復(fù)方鹽酸溶菌酶軟膏及其制備方法和應(yīng)用
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種治療皮膚潰瘍的復(fù)方鹽酸溶菌酶軟膏及其制備方法和應(yīng)用。所述的軟膏包括活性成份和輔料，所述的活性成份是鹽酸溶菌酶和蔗糖；其中鹽酸溶菌酶在復(fù)方鹽酸溶菌酶軟膏中的重量百分比為1.4％～3.3％；蔗糖在復(fù)方鹽酸溶菌酶軟膏中的重量百分比為40％～50％；所述的輔料為制備復(fù)方鹽酸溶菌酶軟膏所需的可接受的任何輔料。本發(fā)明軟膏具有祛腐生肌作用，可抑菌、殺菌、抗病毒、抑制感染、促進(jìn)創(chuàng)面迅速愈合，本發(fā)明還提供復(fù)方鹽酸溶菌酶軟膏在制備治療皮膚潰瘍的藥物中的應(yīng)用。
【專(zhuān)利說(shuō)明】
復(fù)方鹽酸溶菌酶軟膏及其制備方法和應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及一種治療皮膚潰瘍的復(fù)方鹽酸溶菌酶軟膏及其制備方法和應(yīng)用，屬于 醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 慢性皮膚潰瘍又稱難治性潰瘍，多見(jiàn)于老年人，尤其是在有糖尿病、脈管炎及下肢 靜脈回流障礙的老年人群中更為常見(jiàn)。隨著人口的老齡化趨勢(shì)及糖尿病、心血管疾病等發(fā) 病率的增高，慢性皮膚潰瘍的發(fā)病率也有所上升。臨床上因動(dòng)脈硬化閉塞癥、糖尿病、心腦 血管疾病及創(chuàng)傷引起的皮膚潰瘍?cè)絹?lái)越多，占外科住院患者的3 %左右。由于皮膚潰瘍發(fā)生 在體表，具有病程長(zhǎng)、對(duì)外觀影響大以及并發(fā)癥多等特點(diǎn)，對(duì)患者的生活質(zhì)量造成了極大的 危害。
[0003] 皮膚潰瘍是臨床上較常見(jiàn)的合并癥之一，其形成因素多種多樣。難治性潰瘍常因 原發(fā)疾病如燒傷、燙傷、糖尿病等病情長(zhǎng)期得不到控制而引起，如處理方法不當(dāng)，可發(fā)生局 部炎癥，甚至引發(fā)全身性炎癥反應(yīng)，病程反復(fù)，迀延難愈，給患者帶來(lái)極大痛苦，嚴(yán)重影響其 生活質(zhì)量。目前，皮膚潰瘍的治療分為全身療法和局部治療。全身支持療法，補(bǔ)充高能飲食， 糾正貧血和低蛋白血癥。由于長(zhǎng)期營(yíng)養(yǎng)不良，致使皮膚抵抗力低下，皮膚彈性減弱，脂肪層 較薄，機(jī)體免疫力降低，因此對(duì)病人要進(jìn)行有針對(duì)性的飲食護(hù)理，給予病人充足合理的營(yíng)養(yǎng) 素，滿足病人對(duì)營(yíng)養(yǎng)的需求，要給予高蛋白、高熱量、高維生素、富含纖維素飲食，增強(qiáng)機(jī)體 抵抗力，預(yù)防褥瘡的發(fā)生。局部治療法是對(duì)創(chuàng)傷面進(jìn)行治療，根據(jù)褥瘡不同臨床時(shí)期，采取 相應(yīng)的治療措施。局部治療可分為物理治療及藥物治療。紫外線照射:紫外線具有殺菌、消 炎及干燥作用，對(duì)各類(lèi)細(xì)菌感染創(chuàng)面均有較好的殺菌作用。紅外線照射:在促進(jìn)血液循環(huán)， 增強(qiáng)細(xì)胞功能及局部抵抗力的同時(shí)，可使創(chuàng)面干燥，減少滲出，有利于組織的再生與修復(fù)。
[0004] 目前臨床上一般采用傳統(tǒng)治療皮膚潰瘍的方法即為盡可能地保持傷口干燥，以防 止發(fā)生細(xì)菌感染，吸收和排除傷口滲液，這些方法可使傷口脫水、結(jié)痂，但也存在缺陷，在痂 皮中混有一些表皮細(xì)胞，這些細(xì)胞被迫移向干燥痂皮下深處，從而延長(zhǎng)了褥瘡的愈合過(guò)程。
[0005] 總之，以上治療方法都存在不同程度的缺陷，使臨床應(yīng)用受到很大限制。為滿足廣 大患者的臨床需求，因此，本領(lǐng)域技術(shù)人員多年來(lái)一直在尋求一種安全高效，使用方便的治 療皮膚潰瘍的外用藥物，以豐富臨床用藥。
[0006] 按照中國(guó)藥典規(guī)定，用于燒傷或嚴(yán)重創(chuàng)傷的軟膏劑、乳膏劑、凝膠劑，應(yīng)是無(wú)菌制 劑。制劑所用的原料藥、輔料以及生產(chǎn)條件不滅菌或滅菌方法不當(dāng)?shù)脑挘谂R床上容易產(chǎn)生 二次染菌，造成創(chuàng)傷面更難愈合，治療效果很不理想或?qū)兠娈a(chǎn)生更大的危害。此外，專(zhuān) 用于治療皮膚潰瘍的鹽酸溶菌酶與蔗糖復(fù)方外用藥物，特別是復(fù)方鹽酸溶菌酶軟膏制劑尚 未見(jiàn)報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種治療皮膚潰瘍的復(fù)方鹽酸溶菌酶軟膏，本 發(fā)明還提供該軟膏的制備方法和應(yīng)用。
[0008] 術(shù)語(yǔ)說(shuō)明：
[0009] 本發(fā)明所述的皮膚潰瘍，是指以長(zhǎng)期不能愈合為主要臨床特征，皮膚組織缺損液 化感染壞死的一種體表疾病。
[00?0] 鹽酸溶菌酶:英文名Lysozyme hydrochloride，系自新鮮雞蛋清中提取的一種粘 多糖的堿性蛋白酶，與氯離子結(jié)合成為溶菌酶氯化物，CAS登錄號(hào)9066-59-5，市場(chǎng)可購(gòu)。
[0011] 本發(fā)明技術(shù)方案如下：
[0012] -種復(fù)方鹽酸溶菌酶軟膏，包括活性成份和輔料，所述的活性成份是鹽酸溶菌酶 和蔗糖;其中鹽酸溶菌酶在復(fù)方鹽酸溶菌酶軟膏中的重量百分比為1.4%~3.3 % ;蔗糖在 復(fù)方鹽酸溶菌酶軟膏中的重量百分比為40%~50%。
[0013] 根據(jù)本發(fā)明，所述的輔料為制備復(fù)方鹽酸溶菌酶軟膏所需的可接受的任何輔料。
[0014] 本發(fā)明所使用的鹽酸溶菌酶為本領(lǐng)域常規(guī)原料，市購(gòu)產(chǎn)品。其質(zhì)量衛(wèi)生部藥品標(biāo) 準(zhǔn)98版二部制定要求，其中每Img的效價(jià)不得少于6250單位(酶活力）。
[0015] 本發(fā)明提供以下優(yōu)選的技術(shù)方案：
[0016] -種治療皮膚潰瘍的復(fù)方鹽酸溶菌酶軟膏，由以下原料按質(zhì)量份制成： 鹽酸溶菌酶 3. 0~6. 0份 蔗糖 80~90份 甘油 Θ~10份
[0017] 聚乙二醇1000 0~6.0份 海藻酸鈉 1.0~1.8份 甘氨酸 3. 0~6. 0份 無(wú)菌水 80~90份。
[0018] 進(jìn)一步優(yōu)選的，一種治療皮膚潰瘍的復(fù)方鹽酸溶菌酶軟膏，由以下原料按質(zhì)量份 制成： 鹽酸溶菌酶 3. 0~5.()份 鹿糖 80~85份 甘油 5. 0~9. 0份
[0019] 聚乙二醇1000 2.0~5. 5份 海藻酸鈉 LO~1.6份 甘氨酸 3. 0~5. 0份
[0020] 無(wú)菌水 80~85份。.
