專利名稱：含γ-亞麻酸的絞股藍(lán)種子油的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于含18個碳原子的直鏈羧酸技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種從絞股藍(lán)種子中提取高含量Y-亞麻酸的絞股藍(lán)種子油的方法。
背景技術(shù)：
Y-亞麻酸是維持人體正常機(jī)能所必需的脂肪酸，在體內(nèi)能夠被代謝形成二高 Y-亞麻酸或花生四烯酸，進(jìn)而轉(zhuǎn)化為前列腺素和白三烯。大量研究和實驗證明，Y-亞麻酸具有相當(dāng)廣泛的藥理作用，它同時具有抗菌、抗腫瘤、抗炎、抗艾滋病毒感染，抑制血小板聚集和血栓素A2的合成，降低血漿總膽固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白、升高高密度脂蛋白含量，降血壓、血脂、膽固醇和X射線放療增敏等作用。Y-亞麻酸儀在少數(shù)植物中存在。國外多以月見草、黑加侖等植物的種子為原料提取Y -亞麻酸，因原料不足，產(chǎn)量極為有限；國內(nèi)主要以月見草為原料，然而月見草的野生資源逐年減少，且人工種植面積較小，在月見草中Y -亞麻酸的含量較低，僅為8 % 10 %。 因此，國內(nèi)外對Y -亞麻酸的提取均面臨原料短缺的難題。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題在于克服上述Y -亞麻酸來源匱乏的缺點，提供-種操作簡單、原料易得、提取率高、提取物中Y-亞麻酸含量高的絞股藍(lán)種子油的制備方法。解決上述技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案由下述步驟組成1、提取將絞股藍(lán)種子晾干、粉碎成65目的細(xì)粉，置于索氏提取器中，以石油醚為提取劑， 絞股藍(lán)種子與石油醚的質(zhì)量比為1 1 5，70 75°C提取6 8小時，蒸餾掉石油醚，得到絞股藍(lán)種子油。2、皂化酸解向絞股藍(lán)種子油中加入皂化液，絞股藍(lán)種子油與皂化液的質(zhì)量比為1 0.2 1， 通入氮氣，攪拌，40 45°C回流1小時，用lmol/L的鹽酸調(diào)節(jié)pH值至2. 0，分離出油相，用 40°C熱水沖洗，得到含Y-亞麻酸的絞股藍(lán)種子油。上述的皂化液是氫氧化鈉與蒸餾水、乙醇的質(zhì)量比為1 5.6 7的混合溶液。3、尿素包合向含Y-亞麻酸的絞股藍(lán)種子油中加入尿素和乙醇，含Y-亞麻酸的絞股藍(lán)種子油與尿素、乙醇的質(zhì)量比為1 0.1 2 10 30，60 651攪拌回流30分鐘，冷卻，-201 冷凍12小時，抽濾，濾液用lmol/L的鹽酸調(diào)節(jié)pH值至3. 0 3. 5，分離出油相，再重復(fù)尿素包合1次，得到純化的含Y-亞麻酸的絞股藍(lán)種子油。本發(fā)明的提取步驟1中，絞股藍(lán)種子與石油醚的最佳質(zhì)量比為1 4. 5 ；在皂化酸解步驟2中，絞股藍(lán)種子油與皂化液的最佳質(zhì)量比為1 0.45;在尿素包合步驟3中，含 Y-亞麻酸的絞股藍(lán)種子油與尿素、乙醇的最佳質(zhì)量比為1 0.4 11。
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本發(fā)明從絞股藍(lán)種子中提取含Y-亞麻酸的絞股藍(lán)種子油。實驗結(jié)果證明，以絞股藍(lán)種子提取絞股藍(lán)種子油，其出油率約為30%，制備得到的絞股藍(lán)種子油中Y-亞麻酸的含量為61. 72% 62. 84%。本發(fā)明原料易得，制備方法簡單，得到的絞股藍(lán)種子油中 Y -亞麻酸含量高，可用于大規(guī)模地工業(yè)化生產(chǎn)。


圖1是甲酯化絞股藍(lán)種子油和甲酯化月見草油的總離子流色譜圖。圖2是甲酯化絞股藍(lán)種子油中Y-亞麻酸甲酯的質(zhì)譜圖。圖3是甲酯化月見草油中Y-亞麻酸甲酯的質(zhì)譜圖。圖4是甲酯化絞股藍(lán)種子油中Y-亞麻酸甲酯的氣相色譜圖。圖5是Y-亞麻酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)樣品的氣相色譜圖。
