專利名稱：從植物果仁中提取的果仁油,其提取方法、藥物組合物及應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及天然藥物化學領域，具體涉及從植物果仁中提取的果仁油，更具體地涉及從酸棗、花椒和核桃果仁中提取的果仁油，其提取方法，以及含所述果仁油的藥物組合物及其醫(yī)藥應用。
核桃仁是一種藥食兩用傳統(tǒng)中藥，具有補腎、溫肺和潤腸等功效。但長期以來普通核桃油只是食用油的一種，未見制成腸胃道外營養(yǎng)劑的報道。由于普通核桃油劑型不利于人體吸收，而要想制成供哺乳動物包括人臨床使用的靜脈乳，又因提取與分離工藝落后致使其中雜質多，酸價等理化值不符合注射用要求，使核桃油在醫(yī)藥上的使用受到了限制。
現(xiàn)有技術中，用脂肪乳來補充人體營養(yǎng)能量，常見的有大豆油，棉子油、紅花油等制成的脂肪乳。其中，使用較為廣泛的是大豆油制成的脂肪乳。但大豆油脂肪乳劑主要起補充人體營養(yǎng)能量的作用，其作用比較單一，有關提高機體免疫功能，升高血清總蛋白，對動物移植腫瘤Lewis肺癌、小鼠肝癌HAC的抑制作用和補腎、溫肺、潤腸的功效未見報道。
因此，本發(fā)明的第一個方面是提供一種從植物果仁中提取的可以制備提供人體營養(yǎng)能量、提高機體免疫功能、具有升高血清蛋白等作用的新一代靜脈乳劑的果仁油。
本發(fā)明的第二個方面是提供兩種提取本發(fā)明的植物果仁油的特定工藝方法。
本發(fā)明的第三個方面是提供含有本發(fā)明的果仁油的藥物組合物，包括靜脈乳劑和口服用膠囊等。所述靜脈乳劑能補充人體營養(yǎng)能量，提高機體免疫功效，具有升高血清蛋白作用，兼有原料藥補腎、溫肺和潤腸的功能，且價格低廉。
本發(fā)明的第四個方面是提供本發(fā)明的果仁油在制備治療腫瘤、AIDS和免疫功能低下等疾病的藥物上的應用。
本發(fā)明提供的一種果仁油提取方法包括以下步驟(1)粗提果仁或果仁粉經(jīng)壓榨，有機溶劑提取或超臨界流體提取得到粗油；(2)脫色用吸附脫色劑脫色，得到脫色油；(3)堿煉將脫色油溶于石油醚，攪拌下加入化學計量的NaOH溶液，靜置分層后，有機層經(jīng)水洗，得到乳液；(4)破乳于攪拌下在乳液中加入丙酮，分層后取上層油相；(5)吸附、水洗將油相先后用中性氧化鋁和白陶土進行吸附、過濾后，濾液在氮氣氛圍下脫除有機溶劑，再用溫水洗滌、干燥，再用中性氧化鋁吸附，得到精煉油。
本發(fā)明提供的另一種果仁油提取方法包括以下步驟(1)粗提果仁或果仁粉經(jīng)壓榨、有機溶劑提取或超臨界流體提取得粗油；(2)脫膠粗油攪拌、加熱、加入磷酸，使之充分反應；(3)堿煉脫膠油中加入同溫NaOH或Na2CO3溶液，充分反應后靜置分層，分離得到堿煉油；(4)水洗用純化水洗滌堿煉油，得水洗油；(5)脫水水洗油中加入吸附劑脫去水分或在抽真空條件下加熱除去水分，得澄清脫水油；
(6)脫色將脫水油用吸附脫色劑脫色，得脫色油；(7)脫臭將脫色油在真空和氮氣氛圍下攪拌、加熱使油溫升至120℃-160℃，通純水蒸汽，繼續(xù)加熱至160℃-260℃，保持0.5-2小時，停止通蒸汽，除去油中的水分，得脫臭油。
本發(fā)明提供的藥物組合物包含治療有效量的從植物果仁中提取的果仁油和藥物上可接受的載體。
本發(fā)明提供的果仁油的應用是在制備治療腫瘤、免疫功能低下等疾病的藥物上的應用。所述疾病為腫瘤、性病、艾滋病、免疫功能低下、小兒營養(yǎng)不良、外科術后及需補充脂肪要素的疾病。發(fā)明詳述本發(fā)明的從植物果仁中提取的果仁油是一種淡黃色透明油狀液體，其中包含甘油三酯90-99.9％，甘油二酯0.01-5％，甘油單酯0.01-3％，谷甾醇0.1-2.5％，環(huán)羊毛甾醇0.01-1％。