[0021 ]更進(jìn)一步優(yōu)選的，一種治療皮膚潰瘍的復(fù)方鹽酸溶菌酶軟膏，由以下原料按質(zhì)量 份制成： 鹽酸溶菌酶 3.0:份 蔗糖 80份 甘油 5. 0份
[0022] 聚乙二醇 1000 2.0 份 海藻酸鈉 1. 0份 甘氨酸 3.0份 無(wú)菌水 80份。
[0023] 或者，一種治療皮膚潰瘍的復(fù)方鹽酸溶菌酶軟膏，由以下原料按質(zhì)量份制成： 鹽酸溶菌酶 4. 0份 蔗糖 82份 甘油 7. Q份
[0024] 聚乙二醇 1000 3. 8 份 海藻酸鈉 1. 3份 甘氨酸 4. 0份 無(wú)菌水 83份。
[0025] 或者，一種治療皮膚潰瘍的復(fù)方鹽酸溶菌酶軟膏，由以下原料按質(zhì)量份制成： 鹽酸溶菌酶 5. 0份 蔗糖 85份 甘油 9. 0份
[0026] 聚乙二醇 1000 5. 5 份 海藻酸鈉 1. 6份 甘氨酸 5. 0份 無(wú)菌水 85份。
[0027] 根據(jù)本發(fā)明，所述復(fù)方鹽酸溶菌酶軟膏制劑的制備方法，包括如下步驟：
[0028] (1)按配比稱取鹽酸溶菌酶、蔗糖、甘油、聚乙二醇1000、海藻酸鈉、甘氨酸備用；
[0029] (2)按配比稱取鹽酸溶菌酶和甘氨酸，分別加無(wú)菌水溶解，并分別用0.1~0.22μπι 濾膜，進(jìn)口壓力〇.65MPa，過(guò)濾除菌后，將所得鹽酸溶菌酶料液、甘氨酸料液合并，輸送至已 滅菌的罐內(nèi)，常溫備用；
[0030] (3)按配比稱取蔗糖、甘油、聚乙二醇1000、海藻酸鈉、無(wú)菌水各組分混合，用2%~ 5%(W/W)鹽酸調(diào)pH4~6,然后升溫至126°C~131°C，并保持時(shí)間30~60min進(jìn)行滅菌，輸送 至已滅菌的罐內(nèi)存放，在50~55°C保溫備用；
[0031] (4)在無(wú)菌條件下，將步驟(2)、（3)所得的物料混合，攪拌均勻；
[0032] (5)將步驟(4)所得混和物抽入剪切罐中，在溫度控制在40~50°C條件下，在攪拌 下用5%(W/W)鹽酸調(diào)混合物的pH4~6之間，然后開(kāi)啟剪切機(jī)低速1000~1500r/min，剪切5 ~IOmin;然后高速2000~2500r/min剪切3~6分鐘，關(guān)閉剪切機(jī);開(kāi)啟攪拌轉(zhuǎn)速為30~50r/ min，繼續(xù)攪拌3~4min，然后再在攪拌轉(zhuǎn)速為20~25r/min繼續(xù)攪拌，降溫至30~35°C時(shí)停 止攪拌，即得。
[0033] 將上述產(chǎn)品進(jìn)行無(wú)菌包裝，檢驗(yàn)，入庫(kù)。
[0034] 根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選的，所述的復(fù)方鹽酸溶菌酶軟膏制劑的制備方法，步驟(5)的方法 如下：
[0035] (5)將步驟(4)所得混和物抽入剪切罐中，在溫度控制在40~50°C條件下，在攪拌 下用5%(W/W)鹽酸調(diào)混合物的pH4~5之間，然后開(kāi)啟剪切機(jī)低速1000~1200r/min，剪切5 ~IOmin;然后高速2000~2200r/min剪切3~4分鐘，關(guān)閉剪切機(jī);開(kāi)啟攪拌轉(zhuǎn)速為30~40r/ min，繼續(xù)攪拌3~4min，然后再在攪拌轉(zhuǎn)速為20~25r/min繼續(xù)攪拌，降溫至30~35°C時(shí)停 止攪拌，即得。
[0036]本發(fā)明所述的室溫系指10~30°C。
[0037] 需要說(shuō)明的是，在以上制備方法中，所有用于物料輸送的管道必須預(yù)先通過(guò)滅菌 處理。就制備方法而言，以上是本發(fā)明的優(yōu)選方法，但不限于此。本領(lǐng)域的技術(shù)人員根據(jù)其 熟知的知識(shí)，可以適當(dāng)加以調(diào)整。以上所述復(fù)方鹽酸溶菌酶軟膏制劑制備方法中未特別限 定的，可參照現(xiàn)有技術(shù)。
[0038] 實(shí)驗(yàn)證明本發(fā)明的復(fù)方鹽酸溶菌酶軟膏具有祛腐生肌作用，可抑菌、殺菌、抗病 毒、抑制感染、促進(jìn)創(chuàng)面迅速愈合。復(fù)方鹽酸溶菌酶軟膏在治療缺損性慢性皮膚潰瘍或糖尿 病皮膚潰瘍方面具有很好的療效，因此，本發(fā)明還提供復(fù)方鹽酸溶菌酶軟膏在制備治療皮 膚潰瘍的藥物中的應(yīng)用，特別是在制備治療缺損性慢性皮膚潰瘍或糖尿病皮膚潰瘍藥物中 的應(yīng)用。
[0039] 本發(fā)明所述的制備方法中復(fù)方鹽酸溶菌酶軟膏制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)如下，但不限于此。
[0040] 復(fù)方鹽酸溶菌酶軟膏質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)
[0041] 本發(fā)明每Ig復(fù)方鹽酸溶菌酶軟膏含鹽酸溶菌酶的效價(jià)不得低于31.25萬(wàn)單位;蔗 糖應(yīng)為標(biāo)示量的94.0%~110.0%。
[0042]【形狀】本品為類(lèi)白色軟膏劑。
[0043]【鑒別】鹽酸溶菌酶（1)取本品1片，加入純化水30mL溶解后，取出2mL加10 %氫氧化 鈉溶液5滴與10 %硫酸銅溶液1滴，混勻后顯紫紅色；
[0044] (2)取鑒別（1)項(xiàng)下溶解液5mL，加茚三酮試液ImL，加熱，溶液應(yīng)顯藍(lán)紫色；
[0045] (3)取鑒別（1)項(xiàng)下溶解液IOmL加醋酸-醋酸鈉緩沖液(取無(wú)水醋酸鈉6.7g，加水約 900mL，振搖使溶解，用醋酸調(diào)節(jié)pH值至5.4,加水稀釋至1000 mL，搖勾）制成每ImL中含鹽酸 溶菌酶0.4mg的溶液，照分光光度法（中國(guó)藥典2010年版二部附錄IVA)測(cè)定，在280nm的波長(zhǎng) 處有最大吸收，吸收度應(yīng)為〇. 39~0.49;
[0046] (4)取鹽酸溶菌酶標(biāo)準(zhǔn)品適量，用磷酸鹽緩沖液[取磷酸二氫鈉10.4g與磷酸氫二 鈉7.86g及乙二胺四乙酸二鈉O . 37g，加水溶解使成1000 mL，調(diào)節(jié)pH值至6.2]制成每ImL含 Img的溶液。照有關(guān)物質(zhì)項(xiàng)下方法試驗(yàn)。供試品色譜中，在與標(biāo)準(zhǔn)品色譜相應(yīng)的位置上，顯相 同顏色的條帶；
[0047]取蔗糖對(duì)照品10mg，加甲醇溶液20mL，作為對(duì)照品溶液。另取本品適量(約相當(dāng)于 蔗糖IOmg)加甲醇溶液20mL，作為供試品溶液。
[0048] 分別取上述溶液各2yL，點(diǎn)在薄層板上，立即吹干，用體積比10:5:3:2的I，2-二氯 乙烷:冰乙酸：甲醇：水混合液展開(kāi)，至15cm左右，取出，高溫吹干。重復(fù)一次展開(kāi)，高溫吹干 后。均勻的噴上麝香草酚溶液，130°C加熱10分鐘。供試品溶液主要斑點(diǎn)的顏色大小同對(duì)照 品溶液一致。
[0049]所述的麝香草酚溶液是按照如下方法制備的：取麝香草酚0.5g，溶解于IOOmL乙醇 與硫酸混合液(乙醇與硫酸體積比19: 1V/V)下同。
[0050]【檢查】粘度依照《中國(guó)藥典2010年版二部附錄VIG第二法》;黏度(Pa. s)48~69。 [00511 酸堿性取本品Ig，加水30mL，溶解后，濾過(guò)，取濾液，依法測(cè)定，PH值應(yīng)為4.5~ 6.00
[0052]粒度照粒度和粒度分布測(cè)定法《中國(guó)藥典2010年版附錄KE第一法》檢查，均不得 檢出大于90μηι的粒子。
