用于治療肺高壓的組合物和方法
【專利摘要】在一些方面，本發(fā)明教導(dǎo)了包含TGF?β配體捕獲劑的藥物組合物，以及使用TGF?β配體捕獲劑來(lái)治療、預(yù)防肺高壓(PH)或降低肺高壓(PH)的進(jìn)展速度的方法。本發(fā)明還提供了使用TGF?β配體捕獲劑來(lái)治療、預(yù)防多種病癥或降低多種病癥的進(jìn)展速度的方法，所述病癥包括但不限于：肺血管重塑、肺纖維化、右心室肥厚、與過(guò)度的TGF?β信號(hào)傳導(dǎo)有關(guān)的疾病、與過(guò)度的GDF15信號(hào)傳導(dǎo)有關(guān)的疾病以及與過(guò)度的PAI?1信號(hào)傳導(dǎo)有關(guān)的疾病。本發(fā)明進(jìn)一步提供了使用TGF?β配體捕獲劑來(lái)降低受試者中的右心室收縮壓的方法。
【專利說(shuō)明】
用于治療肺高壓的組合物和方法
[0001] 相關(guān)申請(qǐng)的交叉引用
[0002] 根據(jù)35U .S.C.119(e)，本申請(qǐng)要求2013年11月21日提交的美國(guó)臨時(shí)專利申請(qǐng)系列 號(hào)61/907，260的權(quán)益，W引用的方式將其各自的內(nèi)容整體并入本文。
[0003] 關(guān)于聯(lián)邦贊助研究的聲明
[0004] 本發(fā)明是在NIH授予的5R01AR057374的政府支持下作出的。政府對(duì)本發(fā)明享有一 定的權(quán)利。
技術(shù)領(lǐng)域
[0005] 本發(fā)明大體上設(shè)及醫(yī)學(xué)領(lǐng)域W及屯、血管疾病和肺部疾病領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0006] 將本文中的所有出版物W引用的方式并入，其程度如同將每個(gè)單獨(dú)的出版物或?qū)?利申請(qǐng)具體且單獨(dú)地指示為W引用的方式并入一樣。下面的描述包括對(duì)于理解本發(fā)明可能 有用的信息。運(yùn)并不是承認(rèn)本文提供的任何信息都是現(xiàn)有技術(shù)或者與目前所請(qǐng)求保護(hù)的發(fā) 明相關(guān)，或者任何明確或隱含地引用的出版物都是現(xiàn)有技術(shù)。
[0007] 通過(guò)配體結(jié)合至細(xì)胞表面受體W及過(guò)度/異?；钴S的信號(hào)傳導(dǎo)出現(xiàn)了許多病理過(guò) 程和不期望的生物過(guò)程。因此，旨在降低或者有利地調(diào)制此類結(jié)合和信號(hào)傳導(dǎo)的組合物和 方法可W是有用的。
[000引TGF-β超家族包括許多具有生物學(xué)意義的配體。TGF-β和活化素在許多疾病（包括 不受控的纖維化和癌癥的進(jìn)展，例如腎、肺和肝纖維化疾?。┲邪l(fā)揮重要的致病作用。肌肉 生長(zhǎng)抑制素(myostatinVGDW是與活化素有關(guān)的另一重要配體，該配體共享結(jié)合至相同的 II型受體(活化素 Rllb)。肌肉生長(zhǎng)抑制素是骨骼肌生長(zhǎng)的強(qiáng)力抑制劑，而且是用于肌肉萎 縮疾病(諸如肌營(yíng)養(yǎng)不良癥）的經(jīng)過(guò)驗(yàn)證的治療祀點(diǎn)。TGF-β家族中的額外的配體包括牽設(shè) 在屯、血管疾病中的骨形態(tài)發(fā)生蛋白（BMP)。例如，高水平的BMP2和BMP4均已在巧化的動(dòng)脈粥 樣硬化斑塊和病態(tài)的主動(dòng)脈瓣中發(fā)現(xiàn)。
[0009] 已開(kāi)發(fā)了方法用來(lái)通過(guò)捕獲配體并防止其與細(xì)胞表面受體的相互作用來(lái)減少配 體結(jié)合。W此種配體為祀標(biāo)的主要試劑是對(duì)配體進(jìn)行結(jié)合并隔離（sequester)的配體捕獲 劑/括抗劑。兩種實(shí)例是：（1)抗-配體抗體;W及(2)可溶性受體胞外結(jié)構(gòu)域。
[0010] 已報(bào)導(dǎo)了使用直接捕獲并中和配體的抗-配體抗體來(lái)抑制一些配體。受體胞外結(jié) 構(gòu)域的可溶形式通過(guò)結(jié)合至配體、并防止配體與細(xì)胞表面受體相互作用來(lái)直接括抗配體。 在TGF-β的情況中，在動(dòng)物模型中，TGF-β受體II型(邱RII)胞外結(jié)構(gòu)域化D)的表達(dá)部分恢復(fù) 了宿主免疫并促進(jìn)了腫瘤清除，表明受體胞外結(jié)構(gòu)域介導(dǎo)的TGF-β的中和抑制了腫瘤的進(jìn) 展。不幸的是，已表明就括抗TGF-β而言，單價(jià)邱RII-抓的功效低于最佳功效?？朔\(yùn)一問(wèn)題 的嘗試使得產(chǎn)生邱RII-抓的二價(jià)人工二聚化形式，經(jīng)由融合至卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域或IgG的化 結(jié)構(gòu)域發(fā)生二聚化。此種二聚化改善了括抗作用。已表明邱RII-抓的非共價(jià)二聚化(例如， 經(jīng)由融合至異源二聚化的螺旋鏈(卷曲螺旋邱RII-ED))極大地增強(qiáng)了邱RII-抓的括抗效力 (De Crescenzo等，2004,J.Biol.Chem.279:26013)。卷曲螺旋融合二聚體的顯著缺點(diǎn)是二 聚化結(jié)構(gòu)域的非共價(jià)性質(zhì)限制了它的效力，即該二聚體在低濃度下解離，從而使螺旋融合 的受體胞外結(jié)構(gòu)域的大部分將被用作單體而非二聚體。IgG的Fc結(jié)構(gòu)域的使用提供了共價(jià) 相互作用，但W大的尺寸為代價(jià)。
[0011] 重要的是，迄今開(kāi)發(fā)出的用于治療PH的TG邱RI抑制劑的臨床部署的障礙之一是毒 性，包括出血性瓣膜壞死。
[0012] 鑒于到目前為止嘗試的治療手段的缺點(diǎn)，在本領(lǐng)域中明確地需要能夠括抗配體活 性、并有潛力作為治療試劑或診斷(成像或非成像)試劑的基于受體的捕獲劑/中和劑，W用 于由本文所述的祀標(biāo)配體的過(guò)度產(chǎn)生/活性引起的疾病/障礙。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0013] 結(jié)合系統(tǒng)、組合物和方法對(duì)如下實(shí)施方式及其方面進(jìn)行描述和說(shuō)明，其意在示例 和說(shuō)明，而并不對(duì)范圍進(jìn)行限制。
[0014] 本發(fā)明的多個(gè)實(shí)施方式描述了包含TGF-β配體捕獲劑的藥物組合物。在一些實(shí)施 方式中，TGF-β配體捕獲劑是可溶性重組TGF-的I型受體化-融合蛋白（TGFBRII-Fc)。在一些 實(shí)施方式中，TGFBRII-Fc融合蛋白包含與SEQ ID N0:1的氨基酸序列至少80%、85%、90%、 95%、96%、97%、98%、99%或100%相同的氨基酸序列;或者由與569 10^:1的氨基酸序 列至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同的氨基酸序列組成。
[0015] 本發(fā)明的多個(gè)實(shí)施方式描述了用于治療、預(yù)防受試者中的肺高壓(PH)或降低受試 者中的肺高壓(PH)的進(jìn)展速度(progression rate)的方法。在一些實(shí)施方式中，該方法包 括向受試者給予治療有效量的TGF-β配體捕獲劑，從而治療、預(yù)防受試者中的PH或降低受試 者中的PH的進(jìn)展速度。
[0016] 本發(fā)明的多個(gè)實(shí)施方式描述了治療、預(yù)防受試者中的肺血管重塑或降低受試者中 的肺血管重塑的進(jìn)展速度的方法。在一些實(shí)施方式中，該方法包括向受試者給予治療有效 量的TGF-β配體捕獲劑，從而治療、預(yù)防受試者中的肺血管重塑或降低受試者中的肺血管重 塑的進(jìn)展速度。
[0017] 本發(fā)明的多個(gè)實(shí)施方式描述了治療、預(yù)防受試者中的肺纖維化或降低受試者中的 肺纖維化的進(jìn)展速度的方法。在一些實(shí)施方式中，該方法包括向受試者給予治療有效量的 TGF-β配體捕獲劑，從而治療、預(yù)防受試者中的肺纖維化或降低受試者中的肺纖維化的進(jìn)展 速度。
[0018] 本發(fā)明的多個(gè)實(shí)施方式描述了治療、預(yù)防受試者中的右屯、室肥厚或降低受試者中 的右屯、室肥厚的進(jìn)展速度的方法。在一些實(shí)施方式中，該方法包括向受試者給予治療有效 量的TGF-β配體捕獲劑，從而治療、預(yù)防受試者中的右屯、室肥厚或降低受試者中的右屯、室肥 厚的進(jìn)展速度。
[0019] 本發(fā)明的多個(gè)實(shí)施方式描述了治療、預(yù)防受試者中的與過(guò)度的TGF-β信號(hào)傳導(dǎo)有 關(guān)的疾病或降低受試者中的與過(guò)度的TGF-β信號(hào)傳導(dǎo)有關(guān)的疾病的進(jìn)展速度的方法。在一 些實(shí)施方式中，該方法包括向受試者給予治療有效量的TGF-β配體捕獲劑，從而治療、預(yù)防 受試者中的所述疾病或降低受試者中的所述疾病的進(jìn)展速度。
[0020] 本發(fā)明的多個(gè)實(shí)施方式描述了治療、預(yù)防受試者中的與過(guò)度的GDF15信號(hào)傳導(dǎo)有 關(guān)的疾病或降低受試者中的與過(guò)度的GDF15信號(hào)傳導(dǎo)有關(guān)的疾病的進(jìn)展速度的方法。在一 些實(shí)施方式中，該方法包括向受試者給予治療有效量的TGF-β配體捕獲劑，從而治療、預(yù)防 受試者中的所述疾病或降低受試者中的所述疾病的進(jìn)展速度。
[0021] 本發(fā)明的多個(gè)實(shí)施方式描述了治療、預(yù)防受試者中的與過(guò)度的PAI-1信號(hào)傳導(dǎo)有 關(guān)的疾病或降低受試者中的與過(guò)度的PAI-1信號(hào)傳導(dǎo)有關(guān)的疾病的進(jìn)展速度的方法。在一 些實(shí)施方式中，該方法包括向受試者給予治療有效量的TGF-β配體捕獲劑，從而治療、預(yù)防 受試者中的所述疾病或降低受試者中的所述疾病的進(jìn)展速度。
[0022] 本發(fā)明的多個(gè)實(shí)施方式描述了降低受試者中的右屯、室收縮壓的方法。在一些實(shí)施 方式中，該方法包括向受試者給予治療有效量的TGF-β配體捕獲劑，從而降低受試者中的右 屯、室收縮壓。
[0023] 本發(fā)明的多個(gè)實(shí)施方式描述了對(duì)受試者中的TGF-β配體進(jìn)行成像/檢測(cè)的方法，該 方法包括向受試者給予一定量的連接至成像分子的TGF-β配體捕獲劑。
【附圖說(shuō)明】
[0024] 在參考的附圖中對(duì)示例性的實(shí)施方式進(jìn)行說(shuō)明。本文公開(kāi)的實(shí)施方式和附圖意圖 被視為說(shuō)明性的、而非限制性的。
[0025] 圖1A至圖化是表明根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施方式大鼠中的野百合堿(MCT)誘發(fā)的肺高壓 與增高的PAI-1和降低的Idl轉(zhuǎn)錄活性有關(guān)的圖表。在用MCT(40mg/kg SC)處理Sprague Dawl巧大鼠之后，定期對(duì)在右屯、室收縮壓(RVSP，圖1A)和右屯、室肥厚(RVH，圖1B)方面的變 化進(jìn)行測(cè)量。通過(guò)右屯、室導(dǎo)管插入術(shù)對(duì)RVSP進(jìn)行測(cè)量，并通過(guò)右屯、室(RV)游離壁的重量對(duì) 左屯、室和間隔壁(LV+S)的總和的比例確定RVH(每個(gè)時(shí)間點(diǎn)η = 3)。經(jīng)MCT處理的大鼠的肺的 定量RT-PCR顯示升高的ΡΑΙ-1轉(zhuǎn)錄(反映了增高的TGF-β信號(hào)傳導(dǎo)）（圖1C)，PAI-1轉(zhuǎn)錄的水 平與基于RVSP的PH程度直接相關(guān)（圖1D和圖化）。相反，觀察到Bmpr2W及其轉(zhuǎn)錄祀標(biāo)Idl的 表達(dá)降低，兩者都具有與RVSP負(fù)相關(guān)的水平。（n = 5-6，*p<0.05和*卸<0.01相較于對(duì)照大 鼠）。
[0026] 圖2A至圖2F示出了免疫印跡和圖表。圖2A-圖2C表明根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施方式 TGFBRII-Fc在人肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞(PASMC)中選擇性地抑制TGFf31、TG邱3和GDF15的信號(hào)傳 導(dǎo)。將經(jīng)培養(yǎng)的PASMC去除血清，并與多個(gè)濃度的BMP4、TGFf31、TG邱2、TG邱3和GDF15配體一 起解育30分鐘。實(shí)施Western印跡和qPCR，W評(píng)估TGFBRII-Fc在體外對(duì)信號(hào)傳導(dǎo)活性進(jìn)行調(diào) 制的能力。圖2D-圖2F表明根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施方式TGFBRII-化選擇性地抑制血管平滑肌細(xì) 胞中的TG邱1與GDF15信號(hào)傳導(dǎo)。（圖2D)將人主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞去除血清并過(guò)夜，然后與所 示濃度的81?4、了6即1、了6即2或60。15 -起解育30分鐘，并如所示出的，通過(guò)免疫印跡對(duì) Smadl、Smad2、Smad3和Smad5的憐酸化進(jìn)行分析。TGFPl、TG邱巧日GDF15 W劑量依賴的方式引 起Smad2和Smad3的活化、并引起Smadl和Smad5活化較小程度，而B(niǎo)MP4僅活化Smadl和Smad5。 (圖沈-圖2F)將HASMCs去除血清，并用TGFBRII-Fc(2000ng/ml)或輔料預(yù)處理，隨后與TG邱1 (lng/ml)、TGFe2(lng/ml)或 GDF15(30ng/ml) -起解育 2 小時(shí)。通過(guò) qRT-PCR 的基因表達(dá)分析 顯示GDF15和TG邱1-誘發(fā)的PAI-1和IdlmRNA表達(dá)得到有效抑制，但TG邱2誘發(fā)的PAI-1和 IdlmRNA表達(dá)未得到有效抑制(各自η = 3-5個(gè)樣品，*p<0.05，**p<0.01相較于輔料）。
