜置2地脫泡后用于后續(xù)紡絲。
[0086] (3)將PLA顆粒溶于丙酬/DMACa : 1，m/m)混合溶劑中，配制成質(zhì)量分?jǐn)?shù)為14%的電 紡絲溶液。在14 % PLA紡絲溶液中加入恩諾沙星固體藥物，配制成化ro與PLA的質(zhì)量比為20/ 80。在室溫下，將溶液在磁力攬拌器上密閉攬拌化，超聲（功率120W、頻率40，000化）2h，保證 PLA聚合物和藥物完全溶解，得到透明溶液，溶液在室溫下靜置24h脫泡后用于后續(xù)紡絲。
[0087] 先用步驟（I)中的20ml PVDF紡絲液在15KV，接收距離15cm，用侶錐紙做接收介質(zhì) 進(jìn)行紡絲;再用步驟(2)中的20ml化r-PLA紡絲液在17KV，接收距15cm的條件下用PVDF電紡 膜作為接收介質(zhì)進(jìn)行紡絲；最后一層用步驟(3)中的20ml Enro-PLA紡絲液在15KV，接收距 為IOcm,流速均為0.5ml/min。
[0088] 將W上紡成的膜進(jìn)行真空抽濾干燥（干燥壓力lOmpa，干燥溫度45°C，干燥時間 24h)，去除殘余有機溶劑，得到復(fù)合薄膜。
[0089] 二、力學(xué)性能的檢測
[0090] 設(shè)定W下測試方法：
[0091] 試驗方案:薄膜和薄片拉伸性能的測定計算標(biāo)準(zhǔn):GB/T 1040.3-2006
[0092] 試樣形狀:板材
[0093] 試驗速度：lOOmm/min
[0094] 試樣寬度:10mm
[0095] 試樣厚度:0.45mm
[0096] 原始標(biāo)距：IOOmm
[0097] 測試結(jié)果如表1所示。
[0098] 表1復(fù)合膜材料的平均斷裂強度和平均斷裂伸長率
[0099]
[0100] 從表1可W看出化A纖維膜的力學(xué)性能非常差，基本不能滿足日常生活所需強度， 為了克服化A載藥纖維膜易斷裂的弱點及增強纖維膜的強度和拉伸率，在復(fù)合膜的制備中 采用了強度和拉伸率都很高的PVDF作為底層，從數(shù)據(jù)結(jié)果顯示，PVDF的存在大大地增強復(fù) 合膜的強度，使其可W滿足復(fù)合膜作為傷口敷料所需的強度。
[0101] 實施例5
[0102] 為了證明雙組分載藥體系的復(fù)合膜具有生物相容的，采用L929小鼠成纖維細(xì)胞 (產(chǎn)品產(chǎn)地:美國ATCC，購于上海拜力生物科技有限公司供應(yīng)商)作為細(xì)胞模型來評價復(fù)合 膜PVDF底層和PLA表層的生物相容性。
[0103] (1)將PVDF粉末溶于丙酬/DMAC(l:l，m/m)混合溶劑中，配制成質(zhì)量分?jǐn)?shù)為12%的 紡絲溶液。在室溫下，將溶液在磁力攬拌器上密閉攬拌化，超聲（功率120W、頻率40，OOO化） 2h，保證聚合物完全溶解，得到均一溶液，溶液在室溫下靜置24h脫泡后用于后續(xù)紡絲。取 15ml PVDF紡絲液在15KV，接收距離15cm，用侶錐紙做接收介質(zhì)進(jìn)行紡絲，流速為0.5ml/ min;
[0104] (2)將PLA顆粒溶于丙酬/DMACa : I，m/m)混合溶劑中，配制成質(zhì)量分?jǐn)?shù)為14%的電 紡絲溶液。在14 % PLA紡絲溶液中加入恩諾沙星固體藥物，配制成化ro與PLA的質(zhì)量比為20/ 80。在室溫下，將溶液在磁力攬拌器上密閉攬拌化，超聲（功率120W、頻率40，000化）2h，保證 PLA聚合物和藥物完全溶解，得到透明溶液，溶液在室溫下靜置24h脫泡后用于后續(xù)紡絲。取 15ml Enro/PLA紡絲液在15KV，接收距離IOcm,用侶錐紙做接收介質(zhì)進(jìn)行紡絲，流速為 0.5ml/min〇