具體實施例方式下面結(jié)合附圖和實施例對本發(fā)明進(jìn)一步詳細(xì)說明，但本發(fā)明不限于這些實施例。實施例11、提取取絞股藍(lán)種子100g，晾干、粉碎成65目的細(xì)粉，置于索氏提取器中，加入450g石油醚，70 75°C提取6小時，65°C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，蒸餾掉石油醚，得到絞股藍(lán)種子油32g。2、皂化酸解取25g絞股藍(lán)種子油，置于燒瓶中，加入11. 25g皂化液，通入氮氣并攪拌，40 45°C回流1小時，倒出混合液，用lmol/L的鹽酸調(diào)節(jié)pH值至2. 0，分離出油相，用40°C熱水沖洗3次，得到含Y-亞麻酸的絞股藍(lán)種子油，絞股藍(lán)種子油中Y-亞麻酸的含量為 49. 43%o上述的皂化液是氫氧化鈉、蒸餾水與乙醇的質(zhì)量比為1 5.6 7的混合溶液。3、尿素包合取步驟2中含γ -亞麻酸的絞股藍(lán)種子油20g，加入尿素Sg、乙醇220g，攪拌，升溫至60 65°C，回流30分鐘，冷卻，放入冰箱中，_20°C包合12小時，抽濾，棄去尿素，濾液用lmol/L的鹽酸調(diào)節(jié)pH值至3. 0 3. 5，分離出油相，再加入尿素Sg、乙醇220g，重復(fù)尿素包合1次，得到純化的含Y-亞麻酸的絞股藍(lán)種子油，絞股藍(lán)種子油中Y-亞麻酸的含量為 62. 84%。實施例21、提取取絞股藍(lán)種子100g，晾干、粉碎成65目的細(xì)粉，置于索氏提取器中，加入500g石油醚，70 75°C提取8小時，65°C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，蒸餾掉石油醚，得到絞股藍(lán)種子油35g。2、皂化酸解取25g絞股藍(lán)種子油，置于燒瓶中，加入25g皂化液，通入氮氣并攪拌，40 45°C 回流1小時，倒出混合液，用lmol/L的鹽酸調(diào)節(jié)pH值至2. 0，分離出油相，用40°C熱水沖洗 3次，得到含Y-亞麻酸的絞股藍(lán)種子油，絞股藍(lán)種子油中Y-亞麻酸的含量為49. 43%。上述的皂化液是氫氧化鈉、蒸餾水與乙醇的質(zhì)量比為1 5.6 7的混合溶液。
3、尿素包合取步驟2中含γ -亞麻酸的絞股藍(lán)種子油20g，加入尿素40g、乙醇600g，攪拌，升溫至60 65°C，回流30分鐘，冷卻，放入冰箱中，_20°C包合12小時，抽濾，棄去尿素，濾液用lmol/L的鹽酸調(diào)節(jié)pH值至3. 0 3. 5，分離出油相，再重復(fù)尿素包合1次，得到純化的含 Y-亞麻酸的絞股藍(lán)種子油，絞股藍(lán)種子油中Y-亞麻酸的含量為61. 72%。實施例31、提取取絞股藍(lán)種子100g，晾干、粉碎成65目的細(xì)粉，置于索氏提取器中，加入IOOg石油醚，70 75°C提取7小時，65°C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，蒸餾掉石油醚，得到絞股藍(lán)種子油30g。2、皂化酸解 取25g絞股藍(lán)種子油，置于燒瓶中，加入5g皂化液，通入氮氣并攪拌，40 45°C回流1小時，倒出混合液，用lmol/L的鹽酸調(diào)節(jié)pH值至2.0，分離出油相，用40°C熱水沖洗3 次，得到含Y-亞麻酸的絞股藍(lán)種子油，絞股藍(lán)種子油中Y-亞麻酸的含量為40. 42%。上述的皂化液是氫氧化鈉、蒸餾水與乙醇的質(zhì)量比為1 5.6 7的混合溶液。3、尿素包合取步驟2中含γ -亞麻酸的絞股藍(lán)種子油20g，加入尿素2g、乙醇200g，攪拌，升溫至60 65°C，回流30分鐘，冷卻，放入冰箱中，_20°C包合12小時，抽濾，棄去尿素，濾液用lmol/L的鹽酸調(diào)節(jié)pH值至3. 0 3. 5，分離出油相，再重復(fù)尿素包合1次，得到純化的含 Y-亞麻酸的絞股藍(lán)種子油，絞股藍(lán)種子油中Y-亞麻酸的含量為61. 75%。