[0027] 圖3A至圖3D是表明根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施方式低劑量的TGFBRII-化處理引起降低右 屯、室收縮壓（RVSP)的趨勢(shì)、降低右屯、室肥厚的趨勢(shì)W及顯著降低肺血管重塑的趨勢(shì)的圖 表。在用或不用TGFBRII-化(5mg/kg，每周兩次）的條件下，經(jīng)MCT處理3周后，通過(guò)在用戊己 比妥麻醉的條件下的導(dǎo)管插入術(shù)和氣管內(nèi)插管，W盲法對(duì)大鼠進(jìn)行分析，從而確定RVSP(圖 3A)、體循環(huán)動(dòng)脈壓（未示出），并將大鼠進(jìn)行安樂(lè)死?；诨? ton ' S比例（RV/化V+S))的測(cè) 量，W盲法對(duì)RVH的程度進(jìn)行評(píng)估（圖3B)。將值表示為平均值±SEM，n = 6-8，*p<0.05和**p< 0.01(相較于對(duì)照大鼠）。用α-平滑肌肌動(dòng)蛋白和血管性血友病因子對(duì)肺組織切片進(jìn)行染 色，W分別識(shí)別血管平滑肌血管和內(nèi)皮。對(duì)遠(yuǎn)端腺泡內(nèi)血管(直徑10皿-50皿)的肌肉化進(jìn)行 定量，并對(duì)無(wú)肌肉化血管、部分肌肉化血管和完全(周向）肌肉化血管的百分比進(jìn)行計(jì)算（圖 3C)。對(duì)全部的完全肌肉化的腺泡內(nèi)血管(直徑10μπι-50皿，圖3D)的內(nèi)側(cè)壁厚度進(jìn)行計(jì)算。將 壁厚指數(shù)計(jì)算為：指數(shù)=(外徑-內(nèi)徑)/外徑XlOOeTGFBRII-Fc處理(5mg/kg，每周兩次）引 起降低完全肌肉化血管的百分比的趨勢(shì)W及顯著降低內(nèi)側(cè)壁厚度指數(shù)的趨勢(shì)。將值表示為 平均值± SEM，η = 100-150個(gè)血管/處理組(各自來(lái)自6-8只大鼠），P值如圖所示。
[002引圖4Α至圖4D示出了表明根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施方式高劑量的TGFBRII-化處理減弱了 右屯、室收縮壓（RVSP)、右屯、室肥厚、并防止肺血管重塑的圖表。在用或不用TGFBRII-Fc (15mg/kg，每周兩次）的條件下，經(jīng)MCT處理3周后，W盲法對(duì)大鼠進(jìn)行分析，W確定RVSP(圖 4A)?；诨疘ton's比例的測(cè)量，W盲法對(duì)RVH的程度進(jìn)行評(píng)估（圖4B)。將值表示為平均值± SEM，η = 6-8。對(duì)遠(yuǎn)端腺泡內(nèi)血管(直徑10μπι-50μπι)的肌肉化進(jìn)行定量（圖4C)。對(duì)全部的完全 肌肉化的腺泡內(nèi)血管（直徑10μπι-50μπι，圖4D)的內(nèi)側(cè)壁厚度進(jìn)行計(jì)算。TGFBRII-Fc處理 (15mg/kg，每周兩次）顯著降低了完全肌肉化血管的百分比、并降低了內(nèi)側(cè)壁厚度指數(shù)。將 值表示為平均值±861，11 = 89-127個(gè)血管/處理組(各自來(lái)自6-8只大鼠），*p<0.05和***p< 0.001相較于對(duì)照大鼠。
[0029] 圖5A至圖加示出了表明根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施方式TGFBRII-化減弱了超聲屯、動(dòng)圖的 RV肥厚的圖表。在MCT(40mg/kg SC)處理后，在MCT后24小時(shí)開(kāi)始用輔料或TGFBRII-Fc (15mg/kg，每周兩次)對(duì)大鼠進(jìn)行處理。在MCT 2周后，在用1.5%異氣燒麻醉的條件下，通過(guò) 小動(dòng)物超聲檢查對(duì)大鼠進(jìn)行分析，W測(cè)量右屯、室厚度和舒張期內(nèi)徑（圖5A和圖5B)、肺血流 加速時(shí)間（PAT，圖5C)W及肺射血時(shí)間（PET，圖加）。將值表示為平均值±SEM，n = 6-8，*p< 0.05和***p<0.001相較于對(duì)照大鼠。
[0030] 圖6A至圖6F是表明根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施方式P胡市組織中的TGFBRII-Fc抑制的TGW- 介導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄的圖表。MCT-誘發(fā)的PH與TG邱1的適度增高和TG邱2mRNA表達(dá)的顯著降低相關(guān) (圖6A-圖6C) dMCT處理之后，Bmpr2和Idl表達(dá)的阻抑未受到TGFBRII-Fc的影響（15mg/kg每 周兩次，圖抓-圖6E)，而用TGFBRII-Fc處理使得TG邱1及其轉(zhuǎn)錄祀標(biāo)PAI-1顯著降低（圖6F)。 將值表示為平均值± SEM，n = 3-5，*p<0.05和**p<0.01相較于對(duì)照。
[0031] 圖7A至圖7C是表明根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施方式在PH確立之后用TGFBRII-化處理同根 據(jù)本發(fā)明的多個(gè)實(shí)施方式的死亡率和PH的部分復(fù)蘇有關(guān)的圖表。在用MCT(40mg/kg SC)處 理之后，W延遲的方式在PH確立后的第17天開(kāi)始用TGFBRII-FC(15mg/kg每周Ξ次)對(duì)大鼠 進(jìn)行處理。相較于用輔料處理的大鼠（每組n=12，p = 0.10)，Kaplan-Meie;r分析（圖7A)顯示 出在經(jīng)TGFBRII-Fc處理的組中的改善的存活趨勢(shì)。在第35天的存活動(dòng)物中，在用TGFBRII- 化處理的動(dòng)物中存在顯著降低的RVSP(圖7B)。然而，在存活的動(dòng)物中，在RVH方面不存在顯 著差異（圖7C)。示出的值為平均值± SEM，每組η = 8-11，**p<0.01相較于對(duì)照。
[0032] 圖8A和圖8B示出了人IgGl、IgG2、IgG3和IgG4較鏈（圖8A)W及Fc(圖8B)結(jié)構(gòu)域的 氨基酸序列。IgGl較鏈結(jié)構(gòu)域(SEQ ID N0:65);IgG2較鏈結(jié)構(gòu)域(SEQ ID N0:66);IgG3較鏈 結(jié)構(gòu)域(SEQ ID N0:67);IgG4較鏈結(jié)構(gòu)域(SEQ ID N0:68);圖8BW與圖8A相同的順序示出： IgGlFc結(jié)構(gòu)域(SEQ ID N0:69)，即氨基酸序列的第一行；IgG2Fc結(jié)構(gòu)域(SEQ ID N0:70)，即 氨基酸序列的第二行；IgG3Fc結(jié)構(gòu)域(SEQ ID N0:71)，即氨基酸序列的第蘭行；IgG4Fc結(jié)構(gòu) 域(SEQ ID N0:72)，即氨基酸序列的第四行。根據(jù)Kabat EU編號(hào)系統(tǒng)對(duì)圖8A和圖8B中示出 的氨基酸殘基進(jìn)行編號(hào)。通過(guò)將各自較鏈區(qū)域的第一個(gè)和最后一個(gè)半脫氨酸殘基(其形成 重鏈間S--S鍵)置于相同的位置，將同種型序列與IgGl序列進(jìn)行比對(duì)。就圖8B而言，CH2結(jié)構(gòu) 域中的殘基由加號(hào)(+ )表示，而CH3結(jié)構(gòu)域中的殘基由波浪線表示?？蓪⑷魏蜦c結(jié)構(gòu)域用于 本發(fā)明的方法中，如在向多種Fc結(jié)構(gòu)域提供指導(dǎo)的圖8中所述，可對(duì)全部的抗體序列進(jìn)行比 對(duì)。
[0033] 圖9A至圖9B示出了表明響應(yīng)于TGFBRII-Fc處理而無(wú)二尖瓣重塑、退行性病變或異 常的組織切片。圖9A為對(duì)照。圖9B為經(jīng)TGFBRII-Fc-處理。
【具體實(shí)施方式】
[0034] 本文中引用的所有參考文獻(xiàn)都^引用的方式整體并入本文進(jìn)行充分闡述。除非另 外定義，否則本文使用的科技術(shù)語(yǔ)具有與本發(fā)明所屬領(lǐng)域中的普通技術(shù)人員通常所理解的 相同白勺含義DSingleton等，Dictionary of Microbiology and Molecular Biology，第3 片反，J.Wiley&Sons(New York，NY 2001);March，Advanced Organic Chemistry 民eactions， Mechanisms and Structure,第5版，J.Wiley&Sons(New York,NY 2001); 1^及53111131'〇〇1^和 民ussel，Molecular Cloning : A Laboratory Manual，第3片反，Cold Spring Harbor Laboratoiy Press(Cold Spring Harbor,NY 2001)，為本領(lǐng)域技術(shù)人員提供了本申請(qǐng)中使 用的許多術(shù)語(yǔ)的通用指導(dǎo)。
[0035] 關(guān)于如何制備抗體的參考文獻(xiàn)，參見(jiàn)例如D · Lane，Antibodies : A LaboratoiT Manual(Cold Spring Harbor Press，Cold Spring Harbor NY，1988);Kohler和Milstein， (1976)Eur.J. Immunol .6:511 ;Queen等，美國(guó)專利號(hào)5,585,089; 1^及1^6(31111131111 等，Nature 332:323(1988)。除非另有說(shuō)明，本發(fā)明的實(shí)踐將采用本領(lǐng)域的技術(shù)范圍之內(nèi)的分子生物學(xué) (包括重組技術(shù)）、微生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、生物化學(xué)、核酸化學(xué)和免疫學(xué)的常規(guī)技術(shù)。在文獻(xiàn) 中對(duì)此類技術(shù)進(jìn)行了充分地闡釋，例如，Current Protocols in ImmunologyQ.E.Coligan 等編著，1999,包括 2011 年的補(bǔ)充）；Current Protocols in Molecular Biology (F.M.Ausubel等編著，1987,包括2011 年的補(bǔ)充）；Short Protocols in Molecular Biology，F(xiàn).M.Ausubel等編著，第五版2002,包括2011年的補(bǔ)充；Molecular Cloning:A Laboratory Manual,第S版（Sambrook和Russel,2001);PCR:The Polymerase Chain Reaction, (Mullis等編著，1994) ;The Immunoassay Handbook(D.Wild編著，Stockton Press NY, 1994) ；Bioconjugate Techniques(Greg T.Hermanson編著，Academic Press， 1996);Methods of Immunological Analysis(R.Masseyeff，W.H.A化6別和N.A.Staines編 著，Weinheim:VCH Verlags gesellschaft mbH，1993)，Harlow and Lane Using Antibodies：A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press , Cold Spring Harbor，N.Y. ,1999; 1^及86311〇3容6等編著，Current Protocols in Nucleic Acid Qiemistry John Wiley&Sons公司，New York,2000)。
[0036] 本領(lǐng)域技術(shù)人員將認(rèn)識(shí)到可用于本發(fā)明的實(shí)踐中、與本文描述的方法和材料類似 或等同的許多方法和材料。本發(fā)明的其它特征和優(yōu)勢(shì)將根據(jù)結(jié)合附圖進(jìn)行的如下詳細(xì)描述 而變得顯而易見(jiàn)，所述附圖通過(guò)示例的方式說(shuō)明本發(fā)明的實(shí)施方式的多個(gè)特征。實(shí)際上，本 發(fā)明并不限于所描述的方法和材料。出于本發(fā)明的目的，下面對(duì)一些術(shù)語(yǔ)進(jìn)行定義。
[0037] "有益結(jié)果"可包括但不W任何方式限于減輕或緩解疾病病癥的嚴(yán)重程度、防止疾 病病癥惡化、治療疾病病癥、防止疾病病癥發(fā)展、降低患者發(fā)展疾病病癥的機(jī)會(huì)W及延長(zhǎng)患 者的壽命或預(yù)期壽命。在多個(gè)實(shí)施方式中，疾病病癥是肺高壓、肺血管重塑、肺纖維化、右屯、 室肥厚、與過(guò)度的TGF-β信號(hào)傳導(dǎo)有關(guān)的疾病、與過(guò)度的GDF15信號(hào)傳導(dǎo)有關(guān)的疾病W及與 過(guò)度的PAI-1信號(hào)傳導(dǎo)有關(guān)的疾病。
[0038] 如本文所使用的"治療/處理"指的是治療性的治療/處理和預(yù)防性或防范性措施， 其中，目標(biāo)是減緩(減輕)祀向的病理病癥、預(yù)防病理病癥、追求或獲得有益結(jié)果、或即使治 療最終不成功也會(huì)降低個(gè)體發(fā)展病癥的機(jī)會(huì)。需要治療/處理的對(duì)象包括已患有病癥的對(duì) 象W及易于患有病癥的對(duì)象、或在其中待對(duì)病癥進(jìn)行預(yù)防的對(duì)象。