本發(fā)明的果仁油酯解后的脂肪酸組分為十六烷酸5-8％，十八烷酸1-3％，十八碳一烯酸18-30％，十八碳二烯酸50-65％，十八碳三烯酸6-14％。
按脂肪油檢測，本發(fā)明的果仁油具有如下理化常數(shù)相對密度0.920-0.930；折光率1.470-1.480；酸值＜0.80；碘值120.0-155.0；皂化值180.0-200.0，過氧化值＜30.0meq.kg-1；熾灼殘渣0.01-0.04％，砷量＜2ppm；重金屬＜10ppm；平均分子量873.969。
本發(fā)明果仁油的優(yōu)選實施方案是以酸棗仁、花椒仁或核桃仁為原料提取的果仁油。
本發(fā)明果仁油的第一種提取方法如下，以核桃仁為例。
初提核桃仁或核桃粉通過壓榨或超臨界流體提取方法得到核桃仁粗油；脫色粗油中先加入適量石油醚，攪拌均勻，再加入適量注射用活性炭，保溫，過濾，回收石油醚，得脫色油；堿煉將脫色油和適量石油醚投入反應釜，攪拌中加入根據(jù)酸值及脫色油的數(shù)量計算出的2％NaOH溶液量，攪拌均勻，靜置，除去下層廢液。攪拌中加入2倍量的溫蒸餾水，攪拌，靜止，除去下層廢液。再用同樣的方法、時間和水溫進行第二次洗滌，充分靜置，除去下層廢液，得上層乳液；破乳將乳液層計量移入分離釜，按乳層量一定比例，攪拌中注入所需丙酮，靜置分層，除去下層廢水得上層油相；水洗按油量所需比例加入經(jīng)保溫活化的中性氧化鋁進行吸附，充分攪拌，靜置，過濾得澄明油，計量后投入反應釜預熱，攪拌中加入適量經(jīng)過保溫活化的白陶土(高嶺土)，攪拌中保溫，真空過濾，濾液導入水洗釜加熱，在充氮保護下脫除有機溶劑，按油量的適當比例加入溫蒸餾水，攪拌，靜置，棄下層廢水，在充氮保護下加熱油層，脫水干燥，至油層澄明清亮，加入適量經(jīng)活化的中性氧化鋁，攪拌均勻，靜置，無菌過濾，得精煉油。充氮保護主要是為了防止油脂的氧化，控制油脂的過氧化值，以保持油的質量。
根據(jù)需要，將用上述方法制得的核桃仁油分裝滅菌，分別注入規(guī)定容器內(nèi)，消毒滅菌，可得注射用核桃仁油。
本發(fā)明果仁油的第二種提取方法如下(1)粗提果仁或果仁粉通過冷榨或超臨界流體提取得到粗油，過濾，得澄清毛油；(2)脫膠將毛油置于反應鍋內(nèi)，充氮，攪拌，加熱，加入適量磷酸，快速攪拌使充分反應；(3)堿煉在充氮保護下脫膠油混合液中直接加入配制好的同溫NaOH或Na2CO3溶液，快速攪拌使游離脂肪酸充分反應，然后在加熱、充氮、保溫下靜置分層，除去下層皂腳，得堿煉油；(4)水洗取堿煉油，在攪拌下加入適量氯化鈉溶液，保溫下靜置分層，棄去下層廢液，再用同樣的方法、時間和水溫，改用純化水洗滌2遍，靜置分層，除去下層廢液，即得水洗油；(5)脫水水洗油中加入適量活化氧化鋁，充分攪拌，靜置、過濾，得澄清脫水油；(6)脫色將脫水油置反應鍋內(nèi)，抽真空、攪拌，加熱、加適量活性炭和活化高嶺土混合物，繼續(xù)抽真空，80-90℃下充分攪拌，冷卻，過濾，得脫色油；(7)脫臭將脫色油置不銹鋼反應鍋內(nèi)，在真空和氮氣氛圍下，攪拌、加熱使油溫升至140℃，停止通氮并改通純水蒸汽，繼續(xù)加熱至190℃并保持恒溫，再通蒸汽1.5小時，關閉蒸汽，再通氮氣，攪拌，冷卻，得脫臭油。
根據(jù)需要，可再進行滅菌。將脫臭油置于不銹鋼滅菌罐中，抽真空、攪拌，加熱至160℃并保持恒溫2小時，冷卻，無菌過濾，充氮分裝于密閉容器，即得注射用果仁油。
按照本發(fā)明的藥物組合物包含治療有效量的用上述方法提取的本發(fā)明的果仁油和一種或多種藥用輔料。
本發(fā)明的藥物組合物中的藥用輔料包括選自乳化劑、增溶劑、助溶劑、等滲劑、抗氧化劑和穩(wěn)定劑的一種或幾種。