為了確定本發(fā)明的最佳工藝條件，發(fā)明人進(jìn)行了大量的實驗室研究試驗，各種試驗情況如下試驗材料絞股藍(lán)全草及種子；Y -亞麻酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)樣品，購買于sigma公司。試驗儀器QP2010型氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀(日本SHIMADZU公司)，GC條件RTX-5MS彈性石英毛細(xì)管(0. 25mmX30mX0. 25 μ m)；柱前壓75. 4kPa ；載氣為氦氣 (99. 999%)；柱內(nèi)載氣流量1.30mL/min ；分流比20 1 ；升溫程序從50°C開始，先以9°C / min升至150°C，維持anin，再以5°C /min升至200°C，最后以3°C /min升至沈0°C，維持 5min ；汽化室溫度250°C ；進(jìn)樣量LOyL ；MS條件EI源，離子源溫度200°C ；接口溫度250°C ； 溶劑延時3. 5min ；掃描范圍40 600m/z。6890N型氣相色譜儀(Palo Alto, CA, USA)，色譜條件HP_5ms彈性石英毛細(xì)管 (30mX0. 25mm i. d.，film thickness 0. 25mm)；載氣為氦氣(99.999%)；柱內(nèi)載氣流量 0.4mL/min ；分流比1 25 ；升溫程序從60°C開始，先以9°C/min升至150°C，再以5°C / min升至200°C，維持3min，最后以3°C /min升至230°C，維持^iin ；汽化室溫度250°C ；進(jìn)樣量1. 0μ L。1、原料的選擇取絞股藍(lán)種子、根狀莖、地上莖、葉各100g，分別晾干、粉碎成65目細(xì)粉，置于索氏提取器中，加入450g石油醚，70 75°C提取6小時，蒸餾掉石油醚，得到絞股藍(lán)油，所得到的絞股藍(lán)油分別采用氫氧化鉀-甲醇直接酯化法進(jìn)行甲酯化，通過氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法分別測定甲酯化絞股藍(lán)油的組成及組分含量，測試及計算結(jié)果見表1。表1絞股藍(lán)各部位中脂肪酸組成及其相對含量
峰號保留時間 (分鐘)化合物相對含量(％)根狀莖地上莖葉種子122. 85棕櫚油酸甲酯6. 27——一223. 06棕櫚酸甲酯23. 2121.4417. 27. 2326. 58亞油酸甲酯19. 3617.87. 538.6426. 73α -亞麻酸甲酯24. 6733. 3253.21一526. 83油酸甲酯6. 62一一4. 1627. 27硬脂酸甲酯3. 533. 725. 213.4729. 79Y-亞麻酸甲酯一一一49. 34由表1可見，在保留時間為26. 73分鐘時，由絞股藍(lán)的根狀莖、地上莖和葉提取的絞股藍(lán)油甲酯化后都檢測到α-亞麻酸甲酯，而由絞股藍(lán)種子提取的絞股藍(lán)油甲酯化后未檢測到α-亞麻酸甲酯的存在。但是，由絞股藍(lán)種子提取的絞股藍(lán)油甲酯化后在保留時間為29. 79分鐘時，出現(xiàn)了強(qiáng)的Y-亞麻酸甲酯峰，其相對含量為49. 34%。實驗結(jié)果說明，甲酯化的絞股藍(lán)種子油中含有Y-亞麻酸甲酯，即絞股藍(lán)油中含有Y-亞麻酸。為了進(jìn)一步確定絞股藍(lán)種子油中含有Y-亞麻酸，進(jìn)行了下面的實驗采用氣相色譜-質(zhì)譜法對甲酯化絞股藍(lán)種子油中的Y -亞麻酸甲酯和甲酯化月見草油中的Y-亞麻酸甲酯進(jìn)行對比測試，實驗結(jié)果見圖1 3。圖1中，曲線A為甲酯化絞股藍(lán)種子油的總離子流色譜圖，曲線B是甲酯化月見草油的總離子流色譜圖。圖2是甲酯化絞股藍(lán)種子油中Y-亞麻酸甲酯的質(zhì)譜圖。圖3是甲酯化月見草油中Y-亞麻酸甲酯的質(zhì)譜圖。由圖1 3可見，甲酯化月見草油在保留時間為29. 79分鐘時，對應(yīng)的組分為 Y -亞麻酸甲酯，甲酯化絞股藍(lán)種子油在保留時間為29. 79分鐘時，對應(yīng)組分的質(zhì)譜圖與甲酯化月見草油中Y-亞麻酸甲酯的質(zhì)譜圖相同，說明經(jīng)甲酯化的絞股藍(lán)種子油中含有 Y-亞麻酸甲酯，即絞股藍(lán)種子油中含有Y-亞麻酸。