[0039] 如本文所使用的"肺高壓"（PH)可包括肺動(dòng)脈(肺動(dòng)脈高壓）、肺靜脈或肺毛細(xì)血管 (一起被稱為肺脈管系統(tǒng)）中的血壓的增高，導(dǎo)致呼吸急促、頭暈、昏厥、下肢腫脹W及其它 癥狀。PH可W是伴隨有顯著降低的運(yùn)動(dòng)耐量W及屯、力衰竭的嚴(yán)重疾病。PH可W是至少五種 不同的可能類型中的一種，包括:動(dòng)脈PH、靜脈PH、缺氧性PH、血栓栓塞性PH或混雜性PH。
[0040] 如本文所使用的"TGF-β配體捕獲劑"指的是能夠捕獲TGF-β配體（即使僅瞬時(shí)地）， 從而調(diào)制配體與一種或多種額外的分子相互作用的能力的蛋白質(zhì)。
[0041 ] 在一些實(shí)施方式中，TGF-β配體可意味著選自TGF-m、TGF-e2、TGF-03和GDF 15中 的配體。
[0042] TGF-β配體捕獲劑的實(shí)例包括但不W任何方式限于可溶性重組TGF-β受體化-融合 蛋白，其包含TGF-β受體的TGF-β配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域和免疫球蛋白的Fc結(jié)構(gòu)域。
[0043] 因此，在一個(gè)實(shí)施方式中，提供了治療、預(yù)防受試者中的肺高壓(PH)或降低受試者 中的肺高壓(PH)的進(jìn)展速度的方法。該方法包括向受試者給予治療有效量的TGF-β配體捕 獲劑，從而治療、預(yù)防受試者中的PH或降低受試者中的PH的進(jìn)展速度，其中TGF-β配體捕獲 劑包含：1 )TGF-i3受體的TGF-β配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域;2)免疫球蛋白的化結(jié)構(gòu)域；W及3)任選的在 配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域和Fc結(jié)構(gòu)域之間的接頭(免疫球蛋白接頭或其它接頭）。
[0044] 在一個(gè)實(shí)施方式中，TGF-β受體的TGF-β配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域包含SEQ ID N0:63、或其 部分、或其變體:?ΡΡΗ V0KSV NN DΜIVTDNN GAVKFPQLCK FCDV 艮 FSTCD NQKSCMSNCS ITSiCEKPQE VCVAVW 民 KND ENiTLETVCH DPKLPYHDFl LEDAASPKCi MKEKKKPGET FFMCSCSSDE CNDNilFSEE YNTSNPD (SEQ ID NO: 63)。
[0045] 在一個(gè)實(shí)施方式中，TGF-β受體的TGF-β配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域包含SEQ ID NO:3、或SEQ ID NO:4、或SEQ ID NO:5、或其部分、或其變體。
[0046] 在一個(gè)實(shí)施方式中，F(xiàn)c結(jié)構(gòu)域包含SEQ ID N0:64、或SEQ ID N0:64的部分/片段、 或其變體。沈Q ID N0:61:ECPPCPAP P-VAGPSVFLF PPKPKDTLMi S 民 TPEVTCVV VDVSHE；DPE￥ QFNWYVDGVE VHNAKTKP 民 E EQFNSTF 民 VV SVLTVVHQDW LNGKEYKCKV SNKGLPAPIE KTISKTKGQP REPQVYTLPP S 民 EEM 下 KNQV SLTCLVKGFY PSDIAVEWES NGQPENNYKT TPPMLDSDGS FFLYSKLTVD KSRWQQGNVF SCSVMHEALH NHYTQKSLSL SPGK (SEQ ID NO: 64)。
[0047] 進(jìn)一步而言，圖8B中描述了示例性的Fc結(jié)構(gòu)域，例如SEQ ID N0:69、SEQ ID NO: 70、SEQ ID N0:71和沈Q ID N0:72。在一些實(shí)施方式中，F(xiàn)c結(jié)構(gòu)域包含沈Q ID N0:69、SEQ ID N0:70、SEQ ID N0:71、或沈Q ID N0:72,或者包含沈Q ID N0:69的片段、SEQ ID N0:70 的片段、SEQ ID N0:71的片段、或沈Q ID N0:72的片段、或者沈Q ID N0:69的變體、SEQ ID NO:70的變體、SEQ ID NO:71的變體、或SEQ ID NO:72的變體。
[0048] 按照本文的公開(kāi)內(nèi)容，對(duì)合適的結(jié)合結(jié)構(gòu)域進(jìn)行選擇在本領(lǐng)域普通技術(shù)人員的能 力之內(nèi)。在一些實(shí)例中，結(jié)合結(jié)構(gòu)域可選自TGF-的型受體和TGF-βΠ 型受體的胞外結(jié)構(gòu)域。 一個(gè)非限制性實(shí)例是可溶性重組TGF-的I型受體Fc-融合蛋白（TGFBRII-Fc)。
[0049] 在進(jìn)一步的實(shí)例中，從其出發(fā)設(shè)計(jì)多膚結(jié)合結(jié)構(gòu)域的天然受體可W是邱R-I-邸或 邱R-n-邸。
[0050] 在一個(gè)實(shí)施方式中，TG邱受體的TGF-β配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域包含TGF-βΙ型受體胞外結(jié) 構(gòu)域的序列、或胞外結(jié)構(gòu)域的部分;例如SEQ ID NO:73或其部分， GVQVETISPG DGRTFPKRGQ TCVVHYTGML EDGKKFDSS 民 DRNKPFKFML GKQEVIRGWE EGVAQMSVGQ RAKLT1SPDY AYGATGHPGI IPPHATLVFD VELLKLEC SE〇 ID NO: 73)；
[0化1 ] 或者例如沈Q ID NO: 74、或其部分/ j 'I.段，EDPSLDRPFl:沒(méi)EGTTLK：丘LI YDMTTSGSGS GLPLLVQ 民 Τ? A 民 TIVLQESl GKG 民 FGEVW 民 GKWRGEEVAV KIFSS 民 EERS WFREAEIYQT VMLRHENILG FiAADNKDNG TWTQLWLVSD YHEHGSLFDY LNRYTVTVEG MIKLALSTAS GLAHLHMEiV GTQGKPAIAH RDLKSKNILV KKNGTC 幻 AD LGLAVRHDSA TDTIDIAPNH RVGTKRYMAP EVLDDSINMK HFESFKRADI YAMGLVFWEI AR 民 CSIGGIH EDYQLPYYDL VPSDPSVEEM RKVVCEQKL 民 PNIPN 民 WQSC EAL民VMA腳M RECWYANGAA RLTAL民脹KT LSQLSQQBGi KM (SEQ 1D NO: 74)(鏈A，無(wú)化bp 12而結(jié)晶的未憐酸化的TGF-的型受體的細(xì)胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域，GenBank 登錄 1IAS_A 01:15988007)。
[0052]在一個(gè)實(shí)施方式中，TG邱受體的TGF-β配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域包含邱R-III-邸的序列、或 沈Q ID N0:75的部分；MTSHYVIAIF ALMSSCLATA GPEPGALCEL SPVSASHPVQ ALMESFTVLS GCASRGTTGL PQEVHVLNLR TAGQGPGQLQ 民EVTLHLNPl SSVHiHHKSV VFLLNSPHPL VWHLKTE 民 LA TGVSRLFLVS EGSVVQFSSA NFSLTAETEE 民 NFPHGNEHL LNWARKEYGA VTSFTELKIA 民 NIYIKVGED QVFPPKCNIG KNFLSLNYLA EYLQPKAA 巨 G CVMSSQPQNE EVHIIELITP NSNPYSAFQV DITIDIRPSQ EDLEVVKNLI LILKCKKSVN VVVIKSFDVKG SLKllAPNSI GFGKESERSM TMTKSI 民 DDI PSTQGNLVKW ALDNGYSPIT SYTMAPVANR FHL 民 LENNEE MGDEEVHTIP PELRILLDPG ALPALQNPPi 艮 GGEGQNGGL PFPFPDISR 民 VWNEEGEDGL P 民 PKDPVIPS IQLFPGL 民 EP EEVQGSVDIA LSVKCDNEKM IVAVEKDSFQ ASGYSGMDVT LLDPTCKAKM NGTHFVLESP LNGCGT 民P 艮 W SALDGVVYYN SiVIQVPALG DSSGWPDGYF. DLESGDNGFP GDMDEGDASL FTRPEIVVFN CSLQQVRNPS SFQEQPHGNi TFNMELYNTD LFLVPSQGVF SVPENGHVYV EVSVTKAEQE LGFAIQTCFi SPYSNPDRMS HYTIIENICP KDESVKFYSP KRVHFPIPQA DMDKK 民 FSFV FKPVFNTSLL FLQCELTLCT KMEKHPQKLP KCVPPDEACT SLDASliWAM MQNKKTFTKP LAVIHHEAES KEKGPSMKEP NPISPPIFHG LDTLT 、'SEQ !D NO: ^)(化稱為可溶性TGF-β受體III，例如，在如下中對(duì)人重組可溶性TGF-fcR III進(jìn)行了描述：Moren A等，Molecular cloning and characterization of the human and porcine transforming growth factor-beta type III receptors，1992， J.Biochem.Bic^hys.Res.Commun.189(1),356-362)〇
[0053] 在如下中對(duì)重組可溶性TGF-郵II型cDNA進(jìn)行了描述：Melissa A.Rowland- Goldsmith等，Soluble Type II Transforming Growth Factor-0(TGF-0)Receptor Inhibits TGF-0Signaling in COL〇-357Pancreatic Cancer Cells in Vitro and Attenuates Tumor F'ormationlJOOUClin Cancer Res,7:2931。將人邱RII的完整cDNA用 作邱RII的細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域的編碼序列(包含信號(hào)序列的核巧酸1-477)的PCR擴(kuò)增的模板。使 用正義引物（5'-AAGCTTGCCGCCGCCATGGGTCG(SEQ ID N0:76))和反義引物（5'- CTGGAATTCGTCAGGATTGCTGG(SEQ ID N0:77))實(shí)施PCR。沈Q ID N0:78是II型轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子- iKTGF-β)受體細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域的實(shí)例： Μ 婦 R(3LL 民 GLW PLHIVLWTRI A 沒(méi) TIPPHVQK SVNNDMIVTD NNGAVKFPQL CKFCDVRFST CDNQKSCMSN CSITSICEKP QEVCVAVWRK NDENITLETV CHDPKLPYHD FILEDAASPK CiMKEKKKPG ETFFMCSCSS DECNDNMFS EEYNTSNPDL LLVIFQVTGI SLLPPLGVAI SVIllFYCYR VN 民 QQKLSST WETGKTRKLM EFSEHCAIiL EDDRSDISST CANNINHNTE LLPIELDTLV GKG 民 FAEVYK AKLKQNTSEQ FETVAVKIFP YEEYASWKTE KDIFSDINLK HENILQFLTA EE 民 KTELGKQ YWLITAFHAK GNLQEYLTRH VISWF,DLRKL GSSLARGiAH LHSDHTPCG 民 PKMPIVH 民 DL KSSNMLVKND LTCCLCDFGL SLRLDPTLSV DDLANSGQVG TARYMAPEVL ES 民 MNLENVE SFKQTDVYSM ALVLWEMTSR CNAVGEVKDY EPPFGSIC (SEQ ID NO 78)。
[0054] TG邱受體的完整細(xì)胞外部分通常包含位于其折疊的配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域兩側(cè)的非結(jié) 構(gòu)化部分。運(yùn)些非結(jié)構(gòu)化的細(xì)胞外部分從如下顯而易見(jiàn):可從PDB數(shù)據(jù)庫(kù)獲得的實(shí)驗(yàn)確定的 3D結(jié)構(gòu)(Berman等，2000，Nucl. Acid Res. 28:235)(例如，I型TGF-β受體胞外結(jié)構(gòu)域(Groppe 等，2008，Mol .Cell 29: 157)或II型TGF-β受體胞外結(jié)構(gòu)域的晶體結(jié)構(gòu)（Hart等， 2002化t. Struct .Biol.9:203; Boesen 等，2002，Structure 10 : 913 ;G;roppe等，2008， Mol.Cell 29:157))、或11型了6。-0受體胞外結(jié)構(gòu)域的醒3結(jié)構(gòu)（〇6邱等，2〇〇3,81〇油611113付7 42:10126)。本領(lǐng)域技術(shù)人員精通于識(shí)別TGF-β受體的配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域。就TGF-β配體捕獲劑 而言，可使用本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的標(biāo)準(zhǔn)配體結(jié)合分析法(例如放射配體結(jié)合分析法)對(duì)配 體的結(jié)合進(jìn)行確認(rèn)（參見(jiàn)例如Si ttampalam , G . S . ; Kahl ,S.D. iJanzen.W.P.High- throughput screening:Advances in assay technologies,1997,Current Opinion in Qiemical Biology 1(3) :384-391 及De Jong,L.A.A.等，Receptor-ligand binding assays:Technologies and Applications,2005,Journal of Chromatography B 829(1- 2):l-25)。
