動(dòng)物和NK耗竭的動(dòng)物中GLA對(duì)MADB106LTR的作用 [0231 ]進(jìn)行此實(shí)驗(yàn)以評(píng)估NK細(xì)胞在介導(dǎo)GLA施用對(duì)LTR的有益效果中的作用。
[0232] 程序:
[0233] 將五十四只四月齡F344雄性大鼠分入兩組一一通過施用抗-NKR-PlmAb而耗竭NK， 或施用溶媒，并將各組進(jìn)一步細(xì)分為三組(2yg GLA、SE和PBS)。每個(gè)動(dòng)物根據(jù)其藥物條件分 配皮下注射1〇〇μ1，并在24h后，將MADB106細(xì)胞與抗-NKR-PlmAb或溶媒同時(shí)施用。二十四小 時(shí)后處死動(dòng)物，并提取肺用于LTR評(píng)估(如第4節(jié)中詳述的）。
[0234] 結(jié)果:
[0235] 二乘三ANOVA(耗竭X藥物注射）揭示了耗竭的顯著效應(yīng)(F(l ,46)=712.065，p〈 0.0001)，顯示NK-耗竭的動(dòng)物中的LTR水平高出約20倍，由此顯示NK細(xì)胞在從肺部清除 MADB106中的突出作用。參見圖4A。
[0236] 當(dāng)分別檢查耗竭組和非耗竭組時(shí)，各耗竭組之間沒有明顯區(qū)別，這表明在此條件 下GLA或SE均無作用，而在非耗竭條件下發(fā)現(xiàn)組的顯著效應(yīng)(F(2,22)=6.447，p〈0.01)。對(duì) 于非耗竭條件的Fisher氏PLSD事后比較表明單獨(dú)的SE無作用，而GLA和PBS之間有顯著的差 異(p〈0.01)。參見圖4B。這些發(fā)現(xiàn)表明，GLA的有益效果受NK細(xì)胞的顯著介導(dǎo)。
[0237] 在先前采用此實(shí)驗(yàn)方法的研究中，還顯示其他操作可增加或減少NK-耗竭的動(dòng)物 中的LTR，由此消除了此實(shí)驗(yàn)方法中潛在的方法學(xué)障礙，如天花板效應(yīng)或地板效應(yīng)。
[0238] 實(shí)施例5-在自發(fā)術(shù)后轉(zhuǎn)移的小鼠模型中測(cè)試GLAj-受體阻斷劑和C0X2抑制劑
[0239] C57BL/6J小鼠內(nèi)腳墊（intrafootpad)接種同基因的（syngeneic)B16F10 · 9_黑素 瘤或Lewis肺癌瘤，且當(dāng)發(fā)展的腫瘤大于100毫升時(shí)將爪子截肢。在截肢前施用GLA、i3腎上腺 素能受體阻斷劑普萘洛爾、和/或環(huán)氧合酶-2抑制劑依托度酸一次(或多次），并監(jiān)測(cè)無復(fù)發(fā) 存活(recurrence-free survival)。進(jìn)行進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)，其中在截肢前施用GLA-次，而在 截肢后施用普萘洛爾+依托度酸一次。
[0240]購買6周齡的C57BL/6J雄性和雌性小鼠并飼養(yǎng)于動(dòng)物飼養(yǎng)所中，每籠3-4只，隨意 供應(yīng)食物和水，12:12光/暗循環(huán)，22 6 1°C。在每個(gè)實(shí)驗(yàn)中使用10-14周齡的動(dòng)物，并在所有 組中進(jìn)行年齡匹配。腫瘤和藥物施用的順序在所有實(shí)驗(yàn)組中配衡，對(duì)照動(dòng)物注射溶媒。
[0241] 普萘洛爾溶于PBS、礦物油與Arlacel(8:7:l)的乳劑中皮下注射（5mg/kg，10ml/ 1^)。依托度酸溶于玉米油中皮下注射(5〇11^/1^，1〇1111/1^)。61^以0.]^-5(^范圍的劑量/動(dòng) 物皮下注射。
