專利名稱：雄激素在降低獲得皮膚老化的可能性或治療皮膚老化中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及治療或降低獲得由于與年齡相關(guān)的雄激素缺乏而引起的皮膚疾病的可能性的方法，包括給予包括人在內(nèi)的易感溫血?jiǎng)游镉行Я康男奂に鼗蛐早摅w化合物前體和其前藥。特別是，本發(fā)明包括施用雄激素性化合物或性甾體化合物前體，這些性甾體化合物前體選自脫氫表雄酮(DHEA)、硫酸脫氫表雄酮(DHEA-S)、和雄甾-5-烯-3β，17β-二醇(5-二醇)、雄烯二酮、睪酮、DHT、雄烷二酮和雄甾烷-3α，17-β二醇或前藥、在體內(nèi)轉(zhuǎn)變?yōu)槿魏紊鲜鑫镔|(zhì)的化合物。本發(fā)明還涉及實(shí)施前述方法的局部或口服藥物組合物。
相關(guān)技術(shù)的背景近乎排外地關(guān)注卵巢雌激素對女性的作用已經(jīng)將注意力從循環(huán)DHEA顯著降低70％轉(zhuǎn)移，DHEA降低早已在20-30到50-60歲發(fā)生(Migeon等人，1957，JCEM，171051-1062；Vermeulen andVerdonck，1976，JCEM，42247-253；Vermeulen等人，1982，JCEM，54187-191；Orentreich等人，1984，JCEM 59551-555；Belanger等人，1994，JCEM，791086-1090；Labrie等人，1997，Labrie等人，1997，JCEM，822396-2402)。由于DHEA在外周組織中轉(zhuǎn)變?yōu)樾奂に睾痛萍に?，血清DHEA和DHEA-S的降低顯示了為什么絕經(jīng)期女性不僅缺少雌激素，而且多年來還日益缺乏雄激素。在衰老過程中腎上腺生成DHEA-S的顯著減少(Migeon等人，1957，JCEM，171051-1062；Vermeulen and Verdonck，1976，JCEM，42247-253；Vermeulen等人，1982，JCEM，54187-191；Orentreich等人，1984，JCEM 59551-555；Belanger等人，1994，JCEM，791086-1090)導(dǎo)致了在外周靶組織中組織特異性生成雄激素和雌激素明顯降低，這種情況被認(rèn)為與包括胰島素抵抗(Coleman等人，1982，Diabetes，31830-833；Schriock等人，1988，JCEM，661329-1331)和肥胖癥(Nestler等人，1988，JCEM，6657-61；MacEwen and Kurzman，1988，J Nutrit，121S51-S55；Tchernof等人，1995，Tchernof等人，1995，Diabetes Care，18292-299)在內(nèi)的與年齡相關(guān)的疾病有聯(lián)系。而且，許多注意力放到了絕經(jīng)后女性施用DHEA的益處，尤其是口服(Morales等人，1994，JCEM，781360-1367；Baulieu等人，2000，Proc Natl Acad Sci USA，874279-4284)和經(jīng)皮(Diamond等人，1996，J Endocrinol，150S43-S50；Labrie等人，1997，JCEM，823498-3505)給予前體甾體化合物后對于骨頭、皮脂腺、陰道的益處。資料顯示，正常女性中存在相對高水平的雄激素，這明顯暗示了雄激素在女性中起著主要的迄今為止還未被認(rèn)識(shí)到的生理學(xué)作用。事實(shí)上，發(fā)生在20-30歲到40-50歲的女性中血清DHEA降低44.5％可以很好地解釋過早的骨丟失和增加的FSH/LH比率，這在圍絕經(jīng)期女性中先于卵巢類固醇合成增加發(fā)生。事實(shí)上，在絕經(jīng)前女性中血清FSH的增加甚至比血清E2顯示出增加更早(Grodin等人，1973，JCEM，36207-214)。另一方面，已經(jīng)報(bào)導(dǎo)了與年齡相關(guān)的骨丟失在30-40歲期間開始，同時(shí)已經(jīng)發(fā)現(xiàn)骨循環(huán)的改變在絕經(jīng)之前就已發(fā)生(Riggs等人，1981，J Clin Invest，67328-335；Mazess等人，1982，Clinic Orthop，165239-252；Johnston等人，1985，JCEM，61905-911)。與這些發(fā)現(xiàn)相一致，絕經(jīng)期女性受檢查的所有部位的骨密度都比絕經(jīng)前低(Steinberg等人，1989，JCEM，69533-539)。直到近來，由于測定困難，只有有限數(shù)量的循環(huán)腎上腺和性腺甾體化合物在年齡增長中被測定，特別是在受腎上腺源雄激素和雌激素特別重要影響的女性當(dāng)中(Labrie等人，1991，MoI CellEndocrinol，78C113-C118)。