[0化日]本文所使用的叮GFBRII-Fc"指的是包含如下的融合蛋白：TGF-的I型受體的TGF-β 配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域或其變體或其生物活性部分W及免疫球蛋白的Fc結(jié)構(gòu)域。在多個(gè)實(shí)施方式 中，在TGF-β配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域和化結(jié)構(gòu)域之間可包含接頭。還根據(jù)本發(fā)明，融合蛋白可包含 TGF-WI型受體的整個(gè)細(xì)胞外部分或其變體W及免疫球蛋白的化結(jié)構(gòu)域。在一些實(shí)施方式 中，融合蛋白可包含如下的一部分:TGF-WI型受體的細(xì)胞外部分或其變體W及免疫球蛋白 的Fc結(jié)構(gòu)域。變體的實(shí)例可包括但不限于包括傳統(tǒng)的氨基酸突變、SNP變體W及剪接變體的 變體。一個(gè)非限制性實(shí)例是TGF-的I型受體的Hb剪接變體。在多個(gè)實(shí)施方式中，可對(duì)TGF-0 配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域和/或化結(jié)構(gòu)域進(jìn)行修飾例如用于促進(jìn)純化，只要此類修飾不會(huì)將運(yùn)些結(jié) 構(gòu)域的功能降低至不可接受的水平。
[0化6]已在本領(lǐng)域中普遍描述了化-融合的基本技術(shù)，例如在Czajkowsky等，F(xiàn)c-化sion proteins:new developments and future perspectives，EMB0 Mol Med.2012年10月，4 (10) :1015-28中，w引用的方式將其整體并入本文。TGF-β型II受體可來(lái)自哺乳動(dòng)物。在一 些實(shí)例中，該受體來(lái)自人、猴、猿、狗、貓、牛、馬、山羊、綿羊、豬、兔、小鼠或大鼠。免疫球蛋白 可來(lái)自哺乳動(dòng)物。僅舉例來(lái)說(shuō)，免疫球蛋白可來(lái)自人、猴、猿、狗、貓、牛、馬、山羊、綿羊、豬、 兔、小鼠或大鼠。
[0057] 當(dāng)提及抗體結(jié)構(gòu)域時(shí)，根據(jù)Kabat的定義對(duì)各個(gè)結(jié)構(gòu)域指定氨基酸（參見(jiàn)，Elvin A.Kabat,Tai Te Wu，Kay S.Gottesman，Carl Foeller的"Sequences of Proteins of Immunological Interest"，第5版，出版號(hào)913242,國(guó)立衛(wèi)生研究院，Bethesda,Md.，1991， W及更早的版本）。來(lái)自免疫球蛋白的成熟重鏈和輕鏈的可變區(qū)域的氨基酸通過(guò)鏈中的氨 基酸的位置指明。Kabat描述了就抗體而言的許多氨基酸序列，識(shí)別了就各亞組而言的氨基 酸共有序列，W及對(duì)每個(gè)氨基酸指定了殘基編號(hào)。通過(guò)參照保存的（conserved)氨基酸將有 疑問(wèn)的抗體與Kabat中的共有序列中的一個(gè)進(jìn)行比對(duì)，可將Kabat的編號(hào)方案擴(kuò)展到未包含 在他的概論內(nèi)的抗體。用于指定殘基編號(hào)的運(yùn)一方法已經(jīng)在本領(lǐng)域中成為標(biāo)準(zhǔn)，并方便地 識(shí)別不同抗體中（包括嵌合變體或人源化變體)的等價(jià)位置處的氨基酸。例如，人抗體輕鏈 的位置50處的氨基酸占據(jù)了小鼠抗體輕鏈的位置50處的氨基酸的等價(jià)位置。
[0058] 如本文所使用的術(shù)語(yǔ)"Fc區(qū)域"、"Fc結(jié)構(gòu)域"或類似的術(shù)語(yǔ)用于限定IgG重鏈的 CH2/CH3C-末端區(qū)域。圖8B中示出了包含人IgGl的氨基酸序列的實(shí)例。如根據(jù)Kabat系統(tǒng)的 編號(hào)，雖然界限可能略有變化，F(xiàn)c結(jié)構(gòu)域從氨基酸231延伸至氨基酸447(根據(jù)Kabat系統(tǒng)對(duì) 圖8B中的氨基酸殘基進(jìn)行編號(hào)：參見(jiàn)Kabat等，"Sequences of Proteins of Immunological Interest",第5版，Public Health Se;rvice，NIH，MD(1991)，W引用的方式 將其整體并入本文）。圖8B還提供了 IgG同種型IgGl、IgG2、IgG3和IgG4的Fc區(qū)域的氨基酸序 列的實(shí)例。
[0059] IgG的Fc區(qū)域包含兩個(gè)恒定的結(jié)構(gòu)域:CH2和C冊(cè)。根據(jù)Kabat的編號(hào)系統(tǒng)，人IgG Fc 區(qū)域的C肥結(jié)構(gòu)域通常從氨基酸231延伸至氨基酸341(圖8B)。根據(jù)Kabat的編號(hào)系統(tǒng)，人IgG Fc區(qū)域的C冊(cè)結(jié)構(gòu)域通常從氨基酸342延伸至氨基酸447(圖8B)。人IgG化區(qū)域的C肥結(jié)構(gòu)域 (也稱為乂丫 2"結(jié)構(gòu)域)是獨(dú)特的，因?yàn)樗慌c另一結(jié)構(gòu)域緊密配對(duì)。而是，兩個(gè)N-連接的分 支糖鏈插在完整的天然IgG的兩個(gè)CH2結(jié)構(gòu)域之間。
[0060] TGFBRII-Fc的實(shí)例包括但不限于具有在SEQ ID N0:1或其變體中列出的序列的蛋 白質(zhì)。在一個(gè)實(shí)施方式中，SEQ ID N0:1的變體包含與SEQ ID N0:1具有至少80%、85%、 90 %、95 %、98 %或99 %序列一致性的序列。 TIPPHVQKSV NNDMIVTDNN GAVKFPQL成 FCDV民FSTCD
[0061 ] 在SEQ ID NO: 1中，氨基酸1-137是TGF-β配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域，氨基酸138-141是接頭， 且氨基酸142-364是化結(jié)構(gòu)域。運(yùn)一示例性了6。8311斗(3可通過(guò)包含56〇10^:2或其簡(jiǎn)并變 體中列出的核巧酸序列的核酸來(lái)表示。如本文所使用的"簡(jiǎn)并變體"指的是具有突變的核巧 酸序列、但由于遺傳密碼的冗余性仍然編碼相同多膚的變體。
[0062]
[0063]
[0064]
[0065] 使用Kabat編號(hào)，通常將重鏈IgG的"較鏈區(qū)域"或"較鏈結(jié)構(gòu)域"定義為人IgGl的 G1U216延展至Pro230。圖8A中示出了人IgGl較鏈區(qū)域的氨基酸序列的實(shí)例(根據(jù)Kabat系統(tǒng) 對(duì)圖8A中的氨基酸殘基進(jìn)行編號(hào)）。如圖8A中所示，通過(guò)將形成重鏈間S--S鍵的第一個(gè)和最 后一個(gè)半脫氨酸殘基置于相同的位置，可將其它IgG同種型的較鏈區(qū)域與IgGl序列進(jìn)行比 對(duì)。在一些實(shí)施方式中，配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域和Fc結(jié)構(gòu)域之間的接頭包含較鏈區(qū)域，例如SEQ ID N0:65至SEQ ID N0:68中的任一者(參見(jiàn)圖8A)。在一個(gè)實(shí)施方式中，接頭包含TGG G(SEQ ID NO :79)。在一些實(shí)施方式中，接頭包含沈Q ID NO :6至SEQ ID NO :48中的任一者（參見(jiàn)實(shí)施 例3)。
[0066] 本領(lǐng)域技術(shù)人員將容易理解的是，與在本文中具體描述的膚基本相同的膚是在考 慮之列的，并且可包含一種或多種傳統(tǒng)的氨基酸突變。本領(lǐng)域中已知的是，對(duì)參照膚進(jìn)行一 種或多種傳統(tǒng)的氨基酸突變可產(chǎn)生在生理學(xué)、化學(xué)或功能性質(zhì)方面與所述參照膚相比沒(méi)有 實(shí)質(zhì)變化的突變膚;在此類情況中，參照膚和突變膚可被認(rèn)為是"基本上相同"的多膚。
[0067] 傳統(tǒng)的氨基酸的突變可包括氨基酸的添加、缺失或取代。在本文中將傳統(tǒng)的氨基 酸取代定義為將一個(gè)氨基酸殘基用具有類似化學(xué)性質(zhì)(例如大小、電荷或極性)的另一氨基 酸殘基取代。在非限制性實(shí)例中，傳統(tǒng)的突變可W是氨基酸取代。此類傳統(tǒng)的氨基酸取代可 將堿性氨基酸、中性氨基酸、疏水性氨基酸或酸性氨基酸用具有相同基團(tuán)的另一氨基酸取 代。
[0068] 如本文所使用的"堿性氨基酸"包括具有大于7的側(cè)鏈地a值的親水性氨基酸，其在 生理抑下通常帶正電。堿性氨基酸包括組氨酸化is或H)、精氨酸(Arg或R)和賴氨酸化ys或 K)。如本文所使用的"中性氨基酸"（也稱為"極性氨基酸"）意味著具有在生理pH下不帶電的 側(cè)鏈的親水性氨基酸，但是在其中具有至少一個(gè)鍵，在所述鍵中兩個(gè)原子共用的成對(duì)電子 更靠近其中一個(gè)原子。極性氨基酸包括絲氨酸(Ser或S)、蘇氨酸(Thr或T)、半脫氨酸(切S或 C)、酪氨酸(Tyr或Y)、天冬酷胺(Asn或N)和谷氨酷胺(Gin或Q)。依據(jù)Eisenberg的標(biāo)準(zhǔn)化通 用疏水性標(biāo)度(1984 )，術(shù)語(yǔ)"疏水性氨基酸"（也被稱為"非極性氨基酸"）意味著包括顯示出 大于零的疏水性的氨基酸。疏水性氨基酸包括脯氨酸(Pro或P)、異亮氨酸(lie或I)、苯丙氨 酸(Phe或F)、鄉(xiāng)氨酸(化1或V)、亮氨酸化eu或L)、色氨酸(T巧或W)、甲硫氨酸(Met或M)、丙氨 酸(Ala或A)和甘氨酸(Gly或G)。"酸性氨基酸"指的是具有小于7的側(cè)鏈地a值的親水性氨基 酸，其在生理pH下通常帶負(fù)電。酸性氨基酸包括谷氨酸(Glu或E)和天冬氨酸(Asp或D)。
[0069] 將序列一致性用于評(píng)價(jià)兩個(gè)序列的相似性；當(dāng)對(duì)兩個(gè)序列的殘基位置之間的最大 對(duì)應(yīng)性(correspondence)進(jìn)行比對(duì)時(shí)，通過(guò)計(jì)算相同的殘基的百分比確定序列一致性。任 何已知的方法都可用于計(jì)算序列一致性;例如，可用計(jì)算機(jī)軟件來(lái)計(jì)算序列一致性。作為非 限制性實(shí)例，序列一致性可通過(guò)諸如BLAST-P、Blast-N或FASTA-N的軟件、或者本領(lǐng)域中已 知的任意其它合適的軟件來(lái)計(jì)算。本發(fā)明的基本上相同的序列可至少80%相同。在其它實(shí) 例中，基本上相同的序列可在氨基酸水平上與本文所述的序列至少80%、85%、90%、95% 或100%相同。
[0070] 如上所述，在多個(gè)實(shí)施方式中，在TGF-β配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域和化結(jié)構(gòu)域之間，可存在 接頭。本文提供的是此類接頭的序列。在一個(gè)實(shí)施方式中，接頭是非結(jié)構(gòu)化和柔性的多膚序 列。接頭區(qū)域提供了不同于結(jié)構(gòu)化的配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域和Fc結(jié)構(gòu)域的區(qū)段，并因此可將接頭 區(qū)域用于綴合至輔助分子(例如，用于提高諸如聚乙二醇化(PEGylation)部分的穩(wěn)定性的 分子)或負(fù)荷分子(諸如用于成像的造影劑和毒素），而無(wú)需對(duì)配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域和化結(jié)構(gòu)域 進(jìn)行化學(xué)上的修飾。綴合的方法有所不同，但通?？墒褂媚軌蚪?jīng)由常見(jiàn)的反應(yīng)性基團(tuán)（諸如 伯胺、班巧酷亞胺(NHS)醋和琉基反應(yīng)性基團(tuán)）進(jìn)行綴合的商業(yè)化試劑盒來(lái)實(shí)施。一些非限 制性實(shí)例是：Alexa Fluor 488蛋白質(zhì)標(biāo)記試劑盒（分子探針，Invitrogen detection technologies)和聚乙二醇化試劑盒(Pierce Biotechnology Inc.)。
[0071] 接頭可包括非結(jié)構(gòu)化的氨基酸序列，該非結(jié)構(gòu)化的氨基酸序列可與TGF-β超家族 中的另一受體或感興趣的配體的的細(xì)胞外部分中的天然非結(jié)構(gòu)化區(qū)域的序列相同、或者衍 生自對(duì)該天然非結(jié)構(gòu)化區(qū)域的序列的傳統(tǒng)修飾。在其它實(shí)例中，此類接頭在組成和來(lái)源上 可W是完全人工化的，但將會(huì)包含所選定的用于提供非結(jié)構(gòu)化的柔性接頭的氨基酸，在當(dāng) 使該接頭緊密接近感興趣的配體時(shí)，具有較低可能遇到靜電或空間位阻混亂。