本發(fā)明的藥物組合物還可包含選自抗腫瘤藥物、抗愛滋病藥、免疫調節(jié)劑、營養(yǎng)劑的一種或多種其他活性藥物。
本發(fā)明的藥物組合物還可包含一種或多種其他植物油，例如椰子油、花生油等。
本發(fā)明的藥物組合物可以是脂肪乳劑，如靜脈脂肪乳劑和口服脂肪乳劑，也可以是軟膠丸、碘油劑等。
本發(fā)明藥物組合物的一個優(yōu)選實施方式是脂肪乳劑，其中所述藥用輔料為乳化劑和等滲劑。更優(yōu)選的是核桃仁油靜脈脂肪乳劑。
優(yōu)選的核桃仁油靜脈脂肪乳劑，每100ml中包含5-30g、更優(yōu)選地包含10-30g、最優(yōu)選地包含20g注射用核桃仁油。
本發(fā)明中所使用的乳化劑可以是磷脂(包括大豆卵磷脂、蛋黃卵磷脂、大豆磷脂)，普魯朗立克(Pluronic)，聚甘油棕櫚酸二醇酯等。在靜脈脂肪乳劑中以天然乳化劑如大豆(或蛋黃)卵磷脂為佳，其用量為每100ml乳劑中含1.0-3.0g，更佳為1.0-2.0g，最佳為1.2g。
本發(fā)明中所使用的等滲劑可以是甘油、山梨醇、木糖醇、葡萄糖等，以甘油為佳，其用量為每100ml乳劑中含1.5-3.0g，更佳為2.5g。
以下用實施例對本發(fā)明作更詳細的描述。然而，這些實施例僅僅是一種例示，決不意味著對本發(fā)明的限制。
粗油中加入粗油量40％的石油醚，攪拌均勻，再加入粗油量1％的注射用活性炭，45℃保溫30分鐘后，過濾、濾液回收石油醚，得428g脫色油。
將脫色油和油量50％的石油醚投入反應釜，根據(jù)酸值及脫色油的數(shù)量，加入2％濃度的NaOH溶液量307ml，在攪拌下細流注入乳層中，繼續(xù)攪拌10分鐘，靜置24小時，除去下層廢液。攪拌中加入2倍量的45℃蒸餾水，攪拌，靜置24小時，除去下層廢液。再用同樣的方法、時間和水溫進行第二次洗滌，水量為乳層量的1.5倍，然后靜置48小時。
除去下層廢液，得上層乳液342g，移入分離釜，在攪拌下快速注入丙酮342ml，靜置3小時，除去下層廢水得上層油相。
在油中，按油量的5％加入經(jīng)過160℃、2小時保溫活化的中性氧化鋁進行吸附，并充分攪拌后靜置30分鐘，過濾得澄明油，計量后投入反應釜預熱至40℃，邊攪拌邊加入油量3％的經(jīng)過160℃、2小時保溫活化的白陶土(高嶺土)，并繼續(xù)攪拌，在50℃保溫30分鐘，真空過濾，濾液導入水洗釜加熱至60℃，在充氮保護下脫除有機溶劑，按油量1倍的比例快速注入45℃的蒸餾水，并繼續(xù)攪拌15分鐘，然后靜置30分鐘，分去下層廢水，在真空再充氮狀態(tài)下，對油層加熱至80℃脫水干燥，至油層澄明清亮，加入所需量經(jīng)活化的中性氧化鋁，攪拌均勻，靜置，無菌過濾，得精煉油。
將上述制得的精煉油分別注入規(guī)定容器內(nèi)，消毒滅菌，得328g注射用核桃仁油。
實施例2(1)粗提取30kg核桃仁通過冷榨法提取得到核桃仁粗油，過濾，得澄清毛油13.1kg。
(2)脫膠將毛油置于反應鍋內(nèi)，充氮，攪拌，加熱，使油溫升至30-35℃，加入13.1g濃度為85％的磷酸，快速攪拌半小時。
(3)堿煉在充氮保護下在脫膠油混合液中直接加入717g配制好的同溫5％NaOH溶液，快速攪拌30分鐘，然后在慢速攪拌下快速升溫至60-65℃，繼續(xù)慢速攪拌15分鐘，停止攪拌，在充氮、保溫下靜置分層，除去下層皂腳，得堿煉油12.8kg。
(4)水洗在上述堿煉油中于攪拌下加入1.9kg同溫0.2％氯化鈉溶液，保溫下靜置分層，棄去下層廢液。再用同樣的方法、時間和水溫，改用蒸餾水洗滌2遍，靜置分層，除去下層廢液，即得水洗油12.6kg。