因此非常值得注意的是，循環(huán)DHEA、DHEA-S、雄甾-5-烯-二醇-3β，17β-二醇(5-二醇)、5-二醇-G、雄烯二酮(4-二酮)和雄激素的結(jié)合代謝產(chǎn)物的大多數(shù)的大量減少，稱作雄甾酮-葡糖苷酸(ADT-G)和雄甾烷-3α，17β-二醇葡糖苷酸(3α-二醇-G)，發(fā)生在20-30到50-60之間，而在60歲之后相對很少改變。因此，重要的是留意50-60歲年齡組，血清DHEA已經(jīng)從20-30歲的峰值降低了70％(Labrie等人，1997，JCEM，822396-2402)。這些數(shù)據(jù)顯示，雄激素替代療法應(yīng)當(dāng)及早開始，重視發(fā)生在女性衰老過程相對早期出現(xiàn)的雄激素的顯著減少。正如在我們先前研究中很好證明的那樣，補(bǔ)充生理學(xué)量的外源DHEA僅僅允許在適當(dāng)?shù)陌薪M織中生物合成雄激素和雌激素，這些組織中包含所需要的和組織特異性的類固醇生成酶。因此，特定外周組織中合成的雄激素和雌激素在相同的細(xì)胞中發(fā)揮了它們的作用，這是因?yàn)樵谘h(huán)中發(fā)生了活性甾體化合物的形成和少量滲漏。事實(shí)上，如上所述，DHEA給藥的大多數(shù)顯著作用顯現(xiàn)在DHT代謝產(chǎn)物的葡糖苷酸衍生物的循環(huán)水平上，稱為ADT-G和3α-二醇-G，這些代謝產(chǎn)物在外周胞分泌組織中局部產(chǎn)生，該組織具有從腎上腺前體合成DHEA和DHEA-S合成DHT的適當(dāng)?shù)念惞檀忌擅?Labrie等人，1991，MoI Cell Endocrinol，78C113-C118；Labrie等人1996，JEndocrinol，150S107-S118)。雄激素在靶組織中的局部生物合成和作用阻止了其它組織暴露于活性雄激素，因此使不希望的男性化或其它與雄激素相關(guān)的副作用的危險(xiǎn)最小化。盡管我們感覺還沒有獲得總雌激素分泌(與雄激素葡糖苷酸相比)可靠的參數(shù)，但這同樣適用于雌激素。DHEA已經(jīng)顯示出對年老個(gè)體皮膚具有重要作用，最突出的作用是增加脂肪生成(Labrie等人，1997，JCEM，823498-3505)。這已經(jīng)在女性中進(jìn)行的研究中得到顯示，特別是在生理學(xué)低皮脂溢的大于70歲的女性當(dāng)中，因此發(fā)現(xiàn)了施用DHEA改善了他們的皮膚。我們研究中發(fā)現(xiàn)的DHEA-誘導(dǎo)的脂肪生成增加很可能是由于皮脂腺包含催化DHEA轉(zhuǎn)變?yōu)樾奂に谼HT所必需的所有類固醇生成酶，并且這些雄激素是皮脂腺活性的主要刺激物(Labrie等人，2000，HormRes，54218-219；Labrie等人，2003，End Rev，24152-182)。除了脂肪生成之外，已經(jīng)注意到DHEA對皮膚的其它有益作用。迄今為止，評價(jià)DHEA給藥的皮膚病學(xué)方面僅僅在一個(gè)研究中詳細(xì)地進(jìn)行過，其中60到79歲年齡的男性和女性個(gè)體口服施用50mg的DHEA，每日一次進(jìn)行1年。在該研究中，(Baulieu等人，2000，Proc Natl Acad Sci USA，974279-4284)評價(jià)了皮膚水合作用、皮膚色素沉著和皮膚厚度。治療12個(gè)月后在檢查全部的DHEA治療的人數(shù)中皮膚水表面合作用顯著增加。皮膚表面水合作用被認(rèn)為是對皮膚真正的益處，特別是在老年個(gè)體中，因?yàn)樵谶@些個(gè)體中干燥使皮膚變得粗糙。DHEA還顯著降低了所有人群的面部皮膚色素沉著(黃色)。該增加在＞70歲的女性當(dāng)中更加顯著，他們更加受到與年齡相關(guān)的色素變化的影響。在研究過程中皮膚顏色的其它兩個(gè)組成部分保持穩(wěn)定(即亮度和紅色)。在US 5,843,932中，公開了通過施用DHEA、DHEA-S或在體內(nèi)轉(zhuǎn)變?yōu)槎叩幕衔镏委熎つw萎縮或抑制膠原或結(jié)締組織損失的方法。
發(fā)明概述本發(fā)明的目的是提供治療由與年齡相關(guān)的雄激素缺乏引起的皮膚疾病的有效方法。本發(fā)明的另一目的是提供治療由與年齡相關(guān)的性甾體化合物前提缺乏而引起的皮膚疾病的有效方法。另一目的是提供降低獲得上述問題風(fēng)險(xiǎn)的方法。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及治療或降低獲得皮膚萎縮風(fēng)險(xiǎn)的方法，包括給予有此治療或降低風(fēng)險(xiǎn)需求的患者有效量的雄激素或其前藥。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及治療或降低獲得膠原損失風(fēng)險(xiǎn)的方法，包括給予有此治療或降低風(fēng)險(xiǎn)需求的患者有效量的雄激素或其前藥。