[0072] 認(rèn)為接頭的長(zhǎng)度是如下兩者之間的氨基酸的數(shù)量：（a)位于接頭N-末端的結(jié)合結(jié) 構(gòu)域的C-末端主鏈碳原子；W及(b)位于接頭C-末端的結(jié)合結(jié)構(gòu)域的N-末端主鏈氮原子。當(dāng) 接頭長(zhǎng)度允許結(jié)合結(jié)構(gòu)域?qū)⑺鼈兊奶烊唤Y(jié)合位點(diǎn)結(jié)合在它們的天然配體上時(shí)，該接頭長(zhǎng)度 被認(rèn)為是可接受的。表2中給出了不同長(zhǎng)度的天然接頭序列和人工接頭序列的實(shí)例。例如， 不希望W任何方式受到限制，接頭長(zhǎng)度可為約18-80個(gè)氨基酸、25-60個(gè)氨基酸、35-45個(gè)氨 基酸、或可為任何其它合適的長(zhǎng)度。
[0073] 在一些實(shí)例中，可能期望使本文公開(kāi)的配體結(jié)合試劑的基于多膚的連接設(shè)計(jì)接受 特定應(yīng)用所期望的特性的優(yōu)化。例如，為了改善結(jié)合親和性、特異性、免疫原性和穩(wěn)定性，可 基于原子水平模擬和基于知識(shí)的設(shè)計(jì)，在長(zhǎng)度和組成上對(duì)接頭進(jìn)行修飾。運(yùn)適用于表現(xiàn)出 同聚、異聚、二聚和多聚的配體-受體結(jié)構(gòu)特性的廣泛范圍的分子系統(tǒng)?？蓪㈩~外的不同的 結(jié)合結(jié)構(gòu)域并入，W產(chǎn)生具有甚至更高的結(jié)合效價(jià)的多價(jià)捕獲劑。
[0074] 可對(duì)接頭進(jìn)行設(shè)計(jì)，W促進(jìn)接頭和/或配體結(jié)合捕獲劑的純化。所選擇的精確純化 方案將確定需要何種修飾，例如而且不希望受到限制，加入純化"標(biāo)簽"（諸如化S標(biāo)簽)是在 考慮之列的;在其它實(shí)例中，接頭可包含有利于添加負(fù)荷分子或輔助分子的區(qū)域。當(dāng)此類添 加影響了接頭的非結(jié)構(gòu)化性質(zhì)或引入了潛在的靜電或空間干擾時(shí)，將適當(dāng)增加接頭長(zhǎng)度w 確保結(jié)合結(jié)構(gòu)域能夠使其位點(diǎn)結(jié)合在配體上。按照本文的方法和教導(dǎo)，此類確定可通過(guò)本 領(lǐng)域技術(shù)人員常規(guī)地做出。
[0075] 在本發(fā)明的實(shí)施方式中，其中配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域和接頭主要包含天然序列，在典型 的患者中通常不期望該天然序列是嚴(yán)重免疫原性或毒性的。
[0076] 本發(fā)明的多膚可用作對(duì)與疾病相關(guān)的共價(jià)穩(wěn)定的二聚配體(諸如生長(zhǎng)因子）的作 用進(jìn)行中和的治療劑。它們還可具有用作診斷試劑的商業(yè)化潛力，W在成像和非成像診斷 應(yīng)用中檢測(cè)與疾病相關(guān)的共價(jià)穩(wěn)定的二聚配體(諸如生長(zhǎng)因子)的存在。
[0077] 本發(fā)明還涵蓋了對(duì)本發(fā)明的多膚進(jìn)行編碼的核巧酸序列?？蓪?duì)運(yùn)些核巧酸序列進(jìn) 行克隆并將其插入到任何合適的載體(包括表達(dá)載體)中，并因此運(yùn)些核巧酸序列非常適合 于生產(chǎn)本發(fā)明的多膚。
[0078] 如本文所使用的術(shù)語(yǔ)"載體"指的是可向其中插入核酸序列的載體核酸分子，W用 于將核酸序列引入它可在其中復(fù)制的細(xì)胞中。核酸序列可W是"外源的"，運(yùn)意味著核酸序 列對(duì)于載體被引入其中的細(xì)胞而言是外來(lái)的，或所述序列與細(xì)胞中的序列同源、但處在宿 主細(xì)胞核酸之內(nèi)的通常未發(fā)現(xiàn)該序列的位置中。載體包括質(zhì)粒、粘粒、病毒(隧菌體、動(dòng)物病 毒和植物病毒)和人工染色體(例如YACs)。通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)重組技術(shù)，本領(lǐng)域技術(shù)人員將很好地準(zhǔn) 備構(gòu)建載體(參見(jiàn)，例如，Maniatis等，1988W及Ausubel等，1994, W引用的方式將兩者并入 本文）。另外，就有效的載體構(gòu)建而言，在參照的附圖中表明和本文所述的技術(shù)也是有啟發(fā) 性的。
[0079] 術(shù)語(yǔ)"表達(dá)載體"指的是任何類型的遺傳構(gòu)建體，其包含對(duì)能被轉(zhuǎn)錄的RNA進(jìn)行編 碼的核酸。在一些情況中，RNA分子隨后被翻譯成蛋白質(zhì)、多膚或膚。在其它情況中，例如在 反義分子或核酶的生產(chǎn)中，運(yùn)些序列不被翻譯。表達(dá)載體可包含多種的"控制序列"，該控制 序列指的是在特定宿主細(xì)胞中對(duì)于可操作地連接的編碼序列的可能的翻譯和轉(zhuǎn)錄而言所 必需的核酸序列。除了支配轉(zhuǎn)錄和翻譯的控制序列之外，載體和表達(dá)載體可包含還起到其 它功能、在下文描述的核酸序列。
[0080] 如本文所使用的術(shù)語(yǔ)"多膚"或"蛋白質(zhì)"是指通過(guò)膚鍵W特定序列連接的氨基酸 的聚合物。如本文所使用的，除非另外具體地指定，術(shù)語(yǔ)"氨基酸"指的是氨基酸的D或L立體 異構(gòu)體形式。
[0081] 如本文所使用的分子的"生物活性"部分指的是能夠執(zhí)行與較大的分子類似功能 的較大的分子的部分。僅作為非限制性實(shí)例，蛋白質(zhì)的生物活性部分是蛋白質(zhì)的任何部分， 該部分保留了（即使僅略微地)執(zhí)行全長(zhǎng)蛋白質(zhì)的一種或多種生物功能的能力(例如與另一 分子結(jié)合、憐酸化等）。作為非限制性實(shí)例，配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域是TGFi3受體的生物學(xué)部分。
[0082] 如本文所使用的術(shù)語(yǔ)"治療有效量"意味著減弱或抑制過(guò)度的TGF-β信號(hào)傳導(dǎo)并因 此使得治療、預(yù)防本文所述的疾病病癥或減緩本文所述的疾病病癥的進(jìn)展速度的TGF-β配 體捕獲劑的量。根據(jù)患者和他或她的狀態(tài)W及本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的其它因素，有效量將 取決于待治療的病癥或病理而變化。本領(lǐng)域技術(shù)人員容易確定有效量。在一些實(shí)施方式中， W范圍為0.05mg/kg體重-50mg/kg體重、W及任選1. Omg/kg體重-lOmg/kg體重、或0.3mg/kg 體重-3.Omg/kg體重的劑量，經(jīng)由皮下途徑、銷內(nèi)途徑、對(duì)流增強(qiáng)途徑、靜脈內(nèi)途徑或動(dòng)脈內(nèi) 途徑，W每日至每月的間隔給予治療劑量。在多個(gè)實(shí)施方式中，每周1-7次、或每周一次、或 每?jī)芍芤淮巍⒚喀芤淮?、或每四周一次向受試者給予TGF-β配體捕獲劑。在多個(gè)實(shí)施方式 中，向受試者給予TGF-β配體捕獲劑1 -5天、1 -5周、1 -5個(gè)月、或1 -5年。
[0083] 盡管根據(jù)本發(fā)明提供了一些示例性的給予途徑，但可對(duì)TGF-β配體捕獲劑的任何 合適的給予途徑進(jìn)行改進(jìn)，因此本文所述的給予途徑并不意在進(jìn)行限制。給予途徑可包括 但不限于靜脈內(nèi)、口服、頰部、鼻內(nèi)、吸入、局部施用至粘膜、或注射(包括皮內(nèi)注射、銷內(nèi)注 射、腦池內(nèi)注射、病灶內(nèi)注射或任何其它類型的注射）。給予可連續(xù)地或間歇地進(jìn)行，并隨受 試者和待治療的病癥而變化。本領(lǐng)域技術(shù)人員將容易理解的是，本文所述的多種給予途徑 將使得能夠在肺部疾病位置或祀細(xì)胞上、在肺部疾病位置或祀細(xì)胞中、在接近肺部疾病位 置或祀細(xì)胞處遞送TGF-β配體捕獲劑或組合物。本領(lǐng)域技術(shù)人員還將容易理解的是，本文所 述的多種給予途徑將使得能夠?qū)⒈疚乃龅腡GF-β配體捕獲劑或組合物遞送至在待治療的 患病組織、器官或單個(gè)細(xì)胞的鄰近區(qū)域。"鄰近"可包括受試者中的任何組織或體液，所述組 織或體液足夠緊密地接近患病組織、器官或單個(gè)細(xì)胞，或者與患病組織、器官或單個(gè)細(xì)胞充 分連通，從而使得向受試者給予的TGF-β配體捕獲劑或組合物的至少部分到達(dá)其預(yù)期祀標(biāo) 并發(fā)揮其治療效果。
[0084] 藥物組合物
[0085] 在多個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了包含本文所述的TGF-β配體捕獲劑的藥物組合 物。在多個(gè)實(shí)施方式中，藥物組合物被配制用于改進(jìn)釋放、持續(xù)釋放、或控制釋放、或它們的 組合。在多個(gè)實(shí)施方式中，藥物組合物被配制用于口服、經(jīng)由吸入、鼻部、舌下、頰部、皮下、 皮內(nèi)、肌內(nèi)、靜脈內(nèi)、腹膜內(nèi)或腸胃外給予。
[0086] 在多個(gè)實(shí)施方式中，藥物組合物進(jìn)一步包含至少一種藥學(xué)上可接受的賦形劑。賦 形劑的實(shí)例包括但不限于淀粉、糖、微晶纖維素、稀釋劑、成粒劑、潤(rùn)滑劑、粘合劑、崩解劑、 潤(rùn)濕劑、乳劑、著色劑、脫模劑(release agents)、包衣劑、甜味劑、調(diào)味劑、芳香劑、防腐劑、 抗氧化劑、增塑劑、膠凝劑、增稠劑、硬化劑、凝固劑（setting agents)、懸浮劑、表面活性 劑、保濕劑、載體、穩(wěn)定劑W及它們的組合。
[0087] 在多個(gè)實(shí)施方式中，藥物組合物進(jìn)一步包含至少一種藥學(xué)上可接受的載體。藥學(xué) 上可接受的載體在本領(lǐng)域中是公知的，并包括水性溶液，例如生理緩沖鹽水、或其它溶劑、 或輔料(諸如乙二醇、甘油、植物油(例如橄攬油)或可注射的有機(jī)醋）。藥學(xué)上可接受的載體 可用于向體外的細(xì)胞或向受試者體內(nèi)給予本發(fā)明的組合物。藥學(xué)上可接受的載體可包含生 理學(xué)上可接受的化合物，例如，所述化合物具有對(duì)組合物進(jìn)行穩(wěn)定或增加試劑的吸收的作 用。生理學(xué)上可接受的化合物可包括例如碳水化合物(諸如葡萄糖、薦糖或右旋糖）、抗氧化 劑(諸如抗壞血酸或谷脫甘膚）、馨合劑、低分子量蛋白質(zhì)或其它穩(wěn)定劑或賦形劑。其它生理 學(xué)上可接受的化合物包括潤(rùn)濕劑、乳化劑、分散劑或防腐劑，防腐劑特別是用于防止微生物 的活動(dòng)或生長(zhǎng)。多種防腐劑是公知的并包括例如苯酪和抗壞血酸。本領(lǐng)域的技術(shù)人員知曉 的是，藥學(xué)上可接受的載體(包含生理學(xué)上可接受的化合物）的選擇取決于例如多膚的給予 途徑。例如，生理學(xué)上可接受的化合物(諸如單硬脂酸侶或明膠)被特別用作延長(zhǎng)向受試者 給予的藥物組合物的吸收速度的延遲劑。可在1日的111，1^1111叫如11'3?}1日^11.5^.，第15版， (Mack Publ. Co .，Easton，1975)中發(fā)現(xiàn)載體、穩(wěn)定劑或輔助劑的進(jìn)一步實(shí)例，將其W引用的 方式并入本文。載體的其它實(shí)例包括但不限于基于納米顆粒的載體(例如，聚合物N-(2-^ 丙基）甲基丙締酷胺化PMA)、谷氨酸、PEG、右旋糖)和納米載體(例如，納米殼、脂質(zhì)體、納米 脂質(zhì)體）。
[0088] 治療方法
[0089] 在多個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了治療、預(yù)防受試者中的肺高壓(PH)或降低受試 者中的肺高壓(PH)的進(jìn)展速度的方法。在一些實(shí)施方式中，該方法包括向受試者給予治療 有效量的TGF-β配體捕獲劑，從而治療、預(yù)防受試者中的PH或降低受試者中的PH的進(jìn)展速 度。在一些實(shí)施方式中，該方法可進(jìn)一步包括在向受試者給予治療有效量的TGF-β配體捕獲 劑之前，將藥學(xué)上可接受的載體與TGF-β配體捕獲劑混合。肺動(dòng)脈高壓是可特別適合于用 TGF-β配體捕獲劑治療的肺高壓的類型。因此，在一些實(shí)施方式中，該方法包括向受試者給 予治療有效量的TGF-β配體捕獲劑，從而治療、預(yù)防受試者中的肺動(dòng)脈高壓(包括肺動(dòng)脈高 壓的如下亞類中的任一者)或降低受試者中的肺動(dòng)脈高壓(包括肺動(dòng)脈高壓的如下亞類中 的任一者)的進(jìn)展速度。肺動(dòng)脈高壓可繼發(fā)于其它病癥、或作為原發(fā)性或特發(fā)性肺動(dòng)脈高壓 產(chǎn)生。特別令人感興趣的是，家族性肺動(dòng)脈高壓的一些類型與骨形態(tài)發(fā)生蛋白受體II型 (BMPRII)的降低的表達(dá)或功能有關(guān)，運(yùn)被認(rèn)為導(dǎo)致了 TGF-β的過(guò)度的信號(hào)傳導(dǎo)。
[0090] 肺高壓可具有五種主要類型，因此實(shí)施了一系列的測(cè)試，W將肺動(dòng)脈高壓與如下 區(qū)分開(kāi):靜脈肺高壓、缺氧性肺高壓、血栓栓塞性肺高壓或混雜性肺高壓。運(yùn)些測(cè)試一般包 括:肺功能測(cè)試;血液測(cè)試W排除HIV、自身免疫性疾病和肝部疾病;屯、電圖巧CG);動(dòng)脈血?dú)?測(cè)量;胸部X射線（如果懷疑有間質(zhì)性肺部疾病，隨后進(jìn)行高分辨率CT掃描）；W及通氣灌注 或V/Q掃描，W排除慢性血栓栓塞性肺高壓。PAH的診斷需要肺高壓的存在。雖然可基于超聲 屯、動(dòng)圖對(duì)肺動(dòng)脈壓進(jìn)行估計(jì)，但用穿過(guò)屯、臟右側(cè)的Swan-Ganz導(dǎo)管進(jìn)行的壓力測(cè)量提供了 用于診斷的最確切的評(píng)估。
