專利名稱：一種用固定化磷脂酶A₂脫膠的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種海藻酸鈉-殼聚糖復(fù)合載體固定化磷脂酶A2應(yīng)用于脫膠的方法。
背景技術(shù)：
天然大豆油需經(jīng)過一系列的精煉工藝才能得到最終的油脂產(chǎn)品。其中精煉的第一步就是脫膠工藝，即脫除磷脂類物質(zhì)，磷脂類物質(zhì)又分為水化磷脂和非水化磷脂，其中，水化磷脂可以采用水化脫膠的方式除去；非水化磷脂由于其具有顯著的疏水性，用常規(guī)方法很難除去，針對(duì)這一特點(diǎn)，利用磷脂酶對(duì)水化脫膠油進(jìn)行酶法脫膠則應(yīng)運(yùn)而生。
現(xiàn)對(duì)于酶法大豆油脫膠工藝，用到較多的磷脂酶為磷脂酶仏(PLA1), PLA1專一水解天然磷脂Sn-I位?；?，得到Sn-2位?；苎字椭舅?，但由于Sn_2位?；臒崃W(xué)性質(zhì)不穩(wěn)定，使得溶血磷脂的Sn-2位脂肪酸容易轉(zhuǎn)移到Sn-I位上形成Sn-I位酰基溶血磷脂，從而使得得到的溶血磷脂為Sn-I位?；苎字蚐n-2位?；苎字幕旌衔?，由此為后續(xù)生產(chǎn)純凈的、單一品種的溶血磷脂帶來不便。目前對(duì)于磷脂酶A2應(yīng)用于脫膠工藝研究較少，磷脂酶A2 (PLA2)是一類能夠在磷脂甘油部分的Sn-2位點(diǎn)選擇性斷裂酯鍵的酶，其可將磷脂水解成Sn-2位?；苎字椭舅幔滑F(xiàn)今用于脫膠的酶主要是Novo公司推出的Lecitase IOL(PLA2), LecitaseNovo (PLA1)和Lecitase Ultra(PLA1) 其中，豬胰臟來源的磷脂酶Lecitase IOL已不用于油脂脫膠，而被本專利中采用的更具優(yōu)勢(shì)的微生物Rohalase MPL(PLA2)所代替。PLA2可以將非水化磷脂水解成溶血磷脂，其親水性顯著增強(qiáng)，從而可以通過加水混合后離心的方法將其從油脂中分離，從而達(dá)到精煉的目的。但是對(duì)于游離的PLA2來講，其價(jià)格昂貴，且容易失活變性，不能夠重復(fù)使用等缺點(diǎn)又導(dǎo)致其不能夠大規(guī)模應(yīng)用于油脂精煉。將Rohalase MPL固定于海藻酸鈉-殼聚糖載體上,對(duì)其脫膠條件進(jìn)行研究,最終確定出海藻酸鈉-殼聚糖復(fù)合載體固定化后的Rohalase MPL用于脫膠的最佳工藝參數(shù)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明是為了解決酶法脫膠過程中，將海藻酸鈉-殼聚糖復(fù)合載體固定化Rohalase MPL用于脫膠未見報(bào)道的問題，而提出的用海藻酸鈉-殼聚糖復(fù)合載體固定化Rohalase MPL脫膠的方法。用海藻酸鈉-殼聚糖復(fù)合載體固定化Rohalase MPL脫膠的方法通過以下步驟實(shí)現(xiàn)一、海藻酸鈉-殼聚糖復(fù)合載體固定化Rohalase MPL用于水化脫膠大豆油脫膠。二、海藻酸鈉-殼聚糖復(fù)合載體固定化Rohalase MPL回收。三、酶法脫膠后的脫膠油磷含量的測(cè)定。四、海藻酸鈉-殼聚糖復(fù)合載體固定化Rohalase MPL用于水化脫膠油脫膠條件的優(yōu)化。采用海藻酸鈉-殼聚糖復(fù)合載體固定化Rohalase MPL脫膠的方法,經(jīng)固定化后的酶重復(fù)使用性好，不易變性失活，大大降低了油脂精煉的成本；此外，采用海藻酸鈉-殼聚糖復(fù)合載體固定化Rohalase MPL對(duì)水化脫膠油進(jìn)行脫膠，最終得到的酶法脫膠油磷含量顯著降低，可降至9. 83ppm ;該固定化酶重復(fù)使用7次后活力仍可以保持54%以上，對(duì)油脂精
煉具有重要意義。
具體實(shí)施例方式具體實(shí)施方式
一用海藻酸鈉-殼聚糖復(fù)合載體固定化Rohalase MPL脫膠的方法通過以下步驟實(shí)現(xiàn)一、海藻酸鈉-殼聚糖復(fù)合載體固定化Rohalase MPL用于水化脫膠油脫膠加熱水化脫膠大豆油至85°C，加入O. 1%左右的45%的檸檬酸溶液進(jìn)行酸反應(yīng)并降溫到一定溫度，加入4%左右的NaOH溶液調(diào)節(jié)起始pH到一定值，向內(nèi)加入熱軟水適量，而后加入一定量的固定化Rohalase MPL進(jìn)行酶反應(yīng)一定時(shí)間,得到的脫膠油對(duì)其進(jìn)行4000rpm離心20min后保存上層油樣即酶法脫膠油。二、海藻酸鈉-殼聚糖復(fù)合載體固定化RohalaseMPL回收將脫膠反應(yīng)后的海藻酸鈉-殼聚糖復(fù)合載體固定化Rohalase MPL過濾回收；三、酶法脫膠后的脫膠油磷含量的測(cè)定；四、海藻酸鈉-殼聚糖復(fù)合載體固定化Rohalase MPL 用于水化脫膠油脫膠條件的優(yōu)化分別在脫膠溫度35°C 55°C，起始pH為4. (Γ6. O,固定化酶添加量為O. 06g/kg"0. 14 g/kg，脫膠時(shí)間為2h 8h的條件下，通過測(cè)定用海藻酸鈉-殼聚糖復(fù)合載體固定化Rohalase MPL對(duì)水化脫膠油脫膠后得到的脫膠油的磷含量，得出用海藻酸鈉-殼聚糖復(fù)合載體固定化Rohalase MPL脫膠的最優(yōu)條件；五、采用響應(yīng)面法進(jìn)行分析討論最終確定最佳海藻酸鈉-殼聚糖復(fù)合載體固定化Rohalase MPL脫膠條件。