[0105] 將步驟（I)和步驟(2)所制電紡膜進(jìn)行真空抽濾干燥(干燥壓力lOmpa，干燥溫度45 °C，干燥時間24h)，去除殘余有機溶劑，真空抽濾干燥后進(jìn)行細(xì)胞的生物相容性的實驗：
[0106] 采用細(xì)胞粘附實驗來確定載體材料的生物相容性，主要是將L929小鼠成纖維細(xì)胞 接種到纖維薄膜，并在纖維薄膜上培養(yǎng)一段時間，觀察薄膜材料對細(xì)胞形貌和細(xì)胞增殖的 影響，來確認(rèn)載體的生物相容性(Sun et al. ,2014)。
[0107] ①細(xì)胞的復(fù)蘇。從液氮罐中取出所需的細(xì)胞凍存管，將其放入到39°C的恒溫水浴 鍋中，并不斷搖晃使冰晶迅速融化。待冰晶溶化后，將細(xì)胞凍存管拿入已經(jīng)紫外殺菌的超凈 工作臺內(nèi)。從凍存管中取出細(xì)胞放入到離屯、管中，向離屯、管加入2mL的DMEM高糖培養(yǎng)基90% 培養(yǎng)基，將其用離屯、機（l〇(K)r/min)離屯、5min，去除上清液，再向離屯、管內(nèi)一定比例含胎牛 血清10%的培養(yǎng)基，吹打溶液，使細(xì)胞分散。然后將離屯、管細(xì)胞加入培養(yǎng)瓶內(nèi)搖勻，將培養(yǎng) 瓶放置在37°C、5%C02的條件下進(jìn)行培養(yǎng)。每2天更換一次培養(yǎng)基，并用倒置顯微鏡察細(xì)胞 的生長情況，待貼壁細(xì)胞達(dá)80% W上就可W使用。
[0108] ②材料的處理。將纖維薄膜(按步驟(1)制備得到的）和收集有微球的侶錐(按步驟 (2)制備得到的）剪裁成直徑為2.2cm圓片，在紫外燈(40W，距離Im)下殺菌化，將其放入到12 孔板內(nèi)，不同時間點的樣品要放置在不同的培養(yǎng)板中，每個樣品3個平行樣?？瞻卓?TCP培 養(yǎng)板)作為對照，每個孔加入ImL的DMEM培養(yǎng)基浸泡，過夜。
[0109] ③細(xì)胞種植。在放有樣品的12孔板中加入ImL細(xì)胞培養(yǎng)基(完全培養(yǎng)基:DMEM高糖 培養(yǎng)基90%，胎牛血清10% )，再加入40iil濃度為1 X IO4個/mL的細(xì)胞懸浮液使細(xì)胞分散到 培養(yǎng)基中，然后將培養(yǎng)板蓋好，搖勻，放置在培養(yǎng)箱中，37°C、5%C02條件下培養(yǎng)，然后在1， 3,5,7天時測量細(xì)胞增殖和細(xì)胞的形貌。培養(yǎng)基每隔兩天更換一次。
[0110] ④細(xì)胞增殖的測定。將孔板的培養(yǎng)基吸走后，加入2mL PBS溶液洗去未粘附的細(xì) 胞;加入ImL的膜酶(0.25%w/v)并搖勻，放入37°C培養(yǎng)箱3-5min，在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞 消化，再向培養(yǎng)瓶加入ImL的培養(yǎng)基，吹打細(xì)胞，使細(xì)胞從薄膜上完全脫落;然后從孔板中取 2化L細(xì)胞懸浮溶液加入到血細(xì)胞計數(shù)板中，在倒置顯微鏡下計數(shù)。