[0091] 本領(lǐng)域技術(shù)人員精通于監(jiān)測(cè)肺高壓中的改善，例如通常通過(guò)"六分鐘步行測(cè)試" (即，患者在六分鐘內(nèi)可步行的距離)對(duì)臨床改善進(jìn)行測(cè)量。運(yùn)一測(cè)量中的穩(wěn)定性和改善與 更好的存活相關(guān)聯(lián)。血液BNP水平現(xiàn)還被用于跟蹤肺高壓患者的進(jìn)展。還可通過(guò)分析動(dòng)脈壓 對(duì)癥狀的改善進(jìn)行監(jiān)測(cè)。例如，生活在海平面的人在休息時(shí)的正常肺動(dòng)脈壓具有8mmHg- 20111111叱（1066化-2666?日）的平均值。當(dāng)休息時(shí)平均肺動(dòng)脈壓超過(guò)25111111化(3300?日)時(shí)，存在 肺高壓。不應(yīng)將平均肺動(dòng)脈壓（mPAP)與通常在超聲屯、動(dòng)圖報(bào)告中報(bào)告的肺動(dòng)脈收縮壓 (sPAP)混淆。40mm Hg的收縮壓通常暗示著超過(guò)25mm化的平均壓力。粗略地，mPAP = 0.61 · sPAP+2。
[0092] 在多個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了治療、預(yù)防受試者中的肺血管重塑或降低受試 者中的肺血管重塑的進(jìn)展速度的方法。在一些實(shí)施方式中，該方法包括向受試者給予治療 有效量的TGF-β配體捕獲劑，從而治療、預(yù)防受試者中的肺血管重塑或降低受試者中的肺血 管重塑的進(jìn)展速度。在一些實(shí)施方式中，該方法可進(jìn)一步包括在向受試者給予治療有效量 的TGF-β配體捕獲劑之前，將藥學(xué)上可接受的載體與TGF-β配體捕獲劑混合。
[0093] 在多個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了治療、預(yù)防受試者的屯、臟中的血管重塑或降低 受試者的屯、臟中的血管重塑的進(jìn)展速度的方法。在一些實(shí)施方式中，該方法可進(jìn)一步包括 在向受試者給予治療有效量的TGF-β配體捕獲劑之前，將藥學(xué)上可接受的載體與TGF-β配體 捕獲劑混合。在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明的方法降低了二尖瓣退行性病變、或例如二尖瓣脫 垂。可通過(guò)超聲屯、動(dòng)圖對(duì)有益效果進(jìn)行監(jiān)測(cè)。
[0094] 在多個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了治療、預(yù)防受試者中的肺纖維化或降低受試者 中的肺纖維化的進(jìn)展速度的方法。在一些實(shí)施方式中，該方法包括向受試者給予治療有效 量的TGF-β配體捕獲劑，從而治療、預(yù)防受試者中的肺纖維化或降低受試者中的肺纖維化的 進(jìn)展速度。在多個(gè)實(shí)施方式中，該方法可進(jìn)一步包括在向受試者給予治療有效量的TGF-β配 體捕獲劑之前，將藥學(xué)上可接受的載體與TGF-β配體捕獲劑混合。
[0095] 在多個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了治療、預(yù)防受試者中的右屯、室肥厚或降低受試 者中的右屯、室肥厚的進(jìn)展速度的方法。在多個(gè)實(shí)施方式中，該方法包括向受試者給予治療 有效量的TGF-β配體捕獲劑，從而治療、預(yù)防受試者中的右屯、室肥厚或降低受試者中的右屯、 室肥厚的進(jìn)展速度。在一些實(shí)施方式中，該方法可進(jìn)一步包括在向受試者給予治療有效量 的TGF-β配體捕獲劑之前，將藥學(xué)上可接受的載體與TGF-β配體捕獲劑混合。
[0096] 在多個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了治療、預(yù)防受試者中的與過(guò)度的TGF-β信號(hào)傳導(dǎo) 有關(guān)的肺部疾病或降低受試者中的與過(guò)度的TGF-β信號(hào)傳導(dǎo)有關(guān)的肺部疾病的進(jìn)展速度的 方法。在一些實(shí)施方式中，該方法包括向受試者給予治療有效量的TGF-β配體捕獲劑，從而 治療、預(yù)防受試者中的所述疾病或降低受試者中的所述疾病的進(jìn)展速度。在一些實(shí)施方式 中，該方法可進(jìn)一步包括在向受試者給予治療有效量的TGF-β配體捕獲劑之前，將藥學(xué)上可 接受的載體與TGF-β配體捕獲劑混合。
[0097] 在多個(gè)實(shí)施方式中，TGF-β可W是TGF-化、TGF-盼或它們的組合。
[0098] 在多個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了治療、預(yù)防受試者中的與過(guò)度的GDF15信號(hào)傳導(dǎo) 有關(guān)的肺部疾病或降低受試者中的與過(guò)度的GDF15信號(hào)傳導(dǎo)有關(guān)的肺部疾病的進(jìn)展速度的 方法。在一些實(shí)施方式中，該方法包括向受試者給予治療有效量的TGF-β配體捕獲劑，從而 治療、預(yù)防受試者中的所述疾病或降低受試者中的所述疾病的進(jìn)展速度。在一些實(shí)施方式 中，該方法可進(jìn)一步包括在向受試者給予治療有效量的TGF-β配體捕獲劑之前，將藥學(xué)上可 接受的載體與TGF-β配體捕獲劑混合。
[0099] 在多個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了治療、預(yù)防受試者中的與過(guò)度的PAI-1信號(hào)傳導(dǎo) 有關(guān)的肺部疾病或降低受試者中的與過(guò)度的PAI-1信號(hào)傳導(dǎo)有關(guān)的肺部疾病的進(jìn)展速度的 方法。在一些實(shí)施方式中，該方法包括向受試者給予治療有效量的TGF-β配體捕獲劑，從而 治療、預(yù)防受試者中的所述疾病或降低受試者中的所述疾病的進(jìn)展速度。在一些實(shí)施方式 中，該方法可進(jìn)一步包括在向受試者給予治療有效量的TGF-β配體捕獲劑之前，將藥學(xué)上可 接受的載體與TGF-β配體捕獲劑混合。
[0100] 在多個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了降低受試者中的右屯、室收縮壓的方法。在一些 實(shí)施方式中，該方法包括向受試者給予治療有效量的TGF-β配體捕獲劑，從而降低受試者中 的右屯、室收縮壓。在一些實(shí)施方式中，該方法可進(jìn)一步包括在向受試者給予治療有效量的 TGF-β配體捕獲劑之前，將藥學(xué)上可接受的載體與TGF-β配體捕獲劑混合。
[0101] 在多個(gè)實(shí)施方式中，上述實(shí)例中的受試者是哺乳動(dòng)物。在一些實(shí)施方式中，受試者 是人、猴、猿、狗、貓、牛、馬、山羊、綿羊、豬、兔、小鼠或大鼠。在多個(gè)實(shí)施方式中，TGF-β是 TGF-化、TGF-盼或它們的組合。
[0102] 在多個(gè)實(shí)施方式中，向受試者給予的TGF-β配體捕獲劑的量為0.05mg/kg體重- 50mg/kg體重、任選1. Omg/kg體重-1 Omg/kg體重、或0.3mg/kg體重-3. Omg/kg體重。在多個(gè)實(shí) 施方式中，每周1-7次、或每周一次、或每?jī)芍芤淮?、或每Ξ周一次、或每四周一次向受試?給予TGF-β配體捕獲劑。在多個(gè)實(shí)施方式中，向受試者給予TGF-β配體捕獲劑1-5天、1-5周、 1-5個(gè)月或1-5年。TGF-β配體捕獲劑可通過(guò)用于蛋白質(zhì)療法的任何途徑給予，包括但不限于 皮下給予、靜脈內(nèi)給予或肌內(nèi)給予。
[0103] 如上所述，在多個(gè)實(shí)施方式中，向受試者口服、經(jīng)由吸入、鼻部、舌下、頰部、皮下、 皮內(nèi)、肌內(nèi)、靜脈內(nèi)、腹膜內(nèi)或腸胃外給予TGF-β配體捕獲劑。在多個(gè)實(shí)施方式中，在受試者 發(fā)展如下疾病病癥之前、期間或之后給予TGF-β配體捕獲劑，所述疾病病癥包括但不限于： 肺高壓、肺血管重塑、肺纖維化、右屯、室肥厚、與過(guò)度的TGF-β信號(hào)傳導(dǎo)有關(guān)的肺部疾病、與 過(guò)度的GDF15信號(hào)傳導(dǎo)有關(guān)的肺部疾病W及與過(guò)度的PAI-1信號(hào)傳導(dǎo)有關(guān)的肺部疾病。
[0104] 在多個(gè)實(shí)施方式中，TGF-β配體捕獲劑是藥物組合物的部分。在多個(gè)實(shí)施方式中， 藥物組合物被配制用于改進(jìn)釋放、持續(xù)釋放、或控制釋放、或它們的組合。在多個(gè)實(shí)施方式 中，藥物組合物被配制用于口服、經(jīng)由吸入、鼻部、舌下、頰部、皮下、皮內(nèi)、肌內(nèi)、靜脈內(nèi)、腹 膜內(nèi)或腸胃外給予。
[0105] 在多個(gè)實(shí)施方式中，藥物組合物進(jìn)一步包含至少一種藥學(xué)上可接受的賦形劑。賦 形劑的實(shí)例包括但不限于淀粉、糖、微晶纖維素、稀釋劑、成粒劑、潤(rùn)滑劑、粘合劑、崩解劑、 潤(rùn)濕劑、乳劑、著色劑、脫模劑、包衣劑、甜味劑、調(diào)味劑、芳香劑、防腐劑、抗氧化劑、增塑劑、 膠凝劑、增稠劑、硬化劑、凝固劑、懸浮劑、表面活性劑、保濕劑、載體、穩(wěn)定劑W及它們的組 厶 1=1 〇
[0106] 本發(fā)明的一些實(shí)施方式可由如下編號(hào)段落中的任一段定義：
[0107] 段落1. 一種治療、預(yù)防受試者中的肺高壓(PH)或降低受試者中的肺高壓(PH)的進(jìn) 展速度的方法，所述方法包括：向受試者給予治療有效量的TGF-β配體捕獲劑，從而治療、預(yù) 防受試者中的PH或降低受試者中的PH的進(jìn)展速度。
[0108] 段落2.如段落1所述的方法，其中，所述PH通過(guò)過(guò)度的TGF-β信號(hào)傳導(dǎo)而介導(dǎo)。
[0109] 段落3.如段落1-2中任一段所述的方法，其中，所述受試者是人。
[0110] 段落4.如段落1-3中任一段所述的方法，其中，所述TGF-β配體捕獲劑包含：1)TGF 受體的TGF-β配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域;W及2)免疫球蛋白的Fc結(jié)構(gòu)域。
[0111] 段落5.如段落4所述的方法，其中，所述TGF-β配體捕獲劑進(jìn)一步包含在TGF受體的 TGF-β配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域和Fc結(jié)構(gòu)域之間的接頭。
[0112] 段落6.如段落1-5中任一段所述的方法，其中，所述TGF-β配體捕獲劑是可溶性重 組TGF-的I型受體Fc-融合蛋白（TGFBRII-Fc)。
[0113] 段落7.如段落1-6中任一段所述的方法，其中，所述TGFBRII-Fc由SEQ ID NO: 1或 其變體中列出的序列組成。
[0114] 段落8.如段落1-6中任一段所述的方法，其中，所述TGFBRII-Fc包含SEQ ID NO: 1 或其變體中列出的序列。
[0115] 段落9.如段落1-6中任一段所述的方法，其中，所述TGFBRII-Fc包含SEQ ID NO: 1 中列出的序列的一個(gè)或多個(gè)生物活性部分。
[0116] 段落10.如段落1-6中任一段所述的方法，其中，通過(guò)如下核酸對(duì)所述TGFBRII-化 進(jìn)行編碼，所述核酸包含SEQ ID NO:2或其簡(jiǎn)并變體中列出的核巧酸序列。
[0117] 段落11.如段落1-10中任一段所述的方法，其中，向受試者給予的TGF-β配體捕獲 劑的量為0.1 mg/kg體重-lOmg/kg體重。
[0118] 段落12.如段落1-11中任一段所述的方法，其中，每月1-7次向受試者給予所述 TGF-β配體捕獲劑。
[0119] 段落13.如段落1-12中任一段所述的方法，其中，向受試者給予所述TGF-β配體捕 獲劑1-5天、1-5周、1-5個(gè)月或1-5年。
[0120] 段落14.如段落1-13中任一段所述的方法，其中，向受試者口服、經(jīng)由吸入、鼻部、 舌下、頰部、皮下、皮內(nèi)、肌內(nèi)、靜脈內(nèi)、腹膜內(nèi)或腸胃外給予TGF-β配體捕獲劑。
[0121] 段落15.如段落1-14中任一段所述的方法，其中，在受試者發(fā)展PH之前、期間或之 后給予TGF-β配體捕獲劑。
[0122] 段落16.如段落1-15中任一段所述的方法，其中，所述方法進(jìn)一步包括在向受試者 給予治療有效量的TGF-β配體捕獲劑之前，將藥學(xué)上可接受的載體與TGF-β配體捕獲劑混 厶 1=1 〇
[0123] 段落17.如段落1-16中任一段所述的方法，其中，所述TGF-β配體捕獲劑是藥物組 合物的部分。
[0124] 段落18.如段落17所述的方法，其中，所述藥物組合物被配制用于改進(jìn)釋放、持續(xù) 釋放、或控制釋放、或它們的組合。
[0125] 段落19.如段落17所述的方法，其中，所述藥物組合物被配制用于口服、經(jīng)由吸入、 鼻部、舌下、頰部、皮下、皮內(nèi)、肌內(nèi)、靜脈內(nèi)、腹膜內(nèi)或腸胃外給予。
[01%]段落20.如段落17所述的方法，其中，所述藥物組合物進(jìn)一步包含至少一種藥學(xué)上 可接受的賦形劑。
[0127] 段落21.如段落17所述的方法，其中，所述藥物組合物進(jìn)一步包含至少一種藥學(xué)上 可接受的載體。
[0128] 段落22. -種治療、預(yù)防受試者中的肺血管重塑或降低受試者中的肺血管重塑的 進(jìn)展速度的方法，所述方法包括：向受試者給予治療有效量的TGF-β配體捕獲劑，從而治療、 預(yù)防受試者中的肺血管重塑或降低受試者中的肺血管重塑的進(jìn)展速度。
