專利名稱：包含蛋白酶的儲存穩(wěn)定的液體洗滌劑或清洗劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及液體洗滌劑和清洗劑的領(lǐng)域。本發(fā)明特別地涉及包含酶的液體洗滌劑和清洗劑，其包含與膦酸鹽/酯組合的特定蛋白酶；并且還特別地涉及這類洗滌劑和清洗劑的用途和使用方法。本發(fā)明還涉及特定的蛋白酶在包含膦酸鹽/酯的液體洗滌劑或清洗劑中的用途。
背景技術(shù)：
迄今為止，對于洗滌劑和清洗劑優(yōu)選使用枯草桿菌蛋白酶類型的蛋白酶?，F(xiàn)有技術(shù)中已知用于洗滌劑或清洗劑的蛋白酶最初來自微生物，例如芽孢桿菌屬(Bacillus)、鏈霉菌屬(Str印tomyces)、腐質(zhì)霉屬(Humicola)或假單胞菌屬(I^seudomonas)；和/或利用本身已知的生物技術(shù)方法通過合適的微生物制備，例如通過芽孢桿菌屬或絲狀真菌的轉(zhuǎn)基因表達宿主。膦酸鹽/酯特別存在于現(xiàn)有技術(shù)的液體洗滌劑中，但是也存在于清洗劑中。例如它們用作配位劑用于防止沉淀，或者用作漂白劑穩(wěn)定劑。當作為配位劑存在時，它們用于例如軟化水。它們能夠包圍溶液中諸如Ca2+的陽離子，并且因而改變該陽離子的化學行為。 在鈣的情況下，形成水硬度的特性消失。其他陽離子也可以被配合，并且因而保護免于進行化學反應(yīng)。它們還可以用作緩蝕劑或過氧化物穩(wěn)定劑，特別是在漂白劑中。國際專利申請WO 95/23221公開來自遲緩芽孢桿菌(Bacillus lentus)DSM 5483 的枯草桿菌蛋白酶類型的蛋白酶或蛋白酶變體，其適合用于洗滌劑或清洗劑。這些蛋白酶還包括這樣的蛋白酶，其可以包含氨基酸取代R99E、A、S或G。另外，據(jù)公開洗滌劑可以包含膦酸鹽/酯，特別是聚膦酸鹽/酯。洗滌劑可以是固體或液體。然而，該文件并未公開必須包含與這樣的蛋白酶組合的膦酸鹽/酯的任何具體洗滌劑和/或清洗劑。包含蛋白酶的現(xiàn)有技術(shù)液體洗滌劑和清洗劑的一個缺點是它們通常未表現(xiàn)出令人滿意的蛋白水解活性，特別是在低溫下，例如10°c -50°c，特別是10°C -40°c或 20°C-40°C，而且洗滌劑或清洗劑因此未表現(xiàn)出最佳清洗性能。包含蛋白酶的現(xiàn)有技術(shù)液體洗滌劑和清洗劑的另一缺點是它們儲存穩(wěn)定性不足，并因此在很短的時間后喪失相當程度的蛋白水解活性。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是克服上述缺點，并提供表現(xiàn)出有利蛋白水解活性的液體洗滌劑或清洗劑，特別是在如上文所述的溫度下，此外還表現(xiàn)出改善的儲存穩(wěn)定性。因此，本發(fā)明提供液體洗滌劑或清洗劑，其包含(al)蛋白酶，其包含與SEQ ID no. 1所示的氨基酸序列至少80%相同的氨基酸序列，并且在根據(jù)SEQ ID no. 1編號的位置99處包含氨基酸谷氨酸(E)或天冬氨酸(D)；或者(a2)蛋白酶，其包含與SEQ ID no. 1所示的氨基酸序列至少80%相同的氨基酸序列，并且在根據(jù)SEQ ID no. 1編號的位置99處包含氨基酸天冬酰胺(N)或谷氨酰胺(Q)； 或者(a3)蛋白酶，其包含與SEQ ID no. 1所示的氨基酸序列至少80%相同的氨基酸序列，并且在根據(jù)SEQ ID no. 1編號的位置99處包含氨基酸丙氨酸(A)或甘氨酸(G)或絲氨酸⑶；以及(b)膦酸鹽/酯。令人驚訝地注意到，包含這樣的蛋白酶與膦酸鹽/酯的組合的液體洗滌劑或清洗劑表現(xiàn)出關(guān)于蛋白酶敏感的污漬的有利清洗性能，另外在儲存中有利地穩(wěn)定。