(5)脫水在上述水洗油中加入經(jīng)160℃活化2小時的氧化鋁1.3kg，充分攪拌，靜置半小時以上，過濾，得澄清脫水油12.0kg。
(6)脫色將上述脫水油置于反應鍋內(nèi)，抽真空減壓至0.082Mpa，攪拌，加熱至80-90℃，停止抽真空，加入22.5g活性炭和經(jīng)160℃活化2小時的337.5g高嶺土混合物，繼續(xù)抽真空減壓至0.082Mpa，80-90℃下繼續(xù)攪拌20分鐘，冷卻至40℃，過濾，得脫色油11.0kg。
(7)脫臭將上述脫色油置于不銹鋼反應鍋內(nèi)，抽真空減壓至0.082Mpa，同時通氮氣，攪拌，加熱使油溫升至140℃，停止通氮并改通純水蒸汽，繼續(xù)加熱至190℃并保持恒溫1.5小時，關閉蒸汽，再通氮氣，攪拌，冷卻，得脫臭油10.6kg。
(8)滅菌分裝將脫臭油置于不銹鋼滅菌罐中，抽真空減壓至0.082Mpa，攪拌，加熱至160℃并保持恒溫2小時，冷卻，無菌過濾，充氮分裝于密閉容器，得注射用核桃仁油9.6kg。配方例1注射用核桃仁油 5-30g注射用卵磷脂1.0-3.0g注射用甘油 1.5-3.0gVit E 0-0.15g注射用水加至100ml配方例2注射用核桃仁油 20g注射用大豆卵磷脂1.2g注射用甘油 2.5g注射用水加至100ml配方例3氟尿嘧啶1.0-5.0g注射用核桃仁油 5-30g注射用大豆卵磷脂1.0-3.0g注射用甘油 1.5-3.0gVit E 0-0.1 5g注射用水加至100ml配方例4紫杉醇 10-60mg椰子油 5-15g注射用核桃仁油 5-15g注射用卵磷脂1.0-3.0g注射用甘油 1.5-3gVit E 0-0.15g注射用水加至100ml
配方例5紫杉醇 10-60mg聚氧乙烯蓖麻油 1.0-5.0g注射用核桃仁油 5.0-30g注射用卵磷脂1.0-3.0g注射用甘油 1.5-3gVit E 0-0.15g注射用水加至100ml配方例6高三尖杉酯堿0.05-0.2g注射用核桃仁油 5-30g注射用大豆卵磷脂1.0-3.0gVit E 0-0.15g注射用甘油 1.5-3.0g注射用水加至100ml配方例7環(huán)磷酰胺0.2-1.2g注射用核桃仁油 5-30g注射用卵磷脂1.0-3.0g注射用甘油 1.5-3.0gVit E 0-0.15g注射用水加至100ml實施例3將大豆卵磷脂1.2g和甘油2.5g加水25ml，在5000轉/分速度下攪拌制成均勻的半透明膠體狀磷脂分散體系。加入注射用核桃仁油20g，加水至100ml制成初乳，并用NaOH溶液調節(jié)初乳pH值至6-9。然后將初乳轉移到勻化桶中，用勻質機分別進行高壓和低壓勻化。勻化壓力低壓10-20Mpa，高壓40-60Mpa。勻化溫度為60-80℃。按上述勻化條件勻化6次，所得乳劑經(jīng)過過濾、罐裝、滅菌即得20％供靜脈用核桃仁油脂肪乳。
實施例4將蛋黃卵磷脂1.0g和甘油1.5g加水20ml，在同上速度下攪拌制成均勻的半透明膠體狀磷脂分散體系。加入注射用核桃仁油10g，加水至100ml制成初乳。再經(jīng)過調pH值、勻化、過濾、罐裝、滅菌即制得10％核桃仁油脂肪乳。
實施例5將大豆卵磷脂2.0g和甘油3.0g加水30ml，在同上速度下攪拌制成均勻的半透明膠體狀磷脂分散體系。加入注射用核桃仁油30g，加水至100ml制成初乳。再經(jīng)過調pH值、勻化、過濾、罐裝、滅菌即制得30％核桃仁油脂肪乳。
實施例6按配方3，先用適量水溶解氟尿嘧啶，再按與實施例3同樣的操作，得到脂肪乳劑。
實施例7按配方4，先將紫杉醇溶解在椰子油中，再與注射用核桃仁油混勻，按與實施例3同樣的操作，得到脂肪乳劑。