[0129] 段落23. -種治療、預(yù)防受試者中的肺纖維化或降低受試者中的肺纖維化的進(jìn)展 速度的方法，所述方法包括:向受試者給予治療有效量的TGF-β配體捕獲劑，從而治療、預(yù)防 受試者中的肺纖維化或降低受試者中的肺纖維化的進(jìn)展速度。
[0130] 段落24.如段落23所述的方法，所述方法使用段落4-10中任一段所述的TGF-β配體 捕獲劑。
[0131] 段落25.-種治療、預(yù)防受試者中的右屯、室肥厚或降低受試者中的右屯、室肥厚的 進(jìn)展速度的方法，所述方法包括：向受試者給予治療有效量的TGF-β配體捕獲劑，從而治療、 預(yù)防受試者中的右屯、室肥厚或降低受試者中的右屯、室肥厚的進(jìn)展速度。
[0132] 段落26.如段落25所述的方法，所述方法使用段落4-10中任一段所述的TGF-β配體 捕獲劑。
[0133] 段落27. -種治療、預(yù)防受試者中的與過(guò)度的TGF-β信號(hào)傳導(dǎo)有關(guān)的肺部疾病或降 低受試者中的與過(guò)度的TGF-β信號(hào)傳導(dǎo)有關(guān)的肺部疾病的進(jìn)展速度的方法，所述方法包括： 向受試者給予治療有效量的TGF-β配體捕獲劑，從而治療、預(yù)防受試者中的所述疾病或降低 受試者中的所述疾病的進(jìn)展速度。
[0134] 段落28.如段落27所述的方法，所述方法使用段落4-10中任一段所述的TGF-β配體 捕獲劑。
[0135] 段落29.如段落1-28中任一段所述的方法，其中，所述TGF-β是TGF-i31、TGF-盼或它 們的組合。
[0136] 段落30. -種治療、預(yù)防受試者中的與過(guò)度的GDF15信號(hào)傳導(dǎo)有關(guān)的肺部疾病或降 低受試者中的與過(guò)度的GDF15信號(hào)傳導(dǎo)有關(guān)的肺部疾病的進(jìn)展速度的方法，所述方法包括： 向受試者給予治療有效量的TGF-β配體捕獲劑，從而治療、預(yù)防受試者中的所述疾病或降低 受試者中的所述疾病的進(jìn)展速度。
[0137] 段落31.如段落30所述的方法，所述方法使用段落4-10中任一段所述的TGF-β配體 捕獲劑。
[0138] 段落32. -種治療、預(yù)防受試者中的與過(guò)度的PAI-1信號(hào)傳導(dǎo)有關(guān)的肺部疾病或降 低受試者中的與過(guò)度的PAI-1信號(hào)傳導(dǎo)有關(guān)的肺部疾病的進(jìn)展速度的方法，所述方法包括： 向受試者給予治療有效量的TGF-β配體捕獲劑，從而治療、預(yù)防受試者中的所述疾病或降低 受試者中的所述疾病的進(jìn)展速度。
[0139] 段落33.如段落32所述的方法，所述方法使用段落4-10中任一段所述的TGF-β配體 捕獲劑。
[0140] 段落34.-種降低受試者中的右屯、室收縮壓的方法，所述方法包括：向受試者給予 治療有效量的TGF-β配體捕獲劑，從而降低受試者中的右屯、室收縮壓。
[0141] 段落35.如段落34所述的方法，所述方法使用段落4-10中任一段所述的TGF-β配體 捕獲劑。
[0142] 實(shí)施例
[0143] 提供如下實(shí)施例是為了更好地闡明所請(qǐng)求保護(hù)的發(fā)明，而不應(yīng)解釋為限制本發(fā)明 的范圍。就所提到的具體的材料而言，只是為了說(shuō)明的目的，而并不意在限制本發(fā)明。本領(lǐng) 域技術(shù)人員可開(kāi)發(fā)出等效方式或反應(yīng)物，而無(wú)需創(chuàng)造力且并不背離本發(fā)明的范圍。
[0144] 實(shí)施例1:額外的背景和結(jié)果的簡(jiǎn)要概括
[0145] 如上所述，轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-(TGF-β)配體對(duì)發(fā)展中的重要過(guò)程進(jìn)行協(xié)調(diào)，并對(duì)疾病 中的纖維化和組織重塑進(jìn)行調(diào)節(jié)。過(guò)度的TGF-β信號(hào)傳導(dǎo)已牽設(shè)在肺高壓(PH)的動(dòng)脈重塑 中，部分基于TG邱I型受體(ALK5)激酶抑制劑的能力，W改進(jìn)動(dòng)物模型中的實(shí)驗(yàn)性PH。然而， ALK5抑制劑的臨床部署已受到屯、血管毒性的限制。本文所公開(kāi)的實(shí)驗(yàn)和結(jié)果表明，可溶性 重組TGF的I型受體Fc-融合蛋白（TGFBRII-Fc)在野百合堿(MCT)-誘發(fā)PH的大鼠中抑制TG邱 信號(hào)傳導(dǎo)。當(dāng)在MCT之后預(yù)防性地給予時(shí)，TGFBRII-Fc處理降低了右屯、室收縮壓、右屯、室肥 厚并減弱了肺血管重塑。與TG邱信號(hào)傳導(dǎo)的減弱一致，TGFBRII-Fc對(duì)MCT大鼠肺中的TG邱轉(zhuǎn) 錄祀標(biāo)PAI-1的升高的mRNA水平進(jìn)行了校正。當(dāng)在MCT之后的2.5周給予時(shí)，TGFBRII-Fc在第 5周時(shí)部分地復(fù)蘇了已確立的PH并具有改善的存活趨勢(shì)。值得注意的是，未發(fā)現(xiàn)與W任何劑 量的TGFBRII-Fc處理相關(guān)的屯、臟結(jié)構(gòu)異?；虬昴ぎ惓??？傮w而言，本文所公開(kāi)的數(shù)據(jù)支持 如下結(jié)論:TG邱配體捕獲劑可W是用于校正TG邱-介導(dǎo)的肺血管重塑和PH的有效和可接受 的安全策略。
[0146] 實(shí)施例2
[0147] 表1.非限制性的示例性的TG邱配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域
[014 引
[0149] 實(shí)施例3
[0150] 表2.非限制性的示例性的接頭
[0151]
[0152]
[0153]
[0154] 還在考慮之列的是編碼各上述的接頭和結(jié)合結(jié)構(gòu)域的核酸序列。
[0155] 實(shí)施例4
[0156] 材料和方法
[0157] PAH的大鼠模型
[015引雄性Sprague-Dawley大鼠（6-8周齡，體重150g-170g)購(gòu)自化arles River實(shí)驗(yàn)室。 所有的方案和外科手術(shù)均由當(dāng)?shù)氐膭?dòng)物保護(hù)委員會(huì)批準(zhǔn)。動(dòng)物在24°C下于12小時(shí)光照-黑 暗周期中飼養(yǎng)。食物和水自由攝取。大鼠接受野百合堿(MCT，40mg/kg)的單次皮下注射，W 誘發(fā)PAH。表3中總結(jié)了包括在本研究中的大鼠總數(shù)和死亡數(shù)。
[0159]表3
[0160]
[0161] 藥物處理
[0162] 預(yù)防方案-在PAH誘發(fā)后24小時(shí)，將大鼠隨機(jī)分為TGFBRII-化組（5mg/kg或15mg/ kg，每周兩次)或輔料組。將大鼠處理21天。在第14天，通過(guò)超聲屯、動(dòng)圖對(duì)屯、室功能和RV重塑 進(jìn)行檢查。在第21天，使大鼠接受血流動(dòng)力學(xué)和右屯、室肥厚測(cè)量。
[0163] 復(fù)蘇方案-在另一群組中，對(duì)TGFBRII-化逆轉(zhuǎn)PAH進(jìn)展的能力進(jìn)行了檢查。在第18 天，用MCT注射大鼠并隨機(jī)給予TGFBRII-Fc (15mg/kg，每周Ξ次)或輔料。在第35天檢查血流 動(dòng)力學(xué)和右屯、室肥厚(RVH)。
[0164] LV和RV功能的超聲屯、動(dòng)圖評(píng)估
[0165] 在PA出秀發(fā)后第14天，用1.5%異氣燒對(duì)大鼠進(jìn)行麻醉，并將其保持在仰邸位置。使 用Visual Sonics小動(dòng)物高頻超聲探針檢測(cè)肺血流加速、右屯、室功能和肥厚W及左屯、室功 能。使多普勒穿過(guò)二尖瓣和Ξ尖瓣，W確定TGFBRII-化處理是否誘發(fā)任何明顯的反流或損 傷。
[0166] 血流動(dòng)力學(xué)和RVH測(cè)量
[0167] 在特定的時(shí)間點(diǎn)，將大鼠用戊己比妥進(jìn)行麻醉，并穿過(guò)氣管進(jìn)行插管。使用曬齒類 動(dòng)物呼吸機(jī)對(duì)大鼠進(jìn)行機(jī)械通氣，并如之前所述使用填充有流體的導(dǎo)管穿過(guò)右屯、室(RV)頂 點(diǎn)進(jìn)行血流動(dòng)力學(xué)評(píng)估(Megalou, A. J.，Glava ,C.，Vilaeti,A.D.，Oikonomidis , D 丄.， Baltogiannis'G.G.，Papalois,A.，Vlahos,A.P.和Kolettis'T.M.(2012)Pulm Circ 2， 461-469)。用PBS對(duì)肺進(jìn)行灌注，將一個(gè)右肺葉切除并快速冷凍，W用于RNA和蛋白質(zhì)提取。 用1%多聚甲醒(PFA)進(jìn)一步灌注肺進(jìn)入肺動(dòng)脈中，隨后灌注氣管1分鐘。將左肺葉包埋在石 蠟中。為了獲取RVH的程度，移出屯、臟，將RV游離壁從左屯、室加上間隔壁化V+S)中解剖出來(lái)， 并分別稱重。從RV/ (LV+S)比例對(duì)RVH的程度進(jìn)行確定。
[0168] 血管重塑的定量
[0169] 為了確定肺血管重塑的程度，用α-平滑肌肌動(dòng)蛋白和血管性血友病因子對(duì)肺組織 切片進(jìn)行染色。對(duì)遠(yuǎn)端腺泡內(nèi)血管（直徑1〇μπι-5化m)的肌肉化進(jìn)行定量，并對(duì)無(wú)肌肉化血 管、部分肌肉化血管和完全肌肉化血管的百分比進(jìn)行計(jì)算。
[0170] 對(duì)全部的完全肌肉化的腺泡內(nèi)血管(直徑10皿-50皿)的內(nèi)側(cè)壁厚度進(jìn)行計(jì)算。將 壁厚指數(shù)計(jì)算為:指數(shù)=(外徑-內(nèi)徑)/外徑X 100。
[0171] 表達(dá)研究
[0172] 將冷凍肺樣品進(jìn)行勻漿，并如之前所述使用TRIZ化試劑進(jìn)行總的RNA提取(Long, L.'Crosby,A.，Yang,X.，Southwood,Μ.，Upton,P.D.，Kim,D.K.和Morrell,N.W.(2009) Circulation 119,566-576)。如此前所述實(shí)施逆轉(zhuǎn)錄和定量PCR化ong,L.，C;rosby,A.， 化ng,X.，Southwood,M.，Upton,P.D.，Kim,D.K.和Morrell,N.W.(2009)Ci;rculation 119， 566-576)。計(jì)算特異性基因?qū)Ζ?肌動(dòng)蛋白的比例，并將該比例表示為倍數(shù)變化。表4中總結(jié) 了大鼠-特異性的序列。
[017引 表4
[0174]
[0175] 試劑
[0176] 野百合堿購(gòu)自O(shè)akwood ProductS公司。重組人ΒΜΡ4、TGFm、TG邱巧日GDF15從R&D Systems獲得。對(duì)憐酸化-Smad 3而言特異性的一抗購(gòu)自Abeam，而對(duì)憐酸化-Smad 2、憐酸 化-Smad 1/5W及總的Smad 3而言特異性的其它一抗從Cell Signaling獲得。
[0177] 統(tǒng)計(jì)分析
[0178]血流動(dòng)力學(xué)和RVH測(cè)量W及肺血管重塑定量的所有分析W盲法實(shí)施。將數(shù)據(jù)表示 為平均值±561，并采用t檢驗(yàn)在各組之間進(jìn)行比較。p<0.05被認(rèn)為統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著。
[01巧]二尖瓣的血管重塑
[0180] 圖9A至圖9B示出了表明響應(yīng)于TGFBRII-Fc處理而無(wú)二尖瓣重塑、退行性病變或異 常的屯、臟組織切片。圖9A為對(duì)照。圖9B為經(jīng)TGFBRII-Fc-處理。
[0181] 上述多種方法和技術(shù)提供了實(shí)施該申請(qǐng)的多種方式。當(dāng)然，應(yīng)當(dāng)理解的是，根據(jù)本 文所述的任何特定實(shí)施方式，所述的所有目標(biāo)和優(yōu)點(diǎn)未必都能實(shí)現(xiàn)。因此，例如，本領(lǐng)域技 術(shù)人員將認(rèn)識(shí)到，可通過(guò)實(shí)現(xiàn)或優(yōu)化如本文教導(dǎo)的一個(gè)優(yōu)點(diǎn)或一組優(yōu)點(diǎn)而不必實(shí)現(xiàn)如本文 教導(dǎo)或暗示的其它目標(biāo)或優(yōu)點(diǎn)的方式來(lái)實(shí)施本方法。本文提及了多種替代方式。應(yīng)當(dāng)理解 的是，一些優(yōu)選的實(shí)施方式具體包括一種、另一種或多種特征，而其它的實(shí)施方式則具體地 排除一種、另一種或多種特征，然而還有其它實(shí)施方式通過(guò)包括一種、另一種或多種有利特 征而緩和特定的特征。
[0182] 此外，技術(shù)人員將認(rèn)識(shí)到來(lái)自不同實(shí)施方式的多種特征的適用性。相似地，本領(lǐng)域 的普通技術(shù)人員能夠W多種組合采用上述公開(kāi)的多種要素、特征和步驟W及各此類要素、 特征或步驟的其它已知等同物，W根據(jù)本文所述的原理實(shí)施方法。在多種要素、特征和步驟 之中，一些將被具體地包括在不同的實(shí)施方式之中，而其它的則被具體地排除在不同的實(shí) 施方式之外。
[0183] 雖然本申請(qǐng)已在一些實(shí)施方式和實(shí)施例的上下文中進(jìn)行了公開(kāi)，但是本領(lǐng)域的技 術(shù)人員將會(huì)理解的是，本申請(qǐng)的實(shí)施方式延伸到具體公開(kāi)的實(shí)施方式之外，并延伸至其它 替代性實(shí)施方式和/或用途W(wǎng)及其修改物和等同物。