[0111] ⑤細(xì)胞形貌的觀察。將孔板的培養(yǎng)基吸走后，加入2mL PBS溶液洗去未粘附的細(xì) 胞;加入2mL的2.5 % (v/v)戊二醒溶液進(jìn)行固定2地；吸走固定液后，用2mL PBS溶液洗涂3 次，洗走殘余的固定液;分別用30%(v/v)，50%(v/v) ,70% (v/v) ,90% (v/v) ,100%的乙醇 溶液進(jìn)行脫水，每個濃度lOmin;然后用醋酸戊醋脫水lOmin;放到臨界點干燥儀上進(jìn)行干 燥。最后將樣品噴金后，用SEM觀察細(xì)胞形貌。
[0112] 同時作為空白對照試驗的是憐酸S巧支架(TCP)(連云港東泰食品配料有限公司， GB25558-2010，F(xiàn)CC-5)。
[0113] 通過SEM觀察，結(jié)果如圖4和圖5所示。圖4為細(xì)胞分別在PVDF纖維底層和Enro/PLA 表層的粘附和增殖的形貌圖，圖5為細(xì)胞在復(fù)合膜PVDF底層和Enro/PLA表層增殖的細(xì)胞數(shù) 量圖。
[0114] 由圖4和圖5可知，細(xì)胞接種1天后，有細(xì)胞粘附在了復(fù)合膜上，成發(fā)散狀，有擴張和 增殖的趨勢;細(xì)胞接種3天后，復(fù)合膜上粘附的細(xì)胞明顯增加，說明細(xì)胞已經(jīng)開始在復(fù)合膜 上增殖;細(xì)胞接種5天后，復(fù)合膜上形成了 一層細(xì)胞層;細(xì)胞接種7天后，復(fù)合膜上已經(jīng)基本 被細(xì)胞和細(xì)胞的分泌物所覆蓋。由W上結(jié)果可知，四種材料的組合對細(xì)胞不會產(chǎn)生毒性，仍 能夠使細(xì)胞在復(fù)合膜上進(jìn)行粘附和增殖，復(fù)合膜材料是生物相容的。在復(fù)合膜的PVDF底層 和化ro/PLA表層的細(xì)胞形貌基本一致，說明兩種材料對細(xì)胞的形貌沒有影響，運兩種復(fù)合 材料的結(jié)合作為傷口敷料的高分子支撐材料是很好的組合。
[011引實施例6
[0116] (1)將PLA顆粒溶解在氯仿中配成質(zhì)量分?jǐn)?shù)4%的紡絲液，在4%化A紡絲液中按照 一定的質(zhì)量比加入化r，配制成PLA與化r的質(zhì)量比為85/15。在室溫下，將溶液在磁力攬拌器 上密閉攬拌化，超聲（功率120W、頻率40，000化）2h，保證PLA聚合物和藥物完全溶解，得到透 明溶液，溶液在室溫下靜置2地脫泡后用于后續(xù)紡絲。
[0117] (2)將PLA顆粒溶于丙酬/DMAC(l:l，m/m)混合溶劑中，配制成質(zhì)量分?jǐn)?shù)為14%電紡 絲溶液。在14 %化A紡絲溶液中加入恩諾沙星固體藥物，配制成Enro與化A的質(zhì)量比為20/ 80。在室溫下，將溶液在磁力攬拌器上密閉攬拌化，超聲（功率120W、頻率40，000化）2h，保證 PLA聚合物和藥物完全溶解，得到透明溶液，溶液在室溫下靜置24h脫泡后用于后續(xù)紡絲。
[0118] 分別用步驟（1)和步驟(2)的15ml紡絲液在紡絲電壓為15KV，接收距離為IOcm,流 速為0.5mLA的統(tǒng)一電紡工藝的條件下在侶錐紙上紡膜，分別得到單層的載藥膜。再用步驟 (1)中的15ml Cur-PLA紡絲液先在侶錐紙紡膜，接著用步驟（2)中的15ml化ro-PLA紡絲液 紡絲，電壓均為15KV，接收距離為IOcm,流速為0.5mL/h的統(tǒng)一電紡工藝的條件下在侶錐紙 紡膜。將電紡膜進(jìn)行真空抽濾干燥(干燥壓力lOmpa，干燥溫度45°C，干燥時間24h)，去除殘 余有機溶劑，真空抽濾干燥后，進(jìn)行抗菌性能檢測，其中大腸桿菌CICC 10899和金黃色葡萄 球菌CICC 10001(均購買自中國工業(yè)微生物菌種保藏管理中屯、)作為實驗菌種，用打孔器打 5mm直徑的電紡膜為抗菌材料。采用瓊脂平皿擴散法評價載藥纖維膜和=層復(fù)合纖維膜對 標(biāo)準(zhǔn)菌株金黃色葡萄球菌和大腸桿菌的抗菌性能。