實施例8按配方5，先將紫杉醇溶解在聚氧乙烯蓖麻油中，再與注射用核桃仁油混勻，按與實施例3同樣的操作，得到脂肪乳劑。
實施例9按配方6，先用適量水溶解高三尖杉酯堿，再按與實施例3同樣的操作，得到脂肪乳劑。
實施例10按配方7，與實施例3同樣地操作，得到脂肪乳劑。
實施例11本發(fā)明的口服膠囊制備如下稱取維生素E 0.675g作為抗氧化劑，在室溫下投于900g酸棗仁油或花椒仁油或核桃仁油中，攪拌溶解成一種澄清、透明溶液。
按明膠∶水∶甘油∶防腐劑＝1∶1∶0.4∶0.001的比例，將大部分蒸餾水投入反應鍋內(nèi)，加熱至50-60℃，開啟攪拌，投入明膠、甘油及防腐劑等，容器用剩余蒸餾水蕩洗，倒入鍋內(nèi)，逐漸升溫，使物料全部溶化均勻。關閉反應鍋，開啟真空泵，使鍋內(nèi)真空度維持在表壓0.065-0.080Mpa之間，保持30-60分鐘，解除真空，料液經(jīng)120目篩過濾至料桶內(nèi)，于50-60℃保溫待用。
在室內(nèi)溫度21-24℃、相對濕度＜40％、膠盒溫度50-60℃、分割器電壓110-150V、膠帶溫度10-15℃、膠皮厚度0.8-1.0mm的工藝條件下，用8號模具壓制出1000粒軟膠丸，定時檢測內(nèi)容物的裝量。膠丸在壓制定型4小時后，揩丸去油，初烘8小時，用石油醚(30-50℃)洗滌后，再烘干，經(jīng)整理揀去廢丸后包裝。
試驗例1昆明種小鼠(19-21g)40只，雌雄各半，靜脈注射本發(fā)明的乳劑0.5ml/20g體重，共三次，間隔4小時，即最大耐受量為75ml/kg，觀察七天，實驗期間小鼠未出現(xiàn)不良反應和死亡情況，解剖后動物內(nèi)臟器官未見異常。
按常規(guī)藥物溶血方法試驗，結果無溶血作用。通過對豚鼠全身過敏試驗顯示，本發(fā)現(xiàn)的乳劑對豚鼠無明顯的過敏反應。
家兔耳緣靜脈(血管)連續(xù)7天分別緩慢注射本發(fā)明的乳劑15ml/kg和5ml/kg劑量，結果顯示對家兔耳緣靜脈無明顯的刺激作用。
試驗例2按GB384-81測得能量熱值，本發(fā)明核桃仁油為37599kJ/kg，和大豆油37243kJ/kg相當，核桃仁油乳劑為6303kJ/kg。
試驗例3 小鼠耐缺氧、抗疲勞試驗選健康雄性小鼠40只，按體重隨機分為4組，每組10只。核桃仁油乳劑的三個劑量組分別為25ml/kg、12.5ml/kg、6.25ml/kg，另設生理鹽水組給予同體積的生理鹽水。每天尾靜脈注射一次，連續(xù)給藥7天，末次給藥后2小時進行試驗。
耐缺氧試驗將各受試小鼠分別放入裝有10克鈉石灰的250ml無色透明密閉的廣口瓶內(nèi)，自小鼠放入瓶內(nèi)開始計時，直至小鼠停止呼吸。計算平均存活時間(分鐘)，比較各給藥組和生理鹽水組之間差異的顯著性。
抗疲勞試驗小鼠分別稱體重，按體重的5％在鼠尾根部負重，放入水溫25℃、水深40cm的大水缸中，強迫小鼠持續(xù)游泳直至沉入水底而死亡，記錄各鼠持續(xù)游泳時間(分鐘)，用t測驗作數(shù)據(jù)的統(tǒng)計學分析，比較各給藥組和生理鹽水組之間差異的顯著性。
表1 核桃仁油乳劑不同劑量靜脈給藥對小鼠耐缺氧、抗疲勞的影響

與生理鹽水組比較，*p＜0.05，**p＜0.01。
如上表1所示，耐缺氧試驗統(tǒng)計處理表明，核桃仁油乳劑中、高劑量組的小鼠平均存活時間與生理鹽水組的小鼠平均存活時間之間差異非常顯著(p＜0.01)。試驗結果提示，樣品核桃仁油乳劑對小鼠有一定的耐缺氧作用，能增強機體非特異性抵抗能力，量效關系明顯。
負重游泳試驗統(tǒng)計分析表明，核桃仁油乳劑中、高劑量組的小鼠持續(xù)游泳時間與生理鹽水組比較差異非常顯著(p＜0.01)。上述試驗結果證明，核桃仁油乳劑在25ml/kg劑量下能明顯延長小鼠的游泳時間，增強小鼠抗疲勞作用，量效關系明顯。