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及治療或降低獲得彈性纖維損失風(fēng)險(xiǎn)的方法，給予有此治療或降低風(fēng)險(xiǎn)需求的患者有效量的雄激素或其前藥。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及治療或降低獲得彈性纖維損失風(fēng)險(xiǎn)的方法，給予有此治療或降低風(fēng)險(xiǎn)需求的患者有效量的性甾體化合物前體或其前藥。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及治療或降低獲得結(jié)締組織損失風(fēng)險(xiǎn)的方法，包括給予有此治療或降低風(fēng)險(xiǎn)需求的患者有效量的雄激素或其前藥。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及治療或降低獲得蜂窩組織風(fēng)險(xiǎn)的方法，包括給予有此治療或降低風(fēng)險(xiǎn)需求的患者有效量的雄激素或其前藥。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及治療或降低獲得皺紋形成風(fēng)險(xiǎn)的方法，包括給予有此治療或降低風(fēng)險(xiǎn)需求的患者有效量的雄激素或其前藥。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及治療或降低獲得蜂窩組織風(fēng)險(xiǎn)的方法，包括在有所述治療或所述性甾體化合物前體需求的個(gè)體或患者中增加選自脫氫表雄酮(DHEA)、硫酸脫氫表雄酮(DHEA-S)和雄甾-5-烯-3β，17β-二醇(5-二醇)的性甾體化合物前體的水平。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及治療和降低獲得皺紋形成風(fēng)險(xiǎn)的方法，包括在有所述治療或所述性甾體化合物前體需求的個(gè)體或患者中增加選自脫氫表雄酮(DHEA)、硫酸脫氫表雄酮(DHEA-S)和雄甾-5-烯-3β，17β-二醇(5-二醇)的性甾體化合物前體的水平。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及治療或降低獲得彈性纖維損失風(fēng)險(xiǎn)的方法，包括在有所述治療或所述性甾體化合物前體需求的個(gè)體或患者中增加選自脫氫表雄酮(DHEA)、硫酸脫氫表雄酮(DHEA-S)和雄甾-5-烯-3β，17β-二醇(5-二醇)的性甾體化合物前體的水平。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及治療或降低獲得皮膚萎縮風(fēng)險(xiǎn)的方法，包括給予有所述治療需求的個(gè)體或患者雄烯二酮、雄甾烯二酮、睪酮、二氫睪酮、5α-雄甾烷-3α，17β-二醇或轉(zhuǎn)變這些物質(zhì)的化合物。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及治療或降低獲得膠原損失風(fēng)險(xiǎn)的方法，包括給予有所述治療需求的個(gè)體或患者雄烯二酮、雄甾烯二酮、睪酮、二氫睪酮、5α-雄甾烷-3α，17β-二醇或轉(zhuǎn)變這些物質(zhì)的化合物。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及治療或降低獲得彈性纖維損失風(fēng)險(xiǎn)的方法，包括給予有所述治療需求的個(gè)體或患者雄烯二酮、雄甾烯二酮、睪酮、二氫睪酮、5α-雄甾烷-3α，17β-二醇或轉(zhuǎn)變這些物質(zhì)的化合物。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及治療或降低獲得結(jié)締組織損失風(fēng)險(xiǎn)的方法，包括給予有所述治療需求的個(gè)體或患者雄烯二酮、雄甾烯二酮、睪酮、二氫睪酮、5α-雄甾烷-3α，17β-二醇或轉(zhuǎn)變這些物質(zhì)的化合物。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及治療或降低獲得皺紋風(fēng)險(xiǎn)的方法，包括給予有所述治療需求的個(gè)體或患者雄烯二酮、雄甾烯二酮、睪酮、二氫睪酮、5α-雄甾烷-3α，17β-二醇或轉(zhuǎn)變這些物質(zhì)的化合物。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及治療或降低獲得蜂窩組織風(fēng)險(xiǎn)的方法，包括給予有所述治療需求的個(gè)體或患者雄烯二酮、雄甾烯二酮、睪酮、二氫睪酮、5α-雄甾烷-3α，17β-二醇或轉(zhuǎn)變這些物質(zhì)的化合物。在另一方面，本發(fā)明提供了包含雄激素和藥學(xué)可接受的稀釋劑或載體的局部藥物組合物。