[0242] 每只小鼠內(nèi)腳墊注射5x 104B16F10.9黑素瘤細(xì)胞或dl22 Lewis肺癌瘤（于含有 0.1%BSA的20ml PBS中），每天目視檢查腫瘤。一旦腫瘤達(dá)至Ij100 -150ml的體積，則用2%異 氟烷將小鼠麻醉并施以特定的藥物治療，且通過爪截肢切除腫瘤。將達(dá)到指定腫瘤體積的 小鼠基于預(yù)定的配衡順序分配至特定的藥物治療組，從而保證切除時(shí)的腫瘤大小和腫瘤年 齡在不同的藥物組之間相等分布。實(shí)施截肢的實(shí)驗(yàn)者對(duì)于藥物治療組不知情。隨后每天監(jiān) 測(cè)小鼠的發(fā)病指征歷時(shí)80d(且在最后一次發(fā)病后不少于2周）。對(duì)顯示疾病行為或明顯的癌 癥復(fù)發(fā)的小鼠給予過量的異氟烷，并進(jìn)行尸檢以確定惡性病灶。疾病行為由緩慢的身體動(dòng) 作、對(duì)環(huán)境刺激無響應(yīng)、顯著的體重減少或震顫(tremor)所定義。
[0243] 特定實(shí)施方案的上述描述會(huì)如此全面地揭示本發(fā)明的一般性質(zhì)，以致于他人能夠 通過應(yīng)用目前的知識(shí)容易地修飾所述特定的實(shí)施方案和/或?qū)⑵溥m用于多種應(yīng)用而無需過 多的實(shí)驗(yàn)且不背離通用的概念，并因此這樣的適用和修飾應(yīng)當(dāng)且意欲在所公開的實(shí)施方案 的等同物的含義和范圍內(nèi)加以理解。可理解的是，本發(fā)明采用的措辭或術(shù)語是為了說明而 非限制的目的。用于實(shí)施多種公開的功能的手段、材料和步驟可采取許多種替換形式而不 背離本發(fā)明。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種用于減少或防止受試者中轉(zhuǎn)移發(fā)展的方法，該方法包括對(duì)受試者施用包含吡喃 葡萄糖基脂質(zhì)佐劑(GLA)或其藥學(xué)上可接受的鹽作為活性成分的組合物的步驟，其中所述 施用對(duì)減少或防止轉(zhuǎn)移是有效的。2. 權(quán)利要求1的方法，其中所述施用通過局部-區(qū)域遞送進(jìn)行。3. 權(quán)利要求1或2的方法，其中所述包含GLA或其藥學(xué)上可接受的鹽的藥物組合物基本 上沒有癌癥抗原。4. 權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)的方法，其中為了減少或防止腫瘤切除手術(shù)后受試者體內(nèi)的 轉(zhuǎn)移發(fā)展而施用所述藥物組合物。5. 權(quán)利要求4的方法，其中所述施用在所述腫瘤切除手術(shù)的圍手術(shù)期過程中進(jìn)行。6. 權(quán)利要求5的方法，其中所述藥物組合物在手術(shù)之前(術(shù)前)施用至少一次。7. 權(quán)利要求5的方法，其中所述藥物組合物在手術(shù)之后(術(shù)后)施用至少一次。8. 權(quán)利要求6-7中任一項(xiàng)的方法，其中所述藥物組合物以恒定劑量施用。9. 權(quán)利要求6-7中任一項(xiàng)的方法，其中所述藥物組合物以變化劑量施用。 1 〇.權(quán)利要求1 -9中任一項(xiàng)的方法，其中所述GLA具有如下結(jié)構(gòu)式(I): -〇 r ^ ^ i \ m> WK ? i \ I 爐八 / 、' s Λ V- ?" (I) 其中： R1，R3，R5 和 R6 為 CH-C2。經(jīng)基;且 R2 和 R4 為 C12-C2。經(jīng)基。11. 權(quán)利要求10的方法，其中R1，R3，R5和R6為十一烷基且R 2和R4為十三烷基。12. 