[0184] 在一些實(shí)施方式中，在描述本申請(qǐng)?zhí)囟▽?shí)施方式的上下文中（尤其是在如下一些 權(quán)利要求的上下文中）使用的術(shù)語(yǔ)"一"、"一個(gè)"、"所述/該"和類似的提法可被解釋為涵蓋 單數(shù)和復(fù)數(shù)。本文列舉的值的范圍僅意在用作單獨(dú)提及的落在該范圍內(nèi)的各單獨(dú)值的速記 方法。除非本文另外指明，否則每個(gè)單獨(dú)的值均被并入本說(shuō)明書(shū)，就像在本文中單獨(dú)列舉一 樣。除非本文另外指明或上下文明顯沖突，否則本文所述的所有方法可W按任何合適的順 序?qū)嵤ｊP(guān)于本文的一些實(shí)施方式提供的任何和所有實(shí)例或示例性語(yǔ)言（例如，"諸如"）的 使用僅意在更好地闡明本申請(qǐng)，并不對(duì)本申請(qǐng)的范圍造成限制，除非它們被請(qǐng)求保護(hù)。本說(shuō) 明書(shū)中的語(yǔ)言不應(yīng)解釋為是表示實(shí)踐本申請(qǐng)所必需的任何未請(qǐng)求保護(hù)的要素。
[0185] 本文對(duì)運(yùn)一申請(qǐng)的優(yōu)選實(shí)施方式進(jìn)行了描述，包括本發(fā)明人已知的用于實(shí)施本申 請(qǐng)的最佳模式。在本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員閱讀上述說(shuō)明時(shí)，運(yùn)些優(yōu)選實(shí)施方式的變型將變 得顯而易見(jiàn)。在考慮之列的是，技術(shù)人員可在適當(dāng)時(shí)采用此類變型，并且本申請(qǐng)可按本文具 體描述之外的方式加 W實(shí)踐。因此，如可適用的法律所允許的，運(yùn)一申請(qǐng)的許多實(shí)施方式包 括所附權(quán)利要求書(shū)中列出的主題的所有修改物和等同物。此外，除非在本文中另外指明，或 除非與上下文明顯沖突，本申請(qǐng)涵蓋上述要素在其所有可能的變型中的任何組合。
[0186] 除了如下，將本文中參考的所有專利、專利申請(qǐng)、專利申請(qǐng)的公開(kāi)文本W(wǎng)及其它材 料(諸如文章、書(shū)籍、說(shuō)明書(shū)、出版物、文件、事物和/或類似物）由此都W此種引用方式整體 并入本文，用于所有目的：與相同材料相關(guān)的任何審查文件歷史、與本文件不一致或沖突的 任何相同材料、或可能對(duì)當(dāng)前或隨后與本文件相關(guān)的權(quán)利要求書(shū)的最廣范圍具有限制作用 的任何相同材料。舉例來(lái)說(shuō)，如果與任何并入的材料相關(guān)的術(shù)語(yǔ)的描述、定義和/或用途同 與本文件相關(guān)的術(shù)語(yǔ)的描述、定義和/或用途之間存在任何不一致或沖突，應(yīng)w本文件中的 術(shù)語(yǔ)的描述、定義和/或用途為準(zhǔn)。
[0187] 應(yīng)當(dāng)理解的是，本文所公開(kāi)的申請(qǐng)的實(shí)施方式是對(duì)本申請(qǐng)實(shí)施方式的原理的說(shuō) 明?？刹捎玫钠渌薷男问娇稍诒旧暾?qǐng)的范圍內(nèi)。因此，舉例來(lái)說(shuō)，而非加 W限制，本申請(qǐng)的 實(shí)施方式的替代構(gòu)造可根據(jù)本文的教導(dǎo)而使用。因此，本申請(qǐng)的實(shí)施方式不限于如精確地 示出和描述的內(nèi)容。
[0188] 在上面的詳細(xì)說(shuō)明中描述了本發(fā)明的多個(gè)實(shí)施方式。雖然運(yùn)些描述直接描述上面 的實(shí)施方式，但是應(yīng)該理解，本領(lǐng)域技術(shù)人員可對(duì)本文示出和描述的特定的實(shí)施方式構(gòu)想 出修改和/或變化。落入本發(fā)明說(shuō)明書(shū)范圍內(nèi)的任何此類修改或變化也意圖包括在其中。除 非特別指出，否則，本發(fā)明人的意圖是說(shuō)明書(shū)和權(quán)利要求書(shū)中的詞匯和短語(yǔ)都被賦予適用 領(lǐng)域的普通技術(shù)人員所知曉的普通含義和慣用含義。
[0189] 已經(jīng)給出了本
【申請(qǐng)人】在提交申請(qǐng)時(shí)所知道的本發(fā)明的多個(gè)實(shí)施方式的前述描述， 并意在用于說(shuō)明和描述的目的。本描述并不意在詳盡無(wú)遺，也并不意在將本發(fā)明限于所公 開(kāi)的精確形式，并且根據(jù)上述教導(dǎo)，許多修改和變化都是可能的。所描述的實(shí)施方式是用來(lái) 解釋本發(fā)明的原理及其實(shí)際應(yīng)用，并用來(lái)使本領(lǐng)域其他技術(shù)人員能夠按多種實(shí)施方式及適 合于所預(yù)期的特定用途的多種修改來(lái)利用本發(fā)明。因此，并不意在將本發(fā)明限制至所公開(kāi) 的用于實(shí)施本發(fā)明的特定實(shí)施方式。
[0190] 雖然已經(jīng)示出和描述本發(fā)明的特定實(shí)施方式，但是對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員來(lái)說(shuō)顯而 易見(jiàn)的是，根據(jù)本文中的教導(dǎo)，在不背離本發(fā)明及其較寬泛的方面的情況下可W作出改變 和修改，并且因此，所附權(quán)利要求書(shū)將在它們的范圍內(nèi)涵蓋所有此類落在本發(fā)明的真正精 神和范圍內(nèi)的改變和修改。本領(lǐng)域技術(shù)人員將理解，一般而言，本文使用的術(shù)語(yǔ)一般意圖作 為"開(kāi)放的"術(shù)語(yǔ)(例如，術(shù)語(yǔ)"包掠'應(yīng)解釋為"包括但不限于"，術(shù)語(yǔ)"具貧'應(yīng)解釋為"具有 至少'，術(shù)語(yǔ)"包含"應(yīng)解釋為"包含但不限于'等）。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種治療、預(yù)防受試者中的肺高壓(PH)或降低受試者中的肺高壓(PH)的進(jìn)展速度的 方法，所述方法包括：向所述受試者給予治療有效量的TGF-β配體捕獲劑，從而治療、預(yù)防所 述受試者中的PH或降低所述受試者中的PH的進(jìn)展速度。2. 如權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述PH通過(guò)過(guò)度的TGF-iH言號(hào)傳導(dǎo)而介導(dǎo)。3. 如權(quán)利要求1-2中任一項(xiàng)所述的方法，其中，所述受試者是人。4. 如權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的方法，其中，所述TGF-β配體捕獲劑包含：I)TGF受體 的TGF-β配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域；以及2)免疫球蛋白的Fc結(jié)構(gòu)域。5. 如權(quán)利要求4所述的方法，其中，所述TGF-β配體捕獲劑進(jìn)一步包含在TGF受體的所述 TGF-β配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域和所述Fc結(jié)構(gòu)域之間的接頭。6. 如權(quán)利要求1 -5中任一項(xiàng)所述的方法，其中，所述TGF-β配體捕獲劑是可溶性重組 TGF-βΙΙ型受體Fc-融合蛋白（TGFBRII-Fc)。7. 如權(quán)利要求1-6中任一項(xiàng)所述的方法，其中，所述TGFBRII-Fc由SEQ ID NO: 1或其變 體中列出的序列組成。8. 如權(quán)利要求1-6中任一項(xiàng)所述的方法，其中，所述TGFBRII-Fc包含SEQ ID NO: 1或其 變體中列出的序列。9. 如權(quán)利要求1-6中任一項(xiàng)所述的方法，其中，所述TGFBRII-Fc包含SEQ ID NO: 1中列 出的序列的一個(gè)或多個(gè)生物活性部分。10. 如權(quán)利要求1-6中任一項(xiàng)所述的方法，其中，通過(guò)如下核酸對(duì)所述TGFBRII-Fc進(jìn)行 編碼，所述核酸包含SEQ ID N0:2或其簡(jiǎn)并變體中列出的核苷酸序列。11. 如權(quán)利要求1 -1 〇中任一項(xiàng)所述的方法，其中，向所述受試者給予的TGF-β配體捕獲 劑的量為〇. lmg/kg體重-10mg/kg體重。12. 如權(quán)利要求1-11中任一項(xiàng)所述的方法，其中，每月1-7次向所述受試者給予所述 TGF-β配體捕獲劑。13. 如權(quán)利要求1-12中任一項(xiàng)所述的方法，其中，向所述受試者給予所述TGF-β配體捕 獲劑1-5天、1-5周、1-5個(gè)月或1-5年。14. 如權(quán)利要求1-13中任一項(xiàng)所述的方法，其中，向所述受試者口服、經(jīng)由吸入、鼻部、 舌下、頰部、皮下、皮內(nèi)、肌內(nèi)、靜脈內(nèi)、腹膜內(nèi)或腸胃外給予所述TGF-β配體捕獲劑。15. 如權(quán)利要求1-14中任一項(xiàng)所述的方法，其中，在所述受試者發(fā)展PH之前、期間或之 后給予所述TGF-β配體捕獲劑。16. 如權(quán)利要求1-15中任一項(xiàng)所述的方法，其中，所述方法進(jìn)一步包括在向所述受試者 給予治療有效量的所述TGF-β配體捕獲劑之前，將藥學(xué)上可接受的載體與所述TGF-β配體捕 獲劑混合。17. 如權(quán)利要求1-16中任一項(xiàng)所述的方法，其中，所述TGF-β配體捕獲劑是藥物組合物 的一部分。18. 如權(quán)利要求17所述的方法，其中，所述藥物組合物被配制用于改進(jìn)釋放、持續(xù)釋放、 或控制釋放、或它們的組合。19. 如權(quán)利要求17所述的方法，其中，所述藥物組合物被配制用于口服、經(jīng)由吸入、鼻 部、舌下、頰部、皮下、皮內(nèi)、肌內(nèi)、靜脈內(nèi)、腹膜內(nèi)或腸胃外給予。20. 如權(quán)利要求17所述的方法，其中，所述藥物組合物進(jìn)一步包含至少一種藥學(xué)上可接 受的賦形劑。21. 如權(quán)利要求17所述的方法，其中，所述藥物組合物進(jìn)一步包含至少一種藥學(xué)上可接 受的載體。22. -種治療、預(yù)防受試者中的肺血管重塑或降低受試者中的肺血管重塑的進(jìn)展速度 的方法，所述方法包括：向所述受試者給予治療有效量的TGF-β配體捕獲劑，從而治療、預(yù)防 所述受試者中的肺血管重塑或降低所述受試者中的肺血管重塑的進(jìn)展速度。23. -種治療、預(yù)防受試者中的肺纖維化或降低受試者中的肺纖維化的進(jìn)展速度的方 法，所述方法包括:向所述受試者給予治療有效量的TGF-β配體捕獲劑，從而治療、預(yù)防所述 受試者中的肺纖維化或降低所述受試者中的肺纖維化的進(jìn)展速度。24. 如權(quán)利要求23所述的方法，所述方法使用權(quán)利要求4-10中任一項(xiàng)所述的TGF-β配體 捕獲劑。25. -種治療、預(yù)防受試者中的右心室肥厚或降低受試者中的右心室肥厚的進(jìn)展速度 的方法，所述方法包括：向所述受試者給予治療有效量的TGF-β配體捕獲劑，從而治療、預(yù)防 所述受試者中的右心室肥厚或降低所述受試者中的右心室肥厚的進(jìn)展速度。26. 如權(quán)利要求25所述的方法，所述方法使用權(quán)利要求4-10中任一項(xiàng)所述的TGF-β配體 捕獲劑。27. -種治療、預(yù)防受試者中的與過(guò)度的TGF-β信號(hào)傳導(dǎo)有關(guān)的肺部疾病或降低受試者 中的與過(guò)度的TGF-iH言號(hào)傳導(dǎo)有關(guān)的肺部疾病的進(jìn)展速度的方法，所述方法包括：向所述受 試者給予治療有效量的TGF-β配體捕獲劑，從而治療、預(yù)防所述受試者中的所述疾病或降低 所述受試者中的所述疾病的進(jìn)展速度。28. 如權(quán)利要求27所述的方法，所述方法使用權(quán)利要求4-10中任一項(xiàng)所述的TGF-β配體 捕獲劑。29. 如權(quán)利要求1-28中任一項(xiàng)所述的方法，其中，所述TGF-β是TGF-βΙ、TGF-f33或它們的 組合。30. -種治療、預(yù)防受試者中的與過(guò)度的GDF15信號(hào)傳導(dǎo)有關(guān)的肺部疾病或降低受試者 中的與過(guò)度的GDF15信號(hào)傳導(dǎo)有關(guān)的肺部疾病的進(jìn)展速度的方法，所述方法包括：向所述受 試者給予治療有效量的TGF-β配體捕獲劑，從而治療、預(yù)防所述受試者中的所述疾病或降低 所述受試者中的所述疾病的進(jìn)展速度。31. 如權(quán)利要求30所述的方法，所述方法使用權(quán)利要求4-10中任一項(xiàng)所述的TGF-β配體 捕獲劑。32. -種治療、預(yù)防受試者中的與過(guò)度的PAI-I信號(hào)傳導(dǎo)有關(guān)的肺部疾病或降低受試者 中的與過(guò)度的PAI-I信號(hào)傳導(dǎo)有關(guān)的肺部疾病的進(jìn)展速度的方法，所述方法包括：向所述受 試者給予治療有效量的TGF-β配體捕獲劑，從而治療、預(yù)防所述受試者中的所述疾病或降低 所述受試者中的所述疾病的進(jìn)展速度。33. 如權(quán)利要求32所述的方法，所述方法使用權(quán)利要求4-10中任一項(xiàng)所述的TGF-β配體 捕獲劑。34. -種降低受試者中的右心室收縮壓的方法，所述方法包括：向所述受試者給予治療 有效量的TGF-β配體捕獲劑，從而降低所述受試者中的右心室收縮壓。35. 如權(quán)利要求34所述的方法，所述方法使用權(quán)利要求4-10中任一項(xiàng)所述的TGF-β配體 捕獲劑。
【文檔編號(hào)】A61K39/00GK105934249SQ201480073820
【公開(kāi)日】2016年9月7日
【申請(qǐng)日】2014年11月21日
【發(fā)明人】保羅·于, 阿斯亞·格林博格, 戴安娜·S·薩科, 羅斯琳·卡斯頓圭, 麗塔·斯帝夫斯, 拉溫德拉·庫(kù)馬爾
【申請(qǐng)人】布里格姆及婦女醫(yī)院股份有限公司, 阿塞勒隆制藥公司