在一個(gè)實(shí)施方案中，前體是DHEA。在另一實(shí)施方案中，雄激素是睪酮或其衍生物。當(dāng)用于本文時(shí)，雄激素是具有對人類雄激素受體Ki值小于約2×10-8M且對人乳腺癌ZR-75-1細(xì)胞具有雄激素受體介導(dǎo)的抑制作用的化合物(或其代謝產(chǎn)物之一)，其中的細(xì)胞在低于10納摩爾每升的濃度達(dá)到半數(shù)最大值，或者是對2004年8約30日遞交的標(biāo)題為″Method for determination of anabolic activity″的美國臨時(shí)申請60/606,174中公開的篩選方法陽性相應(yīng)的化合物(或其代謝產(chǎn)物之一)。需要治療或降低患給定疾病風(fēng)險(xiǎn)的患者是被診斷患該疾病的個(gè)體或者易于患該疾病的個(gè)體。除非另外說明，本發(fā)明活性化合物(濃度和給藥模式)優(yōu)選的劑量對于治療和預(yù)防目的是相同的。不管將要治療(或者發(fā)病的可能性被降低)的疾病，本文討論的每一化合物的劑量都是相同。除非另外指出和在上下文明顯時(shí)，本文的劑量是指未受藥物賦形劑、稀釋劑、載體和其它成分影響的活性化合物的重量，盡管需要包含這些添加成分，如本文實(shí)施例所示。常用于藥學(xué)工業(yè)的任何劑型，特別是局部制劑(凝膠、洗劑、乳膏、軟膏等)都適合用于本文，術(shù)語″賦形劑″、″稀釋劑″或″載體″包括通常包含的非活性成分，和工業(yè)上該劑型中的活性成分。例如，典型的乳膏、滲透劑、防腐劑等可包含在局部制劑中。在本文討論的任何治療中所使用的所有活性成分可制成還包含一種或多種其它活性成分的藥物組合物。可選擇地，它們可單獨(dú)而十分同時(shí)給予以便患者最終擁有升高的血液水平或在其它方面同時(shí)地享受每一活性成分(或方案)的益處。在本發(fā)明一些優(yōu)選的實(shí)施方案中，例如，將一種或多種活性成分制成單一藥物組合物。
附圖的簡要說明

圖1顯示了雄性和雌性小鼠背部皮膚間的比較。(A)用蘇木精和伊紅染色的小鼠背部皮膚石蠟切片。a)在未受損的雄性中，所有毛囊都處于生長終期狀態(tài)且位于真皮，其與薄層的皮下組織相鄰。b)在未受損的雌性中，所有毛囊也都處于生長終期狀態(tài)，然而皮下組織比雄性厚，真皮較窄。c)GDX之后，雄性的毛囊處于毛發(fā)生長初期的后期。d)在GDX雌性中，所有毛囊都處于毛發(fā)生長初期。表皮(E)，真皮(D)，皮下組織(H)，肉膜(PC)和毛囊(HF)。Scalebar＝100μm。(B)在未受損和GDX動(dòng)物和用DHT、E2和DHEA治療的GDX動(dòng)物中比較雄性和雌性總皮膚厚度和各自皮層的厚度(表皮、真皮和皮下組織)。數(shù)值表示為平均±SEM。*p＜0.05vs。GDX雄性對照；++p＜0.01vs。GDX雌性對照(Duncan-Kramer多范圍檢驗(yàn))。圖2顯示了小鼠背部皮膚表皮中雄激素受體(AR)的表達(dá)。發(fā)現(xiàn)AR僅僅位于細(xì)胞核中，a)在未受損雄性中，標(biāo)記大多數(shù)表皮細(xì)胞核，b)在未受損雌性中，標(biāo)記大多數(shù)的表皮細(xì)胞核，但是標(biāo)記強(qiáng)度低于雄性。GDX三周后，在GDX雄性(c)和GDX雌性(d)中檢測不到標(biāo)記。當(dāng)用DHT治療GDX雄性(e)和雌性(f)小鼠時(shí)，在表皮細(xì)胞的大多數(shù)細(xì)胞核中觀察導(dǎo)了強(qiáng)烈的AR標(biāo)記。當(dāng)GDX雄性(g)和雌性(h)接受E2時(shí)，在某些細(xì)胞核中檢測到弱的AR標(biāo)記。與DHT治療相似，當(dāng)GDX雄性(i)和雌性(j)接受DHEA時(shí)，在大多數(shù)表皮細(xì)胞核中檢測到了強(qiáng)烈的標(biāo)記。Scale bar＝20μm。圖3和圖4顯示了用DHEA治療(面部右側(cè))和未治療(面部左側(cè))的面部皮膚比較。在13周中將包含DHEA的300微升(0.3ml)乳劑應(yīng)用到前額和面部右側(cè)。
發(fā)明的詳細(xì)描述本發(fā)明顯示了雄激素對真皮厚度的主要作用。事實(shí)上，膠原和彈性纖維已知是真皮的主要成分，其為皮膚防御作用提供了主要的支持，包括在皺紋形成中可能的作用。DHT和DHEA治療后在GDX雌性中觀察到真皮厚度增加，(圖1)然而，在所有實(shí)驗(yàn)條件下，雄性中真皮較厚，因此可能說明在3周治療期間雄性中缺少雄激素的作用。未受損動(dòng)物的皮下組織出現(xiàn)了顯著的性別差異，因而提供了與人類皮膚進(jìn)一步的相似性(Hattori等人，1993)，并暗示DHEA和雄激素可能對降低獲得蜂窩組織的風(fēng)險(xiǎn)或治療蜂窩組織有益。使用小鼠作為模型，本發(fā)明清楚地建立了雄性和雌性間在小鼠皮層和附件上的形態(tài)差異。