[0119] ①瓊脂培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基的配制。瓊脂培養(yǎng)基:細(xì)菌學(xué)蛋白腺lOg，牛肉浸膏3g， 氯化鋼5g，瓊脂粉20g，加 1000 mL蒸饋水煮沸充分溶解，調(diào)節(jié)用化OH調(diào)節(jié)抑為7.0 ±0.2，待 用。細(xì)菌培養(yǎng)液:細(xì)菌學(xué)蛋白腺Ig,牛肉浸膏〇.3g，氯化鋼0.5g，加 IOOmL蒸饋水，煮沸溶解， 調(diào)節(jié)用NaOH調(diào)節(jié)pH為6.8，待用。
[0120] ②滅菌:抗菌實驗中所用的試管、培養(yǎng)皿、量筒、移液槍槍頭，細(xì)菌培養(yǎng)基，瓊脂培 養(yǎng)基在使用前必須經(jīng)過高壓蒸汽滅菌處理。具體操作是:將玻璃器皿用報紙包好，培養(yǎng)基用 硅膠塞封好后用報紙將瓶口包住，置于高壓蒸汽滅菌滅菌Ih，滅菌完成之后，將所有器皿放 到潔凈操作臺上，并打開紫外燈殺菌20min。
[0121] ③菌液的培養(yǎng):從3-10代的細(xì)菌保存菌種斜面上取一環(huán)細(xì)菌，在瓊脂平板上劃線， 并在37°C下培養(yǎng)18-2地。用接菌環(huán)從平板中挑出典型的菌落接種于IOmL的細(xì)菌培養(yǎng)基中， 于37°C振蕩培養(yǎng)18-24h后得到菌懸液。制得的菌懸液中菌落數(shù)較大，需要將菌懸液中的菌 落數(shù)控制在相同的數(shù)量級，W保證菌液濃度一定。因為菌體具有散射和吸收作用，所W當(dāng)光 線通過菌懸液時，透光率會降低，因此菌懸液濃度可W用分光光度法測定。瓊脂平皿擴散法 中，采用菌液濃度為：1 X IO8-S X 10化fu/ml。
[0122] ④誘板:在潔凈操作臺中，用量筒量取25mL固體培養(yǎng)基迅速誘鑄到滅菌好的培養(yǎng) 皿，開啟通風(fēng)裝置內(nèi)瓊脂培養(yǎng)基固化。
[0123] ⑤瓊脂平皿擴散法試樣準(zhǔn)備:將納米纖維薄膜用6mm的打孔機剪裁成直徑為6mm的 小圓片，并用分析太平稱量樣品重量約為lOmg。
[0124] ⑥瓊脂平皿擴散法測抗菌性。涂板:用移液槍吸取SOiiL的菌液，并用涂布棒均勻地 涂布在瓊脂培養(yǎng)基上。試樣放置：用酒精燈外焰灼燒綴子，待綴子冷卻至室溫后，用綴子取 試樣(每個樣品重復(fù)3次），并將其輕輕放置在培養(yǎng)基上使試樣緊貼培養(yǎng)基。細(xì)菌培養(yǎng):將放 置好試樣的培養(yǎng)皿放入隔水恒溫培養(yǎng)箱中，在37±2°C條件下培養(yǎng)18-2地。
[0125] ⑦測量抑菌圈寬度:用直尺測量抑菌圈直徑，不同方向測四次，取平均值作為樣品 的抑菌圈直徑(Unnithan et al.,2012)。
[0126] 進(jìn)行抗菌性能檢測結(jié)果見表2。
[0127] 表2載藥微球和載藥纖維膜及其復(fù)合的抗菌結(jié)果
[012 引
[0129] 從表2可W看出，單一的載藥微球和載藥纖維膜對大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的 抑制效果均不及兩者復(fù)合的效果。說明在本發(fā)明的雙組分載藥體系比單一組分更具有優(yōu)越 的抗菌效果。
[0130] 實施例7
