阿掏比克酸三唑基與1h?四氮唑基衍生物的組合物用于制備防治胰腺纖維化藥物的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種阿掏比克酸即Artalbic acid的O?(三唑基)乙基與O?(1H?四氮唑基)乙基衍生物的組合物在預(yù)防或治療胰腺纖維化藥物中的應(yīng)用，本發(fā)明涉及有機(jī)合成和藥物化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及阿掏比克酸即Artalbic acid的O?(三唑基)乙基與O?(1H?四氮唑基)乙基衍生物的組合物、制備方法及其在制備預(yù)防或治療胰腺纖維化藥物上的用途。本發(fā)明公開了一種阿掏比克酸即Artalbic acid的O?(三唑基)乙基與O?(1H?四氮唑基)乙基衍生物的組合物及其制備方法。藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)表明，本發(fā)明的阿掏比克酸即Artalbic acid的O?(三唑基)乙基與O?(1H?四氮唑基)乙基衍生物的組合物具有預(yù)防或治療胰腺纖維化的作用，具有開發(fā)預(yù)防或治療胰腺纖維化藥物的價值。
【專利說明】
阿掏比克酸三唑基與1H-四氮唑基衍生物的組合物用于制備 防治胰腺纖維化藥物
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及有機(jī)合成和藥物化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及組合物、制備方法及其用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 胰腺纖維化是各種原因所致慢性胰腺炎的共同特征，同時也是與其伴隨的組織病 理學(xué)特點(diǎn)，表現(xiàn)為大量成纖維細(xì)胞增生和富含連接組織的細(xì)胞外基質(zhì)。是多種原因?qū)е乱?腺損傷修復(fù)的結(jié)果，近期發(fā)現(xiàn)胰腺星狀細(xì)胞和多種細(xì)胞因子與胰腺纖維化有關(guān)，胰腺纖維 化目前發(fā)病率愈來愈高，急需研發(fā)高效低毒的抗胰腺纖維化藥物。
[0003] 胰腺纖維化的治療目前已有的藥物存在毒性大、安全性低的問題，從天然產(chǎn)物中 尋找化合物或先導(dǎo)化合物并進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾獲得其衍生物，從而得到高效低毒的潛在藥物最 有重要價值。
[0004] 本發(fā)明涉及的化合物I是一個2011年發(fā)表（Antonella Maggio et al ·， 2011.Artalbic acid,a sesquiterpene with an unusual skeleton from Artemisia alba (Asteraceae)from Sicily.Tetrahedron Letters,52(2011)4543-4545)的化合物， 我們對化合物I進(jìn)行了結(jié)構(gòu)修飾，獲得了兩個新的衍生物即化合物III和化合物IV，并用化 合物III和化合物IV制備了組合物并對該組合物抗胰腺纖維化活性進(jìn)行了評價，其具有抗 胰腺纖維化活性。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明公開了一個新的組合物，該組合物由化合物III和化合物IV組成，該組合物 中化合物III和化合物IV的質(zhì)量百分?jǐn)?shù)分別為80%和20%。
[0006]
[0007] 本發(fā)明公開的組合物可以制成藥學(xué)上可接受的鹽或藥學(xué)上可接受的載體。
[0008] 藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)表明，本發(fā)明的組合物具有較好的抗胰腺纖維化作用。本發(fā)明的藥學(xué) 上可接受的鹽具有同樣的藥效。
[0009] 以下通過實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的說明，但本發(fā)明的保護(hù)范圍不受具體實(shí) 施例的任何限制，而是由權(quán)利要求加以限定。
【具體實(shí)施方式】
[0010] 實(shí)施例1化合物Artalbic acid的制備
[0011] 化合物Artalbic acid(I)的制備方法參照Antonella Maggio等人發(fā)表的文獻(xiàn) (Antonella Maggio et al.,2011.Artalbic acid,a sesquiterpene with an unusual skeleton from Artemisia alba(Asteraceae)from Sicily. Tetrahedron Letters ,52 (2011 )4543-4545)的方法。
[0012]
[0013] 實(shí)施例2 Artalbic acid的0-溴乙基衍生物（II)的合成
[0014] 將化合物I(266mg，l .OOmmol)溶于IOmL苯，向溶液中加入四丁基溴化銨（TBAB) (0.088)，1，2-二溴乙燒(3.76(^，20.00_〇1)和61]1]^的50%氫氧化鈉溶液?；旌衔镌?0攝氏 度攪拌Iehieh之后將反應(yīng)液倒入冰水中，立即用二氯甲烷萃取兩次，合并有機(jī)相溶液。然 后對有機(jī)相溶液依次用水和飽和食鹽水洗滌5次，再用無水硫酸鈉干燥，最后減壓濃縮去除 溶劑得到產(chǎn)物粗品。產(chǎn)物粗品用硅膠柱層析純化(流動相為:石油醚/丙酮= 100:1.0，v/V)， 收集棕色集中洗脫帶并揮去溶劑即得到化合物II的棕色粉末(272mg，73% )。
[0015] 1H NMR(500MHz,DMS0-d6)5ll.41(s,lH),6.06(s,lH),5.76(s,lH),4.99(s,lH), 4.71(s,1H),4.56(s,1H),3.86(s,2H),3.54(s,2H),2.65(s,1H),2.43(s,2H),2.33(s,2H), 2.10(s,lH),1.64(s,3H),1.54(s,lH),1.44(s,2H),0.95(s,3H).