[0053]有關(guān)物質(zhì)取本品照效價(jià)測(cè)定項(xiàng)下供試品溶液制備方法用ρΗ6.2磷酸鹽緩沖液制 成每ImL中含鹽酸溶菌酶Img的溶液，作為供試品溶液。取鹽酸溶菌酶標(biāo)準(zhǔn)品適量，用ρΗ6.2 磷酸鹽緩沖液制成每ImL含2mg的溶液，作為標(biāo)準(zhǔn)品溶液。分別精密吸取各溶液IOyL照電泳 法(《中國(guó)藥典》2010年版二部附錄VF)測(cè)定，用SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳法，考馬斯亮藍(lán)染 色。供試品溶液如顯雜質(zhì)斑點(diǎn)，與標(biāo)準(zhǔn)品溶液雜質(zhì)斑點(diǎn)比較，不得更深。
[0054] 轉(zhuǎn)化糖對(duì)照溶液，稱取葡萄糖IOmg，置50mL量瓶中，加甲醇溶液適量溶解，并用甲 醇溶液稀釋至刻度，搖勻，即得。
[0055]供試品溶液，稱取樣品1.0g，精密稱定，置50mL量瓶中，加甲醇溶液適量溶解，并用 甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻，即得。
[0056] 分別取上述溶液各2yL，點(diǎn)在硅膠G薄層板上，立即吹干，用體積比10: 5:3:2的1， 2-二氯乙烷:冰乙酸：甲醇:水混合液展開(kāi)，至15cm左右，取出，高溫吹干。重復(fù)一次展開(kāi)，高 溫吹干。均勻的噴上麝香草酚溶液，130 °C加熱10分鐘。結(jié)果;供試品溶液在對(duì)照溶液斑點(diǎn)處 不顯斑點(diǎn)；如顯斑點(diǎn)，供試品溶液斑點(diǎn)的顏色不得深于對(duì)照溶液斑點(diǎn)顏色1.0%。
[0057] 無(wú)菌照無(wú)菌檢查法《中國(guó)藥典2010年版附錄XIH》檢查，應(yīng)符合規(guī)定。
[0058]其他本品應(yīng)符合《中國(guó)藥典2010年版附錄IF》軟膏項(xiàng)下的其他要求。
[0059] 【效價(jià)測(cè)定】供試品溶液的制備稱取軟膏適量(相當(dāng)于溶菌酶25mg)，置試管中，加 水20mL攪拌后，過(guò)濾，取濾餅用80mL水反復(fù)沖洗三次，濾液合并至100毫升量瓶中，用pH6.2 磷酸鹽緩沖溶液定刻度。精密移取2mL置50mL容量瓶中，加pH6.2磷酸鹽緩沖液至刻度，做為 供試品溶液備用。
[0060] 標(biāo)準(zhǔn)品溶液制備精密稱取鹽酸溶菌酶標(biāo)準(zhǔn)品25毫克，置IOOmL容量瓶中，加磷酸 鹽緩沖溶液溶解，定容至刻度。分別精密移取lmL、2mL溶液置50mL容量瓶中，加PH6.2磷酸鹽 緩沖溶液至刻度，做為標(biāo)準(zhǔn)溶液(1)及標(biāo)準(zhǔn)溶液(2)。樣品溶液，標(biāo)準(zhǔn)溶液(1)標(biāo)準(zhǔn)溶液(2)置 冰浴中保存。
[0061 ]底物懸浮液的制備稱取溶酶小球菌15~20mg，加磷酸鹽緩沖液（pH6.2)0.5~ ImL，在研缽內(nèi)研磨3分鐘，再加磷酸鹽緩沖液(pH6.2)適量，使總體積約為50mL，使懸浮液于 25 ± 0.1°C時(shí)，在450nm的波長(zhǎng)處測(cè)得的吸收度為0.70 ± 0.05(臨用前配制）。
[0062] 測(cè)定法精密量取溶菌酶底物試液4mL，在35°C水浴中加熱5分鐘，精密移取在水浴 提前加熱3分鐘的樣品溶液IOOyU加入底物試液中，并在35°C水浴中加熱10分鐘后，再精密 量取lmol/L的鹽酸溶液0.5mL加入底其中，搖勻。以水做為空白，在波長(zhǎng)640nm處，紫外可見(jiàn) 分光光度法測(cè)量樣品溶液的吸收值A(chǔ)st。標(biāo)準(zhǔn)溶液(1)、標(biāo)準(zhǔn)溶液(2)按以上方法測(cè)定吸光度 Asi、As2〇
[0063] 每g鹽酸溶菌酶的單位=X ( Afl ~ AaS' + 1)1 2 Wt As1 - As2 _
[0064] Ws:鹽酸溶菌酶標(biāo)準(zhǔn)品稱取量；
[0065] Wt:樣品稱取量X規(guī)格；
[0066] As1 :標(biāo)準(zhǔn)溶液（1)吸收度；
[0067] As2:標(biāo)準(zhǔn)溶液(2)吸收度。
[0068]【含量測(cè)定】蔗糖取本品1.4g，精密稱定，置小燒杯中，加水適量，攪拌溶解，轉(zhuǎn)移 置IOOmL量瓶中，并用水稀釋至刻度，搖勻；精密量取ImL，置IOOmL量瓶中，稀釋至刻度，搖 勻，作為供試品溶液。另取精制蔗糖12.5mg，精密稱定，置250mL量瓶中，加水振搖溶解，并用 水稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液。
[0069] 精密量取對(duì)照品溶液和供試品溶液各ImL，分別置IOmL量瓶中，加硫酸溶液3mL (5ml硫酸用水稀釋至100mL)，鉬酸銨溶液(4g鉬酸銨加入100mL水中溶解)3.5mL，并用水稀 釋至刻度，搖勻，沸水浴中25分鐘后，用水冷卻至室溫。照中國(guó)藥典2010年版二部（附錄）紫 外分光光度，于700nm處測(cè)定，并空白校正，記錄吸光度，計(jì)算，即得。
[0070] 本發(fā)明的治療皮膚潰瘍的復(fù)方鹽酸溶菌酶軟膏，它采用鹽酸溶菌酶和蔗糖為本發(fā) 明藥物的有效成分，與藥用輔料制成藥劑，經(jīng)過(guò)皮膚外用藥物給藥，對(duì)不同時(shí)期的病并發(fā)癥 引起的皮膚潰瘍的治療，都顯不了它具有尚滲、殺菌，其中所具備的特點(diǎn)如下：
[0071] 1、本發(fā)明制劑中的鹽酸溶菌酶具有促進(jìn)纖維芽細(xì)胞的增殖作用、促進(jìn)試驗(yàn)性創(chuàng)傷 愈合作用、促進(jìn)結(jié)締組織纖維形成等藥理作用。復(fù)方鹽酸溶菌酶軟膏中的活性成分溶菌酶 為一種粘多糖溶解酶，其通過(guò)水解破壞組成細(xì)菌細(xì)胞壁的肽糖分子的由N-乙酰胞壁酸和N-乙酰氨基葡萄糖氨之間的β_(1，4)糖苷鍵，使細(xì)胞因滲透壓不平衡引起破裂，從而導(dǎo)致菌體 細(xì)胞壁溶解而殺死細(xì)菌。
[0072] 2、本發(fā)明制劑中使用蔗糖外敷于創(chuàng)面，在水腫組織外形成高滲狀態(tài)，同時(shí)還能放 出熱量，改變局部的滲透壓，從而將水腫組織內(nèi)多余水分吸出，高滲也能抑制細(xì)菌生長(zhǎng)，還 可起到一種"消毒"作用。蔗糖具有高滲作用，能減輕局部創(chuàng)口水腫程度，加速肉芽組織生 成，加速愈合，能達(dá)到收斂生肌的目的。
[0073] 3、本發(fā)明制劑中使用蔗糖能改變創(chuàng)口的酸堿性，促使上皮細(xì)胞產(chǎn)生溫良的生理刺 激，供給創(chuàng)口營(yíng)養(yǎng)，使創(chuàng)口附近血液循環(huán)良好，促進(jìn)細(xì)胞再生，加速創(chuàng)口愈合。
[0074] 4、本發(fā)明蔗糖聯(lián)合鹽酸溶菌酶治療皮膚潰瘍，起到協(xié)同作用。其特點(diǎn)是抑菌力強(qiáng)、 無(wú)味、性能穩(wěn)定、無(wú)刺激性、毒性低，能抑制細(xì)菌、病毒、真菌、芽孢及原蟲(chóng)等，對(duì)創(chuàng)面愈合無(wú) 干擾作用，應(yīng)用勝過(guò)其他任何一種傷口護(hù)理產(chǎn)品。蔗糖聯(lián)合溶菌酶應(yīng)用從而促進(jìn)皮膚潰瘍 的快速愈合。將其制成復(fù)方劑型完全符合藥物用藥的要求及臨床治療的特點(diǎn)。
[0075] 5、本發(fā)明制劑中加入甘氨酸，一方面對(duì)鹽酸溶菌酶起到穩(wěn)定性作用，另一方面持 續(xù)性緩慢釋放鹽酸溶菌酶以達(dá)到延長(zhǎng)藥效的目的。
[0076] 6、本發(fā)明的復(fù)方鹽酸溶菌酶軟膏為皮膚局部外用無(wú)菌制劑，制備工藝中最關(guān)鍵的 就是滅菌技術(shù)。本發(fā)明制劑產(chǎn)品有效成分鹽酸溶菌酶高溫條件下易發(fā)生變性，不適于采用 高溫滅菌法。考慮到鹽酸溶菌酶在水中溶解性較好，根據(jù)本品生產(chǎn)過(guò)程中，本發(fā)明先將鹽酸 溶菌酶溶解后再加入到水相中，選擇過(guò)濾法滅菌，以保證本制劑既符合國(guó)家藥典要求，又能 達(dá)到滅菌的目的。根據(jù)本發(fā)明制劑輔料各成分的理化性質(zhì)，如果采用非熱力滅菌方法，如過(guò) 濾法，因基質(zhì)黏稠，難以過(guò)濾。經(jīng)綜合考慮本制劑的特點(diǎn)，本發(fā)明特別采用高溫濕熱滅菌工 藝對(duì)制劑輔料的水相進(jìn)行滅菌。
