貓爪草提取物以組合物在制備治療癌癥的藥物中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于藥物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及貓爪草提取物的醫(yī)藥新用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 貓爪草Ranunculi Ternati Radix為毛茛科植物小毛茛Ranunculus ternatus Thunb.的干燥塊根。本品呈紡錘形，多5~6個簇生，形似貓爪，長3~10mm，直徑2~3mm，頂端 有黃褐色殘莖或莖痕。表面黃褐色或灰黃色，久存色澤變深，微有縱皺紋，并有點狀須根痕 和殘留須根。質(zhì)堅實，斷面類白色或黃白色，空心或?qū)嵭?，粉性。氣微，味微甘。貓爪草別名三 散草(浙江）、貓爪兒草(河南）、貓爪子(河南）、鴨腳板(安徽）、金花草(廣西）。貓爪草性溫， 味甘、辛，入肝、肺經(jīng)，具有清熱解毒、消腫散結(jié)、止咳祛痰等功效，臨床用于治療肺結(jié)核、淋 巴結(jié)結(jié)核、咽喉炎、瘧疾等癥。民間用貓爪草治療淋巴結(jié)核，不論結(jié)核大小或是否化膿均有 較好的療效。近年來因其有較好的抗腫瘤效果而成為研究熱點。
[0003] 近年來針對貓爪草化學成分的研究較少，其主要含有黃酮類及苷類、生物堿、揮發(fā) 油、有機酸等化合物。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的發(fā)明目的是提供一種從貓爪草的貓爪草提取物在治療癌癥的藥物中的 應(yīng)用。進一步地，本發(fā)明的發(fā)明目的還在于提供一種貓爪草干燥塊根中分離得到的二萜化 合物在治療前列腺癌的藥物中的應(yīng)用；另外，作為和上述二萜化合物相關(guān)聯(lián)的組合物，本發(fā) 明還提供一種藥物組合物以及藥物組合在在治療前列腺癌的藥物中的應(yīng)用。
[0005] 本發(fā)明的上述四個目的是通過下面的技術(shù)方案得以實現(xiàn)的：
[0006] -種貓爪草提取物在制備治療癌癥的藥物中的應(yīng)用，所述貓爪草提取物是通過將 貓爪草的干燥塊根粉碎，乙醇熱回流提取，濃縮，再用有機溶劑萃取;再進行多次洗脫，減壓 濃縮獲得洗脫物浸膏;最后依次采用多次正相硅膠分離和至少一次反相硅膠分離獲得貓爪 草提取物。
[0007] 進一步的，所述癌癥是前列腺癌。
[0008] 作為優(yōu)選，所述貓爪草提取物采用以下步驟獲得：
[0009] SOl將貓爪草的干燥塊根粉碎，乙醇熱回流提取，濃縮，依次用石油醚、乙酸乙酯和 水飽和的正丁醇萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；
[0010] S02步驟SOl中乙酸乙酯萃取物用大孔樹脂除雜，先用15 %乙醇洗脫8個柱體積，再 用75%乙醇洗脫10個柱體積，收集75%乙醇洗脫液，減壓濃縮得75%乙醇洗脫物浸膏； [0011] 303步驟502中75%乙醇洗脫浸膏用正相硅膠分離，依次用體積比為85:1、45:1、 20:1、10:1和1:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到5個組分；
[0012] S04步驟S03中組分3用正相硅膠進一步分離，依次用體積比為25:1、20:1和10:1的 二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個組分；
[0013] S05步驟S04中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為 75 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集8~10個柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到貓爪草提取 物。
[0014] 作為優(yōu)選，所述步驟S01:將貓爪草的干燥塊根粉碎，用80%乙醇熱回流提取，合并 提取液，濃縮至無醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水飽和的正丁醇萃取，分別得到石油醚 萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；
[0015] 作為優(yōu)選，所述貓爪草提取物是具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物(I):
[0016]
[0017]作為優(yōu)選，所述大孔樹脂為AB-8型大孔吸附樹脂。
[0018] 化合物(I)在制備治療前列腺癌的藥物中的應(yīng)用，化合物(I)具有下述結(jié)構(gòu)式：
[0019] (I )〇
[0020] -種藥物組合物，其中含有治療有效量的所述的化合物（I)和藥學上可接受的載 體;化合物(I)具有下述結(jié)構(gòu)式：
[0021]
[0022] 上述的藥物組合物在制備治療前列腺癌的藥物中的應(yīng)用。