而且，證明了雄激素和雌激素在不同部位的特定和不同作用，同時(shí)為由雄激素在真皮中和刺激素在表皮中介導(dǎo)的DHEA的作用提供了證據(jù)。相對于藥物組合物的總重，局部應(yīng)用活性成分為0.05％到20％重量，更優(yōu)選0.1到10％的DHEA和5-二醇和0.1％到3％的雄激素?？蛇x擇地，活性成分可至于本領(lǐng)域已知結(jié)構(gòu)的透皮貼劑中，例如，列于歐洲專利0279982中的那些結(jié)構(gòu)。當(dāng)制成軟膏、洗劑、凝膠和乳膏等時(shí)，將活性化合物與適當(dāng)?shù)妮d體混合物，該載體與人類皮膚或粘膜是相容的。適當(dāng)?shù)妮d體在本領(lǐng)域是已知的，包括但不限于Klucel HF和Glaxal base。一些是商業(yè)上可獲得的，例如，從Glaxal Canada Limited Company獲得的Glaxalbase。其它適當(dāng)?shù)妮d體可以在Koller and Buri，S.T.P.Pharma 3(2)，115-124，1987中找到。室溫下活性成分溶于其中到達(dá)使用的活性成分濃度的載體是優(yōu)選的。載體應(yīng)當(dāng)具有足夠的年度以維持甾體化合物位于組合物應(yīng)用的皮膚或粘膜的局部區(qū)域，一段時(shí)期不流動(dòng)或蒸發(fā)足以使前體或雄激素通過皮膚或粘膜的局部區(qū)域大量滲透以引起所需的臨床效果。代表性的載體是幾種成分的混合物，例如，藥學(xué)可接受的溶劑和增稠劑。有機(jī)和無機(jī)溶劑的混合物可以幫助親水和親油溶解度，例如，水和諸如乙醇和丙二醇的醇。優(yōu)選的性甾體化合物前體是脫氫表雄酮(DHEA)(可獲自于Diosynth Inc.，Chicago，Illinois，USA)、5-雄甾烯-3β，17β-二醇(可獲自于Steraloids，Wilton，New Hampshire USA)。另一優(yōu)選的性甾體化合物前體是4-雄甾烯-3，17-二酮，可獲自于Sigma-Aldrich Canada Ltd，Oakvill，Ontario，Canada。本發(fā)明一種優(yōu)選的雄激素是二氫睪酮(5a-雄甾烷-17β-醇-3-酮，DHT)，可獲自于Sigma-Aldrich Canada Ltd，Oakvill，Ontario，Canada。另一優(yōu)選的雄激素是AndroGel，包含1％的睪酮在乙醇、水、Carbopol 980 NF、十四烷酸異丙酯和0.1 M氫氧化鈉中的凝膠，可獲自于Solvay Pharma，Markham，Ontario，Canada。一種全身作用優(yōu)選的雄激素是Androderm，包含12.2mg或24.3mg睪酮的帖劑，可獲自于Laboratoires Paladin Inc.，Montreal，Quebec，Canada。其它睪酮的酯(十一酸睪酮，可以商品名安特爾獲自于OrganonCanada Ltd.，Scarborough，Ontario，Canada，庚酸睪酮，可以商品名Delatestryl獲自于Theramed Corporation，Mississauga，Ontario，Canada，環(huán)戊丙酸睪酮可以商品名Depo-testosterone(環(huán)戊丙酸酯)獲自于Pfizer Canada，Kirland，Canada或以商品名環(huán)戊丙酸睪酮注射劑USP獲自于Sabex，2002 Inc.，Boucherville，Qc，Canada)和衍生物[即諾龍(19-去甲睪酮)和酯(癸酸諾龍，可以商品名Deca-Durabolin獲自于Organo Canada，Ltd ScarboroughOntario Canada)，還優(yōu)選甲基睪酮，獲自于sigma-Aldrich CanadaLtd.，Oakvill，Ontario，Canada。還優(yōu)選的雄激素是5α-雄甾烷-3α，17β-二醇和5α-雄甾烷-3，17-二酮，都可獲自于Sigma-Aldrich Canada Ltd.，Oakvill，Ontario，Canada。優(yōu)選的是性甾體化合物前體或雄激素制成含醇凝膠，包含1.0到10％的辛酸-羊脂酸甘油三酯(Neobee M-5)；10到20％的2-甲-2，4-戊二醇；2.0到10％的二甘醇單甲基醚(Transutol)；2.0到10％的環(huán)甲硅油(Dow Corning 345)；1.0到2％的芐醇和1.0到5.0％的羥丙基纖維素(Klucel HF)。還優(yōu)選的是性甾體化合物前體或雄激素制成乳膏，包含2.0到4.0％的十二烷基甲基硅氧烷共聚多元醇，5.0到7.0％的環(huán)甲硅油，2.0到4.0％的礦物油，6.0到8.0％的Cetearyl isononoate，0.5到1.5％的Eumulgin B2，0.01到0.1％的二叔丁對甲酚，49.0到60.0％的丙二醇，10到20％的水，0.5到1.5％的硫酸鎂，4.0到6.0％的乙醇和0.1到3.0％的性甾體化合物前體或雄激素。