本發(fā)明的洗滌劑或清洗劑的優(yōu)選實施方案在10°c -60°c的溫度下，還優(yōu)選在低溫下例如10°C -50 10°C -40°C或20°C -40°C下，表現(xiàn)出關(guān)于至少一種蛋白酶敏感類型的污漬的有利清洗性能。 因此本發(fā)明的洗滌劑或清洗劑使得能夠改善去除紡織品和/或堅硬表面(例如盤子)上的至少一種、優(yōu)選多種蛋白酶敏感類型的污漬。關(guān)于上文所提到的國際專利申請1095/^23221, 本發(fā)明因此涉及特別有利的選擇，這使得實現(xiàn)高性能、儲存穩(wěn)定的液體洗滌劑或液體清洗劑。為了本發(fā)明的目的，清洗性能理解為表示關(guān)于對蛋白酶降解敏感的一種或多種類型的污漬的減輕性能，特別是洗衣污漬或陶器污漬。這樣的洗衣污漬的實例為棉布上的血-乳液/墨汁、棉布上的全蛋/色素、棉布上的巧克力-乳汁/墨汁、聚酯/棉布上的花生油-色素/墨汁、棉布上的草或棉布上的可可，特別如下文進一步所述。這類陶器污漬的實例為牛奶、肉末或蛋黃。為了本發(fā)明的目的，包含蛋白酶的洗滌劑或清洗劑或者由這樣的洗滌劑或清洗劑形成的洗滌液或清洗液以及蛋白酶本身均表現(xiàn)出各自的清洗性能。因此水解酶的清洗性能有助于所述洗滌劑或清洗劑或者由所述洗滌劑或清洗劑形成的洗滌液或清洗液的清洗性能。清洗性能優(yōu)選如下文進一步所述來測定。洗滌液或清洗液理解為包含洗滌劑或清洗劑的工作溶液，該溶液作用于紡織品或織物(洗滌液)或堅硬表面(清洗液)，并且因此與紡織品或織物或堅硬表面上存在的污漬接觸。通常，當洗滌或清洗過程開始并且在例如洗衣機、洗碗機或另一合適的容器中用水稀釋洗滌劑或清洗劑時產(chǎn)生洗滌液或清洗液。本發(fā)明的洗滌劑或清洗劑中所含的洗滌劑或清洗劑包含與SEQ ID no. 1所示的氨基酸序列至少80%相同的氨基酸序列，并且其在根據(jù)SEQ ID no. 1編號的位置99處包含氨基酸谷氨酸(E)或天冬氨酸(D)或者氨基酸天冬酰胺(N)或谷氨酰胺(Q)或者氨基酸丙氨酸(A)或甘氨酸(G)或絲氨酸( 。更優(yōu)選地，所述氨基酸序列與SEQ ID no. 1所示的氨基酸序列至少 81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、 94%、95%、96%、97%、98%相同，并且特別優(yōu)選99%相同。SEQ ID no. 1是來自遲緩芽孢桿菌DSM 5483的成熟堿性蛋白酶的序列，其在國際專利申請W092/21760中公開，并且該公開援引加入本文。根據(jù)本發(fā)明，發(fā)現(xiàn)通過將這樣的蛋白酶加入包含膦酸鹽/酯的液體洗滌劑或清洗劑，獲得儲存特別穩(wěn)定的液體洗滌劑，特別是關(guān)于其儲存之后剩余的蛋白水解活性，特別是在1-5周、1-4周、1. 5-3周的儲存期之后，并且特別優(yōu)選2周之后。本發(fā)明的洗滌劑或清洗劑中所包含的蛋白酶表現(xiàn)出蛋白水解活性，即其能夠水解多肽或蛋白的肽鍵。因此所述蛋白酶為催化肽鍵水解并因此能夠切割肽或蛋白的酶，特別是枯草桿菌蛋白酶。在本發(fā)明的另一實施方案中，所述洗滌劑或清洗劑的特征在于所述蛋白酶進一步包含根據(jù)SEQ ID no. 1編號的以下氨基酸中的至少一個(a)位置3處的蘇氨酸(3T)，(b)位置4處的異亮氨酸GI)，(c)位置61處的丙氨酸、蘇氨酸或精氨酸(61A、61T或61R)，(d)位置巧4處的天冬氨酸或谷氨酸(154D或1ME)，(e)位置188處的脯氨酸(188P)，(f)位置193處的甲硫氨酸(193M)，(g)位置199處的異亮氨酸(1991)，(h)位置211處的天冬氨酸、谷氨酸或甘氨酸Q11D、211E或211G)，⑴氨基酸(a)-(h)的組合。因此除了位置99處的所示氨基酸中的一個，所述蛋白酶包含各自位置處的上文所述氨基酸中的一個或多個。