[0023] 實驗表明，本發(fā)明的貓爪草提取物不僅能誘生腫瘤壞死因子(TNF)，而腫瘤壞死因 子是一組具有抗腫瘤、抗病毒、參與多種免疫調(diào)節(jié)過程的球蛋白，由于它能特異性地殺死腫 瘤細胞，而對正常組織細胞無不良影響，從而起到腫瘤免疫和腫瘤治療的作用。小鼠試驗還 證明貓爪草提取物對小鼠 S180、S37癌株有抑制作用。
[0024] 本發(fā)明化合物（I)在醫(yī)藥領(lǐng)域新用途，可以作為抗前列腺癌藥物，可以直接使用， 或者以藥物組合物的形式使用。該藥物組合物含有治療有效量的本發(fā)明化合物（I)，其余為 藥物學上可接受的、對人和動物無毒和惰性的可藥用載體和/或賦形劑。體外試驗證明該化 合物對前列腺癌細胞株P(guān)C3和DU145有抑制作用，且抑制作用具有濃度--時間依賴性關(guān) 系，因此，本發(fā)明的上述化合物(I)可以用來開發(fā)成治療前列腺癌的藥物。
【附圖說明】
[0025] 圖1為化合物(I)結(jié)構(gòu)式；
[0026]圖2為化合物（I)理論E⑶值與實驗E⑶值比較；
[0027]圖3為不同濃度化合物（I)作用72h后PC3和DU145存活率；
[0028]圖4為10.0 mg/L化合物（I)作用不同時間后PC3和DUl 45存活率。
【具體實施方式】
[0029] 下面結(jié)合實施例進一步說明本發(fā)明的實質(zhì)性內(nèi)容，但并不以此限定本發(fā)明保護范 圍。盡管參照較佳實施例對本發(fā)明作了詳細說明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當理解，可以對 本發(fā)明的技術(shù)方案進行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的實質(zhì)和范圍。
[0030] 實施例1:貓爪草提取物的主要成分是包含具有下述結(jié)構(gòu)式二萜化合物（I)，視分 離提純程度的不同而不同，其他成分包含少量的黃酮類及苷類、生物堿、揮發(fā)油、有機酸等 化合物：
[0031]
[0032] 它在誘生腫瘤壞死因子特異性地殺死腫瘤細胞，而對正常組織細胞無不良影響， 從而起到腫瘤免疫和腫瘤治療的作用上功效較好。小鼠試驗還證明貓爪草提取物對小鼠 S180、S37癌株有抑制作用。因此，能在制備治療癌癥的藥物中的具有新的醫(yī)藥用途。
[0033]它具體通過如下步驟制備的：
[0034] SO 1將貓爪草的干燥塊根（IOkg)粉碎，用80%乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮 至無醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水飽和的正丁醇萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸 乙酯萃取物和正丁醇萃取物；
[0035] S02步驟SOl中乙酸乙酯萃取物用大孔樹脂除雜，先用15%乙醇洗脫8個柱體積，再 用75%乙醇洗脫10個柱體積，收集75%乙醇洗脫液，減壓濃縮得75%乙醇洗脫物浸膏； [0036] 303步驟502中75%乙醇洗脫浸膏用正相硅膠分離，依次用體積比為85:1、45:1、 20:1、10:1和1:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到5個組分；
[0037] S04步驟S03中組分3用正相硅膠進一步分離，依次用體積比為25:1、20:1和10:1的 二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個組分；
[0038] S05步驟S04中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為 75 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集8~10個柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到貓爪草提取 物。
[0039] 上述步驟制得的二萜化合物(I)純度比較高。
[0040] 實施例2:純二萜化合物(I)分離制備及結(jié)構(gòu)確證
[0041 ] 試劑來源：乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷為分析純，購自上海凌峰化 學試劑有限公司，甲醇，分析純，購自江蘇漢邦化學試劑有限公司。
[0042]制備方法：（a)貓爪草的干燥塊根（IOkg)粉碎，用80 %乙醇熱回流提?。?5L X 3 次），合并提取液，濃縮至無醇味(3L)，依次用石油醚(3LX3次）、乙酸乙酯(3LX3次)和水飽 和的正丁醇(3LX3次)萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物(398g)和正丁醇萃取 物；（b)步驟(a)中乙酸乙酯萃取物用AB-8型大孔樹脂除雜，先用15%乙醇洗脫8個柱體積， 再用75%乙醇洗脫10個柱體積，收集75%乙醇洗脫液，減壓濃縮得75%乙醇洗脫物浸膏 (163g); (c)步驟(b