試驗例4 對小鼠免疫功能的影響對淋巴細胞增殖的影響C57BL/6小鼠30只，隨機分為5組，每組6只，即核桃仁油乳劑25ml/kg、12.5ml/kg、6.25ml/kg，生理鹽水組(0.5ml/只)，Intralipid(大豆油脂肪乳)12.5ml/kg，靜脈注射每天一次，共7天。末次給藥結束后處死動物，無菌條件下取脾，制備脾細胞懸液。
計數(shù)脾細胞，并調整濃度為1％107個細胞/ml，在96孔培養(yǎng)板上每孔加細胞懸液100μl，ConA 50μl和RPMI-1640培養(yǎng)液50μl，各組均設三復孔，37℃，5％CO2條件下培養(yǎng)48小時，加入3H-TdR 0.5μci/孔，繼續(xù)培養(yǎng)18小時。用多頭細胞收集器收集細胞，在液閃儀上測CPM值，將給藥組與對照組的數(shù)據(jù)進行比較。
對小鼠NK細胞活性的影響C57BL/6小鼠30只，隨機分為5組，每組6只，即核桃仁油乳劑25、12.5、6.25ml/kg，Intralipid 12.5ml/kg，生理鹽水組(0.5ml/只)，均靜脈注射每天一次，共7天。末次給藥結束后處死動物，無菌條件下取脾，制備脾細胞懸液，用RPMI-1640培養(yǎng)基(Difco產(chǎn)品，內(nèi)含15％小牛血清，巰基乙醇，Hepes等)調整細胞濃度為1×106個/ml作效應細胞，另取已培養(yǎng)24小時的YAC-1細胞，調整細胞濃度為1×104個/ml作為靶細胞，分別取效應細胞和靶細胞各100μl加在96孔細胞培養(yǎng)板的孔中，加入3H-TdR0.5μci/孔，每組均設三復孔，37℃，5％CO2條件下培養(yǎng)24小時后收集細胞，測CPM值，計算特異性抑制百分率(Pi)表示NK細胞活性。

對小鼠IL-2的影響C57BL/6小鼠30只，隨機分為5組，每組6只，即核桃仁油乳劑25、12.5、6.25ml/kg，Intralipid 12.5ml/kg，生理鹽水組(0.5ml/只)，均靜脈注射7天。末次給藥結束后處死動物，無菌條件下取脾，用RPMI-1640培養(yǎng)基(Difco產(chǎn)品，內(nèi)含15％小牛血清，巰基乙醇，Hepes等)制備脾細胞懸液，并調整細胞濃度為1×107個/ml，24孔板上每孔加2ml細胞及ConA 5μg/ml，37℃、5％CO2條件下培養(yǎng)24小時后收集上清液，用IL-2依賴性細胞株CTLL以3H-TdR摻入法測定IL-2活性。在96孔培養(yǎng)板的每個孔中加入CTLL細胞懸液(1×105個/ml)100μl、3H-TdR 20μl、上清液100μl，測定CPM值，并比較給藥組和對照組的差異。
試驗結果見表2。
表2 核桃仁油乳劑不同劑量靜脈給藥對小鼠免疫功能的影響

*P＞0.5，Intralipid(大豆油脂肪乳)與生理鹽水比較。
**P＜0.01，核桃仁油乳劑組與生理鹽水組及Intralipid靜脈乳劑組比較。
上述結果表明，核桃仁油乳劑在25、12.5、6.25ml/kg劑量連續(xù)靜脈注射7天后，均能明顯促進小鼠脾淋巴細胞增殖作用，顯著地激活自然殺傷細胞(NK)活性，和明顯地促進白介素-2(IL-2)的生成。即本發(fā)明的乳劑在提高機體免疫功能，如機體脾淋巴細胞增殖，提高NK活性和促進IL-2的生成等方面，其效果明顯大于大豆油脂肪乳。
試驗例5小鼠40只，隨機分為四組，分別靜脈注射生理鹽水10ml/kg，核桃仁油乳劑6.25、12.5和25ml/kg，連續(xù)7天，末次注射后處死，采血，測定血清總蛋白。
結果見表3。
表3 核桃仁油乳劑對小鼠血清總蛋白的影響