這些氨基酸可以帶來進一步有利的特性和/或進一步增強的現(xiàn)有特性。特別地，上文所述的氨基酸在液體洗滌劑或清洗劑中或者在由這種洗滌劑或清洗劑形成的洗滌液中帶來蛋白水解活性和/或所述蛋白酶穩(wěn)定性的增加。通過將這樣的蛋白酶加入包含膦酸鹽/酯的液體洗滌劑或清洗劑，同樣獲得儲存特別穩(wěn)定的液體洗滌劑， 特別是關(guān)于其儲存之后剩余的蛋白水解活性，特別是在1-5周、1-4周、1.5-3周的儲存期之后，并且特別優(yōu)選2周之后。本文通過將所用的蛋白酶的氨基酸序列與如SEQ ID no. 1所示的來自遲緩芽孢桿菌的蛋白酶的氨基酸序列比對來定義氨基酸位置。因為在現(xiàn)有技術(shù)中來自遲緩芽孢桿菌的蛋白酶構(gòu)成描述蛋白酶和氨基酸變化的重要參考分子，在氨基酸位置分配中參考來自遲緩芽孢桿菌的蛋白酶的編號(SEQID no. 1)是有利的。而且編號基于成熟蛋白。如果所用的蛋白酶的氨基酸序列包含比SEQ ID no. 1的來自遲緩芽孢桿菌的蛋白酶更多數(shù)目的氨基酸殘基，這種分配也特別應(yīng)當使用?；趤碜赃t緩芽孢桿菌的蛋白酶的氨基酸序列中的所示位置，本發(fā)明所用的蛋白酶中的氨基酸位置是在比對中精確分配至這些位置的氨基酸位置。因此，除了位置99，特別有利的位置相應(yīng)為在與SEQ ID no. 1的比對中分配，并因此根據(jù)SEQ ID no. 1編號中的位置3、4、61、154、188、193、199和211。以下氨基酸殘基在來自遲緩芽孢桿菌的蛋白酶的野生型分子中的所示位置處S3、V4、G61、S154、A188、V193、 V199和L211。氨基酸3T、4I、61A、154D、154E、211D、211G和211E特別優(yōu)選，條件是本發(fā)明所用的蛋白酶中的相應(yīng)位置未天然地采用這些優(yōu)選氨基酸中的一個。例如，3T和41取代通過對分子的穩(wěn)定效應(yīng)導(dǎo)致蛋白酶的儲存穩(wěn)定性和清洗性能的改善，并且因此導(dǎo)致包含蛋白酶的含膦酸鹽/酯的液體洗滌劑或清洗劑的清洗性能改善。因為各自位置提供上文所述氨基酸，如果SEQ ID no. 1在各自位置包含另一氨基酸，可以產(chǎn)生來自SEQ ID no. 1的進一步的序列偏差。根據(jù)存在的來自SEQ ID no. 1的序列偏差的數(shù)目，因此產(chǎn)生SEQ ID no. 1中的本發(fā)明所用的蛋白酶可以表現(xiàn)的不同最大相同性值，關(guān)于所有其他氨基酸其甚至應(yīng)當匹配SEQ ID no. 1。在每種單獨情況下對于所建議的氨基酸的每種可能的組合應(yīng)當考慮這個因素，而且還取決于蛋白酶的氨基酸序列的長度。例如，具有1、2、3、4、5、6、7、8或9個序列變化，對于長度為269個氨基酸的氨基酸序列，最大相同性量分別為 99. 63%,99. 26%,98. 88%,98. 51%,98. 14%,97. 77%,97. 40%,97. 03% 或96. 65 %，或者對于長度為275個氨基酸的氨基酸序列，分別為99. 64 %、99. 27 %、 98. 91%,98. 55%,98. 18%,97. 82%,97. 45%,97. 09%或 96. 73%。核酸或氨基酸序列的相同性是通過序列比較來確定的。這樣的比較通過在核苷酸序列或氨基酸序列中互相分配相似的序列來進行。這種序列比較優(yōu)選在現(xiàn)有技術(shù)建立的常規(guī)使用的 BLAST 算法的基礎(chǔ)上進行(Altschul，S. F.，Gish, W.，Miller, W.