[0131] (1)將PVDF粉末溶于丙酬/DMAC(l:l，m/m)混合溶劑中，配制成質(zhì)量分?jǐn)?shù)為12%紡 絲溶液。在室溫下，將溶液在磁力攬拌器上密閉攬拌化，超聲（功率120W、頻率40,000化)2h， 保證聚合物完全溶解，得到均一溶液，溶液在室溫下靜置2地脫泡后用于后續(xù)紡絲。
[0132] (2)將PLA顆粒溶解在氯仿中配成質(zhì)量分?jǐn)?shù)4%的紡絲液，在4%化A紡絲液中按照 一定的質(zhì)量比加入化r，配制成PLA與化r的質(zhì)量比為85/15。在室溫下，將溶液在磁力攬拌器 上密閉攬拌化，超聲（功率120W、頻率40，000化）2h，保證PLA聚合物和藥物完全溶解，得到透 明溶液，溶液在室溫下靜置2地脫泡后用于后續(xù)紡絲。
[0133] (3)將PLA顆粒溶于丙酬/DMACa : 1，m/m)混合溶劑中，配制成質(zhì)量分?jǐn)?shù)為14%的電 紡絲溶液。在14 % PLA紡絲溶液中加入恩諾沙星固體藥物，配制成化ro與PLA的質(zhì)量比為20/ 80。在室溫下，將溶液在磁力攬拌器上密閉攬拌化，超聲（功率120W、頻率40，000化）2h，保證 PLA聚合物和藥物完全溶解，得到透明溶液，溶液在室溫下靜置2地脫泡后用于后續(xù)紡絲。
[0134] 先用步驟（1)中的20ml PVDF紡絲液在15KV，接收距離15cm，用侶錐紙做接收介質(zhì) 進(jìn)行紡絲;再用步驟(2)中的15ml化r-PLA紡絲液在10KV，接收距15cm的條件下用PVDF電紡 膜作為接收介質(zhì)進(jìn)行紡絲；最后一層用步驟(3)中的20ml Enro-PLA紡絲液在15KV，接收距 15畑1，流速統(tǒng)一為0.51111/111；[]1，得到復(fù)合電紡膜。
[0135] 再W侶錐紙為介質(zhì)，分別用步驟(2)中的15ml Cur-PLA紡絲液在IOKV、接收距15cm 的條件下紡絲W及用步驟(3)中的20ml化ro-PLA紡絲液在15KV、接收距15cm的條件下紡 絲，分別得到單層載藥電紡膜。
[0136] 將電紡膜進(jìn)行真空抽濾干燥(干燥壓力lOmpa，干燥溫度45°C，干燥時間2地），去除 殘余有機溶劑，真空抽濾干燥后進(jìn)行徑基自由基和DPPH自由基的抗氧化活性性能檢測。其 方法如下：
[0137] ①溶液的配制
[013引配制不同濃度的姜黃素和維生素 C的SDS溶液（lOiig/mL、祉g/mL、化g/mL、化g/mL、2 yg/mL)和不同姜黃素和維生素 C的醇溶液（20yg/mL，l祉g/mL，16yg/血，14yg/mL，12iig/mL) 的醇溶液根據(jù)樣品對姜黃素的負(fù)載量相對應(yīng)的將樣品配制成姜黃素的濃度上述濃度的溶 液，并超聲地取上層清夜。
[0139] ②清除-OH自由基法
[0140] 徑基自由基（.OH)是最活躍的一種活性分子，也是進(jìn)攻性最強的化學(xué)物質(zhì)之一， 幾乎可W與所有的生物分子、有機物或無機物發(fā)生各種不同類型的化學(xué)反應(yīng)，會造成糖類、 氨基酸、蛋白質(zhì)、核酸和脂類等物質(zhì)的氧化損傷，從而使細(xì)胞壞死或突變。利用Fenton原理， 使出化在化的催化作用下分解產(chǎn)生? OH自由基，同時化被氧化成化3+。而徑基自由基的反 應(yīng)活性很高存活時間很短，在體系中添加水楊酸可W有效捕捉到? OH自由基，同時產(chǎn)生有 色物質(zhì)此物質(zhì)在510nm處具有特征吸收峰。當(dāng)加入具有清除能力的樣品時就會與水楊酸產(chǎn) 生競爭? OH自由基現(xiàn)象，使有色物質(zhì)生產(chǎn)量減少。