[0077] 綜上，本發(fā)明的治療皮膚潰瘍的外用藥物的復(fù)方鹽酸溶菌酶軟膏制劑，采用鹽酸 溶菌酶、蔗糖為本發(fā)明藥物的有效成分與藥用輔料，通過(guò)溶解、高溫滅菌、濾膜過(guò)濾除菌、低 速均質(zhì)、高速均質(zhì)、攪拌、降溫、無(wú)菌灌裝等工藝制成藥劑。經(jīng)過(guò)皮膚外用藥物給藥，對(duì)不同 時(shí)期的皮膚潰瘍都顯示了它具有較好的臨床作用。更為詳細(xì)的效果實(shí)驗(yàn)將在實(shí)施例中予以 說(shuō)明。
[0078] 下面結(jié)合實(shí)驗(yàn)例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步的說(shuō)明，但不限于此。
[0079] 實(shí)驗(yàn)例1、鹽酸溶菌酶、甘氨酸過(guò)濾除菌實(shí)驗(yàn)研究
[0080] 1、材料與方法
[0081 ] 1.1試驗(yàn)材料
[0082] 鹽酸溶菌酶由山東魯北藥業(yè)有限公司、甘氨酸由宜昌人福藥業(yè)有限責(zé)任公司提 供；
[0083] 1.2主要設(shè)備
[0084] 電子天平，壓濾裝置，恒溫水浴鍋，濾膜，分光光度計(jì)；
[0085] 1.3試驗(yàn)方法
[0086] 1.3.1膜孔徑選擇
[0087]根據(jù)細(xì)菌的特征，分別選用孔徑為0.05、0.22、0.5μπι的濾膜，對(duì)接種細(xì)菌的鹽酸溶 菌酶、甘氨酸進(jìn)行過(guò)濾，進(jìn)口壓力〇. 65MPa。溫度52°C，30min時(shí)對(duì)過(guò)濾后的濾液進(jìn)行采樣，檢 測(cè)細(xì)菌。
[0088] 1.3.2操作壓力的確定
[0089]分別用孔徑為0.22μπι的濾膜過(guò)濾鹽酸溶菌酶、甘氨酸溶解液，連續(xù)工作25min，期 間每隔30min檢測(cè)透過(guò)通量。操作溫度為37~52°C，進(jìn)口壓力分別為0.35、0.55、0.65、 0.70MPa，最后根據(jù)通量的大小及穩(wěn)定性選定合適的進(jìn)口工作壓力。
[0090] 1.3.3濾膜過(guò)濾鹽酸溶菌酶、甘氨酸溶解液效果試驗(yàn)
[0091] 濾膜過(guò)濾鹽酸溶菌酶、甘氨酸溶解液，操作溫度37~52°C，進(jìn)口壓力為0.65MPa。每 隔30min分別對(duì)過(guò)濾前及過(guò)濾后的提取液進(jìn)行采樣，檢測(cè)細(xì)菌、菌落總數(shù)、濁度色值過(guò)濾前 為對(duì)照組，過(guò)濾后為試驗(yàn)組。
[0092] 2結(jié)果與分析
[0093] 2.1不同膜孔徑對(duì)細(xì)菌的去除效果
[0094]試驗(yàn)結(jié)果如表1所示。從表中可以看出，隨著濾膜孔徑的減小，鹽酸溶菌酶、甘氨酸 溶解液中細(xì)菌的去除率越高，〇. 22μπι孔徑的濾膜能達(dá)到完全除菌的要求。
[0095]表1濾膜孔徑對(duì)細(xì)菌的影響
[0097] 2.2不同操作壓力對(duì)通量的影響
[0098] 在過(guò)濾溫度52°C的條件下，采用不同的壓力進(jìn)行過(guò)濾試驗(yàn)，試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)圖1，可以 看出，隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，過(guò)濾初期通量下降較快，隨后下降速率變緩；在壓力小于〇.65MPa 下，隨著壓力的增加，鹽酸溶菌酶、甘氨酸溶解液通量增加較快;但當(dāng)壓力達(dá)到〇. 7MPa時(shí)，過(guò) 濾后期通量反而小于〇. 65MPa時(shí)的通量。過(guò)濾初期，污染層較少，流道較為通暢，料液流動(dòng)速 度較快，過(guò)濾阻力主要為過(guò)濾膜的阻力。通量與壓力成正比，增加壓力即可增加通量。壓力 繼續(xù)增大時(shí)，濃差極化作用增加，形成較厚的膜面凝膠層，凝膠層引起流道堵塞。濃差極化 作用進(jìn)一步加強(qiáng)，形成惡性循環(huán)，此時(shí)過(guò)濾阻力除膜阻力外，還有極化層阻力和凝膠層阻 力。隨著凝膠層厚度及濃差極化程度增加，阻力增加，使得通量反而降低，因此，操作壓力取 0.65MPa〇
[0099] 實(shí)驗(yàn)例2、蔗糖以及輔料滅菌實(shí)驗(yàn)研究
[0100] 不同的濕熱滅菌和時(shí)間對(duì)蔗糖以及輔料濕熱滅菌效果的比較，按配比稱取蔗糖、 甘油、聚乙二醇1000、海藻酸鈉、無(wú)菌水各組分混合，用2%~5% (W/W)鹽酸調(diào)pH4~6,考察 濕熱滅菌溫度和時(shí)間，見(jiàn)表2:
[0101]表2蔗糖以及輔料濕熱滅菌效果比較
[0103]由表2中可分析出：
[0104] 1、濕熱滅菌溫度在121°C，時(shí)間在30~60min條件下，蔗糖中轉(zhuǎn)化糖含量<1.0%符 合規(guī)定，表明在此條件下未對(duì)蔗糖化學(xué)結(jié)構(gòu)發(fā)生破壞，但無(wú)菌檢查，不符合規(guī)定。
[0105] 2、濕熱滅菌溫度在126~131°C，時(shí)間在30~60min，蔗糖中轉(zhuǎn)化糖含量<1.0%符 合規(guī)定，表明在此條件下未對(duì)蔗糖化學(xué)結(jié)構(gòu)發(fā)生破壞，無(wú)菌檢查，符合規(guī)定。
[0106] 試驗(yàn)結(jié)論；由于蔗糖的高滲性，改變液體環(huán)境的滲透壓;又因蔗糖在PH4~6溶液條 件，抑菌效果明顯，所以在濕熱滅菌溫度在126~131°C，時(shí)間在30min~60min，無(wú)菌檢查，符 合規(guī)定。
[0107] 實(shí)驗(yàn)例3、甘氨酸對(duì)鹽酸溶菌酶溶出度影響作用實(shí)驗(yàn)
[0108] 本發(fā)明制劑中加入甘氨酸，一方面對(duì)鹽酸溶菌酶起到穩(wěn)定性作用，另一方面持續(xù) 性緩慢釋放鹽酸溶菌酶以達(dá)到延長(zhǎng)藥效的目的，并對(duì)其溶出度進(jìn)行實(shí)驗(yàn)；
[0109]取實(shí)施例1~3的復(fù)方鹽酸溶菌酶軟膏各2g，照《中國(guó)藥典2010年版二部》(附錄XC) 第二法溶出度測(cè)定法，以經(jīng)脫氣處理后的1000 mL水為溶出介質(zhì)，轉(zhuǎn)速為75轉(zhuǎn)± 5轉(zhuǎn)/分，依法 操作，分別于5min、IOmin、20min、30min、45min，取樣20mL，濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液； 測(cè)定鹽酸溶菌酶的效價(jià)并換算成含量。
[0110]復(fù)方鹽酸溶菌酶軟膏溶出度試驗(yàn)表明：復(fù)方鹽酸溶菌酶軟膏中的鹽酸溶菌酶成分 在45min內(nèi)持續(xù)性緩慢釋放。見(jiàn)表3。
[0111]表3復(fù)方鹽酸溶菌酶軟膏中的鹽酸溶菌酶效價(jià)
[0113] 結(jié)果表明：復(fù)方鹽酸溶菌酶軟膏實(shí)施例1~3的鹽酸溶菌酶效價(jià)在45min后均在 31.25萬(wàn)單位以上。以時(shí)間（分鐘)對(duì)其鹽酸溶菌酶效價(jià)作曲線，即得各樣品的溶出曲線，見(jiàn) 附圖2~4。
[0114] 實(shí)驗(yàn)例4、甘氨酸對(duì)鹽酸溶菌酶效價(jià)影響作用試驗(yàn)