，Myers, Ε. W. & Lipman,D. J. (1990)" Basic localalignment search tool. “ J. Mol. Biol. 215 :403-410, and Altschul, Stephan F. , Thomas L. Madden, Alejandro A. Schaffer, Jinghui Zhang, Hheng Zhang,WebbMiller,and David J. Lipman(1997) :" Gapped BLAST and PSI-BLAST a newgeneration of protein database search programs“ ；Nucleic Acids Res. ,25, S. 3389-340 ，并且原則上通過互相分配核酸或氨基酸序列中核苷酸或氨基酸的相似序列來進行。所考慮的位置的表格分配稱為比對?，F(xiàn)有技術(shù)中可用的另一算法為FASTA算法。利用計算機軟件常規(guī)創(chuàng)建序列比較(比對)，特別是多個序列比較。例如經(jīng)常使用 Clustal 系列(參見例如 Chenna et al. (2003) Multiple sequence alignment with the Clustal series of programs. Nucleic Acid Research 31,3497-3500)、T-Coffee (參見例如Notredame et al. (2000) :T-Coffee :A novel method for multiple sequence alignment. J. Mol. Biol. 302，205-217)或者基于這些程序或算法的程序。例如經(jīng)常使用 Clustal (參見例如 Chenna et al. (2003) :Multiple sequence alignment with the Clustal series of programs. Nucleic Acid Research 31，3497-3500)、T-Coffee (參見例如Notredame et al. (2000) :T~Coffee :A novel method for multiple sequence alignment. J. Mol. Biol. 302，205-217)以及BLAST或FASTA用于數(shù)據(jù)庫檢索，或者基于這些程序或算法的程序。為了本發(fā)明的目的，序列比較和比對優(yōu)選用計算機程序Vector NTI Suite 10.3 (Invitrogen Corporation,1600Faraday Avenue，Carlsbad，California，USA) 利用預(yù)設(shè)的缺省參數(shù)進行。這樣的比較允許做出關(guān)于所比較的序列的相似性的說明。常規(guī)以百分比相同性 (即其中相同的核苷酸或氨基酸殘基的比例)或互相對應(yīng)的位置來說明。較廣泛的術(shù)語“同源性”還包括考慮氨基酸序列中保守的氨基酸取代，因此氨基酸具有相似的化學活性，因為它們一般在蛋白內(nèi)發(fā)揮相似的化學活性。因此所比較的序列的相似性還可以百分比同源性或百分比相似性來說明?？梢詫φ麄€多肽或基因或者僅對單個結(jié)構(gòu)域作出關(guān)于相同性和/ 或同源性的說明。因此各種核酸或氨基酸序列的同源或相同結(jié)構(gòu)域通過序列中的匹配來定義。這類結(jié)構(gòu)域經(jīng)常表現(xiàn)出相同功能。它們可以很小，并且僅包含幾個核苷酸或氨基酸。這類小結(jié)構(gòu)域經(jīng)常發(fā)揮對蛋白的總體活性必不可少的功能。因此序列匹配僅涉及單個任選的小結(jié)構(gòu)域可以是有意義的。然而，如果沒有另外說明，在本申請中關(guān)于相同性或同源性的說明在每種情況下涉及所示核酸或氨基酸序列的整個長度。