發(fā)明人通過氣相色譜法對甲酯化的絞股藍(lán)種子油中的Y-亞麻酸甲酯和購買的 Y-亞麻酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)樣品進(jìn)行進(jìn)一步對比測試，測試結(jié)果見圖4和圖5，其中圖4是甲酯化絞股藍(lán)種子油中Y-亞麻酸甲酯的氣相色譜圖，圖5是Y-亞麻酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)樣品的氣相色譜圖。由圖4和圖5可見，甲酯化絞股藍(lán)種子油中Y-亞麻酸甲酯的保留時間是10 分鐘，Y -亞麻酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)樣品的保留時間是23. 90分鐘，兩者的保留時間基本相同，說明甲酯化絞股藍(lán)種子油中含有Y-亞麻酸甲酯，即絞股藍(lán)種子油中含有Y-亞麻酸。通過上述試驗可見，絞股藍(lán)種子油中含有大量的Y-亞麻酸。因此，本發(fā)明以絞股藍(lán)種子為原料制備絞股藍(lán)種子油。2、Y-亞麻酸的富集發(fā)明人按照表2設(shè)計正交試驗，取皂化酸解后得到的含Y -亞麻酸的絞股藍(lán)種子
6油20g，用尿素包合1次，考查尿素包合過程中尿素用量、乙醇用量、包合溫度和包合時間對 Y -亞麻酸提取率的影響，實驗結(jié)果見表3。表2正交試驗設(shè)計表
權(quán)利要求
1.一種含Y-亞麻酸的絞股藍(lán)種子油的制備方法，其特征在于由下述步驟組成(1)提取將絞股藍(lán)種子晾干、粉碎成65目的細(xì)粉，置于索氏提取器中，以石油醚為提取劑，絞股藍(lán)種子與石油醚的質(zhì)量比為1 1 5，70 75°C提取6 8小時，蒸餾掉石油醚，得到絞股藍(lán)種子油；(2)皂化酸解向絞股藍(lán)種子油中加入皂化液，絞股藍(lán)種子油與皂化液的質(zhì)量比為1 0.2 1，通入氮氣，攪拌，40 45°C回流1小時，用lmol/L的鹽酸調(diào)節(jié)pH值至2. 0，分離出油相，用40°C 熱水沖洗，得到含Y-亞麻酸的絞股藍(lán)種子油；上述的皂化液是氫氧化鈉與蒸餾水、乙醇的質(zhì)量比為1 5.6 7的混合溶液；(3)尿素包合向含Y-亞麻酸的絞股藍(lán)種子油中加入尿素和乙醇，含Y-亞麻酸的絞股藍(lán)種子油與尿素、乙醇的質(zhì)量比為1 0.1 2 10 30，60 651攪拌回流30分鐘，冷卻，-201 冷凍12小時，抽濾，濾液用lmol/L的鹽酸調(diào)節(jié)pH值至3. 0 3. 5，分離出油相，再重復(fù)尿素包合1次，得到純化的含Y-亞麻酸的絞股藍(lán)種子油。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的含Y-亞麻酸的絞股藍(lán)種子油的制備方法，其特征在于在提取步驟(1)中，絞股藍(lán)種子與石油醚的質(zhì)量比為1 4. 5;在皂化酸解步驟O)中，絞股藍(lán)種子油與皂化液的質(zhì)量比為1 0.45 ；在尿素包合步驟(3)中，含Y-亞麻酸的絞股藍(lán)種子油與尿素、乙醇的質(zhì)量比為1 0.4 11。
全文摘要
一種含γ-亞麻酸的絞股藍(lán)種子油的制備方法，以石油醚為提取劑，從絞股藍(lán)種子中提取絞股藍(lán)種子油，對絞股藍(lán)種子油進(jìn)行皂化酸解、尿素包合，得到純化的含γ-亞麻酸的絞股藍(lán)種子油。實驗結(jié)果證明，以絞股藍(lán)種子提取絞股藍(lán)種子油，其出油率約為30％，制備得到的絞股藍(lán)種子油中γ-亞麻酸的含量為61.72％～62.84％。本發(fā)明原料易得，制備方法簡單，得到的絞股藍(lán)種子油中γ-亞麻酸含量高，可用于大規(guī)模地工業(yè)化生產(chǎn)。
文檔編號C11B3/00GK102206543SQ20111007762
公開日2011年10月5日 申請日期2011年3月29日 優(yōu)先權(quán)日2011年3月29日
發(fā)明者姜東亮, 肖婭萍, 馬彩霞 申請人:陜西師范大學(xué)