[0115] 考察加入甘氨酸對(duì)鹽酸溶菌酶活性起到保護(hù)作用;見(jiàn)表4。
[0116] 表4甘氨酸用量篩選單位(g)
[0118] 用實(shí)施例1的方法制備;對(duì)其5個(gè)處方所制備的軟膏進(jìn)行12個(gè)月的考察，按照復(fù)方 鹽酸溶菌酶軟膏質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)加入甘氨酸所產(chǎn)生的鹽酸溶菌酶效價(jià)分析;見(jiàn)表5。
[0119] 表5鹽酸溶菌酶效價(jià)分析
[0122] 處方評(píng)價(jià)及結(jié)果：
[0123] 處方1:復(fù)方鹽酸溶菌酶軟膏為色澤均勻，但鹽酸溶菌酶效價(jià)低；
[0124] 處方2:復(fù)方鹽酸溶菌酶軟膏為色澤均勻，但鹽酸溶菌酶效價(jià)較低；
[0125] 處方3:復(fù)方鹽酸溶菌酶軟膏為色澤均勻，鹽酸溶菌酶效價(jià)穩(wěn)定；
[0126] 處方4:復(fù)方鹽酸溶菌酶軟膏為色澤均勻，鹽酸溶菌酶效價(jià)穩(wěn)定；
[0127] 處方5:復(fù)方鹽酸溶菌酶軟膏為色澤均勻，鹽酸溶菌酶效價(jià)穩(wěn)定。
[0128] 結(jié)果分析：以上處方軟膏成型較好;處方1、2中甘氨酸用量低，造成鹽酸溶菌酶效 價(jià)較低，不適合本制劑的要求。處方3、4、5成型較好;鹽酸溶菌酶效價(jià)穩(wěn)定，適合要求，由此 可見(jiàn)加入甘氨酸對(duì)鹽酸溶菌酶活性起到保護(hù)作用。
[0129] 實(shí)驗(yàn)例5、復(fù)方鹽酸溶菌酶軟膏中蔗糖抑菌濃度以及pH實(shí)驗(yàn)研究
[0130] 1、材料與儀器
[0131] 電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱、型數(shù)控超聲波清洗儀、旋渦混合器、數(shù)顯恒溫水浴鍋、循環(huán) 水真空栗、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、生化培養(yǎng)箱、細(xì)菌培養(yǎng)箱，蔗糖；
[0132] 2、方法
[0133] 2.1制備馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基以及牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基細(xì)菌培養(yǎng)基；
[0134] 2.2制備菌懸液用牛肉膏瓊脂平板活化大腸桿菌，分別挑取適量菌苔，用無(wú)菌水制 備10~I OOcf u/mL的供試菌液。
[0135] 2.3不同質(zhì)量濃度蔗糖：蔗糖的抑菌效果比較，使用無(wú)菌水配制質(zhì)量濃度分別為 50%、40%、20%、10%的蔗糖溶液，比較不同質(zhì)量濃度溶液的抑菌效果。
[0136] 2.4不同pH蔗糖的抑菌效果比較:配制蔗糖質(zhì)量濃度為40% ;pH分別為2.0、4.0、 6.0、8.0的蔗糖溶液，比較不同的pH值對(duì)蔗糖抑菌活性的影響。
[0137] 2.5檢測(cè)分析方法
[0138] 2.5.1濾紙片擴(kuò)散法測(cè)定抑菌效果:取直徑為5.8mm經(jīng)滅菌烘干的濾紙片若干，放 入一定質(zhì)量濃度和pH的鹿糖溶液中，浸泡20~40min，干燥備用。在無(wú)菌條件下，接種適量供 試菌液于相應(yīng)的固體瓊脂培養(yǎng)基上，用涂布器涂布均勻后，靜置0.5h。使用無(wú)菌鑷子將供試 濾紙片貼在上述平板上，間隔一定的距離，每個(gè)平皿貼2片。以浸泡過(guò)無(wú)菌水的濾紙片作為 對(duì)照，每一菌種做2個(gè)平行。大腸桿菌、金黃色葡萄球菌置于37°C恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)16~ 18h，取出量取抑菌圈直徑，判斷抑菌效果。
[0139] 3、結(jié)果
[0140] 3.1不同濃度蔗糖的抑菌圈直徑結(jié)果見(jiàn)表6。
[0141] 表6不同質(zhì)量濃度蔗糖的抑菌圈直徑Gwkm
[0143] "一"表示沒(méi)有抑菌圈
[0144] 表1顯示蔗糖對(duì)大腸桿菌、金黃色葡萄球菌的抑制作用相當(dāng)，在40%時(shí)有抑菌圈， 且抑菌圈直徑都是6.0mm左右。蔗糖對(duì)的抑制具有選擇性，在所測(cè)蔗糖質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，隨 著濃度的增大，對(duì)細(xì)菌的抑菌效果呈增強(qiáng)趨勢(shì)。
[0145] 3.2不同pH蔗糖的抑菌圈直徑結(jié)果見(jiàn)表7。
[0146] 表7不同pH值蔗糖的抑菌圈直徑ChAmra
[0148] 表示沒(méi)有抑菌圈
[0149] 由表2可知，蔗糖在pH6的條件下對(duì)大腸桿菌抑菌活性明顯;在pH4的條件下對(duì)金黃 色葡萄球菌的抑菌效果明顯;而在強(qiáng)酸和強(qiáng)堿條件下抑菌活性相對(duì)較弱。
[0150] 4結(jié)論
[0151] 蔗糖對(duì)大腸桿菌、金黃色葡萄球菌均有抑制作用，質(zhì)量濃度以及pH值影響其抑菌 效果。總的來(lái)說(shuō)，隨著質(zhì)量濃度的增大，抑菌效果呈上升趨勢(shì)。PH4~6對(duì)蔗糖抑菌活性有明 顯影響。40% (W/W)以上質(zhì)量濃度的蔗糖對(duì)大腸桿菌、金黃色葡萄球菌有較強(qiáng)地抑菌效果。
[0152] 實(shí)驗(yàn)例6、原輔料相容性實(shí)驗(yàn)
[0153] 本發(fā)明復(fù)方鹽酸溶菌酶軟膏研究過(guò)程中選用的鹽酸溶菌酶、蔗糖，尤其是輔料在 處方中的應(yīng)用，需進(jìn)行原輔料的相容性試驗(yàn)，原輔料相容性試驗(yàn)如下；
[0154] 將原料與所選輔料按一定比例物理混合，按照中國(guó)藥典2010版二部(附錄XIXC)原 料藥與藥物制劑穩(wěn)定性試驗(yàn)指導(dǎo)原則中影響因素的實(shí)驗(yàn)方法，由于鹽酸溶菌酶在高溫條件 下不穩(wěn)定，所以影響因素分別在高溫50°C±2°C、濕度90%±5%、強(qiáng)光4500±500以的條件 下放置10天，檢查放置前后變化。試驗(yàn)結(jié)果如下：
[0155] 1、高溫條件原輔料相容性試驗(yàn)
[0156] 將原輔料按照一定比例混合，暴露置高溫50°C±2°C條件下10天取樣，檢驗(yàn)結(jié)果見(jiàn) 表8:
[0157] 表8原輔料相容性試驗(yàn)(50°C ±2°C)10天

[0160]經(jīng)高溫50°C±2°C條件下10天相容性試驗(yàn)，結(jié)果顯示與各輔料性狀、含量均無(wú)變 化。水分檢查結(jié)果顯示隨時(shí)間延長(zhǎng)而有所降低。
[0161]以上結(jié)果表明鹽酸溶菌酶+蔗糖在高溫50°C±2°C條件下與輔料相容性良好。
[0162] 2、光照條件原輔料相容性試驗(yàn)
[0163] 將原輔料按照一定比例混合，暴露置光照(4500±5001x)條件下10天取樣，測(cè)定各 項(xiàng)指標(biāo)，結(jié)果見(jiàn)表9。
[0164] 表9原輔料相容性試驗(yàn)光照(4500 ± 5001x) 10天
[0166] 以上結(jié)果表明鹽酸溶菌酶+蔗糖在光照(4500 ± 5001x)條件下與輔料相容性良好； 經(jīng)光照(4500±5001x)條件下10天相容性試驗(yàn)，結(jié)果顯示與各輔料性狀、含量均無(wú)變化。
[0167] 3、高濕條件原輔料相容性試驗(yàn)
[0168] 將原輔料按照一定比例混合，暴露置高濕(90% ±5%)條件下10天取樣，測(cè)定各項(xiàng) 指標(biāo)，結(jié)果見(jiàn)表10。
[0169] 表10原輔料相容性試驗(yàn)高濕(90% ±5% )10天