與生理鹽水組比較，*p＜0.05，**p＜0.01。
試驗例6抑制小鼠肝癌HAC和Lewis肺癌的作用取生長良好的HAC腹水，用生理鹽水以1∶4稀釋制備成細胞懸液，每只小鼠腋皮下接種0.2ml，隨機分組，設生理鹽水組及核桃仁油乳劑3個劑量組，分別為25、12.5和6.25ml/kg，次日起給藥，連續(xù)靜脈注射7天。接種后10日頸椎脫臼處死動物，解剖取瘤塊，比較各劑量組的瘤重。用以下公式計算腫瘤抑制率。

結果見表4。
表4 桃仁油乳劑對小鼠肝癌HAC的抑制作用

與生理鹽水組比較，**p＜0.01。
取生長良好的Lewis肺癌瘤塊，用生理鹽水以1∶4勻漿制備成細胞懸液，每只小鼠腋皮下接種0.2ml，隨機分組，設生理鹽水組，核桃仁油乳劑設3個劑量組，分別為25、12.5和6.25ml/kg，次日起給藥，連續(xù)靜脈注射7天。接種后14日頸推脫臼處死動物，解剖取瘤塊，比較各劑量組的瘤重。用以下公式計算腫瘤抑制率。

結果見表5。
表5 桃仁油乳劑對小鼠Lewis肺癌抑制作用

與生理鹽水組比較，**P＜0.01。
從表4、表5可見，核桃仁油乳劑在上述劑量時，有一定的抑制小鼠肝癌HAC和Lewis肺癌生長的作用。
進一步研究發(fā)現(xiàn)，從核桃仁中提取的核桃仁油所制成的乳劑在用作能量乳的同時，也發(fā)現(xiàn)有上述相似的功能，可能與核桃仁具有補腎、溫肺和潤腸的作用有關。
產(chǎn)業(yè)上利用的可能性本發(fā)明所述的核桃仁油靜脈乳劑，乳化劑安全可靠、配方合理。除了能補充機體營養(yǎng)能量、抗疲勞、耐缺氧，顯著提高人體免疫功能、升高血清總蛋白外，它還對動物移植性腫瘤Lewis肺癌、小鼠肝癌HAC有一定的抑制作用，并兼有原料藥補腎、溫肺和潤腸的功能，價格又低廉，是一種具有多功效的能量型乳劑。而且，可用于治療腫瘤、性病、艾滋病、免疫功能低下、小兒營養(yǎng)不良、外科術后及需補充脂肪要素的疾病等。
用本發(fā)明方法提取的果仁油，具有質量好、收率高且療效確定的優(yōu)點，特別是引入了充氮保護工藝，大大降低了油脂的氧化，有效地提高了果仁油的質量。
用第二種方法的最大優(yōu)點是不使用有機溶劑，從而避免了污染。該方法提取的果仁油中的過氧化值可以＜6.0(meq·kg-1)。
權利要求
1.一種從植物果仁中提取的果仁油，其特征在于包含甘油三酯90-99.9％，甘油二酯0.01-5％，甘油單酯0.01-3％，谷甾醇0.1-2.5％，環(huán)羊毛甾醇0.01-1％。
2.根據(jù)權利要求1所述的果仁油，其特征在于所述果仁油酯解后的脂肪酸組分為十六烷酸5-8％，十八烷酸1-3％，十八碳一烯酸18-30％，十八碳二烯酸50-65％，十八碳三烯酸6-14％。
3.根據(jù)權利要求1所述的果仁油，其特征在于按脂肪油檢測其理化常數(shù)為相對密度0.920-0.930；折光率1.470-1.480；酸值＜0.80，碘值120.0-155.0；皂化值180.0-200.0，過氧化值＜30.0meq·kg-1；熾灼殘渣0.01-0.04％，砷鹽＜2ppm；重金屬＜10ppm；平均分子量873.96。
4.根據(jù)權利要求1-3之一所述的果仁油，其特征在于以酸棗仁、花椒仁或核桃仁為原料。
5.權利要求1所述果仁油的提取方法，其特征在于包括以下步驟(1)粗提果仁或果仁粉經(jīng)壓榨，有機溶劑提取或超臨界流體提取得到粗油；(2)脫色用吸附脫色劑脫色，得到脫色油；(3)堿煉將脫色油溶于石油醚，攪拌下加入化學計量的NaOH溶液，靜置分層后，有機層經(jīng)水洗，得到乳液；(4)破乳于攪拌下在乳液中加入丙酮，分層后取上層油相；(5)吸附、水洗將油相先后用中性氧化鋁和白陶土進行吸附、過濾后，濾液在氮氣氛圍下脫除有機溶劑，再用溫水洗滌、干燥，再用中性氧化鋁吸附，得到精煉油。