在本發(fā)明的這個主題的另一實施方案中，如上文所述，所述洗滌劑或清洗劑的特征在于所述蛋白酶包含氨基酸序列，所述氨基酸序列與SEQ IDno. 1所示的氨基酸序列相同，并且是通過保守氨基酸單取代或多取代獲得自或可獲得自SEQ ID no. 1的蛋白酶。術(shù)語“保守氨基酸取代”表示一個氨基酸殘基取代(交換)另一個氨基酸殘基，這種取代不導(dǎo)致取代氨基酸的位置中的極性或電荷變化，例如非極性氨基酸殘基取代另一非極性氨基酸殘基。為了本發(fā)明的目的，保守氨基酸取代包括例如G = A = S、I=V = L = M、D = E、N =Q、K = R、Y = F，S = Τ、G = A = I= V = L = M = Y = F = W = P = S = Τ。在本發(fā)明的另一實施方案中，本發(fā)明的洗滌劑或清洗劑的進一步特征在于其清洗性能至少對應(yīng)于包含蛋白酶的洗滌劑或清洗劑的清洗性能，所述蛋白酶包含對應(yīng)于SEQ ID no. 2 或 SEQ ID no. 3 或 SEQ ID no. 4 或 SEQID no. 5 或 SEQ ID no. 6 或 SEQ ID no. 7 或 SEQ ID no. 8所示氨基酸序列的氨基酸序列，清洗性能在包含4. 0-8. 0克/升洗滌液的添加率的洗滌劑和蛋白酶的洗滌系統(tǒng)中測定，待比較的蛋白酶在相同活性下使用，并且相對于一種或多種污漬類型棉布上的血-乳液/墨汁、棉布上的全蛋/色素(全蛋/煤煙)、聚酯/棉布上的花生油-色素/墨汁和棉布上的草測定清洗性能，特別是相對于以下污漬類型中的一種或多種-棉布上的血-乳液/墨汁可獲得自CFT(CenterFor Testmaterials) B. V. Vlaardingen, Netherlands 的產(chǎn)品編號 C-05-棉布上的全蛋/色素(全蛋/煤煙)可獲得自wfkTestgewebe GmbH ； Briiggen-Bracht,Germany 的產(chǎn)品編號 10N，或者可獲得自 CFT (Centre For Testmaterials) B. V. Vlaardingen, Netherlands 的產(chǎn)品 C-S-37-聚酯/棉布上的花生油-色素/墨汁可獲得自CFT(CenterFor Testmaterials)B. V. Vlaardingen, Netherlands ^jfm^^ PC-10-棉布上的草可獲得自 Eidgenossische Material-und Prufanstalt (EMPA) Testmaterialien AG, St. Gallen, Switzerland 的產(chǎn)品編號 164,通過測量洗滌的紡織品的白度，洗滌過程在20°C的溫度下進行至少30分鐘，任選 60分鐘，并且水表現(xiàn)出15. 5-16. 5° dH(德國硬度)的硬度。用于洗滌系統(tǒng)的洗滌劑為液體洗滌劑，其優(yōu)選具有表1所示的組成(所有值均以重量百分比表示)表1
權(quán)利要求
1.一種液體洗滌劑或清洗劑，其包含(al)蛋白酶，其包含與SEQ ID no. 1所示的氨基酸序列至少80%相同的氨基酸序列， 并且在根據(jù)SEQ ID no. 1編號的位置99處包含氨基酸谷氨酸(E)或天冬氨酸(D)；或者(a2)蛋白酶，其包含與SEQ ID no. 1所示的氨基酸序列至少80%相同的氨基酸序列， 并且在根據(jù)SEQ ID no. 1編號的位置99處包含氨基酸天冬酰胺(N)或谷氨酰胺(Q)；或者 (a3)蛋白酶，其包含與SEQ ID no. 1所示的氨基酸序列至少80%相同的氨基酸序列， 并且在根據(jù)SEQ ID no. 1編號的位置99處包含氨基酸丙氨酸(A)或甘氨酸(G)或絲氨酸 ⑶；以及(b)膦酸鹽/酯。