具體實(shí)施方式
二 本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一的不同點(diǎn)在于步驟四中脫膠溫度為45°C 55°C再用海藻酸鈉-殼聚糖復(fù)合載體固定化Rohalase MPL對(duì)水化脫膠油脫膠。其它步驟與具體實(shí)施方式
一相同。
具體實(shí)施方式
三本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一的不同點(diǎn)在于步驟四中用4%左右的NaOH溶液調(diào)節(jié)pH為4. 5 5. 5再用海藻酸鈉-殼聚糖復(fù)合載體固定化Rohalase MPL對(duì)水化脫膠油脫膠。其它步驟與具體實(shí)施方式
一相同。
具體實(shí)施方式
四本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一的不同點(diǎn)在于步驟四中向水化脫膠油中加入的海藻酸鈉-殼聚糖復(fù)合載體固定化Rohalase MPL為O. 80g/kg 0. 12 g/kg再用海藻酸鈉-殼聚糖復(fù)合載體固定化Rohalase MPL對(duì)水化脫膠油脫膠。其它步驟與具體實(shí)施方式
一相同。
具體實(shí)施方式
五本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一的不同點(diǎn)在于步驟四中酶法脫膠反應(yīng)時(shí)間為6h lh，對(duì)油脂進(jìn)行脫膠。其它步驟與具體實(shí)施方式
一相同。
具體實(shí)施方式
六本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一的不同點(diǎn)在于步驟五中采用響應(yīng)面分析法進(jìn)一步分析最佳固定化條件。其它步驟與具體實(shí)施方式
一相同。
權(quán)利要求
1.一種用固定化磷脂酶A2脫膠的方法，其特征在于用海藻酸鈉-殼聚糖復(fù)合載體固定化磷脂酶A2用于大豆油脫膠通過以下步驟實(shí)現(xiàn)加熱水化脫膠大豆油至85°C，加入O. 1%左右的45%的檸檬酸溶液進(jìn)行酸反應(yīng)并降溫到35°C 55°C，加入4%左右的NaOH溶液調(diào)節(jié)起始pH到4. (Γ6. O,向內(nèi)加入熱軟水適量,而后加入O. 06g/kg 0. 14 g/kg (油樣)的固定化磷脂酶A2進(jìn)行酶反應(yīng)2h lh，對(duì)脫膠大豆油進(jìn)行過濾，分離出固定化磷脂酶A2并進(jìn)行洗滌保存；得到的脫膠油對(duì)其進(jìn)行4000rpm離心20min后保存上層油樣即為酶法脫膠油。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種用固定化磷脂酶A2脫膠的方法，其特征在于將85°C的加入O. 1%左右的45%的檸檬酸溶液進(jìn)行酸反應(yīng)并降溫到45°C 55°C。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種用固定化磷脂酶A2脫膠的方法，其特征在于中用4%左右的NaOH溶液調(diào)節(jié)pH為4. 5 5. 5。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種用固定化磷脂酶A2脫膠的方法，其特征在于中向水化脫膠油中加入的固定化磷脂酶A2為O. 80g/kg 0. 12 g/kg。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種用固定化磷脂酶A2脫膠的方法，其特征在于中酶法脫膠反應(yīng)時(shí)間為6h 8h。
全文摘要
本發(fā)明提供一種用固定化磷脂酶A2對(duì)水化脫膠大豆油進(jìn)行脫膠。研究了脫膠溫度、脫膠起始pH、固定化磷脂酶A2添加量以及脫膠反應(yīng)時(shí)間等不同脫膠條件對(duì)大豆油脫膠效果的影響，并采用響應(yīng)面的分析方法對(duì)所研究的因素進(jìn)行優(yōu)化。根據(jù)本發(fā)明中固定化磷脂酶A2對(duì)大豆油進(jìn)行脫膠,提高了酶在反應(yīng)體系中的活性和穩(wěn)定性,大大降低了油脂精煉的成本；此外，采用固定化磷脂酶A2對(duì)大豆油進(jìn)行脫膠，最終得到的酶法脫膠大豆油磷含量顯著降低，可降至9.83ppm；該固定化酶重復(fù)使用7次后活力可以保持54%以上，對(duì)油脂精煉具有重要意義。
文檔編號(hào)C11B3/04GK102776066SQ20121025704
公開日2012年11月14日 申請(qǐng)日期2012年7月24日 優(yōu)先權(quán)日2012年7月24日
發(fā)明者于殿宇, 劉鑫, 宋云花, 宋鵬, 張佳寧, 張春艷, 李萬振, 李寶昌, 江連洲, 王玥, 胡立志, 鄒小雨 申請(qǐng)人:東北農(nóng)業(yè)大學(xué)