還有選的是性甾體化合物前體或雄激素制成乳膏，包含0.1到10％的性甾體化合物前體或雄激素，10到25％的乳化蠟，5到20％的輕質(zhì)礦物油，0.5到2.0％的芐醇，20到40％的乙醇95％和20到40％的水。還優(yōu)選的是性甾體化合物前體或雄激素制成乳膏，包含0.1到10％的性甾體化合物前體或雄激素，2到10％的十六醇，5到10％的十六烷基酯蠟，0.25到0.5％的苯乙醇，5到10％的白蠟，20到40％的水，20到40％的丙三醇，2.0到10.0％的礦物油，1.0到5.0％的月桂基硫酸鈉，3.0到6.0％的單硬脂酸甘油酯，3.0到6.0％的單硬脂酸丙基乙二醇酯和1到5.0％的硬脂酸甲酯。還優(yōu)選的是性甾體化合物前體或雄激素制成口服給藥的膠囊，包含10到50mg的性甾體化合物前體或雄激素衍生物。載體還包括常用于軟膏和洗劑和在化妝品和藥物領(lǐng)域公知的各種添加劑。例如香味劑、抗氧化劑、香料、膠凝劑、增稠劑例如羧甲基纖維素、表面活性劑、穩(wěn)定劑、軟化劑、著色劑和可存在的其它相似試劑。優(yōu)選地，尤其在治療開始時(shí)，主治臨床醫(yī)師將監(jiān)測個(gè)體患者的所有反應(yīng)和DHEA或雄激素的血清水平，尤其是，監(jiān)測患者對治療的所有反應(yīng)，根據(jù)需要調(diào)整劑量，其中給定患者的代謝或?qū)χ委煹姆磻?yīng)的是不典型的。用于性甾體化合物前體或雄激素局部給藥的典型劑量是5mg到200mg的活性成分每天，每千克體重，優(yōu)選20到60mg每天。如果選擇口服給藥，每50kg體重應(yīng)當(dāng)每日一次給予10到100mg活性成分。
本發(fā)明效果實(shí)施例實(shí)施例1材料和方法動(dòng)物和處理56只13-15周齡的成年雄性和雌性小鼠獲自于HarlanLaboratory(Indiana，USA)。將小鼠如下隨機(jī)分成4組，每組7只(1)未受損對照；(2)GDX對照；(3)GDX+DHT(0.1mg/每只小鼠)；(4)GDX+DHEA(6.25mg/每只小鼠)。在研究的第1天，除了第1組模擬手術(shù)之外將所有的動(dòng)物根據(jù)(Castro，1974 andFleischman，1981)的描述進(jìn)行雙側(cè)GDX。從GDX之后的第2天開始進(jìn)行3周，將DHEA在0.4％甲基纖維素和5％乙醇的混懸劑形式每日一次口服給予適當(dāng)組的動(dòng)物。在相同時(shí)期單獨(dú)用載體處理未受損和GDX對照組的動(dòng)物。最后一次處理完6小時(shí)后，處死所有動(dòng)物。DHEA的口服劑量根據(jù)先前公開的研究(Labrie等人，1996；Labrie等人，2003b)選擇。因此，選擇的生理學(xué)劑量完全逆轉(zhuǎn)了GDX誘導(dǎo)的激素敏感器官的萎縮，使得器官重量與未受損動(dòng)物的相似。由于已知通過口服DHT活性微弱，因此，將其皮下注射。為了測定DHT的劑量，進(jìn)行了劑量范圍研究預(yù)選(參見supplementary onlinematerial，online Table Sl)。
組織處理剃去長毛發(fā)之后，將背部皮膚離體，弄平并立即浸泡到10％的緩沖福爾馬林中。將樣品嵌入石蠟塊中，切4μm的切片并常規(guī)染色。如(Badertscher JA，1940，Stain Technol，1529-30)所述，其它的部分皮膚用于全部的封固技術(shù)。
皮膚厚度分析在光學(xué)顯微鏡下，使用IMAGE-PRO PLUS(MediaCybernetics，USA)進(jìn)行測量。每只動(dòng)物的每一皮層記25個(gè)讀數(shù)。從基底層到顆粒層(角質(zhì)層除外)測量表皮厚度，真皮厚度是表皮與皮下組織間的舉例。最后，測量作為真皮和肉膜間距離的皮下組織厚度。
免疫組織化學(xué)將石蠟切片去除石蠟并再水合。通過在30％H2O2的甲醇溶液中預(yù)培養(yǎng)30分鐘出去內(nèi)源性過氧化物酶活性。應(yīng)用采用了檸檬酸鹽緩沖液的微波回收技術(shù)(Tacha et Chen，1994)，用10％山羊血清中和非特異性結(jié)合部位。然后將切片在室溫下用小鼠抗-Ki-67抗體克隆MIB-5(1∶60)(Dako Diagnostic，CA，USA)培養(yǎng)60分鐘或者在室溫下用家兔抗-雄激素受體(AR)抗體(1∶300)(N-20；Santa CruzBiotechnology，Inc.，CA，USA)培養(yǎng)90分鐘。Zymed SP試劑盒(SanFrancisco，CA，USA)和Vectastain Elite ABC試劑盒(VectorLaboratories，Inc.Burlingame，CA，USA)分別用于AR，Ki-67抗體。在顯微鏡監(jiān)測下，將二氨基聯(lián)苯用作色原體。為了評價(jià)Ki-67，計(jì)算每只動(dòng)物400個(gè)細(xì)胞的標(biāo)記指數(shù)。