2.如權(quán)利要求1所述的洗滌劑或清洗劑，其中，所述蛋白酶進一步包含根據(jù)SEQID no. 1編號的以下氨基酸中的至少一個(a)位置3處的蘇氨酸(3T)，(b)位置4處的異亮氨酸(41)，(c)位置61處的丙氨酸、蘇氨酸或精氨酸(61A、61T或61R)，(d)位置巧4處的天冬氨酸或谷氨酸(154D或1ME)，(e)位置188處的脯氨酸(188P)，(f)位置193處的甲硫氨酸(193M)，(g)位置199處的異亮氨酸(1991)，(h)位置211處的天冬氨酸、谷氨酸或甘氨酸Q11D、211E或211G)， ⑴氨基酸(a)-(h)的組合。
3.一種液體洗滌劑或清洗劑，其包含(b)蛋白酶，其選自a.蛋白酶，其包含SEQ ID no. 2 或 SEQ ID no. 3 或 SEQ ID no. 4 或 SEQ ID no. 5 或 SEQ ID no. 6 或 SEQ ID no. 7 或 SEQ ID no. 8 的氨基酸序列；b.蛋白酶，相對于SEQ ID no. 2 或 SEQ ID no. 3 或 SEQ ID no. 4 或 SEQ ID no. 5 或 SEQ ID no. 6或SEQ ID no. 7或SEQ ID no. 8，其包含在至少一個位置處修飾的氨基酸序列，根據(jù)SEQ ID no. 1編號的所述修飾選自i.位置3處的蘇氨酸(3T)， .位置4處的異亮氨酸01)，iii.位置61處的丙氨酸、蘇氨酸或精氨酸(61A、61T或61R)，iv.位置巧4處的天冬氨酸或谷氨酸(154D或1ME)，v.位置188處的脯氨酸(188P)，vi.位置193處的甲硫氨酸(193M)，vii.位置199處的異亮氨酸(1991)，viii.位置211處的天冬氨酸、谷氨酸或甘氨酸Q11D、211E或211G)，ix.氨基酸(i)-(viii)的組合；(c)膦酸鹽/酯。
4.如權(quán)利要求1-3中任一項所述的洗滌劑或清洗劑，其中所述膦酸鹽/酯選自1-羥基乙烷-1，1- 二膦酸(HEDP)、氨基三(亞甲基膦酸)(ATMP)、二亞乙基三胺五(亞甲基膦酸)(DTPMP或DETPMP或DTPNT)、乙二胺四(亞甲基膦酸)(EDTMP)、2-膦?；⊥?1，2，4-三羧酸(PBS-AM)及上述物質(zhì)的組合。
5.如權(quán)利要求1-4中任一項所述的洗滌劑或清洗劑，其中所述膦酸鹽/酯存在的量為 0. 01-4wt. %，和/或相對于活性蛋白，所述蛋白酶存在的量為lX10_8-5wt. %。
6.如權(quán)利要求1-5中任一項所述的洗滌劑或清洗劑，其進一步包含選自以下物質(zhì)的組分i.陰離子和/或聚陰離子物質(zhì)，和/或 .陽離子和/或聚陽離子物質(zhì)，和/或 iii.包含羥基和/或多羥基的物質(zhì)。
7.如權(quán)利要求1-6中任一項所述的洗滌劑或清洗劑，其包含至少一種其他成分，特別是選自表面活性劑、助洗劑、過氧化合物、漂白活化劑、醇、酸、泛灰抑制劑、熒光增白劑、抑泡劑、水溶性鹽、增稠劑、揮發(fā)性堿和/或堿、親水劑及上述物質(zhì)的組合的成分。
8.如權(quán)利要求1-7中任一項所述的洗滌劑或清洗劑，其包含至少一種其他酶，特別是蛋白酶、淀粉酶、纖維素酶、半纖維素酶、甘露聚糖酶、鞣酸酶、木聚糖酶、黃原膠酶、β -葡糖苷酶、卡拉膠酶、過氧化氫酶、氧化酶、氧化還原酶或脂肪酶，優(yōu)選上述酶的混合物。
9.權(quán)利要求1-8中任一項所述的洗滌劑或清洗劑用于從紡織品或堅硬表面去除蛋白酶敏感性污漬的用途。
10.一種用于清洗紡織品或堅硬表面的方法，其中在至少一個方法步驟中使用權(quán)利要求1-8中任一項所述的洗滌劑或清洗劑。
11.如權(quán)利要求10所述的方法，其中所述膦酸鹽/酯在所述洗滌液中存在的濃度為 0. 00075-0. 05wt. %，和/或所述蛋白酶在所述洗滌液中存在的濃度為0. 0005-0. 03wt. %0