[0141] 取2mL樣品溶液于試管中，依次加入2mL 6mmol/L FeS〇4、2mL 6mmol/L此〇2,混合 均勻后靜置lOmin，再加入6mmol/L水楊酸2mL，混勻，靜置SOmin后，用UV-2550紫外分光光度 計測510nm波長處的吸光度(Al)，蒸饋水代替水楊酸測定其吸光度(Aj)，SDS溶液代替樣液測 定吸光度(Aq)。每個實驗組需重復(fù)3次，求平均值，按照下式計算姜黃總姜黃素對的? OH自 由基清除率。
[0142]
[0143] ③清除DPKl自由基的方法
[0144] 此法是根據(jù)DPPH自由基有單電子，在517nm處有一強吸收，其醇溶液呈紫色的特 性。當(dāng)有自由基清除劑存在時，由于與其單電子配對而使其吸收逐漸消失，其稱色程度與其 接受的電子數(shù)量成定量關(guān)系，因而可用分光光度計進(jìn)行快速的定量分析。
[0145] 5血 0.03g/L的DPPH(2,2-dipheny]_-1-pic-巧lhi化az;yl)乙醇溶液，加上l血被測 樣品溶液。在暗箱中反應(yīng)30min后，用UV-2550紫外分光光度計在517nm測反應(yīng)后溶液的吸光 值。每組市3A巧包Mq你而巫+ 々估田了而6A/人氣計算被測樣清除DPPH自由基的能力。
[0146]
[0147] 式中Ao:用乙醇溶液代替樣品的吸光值。Ai:被測樣品吸光值(段雪琴，2013)。
[0148] 檢測結(jié)果如表3所示。
[0149] 親3官會瞪對OH白由甚巧0口口1^白由的潔除化田
[0150]
[0151 ]從表3的結(jié)果可W看出，雙組分載藥的復(fù)合膜對OH自由基和DPPH自由的清除作用 要比單一組分的化r/PLA微球和化ro/PLA纖維要好，甚至大于兩者的清除作用的總和。運說 明雙組分載藥的復(fù)合膜的抗氧化性要比單一組分要好。
[0152]上述實施例為本發(fā)明較佳的實施方式，但本發(fā)明的實施方式并不受上述實施例的 限制，其他的任何未背離本發(fā)明的精神實質(zhì)與原理下所作的改變、修飾、替代、組合、簡化， 均應(yīng)為等效的置換方式，都包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
【主權(quán)項】
1. 一種靜電噴射復(fù)合薄膜的制備方法，其特征在于包括如下步驟:通過靜電紡絲先在 滾筒接收器紡一層PVDF納米纖維薄膜做支撐材料，然后通過靜電噴霧法噴一層Cur-PLA微 球，得到雙層膜;再通過靜電紡絲法在雙層膜上紡一層Enro-PLA納米纖維膜，干燥，得到靜 電噴射復(fù)合薄膜。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的靜電噴射復(fù)合薄膜的制備方法，其特征在于： 所述的Cur-PLA微球中Cur和PLA按質(zhì)量比15:85配比； 所述的Enro-PLA納米纖維膜中Enro和PLA按質(zhì)量比20:80配比。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的靜電噴射復(fù)合薄膜的制備方法，其特征在于:所述的PVDF納米 纖維薄膜的紡絲條件為： PVDF紡絲溶液中PVDF的濃度為質(zhì)量體積比6~14% ; 電壓為15~25KV; 接收距離為IOcm~15cm; 流速為0.5mL/h; PVDF紡絲溶液的紡絲用量為10~20ml; 所述的Cur/PLA微球的紡絲條件為： Cur/PLA紡絲溶液中PLA的濃度為質(zhì)量體積1~5% ; Cur/PLA紡絲溶液中Cur的濃度按Cur: PLA =質(zhì)量比15:85計； 電壓為10~17KV; 接收距離為IOcm~15cm; 流速為0.5mL/h; Cur/PLA紡絲溶液的紡絲用量為10~20ml; 所述的Enro/PLA納米纖維的紡絲條件為： Enro/PLA紡絲溶液中PLA的濃度為質(zhì)量體積6~14% ; Enro/PLA紡絲溶液中Enro的濃度按Enro: PLA =質(zhì)量比20:80計； 電壓為10~17KV; 接收距離為IOcm~15cm; 流速為0.5mL/h; Enro/PLA紡絲溶液的紡絲用量為10~20ml。4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的靜電噴射復(fù)合薄膜的制備方法，其特征在于： 所述的PVDF納米纖維薄膜的紡絲條件為： PVDF紡絲溶液中PVDF的濃度為質(zhì)量體積比8~14% ; 電壓為15KV; 接收距離為15cm。5. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的靜電噴射復(fù)合薄膜的制備方法，其特征在于:所述的Cur/PLA 微球的紡絲條件為： Cur/PLA紡絲溶液中PLA的濃度為質(zhì)量體積3~5% ; 電壓為10~15KV。6. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的靜電噴射復(fù)合薄膜的制備方法，其特征在于： 所述的Enro/PLA納米纖維的紡絲條件為： Enro/PLA紡絲溶液中PLA的濃度為質(zhì)量體積比IO~14 % ; 電壓為10~15KV。7. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的靜電噴射復(fù)合薄膜的制備方法，其特征在于： 所述的PVDF紡絲溶液通過如下方法配制得到：將PVDF粉末溶于有機溶劑A中，將所得溶 液攪拌溶解，再超聲溶解，得到均一溶液，接著靜置消泡，得到PVDF紡絲溶液； 所述的Cur/PLA紡絲溶液為通過如下方法配制得到：將PLA溶于有機溶劑B中，再加入 Cur;將所得溶液攪拌溶解，再超聲溶解，得到均一溶液，接著靜置消泡，得到Cur/PLA紡絲溶 液； 所述的Enro/PLA紡絲溶液為通過如下方法配制得到：將PLA溶于有機溶劑C中，再加入 Enro;將所得溶液攪拌溶解，再超聲溶解，得到均一溶液，接著靜置消泡，得到Enro/PLA紡絲 溶液。8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的靜電噴射復(fù)合薄膜的制備方法，其特征在于： 所述的有機溶劑A為丙酮和二甲基乙酰胺按質(zhì)量比1:1配比得到的混合溶劑； 所述的有機溶劑B為氯仿； 所述的有機溶劑C為丙酮和二甲基乙酰胺按質(zhì)量比1:1配比得到的混合溶劑； 所述的攪拌溶解的時間均為6h; 所述的超聲溶解的時間均為2h; 所述的靜置的時間優(yōu)均為24h。9. 一種靜電噴射復(fù)合薄膜，其特征在于:通過權(quán)利要求1~8任一項所述的制備方法得 到。10. 權(quán)利要求9所述的靜電噴射復(fù)合薄膜在制備醫(yī)用敷料中的應(yīng)用。
【文檔編號】D04H1/435GK105908363SQ201610318518
【公開日】2016年8月31日
【申請日】2016年5月12日
【發(fā)明人】周武藝, 李錦珍, 何婷, 董先明, 劉威
【申請人】華南農(nóng)業(yè)大學(xué)