統(tǒng)計(jì)學(xué)分析數(shù)據(jù)都以平均±S.E.M表示。根據(jù)Duncan-Kramer多范圍檢驗(yàn)(Kramer CY，1956，Biometrics，12307-310)測定統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性。
結(jié)果16-18周齡的雄性和雌性小鼠背部皮膚的形態(tài)學(xué)檢查顯示，清楚地看到在皮膚的總厚度和在不同皮層的大小上的性別差異(圖1A和1B)。事實(shí)上，主要的差異是雄性的真皮遠(yuǎn)厚于雌性，而雌性的表皮和皮下組織較厚，因此，導(dǎo)致了總皮膚比雄性厚40％。
表皮未受損雌性的表皮比雄性厚約40％(p＜0.01)。GDX3周之后，雌性的表皮厚度下降40％(p＜0.01)，而DHEA處理后觀察到增加13％(p＜0.05)。如Ki-67-陽性基底細(xì)胞的數(shù)量所示，在未受損雌性中細(xì)胞增殖更高(11.8±0.7 vs 9.3±0.4，p＜0.05)，因此顯示出性別差異。而且，GDX3周之后，雌性細(xì)胞增殖的水平下降27％(8.6±0.7，p＜0.01)，該數(shù)值與未受損雄性中觀察到的相似。未受損雄性中AR免疫染色強(qiáng)度略大于雌性(圖2a，2b)。GDX3周之后，雄性表皮的AR表達(dá)減少，達(dá)到與雌性相似的細(xì)胞水平(圖2c，2d)。當(dāng)GDX動(dòng)物接受DHT或DHEA時(shí)，在雄性和雌性中都發(fā)現(xiàn)了強(qiáng)烈的AR表達(dá)(圖2e，2i，2f，2j)。
真皮在未受損動(dòng)物中，雄性的真皮是雌性的190％(p＜0.01)。GDX之后，雌性真皮厚度增加22％(p＜0.05)，而雄性增加7％統(tǒng)計(jì)學(xué)上不顯著。僅僅在GDX雌性中，DHT和DHEA處理分別顯著地增加了真皮厚度47％(p＜0.01)和19％(p＜0.05)。
皮下組織未受損雌性的皮下組織比雄性厚11倍(p＜0.01)。如圖1B所示，GDX之后，雄性和雌性小鼠的皮下組織厚度都增加(p＜0.01)，而用DHT、E2或DHEA處理顯著地降低了兩種性別GDX動(dòng)物的皮下組織厚度(p＜0.01)。這些發(fā)現(xiàn)是用DHT、E2或DHEA治療蜂窩組織有效的很好的象征。
表I
表1.不同皮層相對比率的性別差異。數(shù)值以平均±SEM.**表示，p＜0.01，實(shí)驗(yàn)GDX雄性；++，p＜0.01，實(shí)驗(yàn)GDX雌性；+，p＜0.05，實(shí)驗(yàn)GDX雌性(Duncan-Kramer多范圍檢驗(yàn))。T厚度(μm)；％每一皮層的比率。
實(shí)施例2方案ERC-202研究設(shè)計(jì)該研究是15個(gè)個(gè)體的隨機(jī)雙盲安慰劑對照試驗(yàn)。研究分為兩個(gè)階段，篩選階段和13周的治療階段。
個(gè)體和處理獲得書面告知的承諾之后，找到適合的女性，早上或晚上每一個(gè)體隨機(jī)接受一日兩次的0.0％(安慰劑)、0.1％、0.3％、1％或2％的DHEA乳劑。每天早餐前和完飯后，個(gè)體接受3.0ml五種乳劑中的一種，進(jìn)行13周。在13周中所有的個(gè)體受到指導(dǎo)每日兩次(早上6:00到9:30和晚上18:00到21:30)應(yīng)用研究治療面部(右側(cè))和前額、上半胸部、手背、手臂背部、大腿和腿的外面。研究治療的第一個(gè)應(yīng)用在實(shí)驗(yàn)部位進(jìn)行，其中為個(gè)體提供如何應(yīng)用局部乳劑的指導(dǎo)說明。將總劑量為3.0ml的DHEA乳劑每日兩次地將300微升(0.3ml)的乳劑應(yīng)用到前額和面部(右側(cè))，手臂背部和手背0.3ml(0.3ml×2)，上半胸部0.3ml，大腿0.6ml(0.6ml×2)，腿0.3(0.3ml×2)。
藥物組合物實(shí)施例舉例而不限制，如下所列的是幾種局部藥物組合物，該組合物使用了優(yōu)選的活性性甾體化合物前體DHEA，優(yōu)選雄激素。如本文所述，活性成分的濃度可在很寬的范圍內(nèi)變化?？砂渌煞值牧亢皖愋驮诒绢I(lǐng)域是公知的。
實(shí)施例A
局部乳膏
實(shí)施例B局部乳膏0.1％的DHEA乳膏(制劑編號(hào)0759-0435)
實(shí)施例C
局部乳膏0.3％的DHEA乳膏(制劑編號(hào)0759-0435)
實(shí)施例D局部乳膏0.3％的DHEA乳膏(制劑編號(hào)0759-0435)
實(shí)施例E局部乳膏1.0％的DHEA乳膏(制劑編號(hào)0759-0435)
實(shí)施例F局部乳膏1.5％的DHEA乳膏(制劑編號(hào)484-12-1.5％)
實(shí)施例G局部乳膏1.5％的DHEA乳膏(制劑編號(hào)435-3-1.5％)
實(shí)施例H局部乳膏1.5％的DHEA乳膏(制劑編號(hào)47-1.5％)