[0172] 經(jīng)高濕90% ±5 %條件下10天相容性試驗(yàn)，結(jié)果顯示與各輔料性狀、含量均無(wú)變 化。因本法為物料暴露于高濕條件下，故水分有所增加。
[0173] 以上結(jié)果表明鹽酸溶菌酶+蔗糖在高濕90% ±5%條件下與輔料相容性良好。綜合 試驗(yàn)結(jié)果表明制劑應(yīng)密封保存。
[0174] 實(shí)驗(yàn)例7、復(fù)方鹽酸溶菌酶軟膏的長(zhǎng)期穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)
[0175] 將實(shí)施例1制備的復(fù)方鹽酸溶菌酶軟膏在上市規(guī)定的貯存條件下進(jìn)行長(zhǎng)期穩(wěn)定性 試驗(yàn)，考察復(fù)方鹽酸溶菌酶軟膏在運(yùn)輸、保存、使用過(guò)程中的穩(wěn)定性特征，從而作為確定有 效期和貯存條件的依據(jù)。將采用復(fù)合鋁塑管包裝的復(fù)方鹽酸溶菌酶軟膏樣品，放置于25°C ± 2 °C、RH60 % ± 10 %的恒溫、恒濕箱中放置24個(gè)月，分別于0、3、6、9、12、18、24個(gè)月取樣，檢 測(cè)各項(xiàng)質(zhì)量指標(biāo)。結(jié)果見(jiàn)表11。
[0176] 表11復(fù)方鹽酸溶菌酶軟膏長(zhǎng)期穩(wěn)定性試驗(yàn)
L〇178」結(jié)果：經(jīng)長(zhǎng)期穩(wěn)定性24個(gè)月的考察，結(jié)果顯示與O月比較各項(xiàng)指標(biāo)無(wú)明顯變化，表 明復(fù)方鹽酸溶菌酶軟膏在25°〇±2°(：、1^60%±10%條件下穩(wěn)定性良好，在規(guī)定的各項(xiàng)條件 下生產(chǎn)、包裝、貯存、運(yùn)輸均不會(huì)對(duì)本品的質(zhì)量產(chǎn)生不利影響，可保障臨床用藥安全有效。
[0179]實(shí)驗(yàn)例8、復(fù)方鹽酸溶菌酶軟膏對(duì)家兔皮膚的刺激性研究 [0180] 1、材料與方法
[0181] 1.1材料
[0182] 復(fù)方鹽酸溶菌酶軟膏，實(shí)施例1方法制備、賦形劑不加鹽酸溶菌酶、蔗糖軟膏按照 實(shí)施例1方法制備。日本大耳白家兔（山東大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心），體重約2.0kg，雌雄各半。
[0183] 1.2單次給藥對(duì)家兔皮膚的刺激性實(shí)驗(yàn)
[0184] 1.2.1實(shí)驗(yàn)方法
[0185] 取家兔8只，雌雄各半，隨機(jī)分成實(shí)驗(yàn)組和賦形劑組，每組雌雄各2只。實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前 對(duì)稱剪去兔脊柱兩側(cè)毛，面積共約140cm，24h后將每只家兔脫毛皮膚自上而下平均分為4 塊，脊柱兩側(cè)共8塊，每塊面積約為15cm，下部4塊制作破損皮膚模型。制作方法為：用大頭針 劃直徑為2cm的形擦傷，注意只刺破表皮，不傷及真皮，以有輕度滲血為度。所有家兔脊 柱左側(cè)均給予賦形劑lg，實(shí)驗(yàn)組脊柱右側(cè)給予復(fù)方鹽酸溶菌酶軟膏l(xiāng)g，涂藥后用醫(yī)用手術(shù) 巾包8h，然后用溫水洗去藥物。
[0186] 1.2.2觀察項(xiàng)目觀察并記錄
[0187] 去除復(fù)方鹽酸溶菌酶軟膏及賦形劑后1、24、48、721!給藥部位皮膚紅斑、水腫、焦痂 等刺激反應(yīng)情況，按新藥毒理學(xué)研究指導(dǎo)原則，將紅斑、水腫程度定為0~4級(jí)并進(jìn)行刺激性 評(píng)價(jià)。將無(wú)紅斑、勉強(qiáng)可見(jiàn)紅斑、中度紅斑、嚴(yán)重紅斑、紫紅色紅斑并有焦痂形成等分別記分 為0.00、1.00、2.00、3.00、4.00。無(wú)水腫、勉強(qiáng)可見(jiàn)水腫、皮膚隆起輪廓清楚、水腫隆起約1111111 并范圍擴(kuò)大等分別記分為0.00、1.00、2.00、4.00。動(dòng)物紅斑形成總分與水腫形成總分之和 除以動(dòng)物數(shù)為反應(yīng)平均值，反應(yīng)平均值< 〇. 05為無(wú)刺激，2.00為輕度刺激性，6.00為中度刺 激性，>6. OO為強(qiáng)刺激性。
[0188] 1.3多次給藥對(duì)家兔皮膚的刺激性實(shí)驗(yàn)
[0189] 1.3.1實(shí)驗(yàn)方法
[0190] 取家兔8只，雌雄各半，分為實(shí)驗(yàn)組和賦形劑組，分組、給藥方法、劑量及包扎時(shí)間 均同"1.2"項(xiàng)下，每日給藥1次，連續(xù)7d，每次給藥后8h，用溫水洗去藥物及賦形劑。
[0191] 1.3.2觀察項(xiàng)目從末次除去藥物及賦形劑后Ih開(kāi)始觀察刺激反應(yīng)情況，每日1次， 連續(xù)觀察14d。
[0192] 2、結(jié)果
[0193] 2.1單次給藥對(duì)家兔皮膚的刺激性
[0194] 實(shí)驗(yàn)組有1只家兔的破損皮膚出現(xiàn)勉強(qiáng)可見(jiàn)的紅斑反應(yīng)(評(píng)1.00分），無(wú)水腫反應(yīng)。 其他家兔的皮膚未見(jiàn)紅斑、水腫、焦痂等刺激反應(yīng)。表明單次給予復(fù)方鹽酸溶菌酶軟膏對(duì)家 兔完整及破損皮膚均無(wú)明顯刺激反應(yīng)。
[0195] 2.2多次給藥對(duì)家兔皮膚的刺激性
[0196] 實(shí)驗(yàn)組完整及破損皮膚分別有1和2只家兔出現(xiàn)勉強(qiáng)可見(jiàn)的紅斑反應(yīng)（各評(píng)1.00 分），但均無(wú)水腫反應(yīng)，完整皮膚在停藥3d后紅斑反應(yīng)消失，破損皮膚在停藥5d后紅斑反應(yīng) 消失。給予賦形劑的家兔皮膚均未出現(xiàn)刺激反應(yīng)。結(jié)果見(jiàn)表12。
[0197] 表12 3種藥物不同時(shí)間給藥對(duì)家兔皮膚平均刺激反應(yīng)評(píng)分n = 4
[0199] 3、討論
[0200] 本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，單次給予復(fù)方鹽酸溶菌酶軟膏對(duì)家兔皮膚無(wú)刺激性，復(fù)方鹽酸 溶菌酶軟膏多次連續(xù)給藥對(duì)家兔完整皮膚無(wú)刺激性，對(duì)破損皮膚有輕度刺激反應(yīng);但停藥 后上述刺激反應(yīng)消失，表明復(fù)方鹽酸溶菌酶軟膏在此劑量下對(duì)家兔皮膚的刺激反應(yīng)是可逆 的。
[0201] 實(shí)驗(yàn)例9、復(fù)方鹽酸溶菌酶軟膏對(duì)治療缺損性慢性皮膚潰瘍大鼠的實(shí)驗(yàn)觀察
[0202] 1、材料和方法
[0203] 1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：
[0204] SD大鼠，雌雄各半，200~250g，山東大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供；
[0205] 1.2藥品：
[0206] 復(fù)方鹽酸溶菌酶軟膏，由實(shí)施例1的方法制備。
[0207] 1.3方法：
[0208]取健康SD大鼠18只，雌雄各半，于大鼠背部去毛，將預(yù)先制成2cm X 2cm的印筐，用 龍膽紫染色后印在皮膚上，然后沿筐壁統(tǒng)一大小切開(kāi)皮膚，深入淺筋膜，造成缺損創(chuàng)面。用 50 %冰醋酸涂創(chuàng)面1次/d，共1周，形成缺損性慢性皮膚潰瘍模型。SD大鼠隨機(jī)分為3組:復(fù)方 鹽酸溶菌酶軟膏組、陽(yáng)性對(duì)照組、陰性對(duì)照組（陽(yáng)性對(duì)照組用凡士林治療，陰性對(duì)照組用液 狀石蠟治療）。1次/d，觀察潰瘍周?chē)つw生長(zhǎng)情況，每隔3d測(cè)定皮膚的潰瘍面積，測(cè)定結(jié)果