6.權利要求1所述果仁油的提取方法，其特征在于包括以下步驟(1)粗提果仁或果仁粉經(jīng)壓榨、有機溶劑提取或超臨界提取得粗油；(2)脫膠粗油攪拌、加熱、加入磷酸，使之充分反應；(3)堿煉脫膠油中加入同溫NaOH或Na2CO3溶液，充分反應后靜置分層，分離得到堿煉油；(4)水洗用純化水洗滌堿煉油，得水洗油；(5)脫水水洗油中加入吸附劑脫去水分或在抽真空條件下加熱脫去水分，得到澄清脫水油；(6)脫色將脫水油用吸附脫色劑脫色，得脫色油；(7)脫臭將脫色油在抽真空和氮氣攪拌下，加熱使油溫升至120℃-160℃，通純水蒸汽，繼續(xù)加熱至160℃-260℃，保持0.5-2小時，停止通蒸汽，除去油中的水分，得脫臭油。
7.一種藥物組合物，包含治療有效量的權利要求1-4之一所述的果仁油及一種或多種藥用輔料。
8.根據(jù)權利要求7所述的藥物組合物，其中還包含選自抗腫瘤藥物、抗愛滋病藥、免疫調節(jié)劑、營養(yǎng)劑的一種或多種其他活性藥物。
9.根據(jù)權利要求7所述的藥物組合物，其中還包含一種或多種其他植物油。
10.根據(jù)權利要求7所述的藥物組合物，所述藥物組合物為含權利要求1-4之一所述果仁油的脂肪乳劑，其中所述藥用輔料包括選自乳化劑、增溶劑、助溶劑、等滲劑、抗氧化劑和穩(wěn)定劑的一種或幾種。
11.根據(jù)權利要求10所述的脂肪乳劑，其中包含注射用核桃仁油 5-30g注射用卵磷脂 1.0-3.0g注射用甘油 1.5-3.0gVit E 0-0.15g注射用水 加至100ml
12.根據(jù)權利要求11所述的脂肪乳劑，其中包含注射用核桃仁油 20g注射用大豆卵磷脂 1.2g注射用甘油 2.5g注射用水 加至100ml
13.根據(jù)權利要求8或10所述的藥物組合物，其中包含氟尿嘧啶 1.0-5.0g注射用核桃仁油 5-30g注射用大豆卵磷脂 1.0-3.0g注射用甘油 1.5-3.0gVit E 0-0.15g注射用水 加至100ml
14.根據(jù)權利要求8-10之一所述的藥物組合物，其中包含紫杉醇 10-60mg椰子油 5-15g注射用核桃仁油 5-15g注射用卵磷脂 1.0-3.0g注射用甘油 1.5-3gVit E 0-0.15g注射用水 加至100ml
15.根據(jù)權利要求7所述的藥物組合物，所述藥物組合物為含權利要求1-4之一所述果仁油的膠囊劑。
16.權利要求1-4之一所述果仁油在制備用于治療以下疾病的藥物上的應用，所述疾病為腫瘤、性病、艾滋病、免疫功能低下、小兒營養(yǎng)不良、外科術后及需補充脂肪要素的疾病。
全文摘要
本發(fā)明提供從植物果仁中提取的果仁油，包含甘油三酯95－99.9％，甘油二酯0.01－3％，甘油單酯0.01－0.5％，谷甾醇0.1－1.5％，環(huán)羊毛甾醇0.01－0.5％。還提供所述果仁油的兩種提取方法，含本發(fā)明果仁油的藥物組合物及其用途。用本發(fā)明方法提取的果仁油，具有質量好、收率高且療效確定的優(yōu)點。本發(fā)明所述的核桃仁油靜脈乳劑，乳化劑安全可靠、配方合理。除了能補充機體營養(yǎng)能量、抗疲勞、耐缺氧，顯著提高人體免疫功能、升高血清總蛋白外，它還對動物移植性腫瘤Lewis肺癌、小鼠肝癌HAC有一定的抑制作用，并兼有原料藥補腎、溫肺和潤腸的功能，價格又低廉，是一種具有多功效的能量型乳劑。
文檔編號C11B1/00GK1400298SQ0210886
公開日2003年3月5日 申請日期2002年4月16日 優(yōu)先權日2002年4月16日
發(fā)明者李大鵬 申請人:李大鵬