[0016] 13C NMR(125MHz,DMS0-d6)S201.95(s),175.93(s),149.13(s),148.15(s),117.05 (s),109.43(s),81.86(s),70.27(s),57.68(s),41.26(s),39.07(s),38.86(s),35.69(s), 33.36(s),30.72(s),20.44(s),18.42(s).
[0017] HRMS(ESI)m/z[M+H]+calcd for Ci7H26BrO4:373.1014；found 373.1017.
[0018]
[0019] 實(shí)施例3 Artalbic acid的0_(三唑基）乙基衍生物（III)的合成 [0020] 將化合物II(187mg，0.5mmo 1)溶于25mL乙腈當(dāng)中，向其中加入無水碳酸鉀(345mg， 2 · 5mmol)，鵬化鉀（84mg，0 · 5mmol)和 1，2，3-三氮挫（2760mg，40mmol)，混合物加熱回流3h。 反應(yīng)結(jié)束后將反應(yīng)液倒入冰水中，用等量二氯甲烷萃取三次，合并有機(jī)相。依次用水和飽和 食鹽水洗滌合并之后的有機(jī)相，再用無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮去除溶劑得到產(chǎn)物粗品。產(chǎn) 物粗品用硅膠柱層析純化(流動相為:石油醚/丙酮= 100: ι.ο，v/v)，收集淡黃色集中洗脫 帶即得到化合物III的淡黃色膠狀固體(124.5mg，69% )。
[0021] 1H NMR(500MHz,DMS0-d6)5l6.23(s,lH) ,7.99(d,J = 29.4Hz,2H) ,6.11(s,lH), 5.82(s,lH),4.76(d J=17.3Hz,2H),4.62(s,1H),4.24(s,1H),4.18(s,1H),3.84(s,2H), 2.70(s,lH),2.52(d J=16.3Hz,4H),2.02(s,lH),1.69(s,3H),1.62(s,2H),1.51(s,lH), 1.02(s,3H).
[0022] 13C NMR(125MHz,DMS0-d6)S201.95(s),175.95(s),149.17(s),148.18(s),136.99 (s),120.76(s),117.09(s),109.44(s),81.89(s),65.54(s),57.72(s),46.43(s),41.30 (s),39.08(s),38.89(s),35.71(s),30.77(s),20.46(s),18.43(s).
[0023] HRMS(ESI) :m/z[M+H].calcd for Ci9H28N3〇4:362.2080;found:362.2085〇
[0024]
[0029] HRMS(ESI) :m/z[M+H]+calcd for Ci8H27N4〇4:363.2032;found:363.2029〇
[0030]
[0031] 實(shí)施例5組合物抗胰腺纖維化活性
[0032] 1 材料
[0033] 1 · 1動物Wistar大鼠，雄性，體重180_200g。
[0034] 1.2組合物劑量:0.911^/1^。
[0035] 組合物的制備：將研磨之后過200目網(wǎng)的SOmg化合物III的粉末和研磨之后過200 目網(wǎng)的20mg化合物IV的粉末裝入帶蓋的小管中并用渦輪攪拌儀混合即得到IOOmg組合物， 使用時用水溶解這IOOmg的組合物即得到組合物的溶液。
[0036] 2實(shí)驗(yàn)方法
[0037] 2.1造模方法:Wistar大鼠以腹腔注射dl-乙硫氨酸250mg/天，連續(xù)2個月，可出現(xiàn) 胰臟腺細(xì)胞減少，間質(zhì)內(nèi)脂肪及結(jié)締組織的增生。
[0038] 2.2分組及給藥方法
[0039]模型大鼠隨機(jī)分為模型組，組合物0.9mg/kg組、化合物III 0.9mg/kg組和化合物 IV 0.9mg/kg組，另設(shè)空白對照組。給藥組于造模開始后給藥，口服連續(xù)30天;60天時解剖動 物。
[0040] 2.3檢測指標(biāo)
[00411 2.3.1實(shí)驗(yàn)結(jié)束時取胰臟稱重。