實(shí)施例I局部乳膏2.0％的DHEA乳膏(制劑編號(hào)0759-0435)
實(shí)施例J局部乳膏0.3％的睪酮乳膏
實(shí)施例K局部乳膏0.3％的DHEA乳膏
實(shí)施例L局部乳膏0.3％的DHT乳膏
實(shí)施例M局部乳膏0.3％的睪酮乳膏
實(shí)施例N局部凝膠10.0％的DHEA凝膠
實(shí)施例O局部凝膠2.0％的DHT凝膠
實(shí)施例P口服膠囊50mg DHEA的膠囊
實(shí)施例Q口服膠囊25mg DHEA的膠囊 已經(jīng)根據(jù)優(yōu)選的實(shí)施方案和實(shí)施例對本發(fā)明進(jìn)行了描述，但并不因此而受限制。本領(lǐng)域的技術(shù)人員將容易地辨別出較寬的適用性和僅受專利權(quán)利要求限制的本發(fā)明的范圍。
權(quán)利要求
1.治療或降低獲得由于與年齡相關(guān)的雄激素缺乏而引起的皮膚疾病的可能性的方法，所述方法包括給予有此治療需求或有降低風(fēng)險(xiǎn)需求的患者有效量的雄激素或其前藥。
2.權(quán)利要求1的方法，其中，這些皮膚疾病選自皮膚萎縮、膠原損失、彈性纖維損失、結(jié)締組織損失、蜂窩組織和皺紋。
3.權(quán)利要求1的方法，其中，雄激素選自睪酮(4-雄甾烯-17β-醇-3-酮)、二氫睪酮(5α-雄甾烷-17β-醇-3-酮)、雄烯二酮(4-雄甾烯-3，17-二酮)、雄烷二酮(5α-雄甾烷-3，17-二酮)、5α-雄甾烷-3α，17β-二醇或其前藥。
4.治療或降低獲得皺紋和蜂窩組織或彈性纖維損失可能性的方法，包括給予有此治療需求或有降低風(fēng)險(xiǎn)需求的患者有效量的至少一種選自脫氫表雄酮、硫酸脫氫表雄酮、5-雄甾烯-3β，17β-二醇和其前藥的性甾體化合物前體。
5.治療或降低獲得皺紋和蜂窩組織或彈性纖維損失可能性的方法，包括給予有此治療需求或有降低風(fēng)險(xiǎn)需求的患者有效量的至少一種選自睪酮(4-雄甾烯-17β-醇-3-酮)、二氫睪酮(5α-雄甾烷-17β-醇-3-酮)、雄烯二酮(4-雄甾烯-3，17-二酮)、雄烷二酮(5α-雄甾烷-3，17-二酮)、5α-雄甾烷-3α，17β-二醇和其前藥的雄激素。
6.權(quán)利要求4的方法，其中，性甾體化合物前體是局部給藥的。
7.治療或降低獲得皮膚萎縮、膠原損失可能性的方法，所述方法包括給予有此治療需求或有降低風(fēng)險(xiǎn)需求的患者有效量的至少一種選自睪酮(4-雄甾烯-17β-醇-3-酮)、二氫睪酮(5α-雄甾烷-17β-醇-3-酮)、雄烯二酮(4-雄甾烯-3，17-二酮)、雄烷二酮(5α-雄甾烷-3，17-二酮)、5α-雄甾烷-3α，17β-二醇和其前藥的雄激素。
8.權(quán)利要求4的方法，其中，性甾體化合物前體是口服給藥的。
9.權(quán)利要求1、5或7的方法，其中，雄激素或其前藥是局部給藥的。
10.權(quán)利要求1、5或7的方法，其中，雄激素或其前藥是口服給藥的。
11.有效量的雄激素或其前藥在制備用于治療或降低獲得由于與年齡相關(guān)的雄激素缺乏而引起皮膚疾病的可能性的藥物中的應(yīng)用。
12.權(quán)利要求11的應(yīng)用，其中，皮膚疾病選自皮膚萎縮、膠原損失、彈性纖維損失、結(jié)締組織損失、蜂窩組織和皺紋。
13.權(quán)利要求11的應(yīng)用，其中，雄激素選自睪酮(4-雄甾烯-17β-醇-3-酮)、二氫睪酮(5α-雄甾烷-17β-醇-3-酮)、雄烯二酮(4-雄甾烯-3，17-二酮)、雄烷二酮(5α-雄甾烷-3，17-二酮)、5α-雄甾烷-3α，17β-二醇或其前藥。
14.用于治療或降低患者獲得皺紋和蜂窩組織或彈性纖維損失的可能性的有效量的至少一種選自脫氫表雄酮、硫酸脫氫表雄酮、5-雄甾烯-3β，17β-二醇和其前藥的性甾體化合物前體。
15.用于治療或降低患者獲得皺紋和蜂窩組織或彈性纖維損失的可能性的有效量的至少一種選自(4-雄甾烯-17β-醇-3-酮)、二氫睪酮(5α-雄甾烷-17β-醇-3-酮)、雄烯二酮(4-雄甾烯-3，17二酮)、雄烷二酮(5α-雄甾烷-3，17-二酮)、5α-雄甾烷-3α，17β-二醇或其前藥的雄激素。
16.用于治療或降低患者獲得皺紋和蜂窩組織或彈性纖維損失的可能性的局部用組合物，所述組合物包括有效量的至少一種選自(4-雄甾烯-17β-醇-3-的雄激素。
全文摘要
新的治療或降低包括人在內(nèi)的易感溫血?jiǎng)游铽@得由于與年齡相關(guān)的雄激素缺乏而引起的皮膚疾病的可能性的方法，特別是皮膚萎縮、膠原損失、彈性纖維損失、結(jié)締組織損失、蜂窩組織和皺紋形成，包括給予雄激素或/和性甾體化合物前體。還公開了用于遞送對本發(fā)明有用的活性成分的藥物組合物。
文檔編號(hào)A61Q19/06GK101094676SQ200580045668
公開日2007年12月26日 申請日期2005年10月31日 優(yōu)先權(quán)日2004年11月1日
發(fā)明者M·埃爾-阿爾菲, F·拉布里, L·阿茲 申請人:恩多研究公司