[0209]見(jiàn)表1。然后以天數(shù)為橫坐標(biāo)，以各組的潰瘍皮膚面積為縱坐標(biāo)作圖，分別觀察藥 物對(duì)慢性皮膚潰瘍的愈合生長(zhǎng)速度。
[0210] 2、結(jié)果：
[0211]從表13中可以看出，復(fù)方鹽酸溶菌酶軟膏對(duì)SD大鼠缺損性慢性皮膚潰瘍有明顯療 效。從第6天起，復(fù)方鹽酸溶菌酶軟膏組皮膚愈合速度比陽(yáng)性對(duì)照組快，相對(duì)于陰性對(duì)照組P <0.01，兩者有非常顯著差異;相對(duì)于陽(yáng)性對(duì)照組P<〇.05,兩者有顯著差異，到給藥后第9 天，復(fù)方鹽酸溶菌酶軟膏組的潰瘍皮膚基本愈合。上述試驗(yàn)結(jié)果表明，復(fù)方鹽酸溶菌酶軟膏 能抑制局部組織炎癥，促進(jìn)組織細(xì)胞生長(zhǎng)，加速潰瘍皮膚的愈合。
[0212]表13大鼠缺損性慢性皮膚潰瘍藥物治療各時(shí)間點(diǎn)創(chuàng)面面積比較(?^πι2，η = 6。 t/d)
[0214] 經(jīng)過(guò)臨床觀察，復(fù)方鹽酸溶菌酶軟膏組能明顯提高慢性皮膚潰瘍創(chuàng)面新生毛細(xì)血 管數(shù)，改善創(chuàng)面微循環(huán)，加速組織修復(fù)過(guò)程。復(fù)方鹽酸溶菌酶軟膏用后在慢性皮膚潰瘍創(chuàng)面 形成一層半透明保護(hù)膜，對(duì)創(chuàng)面起到保護(hù)和濕潤(rùn)作用，減少了創(chuàng)面細(xì)菌感染的機(jī)會(huì)。復(fù)方鹽 酸溶菌酶軟膏具有促進(jìn)潰瘍皮膚愈合的作用。
[0215] 實(shí)驗(yàn)例10、復(fù)方鹽酸溶菌酶軟膏外用治療糖尿病皮膚潰瘍
[0216] 肢端皮膚潰瘍是糖尿病常見(jiàn)并發(fā)癥之一，嚴(yán)重者需要截肢，給病人帶來(lái)極大的痛 苦，威脅著糖尿病人的生活質(zhì)量。用復(fù)方鹽酸溶菌酶軟膏外用治療糖尿病濕性壞疽，取得良 好效果：
[0217] 1、臨床資料：
[0218] 30例病人，符合WHO糖尿病診斷標(biāo)準(zhǔn)。病史7~21年，年齡44~82歲，男性17例，女性 13倒，其中合并糖尿病腎病14例，合并視網(wǎng)膜病變9例。皮膚病損病程半個(gè)月至6個(gè)月，潰瘍 大小I .OcmX 1.2cm~3cmX 4cm不等，臨床分級(jí)2~4級(jí)。其中2級(jí)患者17人，3級(jí)患者9倒，4級(jí) 患者4人。
[0219] 2、治療方法：
[0220]予胰島素控制血糖，使空腹血糖小于或等于7. Ommol/L，餐后血糖小于或等于 7.8mmol/L，并根據(jù)創(chuàng)面分泌物細(xì)菌培養(yǎng)選擇敏感抗生素抗感染治療，生理鹽水250mL局部 常規(guī)清創(chuàng)，用復(fù)方鹽酸溶菌酶軟膏敷于刨面，覆蓋單層油紗后包扎。
[0221] 3、治療結(jié)果：
[0222] 2級(jí)患者12例15天~20天愈合，5例20~30天愈合；3級(jí)患者6例30天~40天愈合，2 例于40天~60天愈合，1例未愈;4級(jí)患者1例半年后愈合，3例未愈?？傆行?6.7%，治療期 間創(chuàng)面干潔，未見(jiàn)其他不良反應(yīng)。
[0223] 4、討論
[0224] 復(fù)方鹽酸溶菌酶軟膏其主要功能有祛腐生肌作用，可抑菌、殺菌、抗病毒、抑制感 染、促進(jìn)創(chuàng)面迅速愈合。復(fù)方鹽酸溶菌酶軟膏治療糖尿病肢端潰瘍，效果頗佳，用藥簡(jiǎn)便且 無(wú)副作用，大大降低致殘率，提高了病人的生活質(zhì)量。
【附圖說(shuō)明】
[0225] 圖1是實(shí)驗(yàn)例1操作壓力對(duì)通量的影響，橫坐標(biāo)為時(shí)間，縱坐標(biāo)為通量；
[0226] 圖2是實(shí)驗(yàn)例3實(shí)施例1溶菌酶溶出曲線，橫坐標(biāo)為時(shí)間、縱坐標(biāo)為鹽酸溶菌酶效 價(jià)；
[0227] 圖3是實(shí)驗(yàn)例3實(shí)施例2溶菌酶溶出曲線，橫坐標(biāo)為時(shí)間、縱坐標(biāo)為鹽酸溶菌酶效 價(jià)；
[0228] 圖4是實(shí)驗(yàn)例3實(shí)施例3溶菌酶溶出曲線，橫坐標(biāo)為時(shí)間、縱坐標(biāo)為鹽酸溶菌酶效 價(jià)。
【具體實(shí)施方式】
[0229] 下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步的說(shuō)明，但不限于此。
[0230]實(shí)施例1~3原輔料說(shuō)明：
[0232]實(shí)施例中所涉及的裝置和設(shè)備均為目前軟膏劑生產(chǎn)通用設(shè)備，市場(chǎng)可購(gòu)。說(shuō)明如 下：
[0233]不銹鋼溶解罐（型號(hào)100L)鄭州永信搪瓷化工設(shè)備有限公司；剪切機(jī)(型號(hào)50L)溫 州市東頂機(jī)械制造有限公司有售。
[0234]實(shí)施例1、復(fù)方鹽酸溶菌酶軟膏制劑及制備 [0235] 1、原輔材料投料量配比(w/w): 鹽酸溶菌酶 3. O份 蔗糖 80份 甘油 5. 0份
[0236] 聚乙二醇iooo 2.0份 海藻酸鈉 L 0份 甘氨酸 3. 0份
[0237] 無(wú)菌水 80份。
[0238] 2、按照如下方法制備：
[0239] (1)按配比稱取鹽酸溶菌酶、蔗糖、甘油、聚乙二醇1000、海藻酸鈉、甘氨酸備用；
[0240] (2)按配比稱取鹽酸溶菌酶和甘氨酸，分別加無(wú)菌水溶解，并分別用0.22μπι濾膜， 進(jìn)口壓力0.65MPa，過(guò)濾除菌后，將所得鹽酸溶菌酶料液、甘氨酸料液合并，輸送至已滅菌的 罐內(nèi)，常溫備用；
[0241] (3)按配比稱取蔗糖、甘油、聚乙二醇1000、海藻酸鈉、無(wú)菌水各組分混合，用5% (W/W)鹽酸調(diào)PH4~6,然后升溫至126°C~131°C，并保持時(shí)間30~40min進(jìn)行滅菌，輸送至已 滅菌的罐內(nèi)存放，在50~55°C保溫備用；
[0242] (4)在無(wú)菌條件下，將步驟(2)、（3)所得的物料混合，攪拌均勻；
[0243] (5)將步驟(4)所得混和物抽入剪切罐中，在溫度控制在40~50°C條件下，在攪拌 下用5%(W/W)鹽酸調(diào)混合物的pH4~5之間，然后開(kāi)啟剪切機(jī)低速1000~1200r/min，剪切5 ~IOmin;然后高速2000~2200r/min剪切3~4分鐘，關(guān)閉剪切機(jī);開(kāi)啟攪拌轉(zhuǎn)速為30~40r/ min，繼續(xù)攪拌3~4min，然后再在攪拌轉(zhuǎn)速為20~25r/min繼續(xù)攪拌，降溫至30~35°C時(shí)停 止攪拌，即得。
[0244] 將上述產(chǎn)品進(jìn)行無(wú)菌包裝，檢驗(yàn)，入庫(kù)。
[0245] 實(shí)施例2、復(fù)方鹽酸蔗糖溶菌酶軟膏制劑及制備
[0246] 1、原輔材料投料量配比(w/w): 鹽酸溶菌酶 4.0份 蔗糖 82價(jià) 甘油 7. 0份
[0247] 聚乙二醇 10:00 3, 8 份 海藻酸鈉 1. 3份 甘氨酸 4. 0份 無(wú)菌水 83份。
[0248] 2、按照如下方法制備：
[0249] (1)按配比稱取鹽酸溶菌酶、蔗糖、甘油、聚乙二醇1000、海藻酸鈉、甘氨酸備用；
[0250] (2)按配比稱取鹽酸溶菌酶和甘氨酸，分別加無(wú)菌水溶解，并分別用0.22μπι濾膜， 進(jìn)口壓力0.65MPa，過(guò)濾除菌后，將所得鹽酸溶菌酶料液、甘氨酸料液合并，輸送至已滅菌的 罐內(nèi)，常溫備用；