[0042] 2.3.2胰臟羥脯氨酸含量測定取IOOmg樣本在水中勻漿，IlOcClON HCl中水解20小 時。HCl用氮?dú)鈸]發(fā)，水解產(chǎn)物用雙蒸水溶解后過濾。取0.5ml液體與3ml枸櫞酸磷酸緩沖液 (0.15M枸櫞酸加0.6M磷酸氫二鈉)和0.5ml溶于9M磷酸的IM過碘酸混合。加1.75ml提取緩沖 液(5份甲苯:5份2-甲基-卜丙醇:2份1-丙醇），震蕩30min，離心。組織相(0.6ml)與Ehrlich, s試劑混合放置15min。在565nm測定吸收度，用4-輕-1-脯氨酸制作標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算濃度，含量 以ug/g組織表示。
[0043] 2.3.3組織學(xué)檢查胰臟組織用10%福爾馬林固定，石蠟包埋，染色后鏡檢。對纖維 化情況評分(0-3分）。
[0044] 3 結(jié)果
[0045] 3.1組合物對大鼠胰臟臟器系數(shù)的影響
[0046] 實(shí)驗(yàn)結(jié)束時，將大鼠處死、解剖，稱量體重和胰臟重并計(jì)算其與體重的比值(胰臟 臟器系數(shù)），結(jié)果見表1。組合物對胰臟臟器系數(shù)的影響，與模型組比較有顯著性差異?；?物III和化合物IV對胰臟臟器系數(shù)的影響，與模型組比較無顯著性差異。
[0047] 表 1
[0049] *表示p〈0.05,與模型組比較
[0050] 3.2胰臟羥脯氨酸含量測定
[0051] 實(shí)驗(yàn)結(jié)束時，對各組大鼠進(jìn)行肺部羥脯氨酸含量測定，結(jié)果如表2。組合物對羥脯 氨酸含量的影響，與模型組比較有顯著性差異?；衔颕II和化合物IV對羥脯氨酸含量的影 響，與模型組比較無顯著性差異。
[0052] 表 2
[0054] *表示ρ〈0·05,與模型組比較
[0055] 3.3組織學(xué)檢查
[0056] 實(shí)驗(yàn)結(jié)束時，將大鼠處死、解剖;標(biāo)本常規(guī)包埋、固定、HE染色，鏡檢。
[0057]結(jié)果:模型組第60天可見胰導(dǎo)管周圍嚴(yán)重炎癥反應(yīng);嗜中粒細(xì)胞核淋巴細(xì)胞浸潤， 間質(zhì)水腫，出血以及偶見胰泡細(xì)胞壞死;胰泡細(xì)胞消失位置及胰泡間出現(xiàn)纖維化。
[0058] 組合物可減少炎癥反應(yīng)和纖維化。評分結(jié)果見表3。組合物對評分的影響，與模型 組比較有顯著性差異。
[0059]表 3
[0061] *表示p〈0.05,與模型組比較;空白對照組的炎癥細(xì)胞浸潤和纖維化評分都為0.
[0062] 結(jié)論:本發(fā)明通過組合物對大鼠胰腺纖維化的影響，證實(shí)了組合物具有抗胰腺纖 維化的作用。因此，組合物可作為活性成分用于制備抗胰腺纖維化的藥物。而化合物III和 化合物IV無此活性，不能用于制備抗胰腺纖維化的藥物。
[0063] 實(shí)施例6本發(fā)明所涉及組合物片劑的制備
[0064] 取2克組合物，加入制備片劑的常規(guī)輔料18克，混勻，常規(guī)壓片機(jī)制成100片。
[0065] 實(shí)施例7本發(fā)明所涉及組合物膠囊的制備
[0066] 取2克組合物，加入制備膠囊劑的常規(guī)輔料如淀粉18克，混勻，裝膠囊制成100粒。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種組合物，其特征為該組合物由化合物HI和化合物IV組成，該組合物中化合物 III和化合物IV的質(zhì)量百分?jǐn)?shù)分別為80%和20%，2. 如權(quán)利要求1所述的組合物的制備方法，其特征為:將化合物III的粉末和化合物IV 的粉末按照質(zhì)量百分?jǐn)?shù)分別為80%和20%充分混合。3. -種如權(quán)利要求1所述的組合物在治療膜腺纖維化藥物中的應(yīng)用。4. 如權(quán)利要求3所述的組合物在治療膜腺纖維化藥物中的應(yīng)用，其特征為:所述組合物 逆轉(zhuǎn)膜腺纖維化所引起的膜臟臟器系數(shù)下降。5. 如權(quán)利要求3所述的組合物在治療膜腺纖維化藥物中的應(yīng)用，其特征為:所述組合物 逆轉(zhuǎn)膜腺纖維化所引起的徑脯氨酸含量升高。6. 如權(quán)利要求3所述的組合物在治療膜腺纖維化藥物中的應(yīng)用，其特征為:所述組合物 逆轉(zhuǎn)膜腺纖維化所引起的炎癥細(xì)胞浸潤升高。
【文檔編號】C07D249/04GK106074529SQ201610347322
【公開日】2016年11月9日
【申請日】2016年5月24日
【發(fā)明人】丁秋菊
【申請人】南京海澳斯生物醫(yī)藥科技有限公司