12.如權(quán)利要求10或11所述的方法，其在10°C_60°C的溫度下進行。
13.蛋白酶在還包含膦酸鹽/酯的液體洗滌劑或清洗劑中提供蛋白水解活性的用途， (al)所述蛋白酶包含與SEQ ID no. 1所示的氨基酸序列至少80%相同的氨基酸序列，并且在根據(jù)SEQ ID no. 1編號的位置99處包含氨基酸谷氨酸(E)或天冬氨酸(D)；或者(a2)所述蛋白酶包含與SEQ ID no. 1所示的氨基酸序列至少80%相同的氨基酸序列， 并且在根據(jù)SEQ ID no. 1編號的位置99處包含氨基酸天冬酰胺(N)或谷氨酰胺(Q)；或者 (a3)所述蛋白酶包含與SEQ ID no. 1所示的氨基酸序列至少80%相同的氨基酸序列，并且在根據(jù)SEQ ID no. 1編號的位置99處包含氨基酸丙氨酸(A)或甘氨酸(G)或絲氨酸 ⑶。
14.如權(quán)利要求13所述的用途，其中所述蛋白酶進一步包含根據(jù)SEQIDno. 1編號的以下氨基酸中的至少一個(j)位置3處的蘇氨酸(3T)， (k)位置4處的異亮氨酸GI)，(1)位置61處的丙氨酸、蘇氨酸或精氨酸(61A、61T或61R)， (m)位置巧4處的天冬氨酸或谷氨酸(154D或1ME)， (η)位置188處的脯氨酸(188Ρ)， (ο)位置193處的甲硫氨酸(193Μ)， (P)位置199處的異亮氨酸(1991)，(q)位置211處的天冬氨酸、谷氨酸或甘氨酸Q11D、211E或211G)， (r)氨基酸(a)-(h)的組合。
15.選自以下蛋白酶的蛋白酶在還包含膦酸鹽/酯的液體洗滌劑或清洗劑中提供蛋白水解活性的用途，a.蛋白酶，其包含SEQ ID no. 2 或 SEQ ID no. 3 或 SEQ ID no. 4 或 SEQID no. 5 或 SEQ ID no. 6 或 SEQ ID no. 7 或 SEQ ID no. 8 的氨基酸序列；b.蛋白酶，相對于SEQ ID no. 2 或 SEQ ID no. 3 或 SEQ ID no. 4 或 SEQID no. 5 或 SEQ ID no. 6或SEQ ID no. 7或SEQ ID no. 8，其包含在至少一個位置處修飾的氨基酸序列，根據(jù)SEQ ID no. 1編號的所述修飾選自i.位置3處的蘇氨酸(3T)， .位置4處的異亮氨酸01)，iii.位置61處的丙氨酸、蘇氨酸或精氨酸(61A、61T或61R)，iv.位置巧4處的天冬氨酸或谷氨酸(154D或1ME)，v.位置188處的脯氨酸(188P)，vi.位置193處的甲硫氨酸(193M)，vii.位置199處的異亮氨酸(1991)，viii.位置211處的天冬氨酸、谷氨酸或甘氨酸Q11D、211E或211G)，ix.氨基酸(i)-(viii)的組合。
全文摘要
一種包含膦酸鹽/酯的液體洗滌劑或清洗劑，期望其表現(xiàn)出有利的蛋白水解活性，并且還表現(xiàn)出改進的儲存穩(wěn)定性。通過使用蛋白酶實現(xiàn)上述目標，所述蛋白酶包含與SEQ ID no.1所示的氨基酸序列至少80％相同的氨基酸序列，并且在根據(jù)SEQ ID no.1編號的位置99處包含氨基酸谷氨酸(E)或天冬氨酸(D)、或者氨基酸天冬酰胺(N)或谷氨酰胺(Q)、或者氨基酸丙氨酸(A)或甘氨酸(G)或絲氨酸(S)。
文檔編號C11D3/36GK102498207SQ201080040795
公開日2012年6月13日 申請日期2010年9月15日 優(yōu)先權(quán)日2009年9月16日
發(fā)明者A·施皮茨, D·森多-米勒, I·普呂澤爾, K·本達, K-H·毛雷爾, M-S·希德爾, P·西格特, S·威蘭, S·米勒, T·奧康奈爾, T·巴斯蒂格凱特, T·艾廷 申請人:漢高股份有限及兩合公司