[0251] (3)按配比稱取蔗糖、甘油、聚乙二醇1000、海藻酸鈉、無(wú)菌水各組分混合，用5% (W/W)鹽酸調(diào)PH4~6,然后升溫至126°C~131°C，并保持時(shí)間30~45min進(jìn)行滅菌，輸送至已 滅菌的罐內(nèi)存放，在50~55°C保溫備用；
[0252] (4)在無(wú)菌條件下，將步驟(2)、（3)所得的物料混合，攪拌均勻；
[0253] (5)將步驟(4)所得混和物抽入剪切罐中，在溫度控制在40~45°C條件下，在攪拌 下用5%(W/W)鹽酸調(diào)混合物的pH5~6之間，然后開(kāi)啟剪切機(jī)低速1000~1100r/min，剪切5 ~7min;然后高速2000~2100r/min剪切3~5分鐘，關(guān)閉剪切機(jī);開(kāi)啟攪拌轉(zhuǎn)速為30~45r/ min，繼續(xù)攪拌3~4min，然后再在攪拌轉(zhuǎn)速為20~25r/min繼續(xù)攪拌，降溫至30~35°C時(shí)停 止攪拌，即得。
[0254] 將上述產(chǎn)品進(jìn)行無(wú)菌包裝，檢驗(yàn)，入庫(kù)。
[0255] 實(shí)施例3、復(fù)方鹽酸蔗糖溶菌酶軟膏制劑及制備
[°256] 1、原輔材料投料量配比(w/w): 鹽酸溶菌酶 5. 0份 蔗糖 85份 甘油 9. 0份
[0257] 聚乙二醇 1000 5, 5 份 海藻酸鈉 L 6份 甘氨酸 5. 0份 .無(wú)菌水 85份。
[0258] 2、按照如下方法制備：
[0259] (1)按配比稱取鹽酸溶菌酶、蔗糖、甘油、聚乙二醇1000、海藻酸鈉、甘氨酸備用；
[0260] (2)按配比稱取鹽酸溶菌酶和甘氨酸，分別加無(wú)菌水溶解，并分別用0.22μπι濾膜， 進(jìn)口壓力0.65MPa，過(guò)濾除菌后，將所得鹽酸溶菌酶料液、甘氨酸料液合并，輸送至已滅菌的 罐內(nèi)，常溫備用；
[0261] (3)按配比稱取蔗糖、甘油、聚乙二醇1000、海藻酸鈉、無(wú)菌水各組分混合，用5% (W/W)鹽酸調(diào)PH4~6,然后升溫至126°C~131°C，并保持時(shí)間30~35min進(jìn)行滅菌，輸送至已 滅菌的罐內(nèi)存放，在50~55°C保溫備用；
[0262] (4)在無(wú)菌條件下，將步驟(2)、（3)所得的物料混合，攪拌均勻；
[0263] (5)將步驟(4)所得混和物抽入剪切罐中，在溫度控制在45~50°C條件下，在攪拌 下用5%(W/W)鹽酸調(diào)混合物的pH4~6之間，然后開(kāi)啟剪切機(jī)低速1000~1300r/min，剪切5 ~8min;然后高速2000~2300r/min剪切3~5分鐘，關(guān)閉剪切機(jī);開(kāi)啟攪拌轉(zhuǎn)速為30~45r/ min，繼續(xù)攪拌3~4min，然后再在攪拌轉(zhuǎn)速為20~25r/min繼續(xù)攪拌，降溫至30~35°C時(shí)停 止攪拌，即得。
[0264] 將上述產(chǎn)品進(jìn)行無(wú)菌包裝，檢驗(yàn)，入庫(kù)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種復(fù)方鹽酸溶菌酶軟膏，其特征在于，包括活性成份和輔料，所述的活性成份是鹽 酸溶菌酶和薦糖；其中鹽酸溶菌酶在復(fù)方鹽酸溶菌酶軟膏中的重量百分比為1.4%~ 3.3% ;薦糖在復(fù)方鹽酸溶菌酶軟膏中的重量百分比為40%~50%。2. 如權(quán)利要求1所述的復(fù)方鹽酸溶菌酶軟膏，所述的輔料為制備復(fù)方鹽酸溶菌酶軟膏 所需的可接受的任何輔料。3. 如權(quán)利要求1或2所述的復(fù)方鹽酸溶菌酶軟膏，其特征在于，由W下原料按質(zhì)量份制 成： 鹽酸溶菌酶 3.日~6. 0份 藤糖 80~90份 甘油 0~10份 聚乙二醇1000 0~6. 0份 海藻酸鋼 1.0~1.8份 甘氨酸 3.0~6.0份 無(wú)菌水 80~90份。4. 如權(quán)利要求3所述的復(fù)方鹽酸溶菌酶軟膏，其特征在于，由W下原料按質(zhì)量份制成： 鹽酸溶菌酶 3. 0~5. 0份 礁糖 80~85化 甘油 5, 0~9. 0份 聚乙二醇1000 2.0~5. 5份 海藻酸鋼 1.0~1.6份 甘氨酸 3.0~5.0份 無(wú)菌水 鎖~概份。...5. 如權(quán)利要求4所述的復(fù)方鹽酸溶菌酶軟膏，其特征在于，由W下原料按質(zhì)量份制成： 鹽酸溶菌酶 3. 0份 薦糖 80份 甘油 5. 0粉 聚己二醇1貓:Q 2.0份 海藻酸鋼 1. 0份 甘氨酸 3. 0份 無(wú)菌水 80份； 或者， 鹽酸溶簡(jiǎn)釀 4. 0份 藤糖 82份 甘油 7. 0份 聚乙二醇說(shuō)朋 3. 8份 海藻酸鋼 1. 3汾 甘氨酸 4. 0份 無(wú)菌水 83汾; 或者， 鹽酸溶菌酶 日.0份 薦糖 如份 甘油 9. 0份 聚乙二醇1000 5. 5份 海藻酸鋼 1.6份 甘氨酸 日.0份 無(wú)蘭水 85份。6. 如權(quán)利要求3-5任一項(xiàng)所述的復(fù)方鹽酸溶菌酶軟膏的制備方法，其特征在于，包括如 下步驟： (1) 按配比稱取鹽酸溶菌酶、薦糖、甘油、聚乙二醇1000、海藻酸鋼、甘氨酸備用； (2) 按配比稱取鹽酸溶菌酶和甘氨酸，分別加無(wú)菌水溶解，并分別用0.1~0.22WI1濾膜， 進(jìn)口壓力0.65MPa，過(guò)濾除菌后，將所得鹽酸溶菌酶料液、甘氨酸料液合并，輸送至已滅菌的 罐內(nèi)，常溫備用； (3) 按配比稱取薦糖、甘油、聚乙二醇1000、海藻酸鋼、無(wú)菌水各組分混合，用2%~5% (W/W)鹽酸調(diào)pH4~6,然后升溫至126°C~13rC，并保持時(shí)間30~60min進(jìn)行滅菌，輸送至已 滅菌的罐內(nèi)存放，在50~55°C保溫備用； (4) 在無(wú)菌條件下，將步驟(2)、（3)所得的物料混合，攬拌均勻； (5) 將步驟(4)所得混和物抽入剪切罐中，在溫度控制在40~5(TC條件下，在攬拌下用 5%(W/W)鹽酸調(diào)混合物的pH4~6之間，然后開(kāi)啟剪切機(jī)低速1000~1500r/min，剪切5~ lOmin;然后高速2000~2500r/min剪切3~6分鐘，關(guān)閉剪切機(jī);開(kāi)啟攬拌轉(zhuǎn)速為30~50r/ min,繼續(xù)攬拌3~4min，然后再在攬拌轉(zhuǎn)速為20~25r/min繼續(xù)攬拌，降溫至30~35°C時(shí)停 止攬拌，即得。7. 如權(quán)利要求6所述的復(fù)方鹽酸溶菌酶軟膏的制備方法，其特征在于，步驟(5)的方法 如下： (5)將步驟(4)所得混和物抽入剪切罐中，在溫度控制在40~5(TC條件下，在攬拌下用 5%(W/W)鹽酸調(diào)混合物的pH4~5之間，然后開(kāi)啟剪切機(jī)低速1000~1200r/min，剪切5~ lOmin;然后高速2000~2200r/min剪切3~4分鐘，關(guān)閉剪切機(jī);開(kāi)啟攬拌轉(zhuǎn)速為30~40r/ min,繼續(xù)攬拌3~4min，然后再在攬拌轉(zhuǎn)速為20~25r/min繼續(xù)攬拌，降溫至30~35°C時(shí)停 止攬拌，即得。8. 如權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)所述的復(fù)方鹽酸溶菌酶軟膏在制備治療皮膚潰瘍的藥物中的 應(yīng)用。9. 如權(quán)利要求8所述的復(fù)方鹽酸溶菌酶軟膏的應(yīng)用，其特征在于，所述的皮膚潰瘍指缺 損性慢性皮膚潰瘍或糖尿病皮膚潰瘍。
【文檔編號(hào)】A61P17/02GK105963689SQ201610309445
【公開(kāi)日】2016年9月28日
【申請(qǐng)日】2016年5月11日
【發(fā)明人】喬敏, 袁武杰
【申請(qǐng)人】山東司邦得制藥有限公司