權(quán)利要求1 -9中任一項(xiàng)的方法，其中所述GLA具有如下結(jié)構(gòu)式(II): ~〇 R、j? 1 , / ,ar 1 Ys tr*k ^ % T o^X 4 1 H I OH (II) 其中： U，L2，L3，L4，LdPL6為相同或不同的，且獨(dú)立地為-o-，-NH-或-(CH 2)-; L7，Ls，L9和Lio為相同或不同的，且獨(dú)立地為不存在或?yàn)?C( = 0)-; Υι為酸官能團(tuán)； Y2和Y3為相同或不同的，且獨(dú)立地為-OH，-SH或酸官能團(tuán)； Υ4 為-0Η 或-SH; R!，R3，R#PR6為相同或不同的，且獨(dú)立地為C8-C13經(jīng)基;和 R2和R4為相同或不同的，且獨(dú)立地為C6-Cn烴基。13. 權(quán)利要求12的方法，其中所述GLA具有如下結(jié)構(gòu)： HO-#、 , 一0H Qs=f^ O^V^^IO in i Λ (Λ〇 W (Λη Μ % οη 11〇 ο14. 權(quán)利要求1-13中任一項(xiàng)的方法，其進(jìn)一步包括施用β腎上腺素能受體阻斷劑和/或 C0X2抑制劑的步驟。15. 權(quán)利要求14的方法，其中所述施用在所述腫瘤切除手術(shù)的圍手術(shù)期過程中進(jìn)行。16. 權(quán)利要求14的方法，其中所述β腎上腺素能受體阻斷劑和C0X2抑制劑存在于分別的 藥物組合物內(nèi)。17. 權(quán)利要求15或16的方法，其中所述β腎上腺素能受體阻斷劑或/和C0X2抑制劑在手 術(shù)之前(術(shù)前)施用至少一次。18. 權(quán)利要求15或16的方法，其中所述β腎上腺素能受體阻斷劑或/和C0X2抑制劑在手 術(shù)之后(術(shù)后)施用至少一次。19. 權(quán)利要求15或16的方法，其中所述包含GLA或其藥學(xué)上可接受的鹽的藥物組合物、β 腎上腺素能受體阻斷劑和C0X2抑制劑在圍手術(shù)期過程中的同日施用。20. 權(quán)利要求15或16的方法，其中所述包含GLA或其藥學(xué)上可接受的鹽的藥物組合物、β 腎上腺素能受體阻斷劑和COX2抑制劑在圍手術(shù)期過程中的不同日施用。21. 權(quán)利要求14-20中任一項(xiàng)的方法，其中所述β腎上腺素能受體阻斷劑選自下組:醋丁 洛爾、阿替洛爾、倍他洛爾、比索洛爾、卡替洛爾、卡維地洛、塞利洛爾、艾司洛爾、拉貝洛爾、 美托洛爾、納多洛爾、奈必洛爾、氧烯洛爾、噴布洛爾、吲哚洛爾、普萘洛爾、索他洛爾、噻嗎 洛爾，或它們藥學(xué)上可接受的鹽。22. 權(quán)利要求21的方法，其中所述β腎上腺素能受體阻斷劑為普萘洛爾或其藥學(xué)上可接 受的鹽。23. 權(quán)利要求14-22中任一項(xiàng)的方法，其中所述COX2抑制劑選自下組:塞來考昔、西米考 昔、艾托考昔、依托度酸、依托考昔、羅美昔布、美洛昔康、帕瑞考昔、羅非考昔、替拉考昔、伐 地考昔，或它們藥學(xué)上可接受的鹽。24. 權(quán)利要求23的方法，其中所述COX2抑制劑為依托度酸或其藥學(xué)上可接受的鹽。25. -種包含GLA或其藥學(xué)上可接受的鹽作為活性成分的藥物組合物，其用于減少或防 止轉(zhuǎn)移發(fā)展。26. 權(quán)利要求25的藥物組合物，其中所述組合物基本上沒有癌癥抗原。27. 權(quán)利要求25或26的藥物組合物，其由作為活性成分的GLA或其藥學(xué)上可接受的鹽組 成。28. 權(quán)利要求25-27中任一項(xiàng)的藥物組合物，其配制用于局部-區(qū)域遞送。29. 權(quán)利要求25-28中任一項(xiàng)的藥物組合物，供腫瘤切除手術(shù)的圍手術(shù)期過程中使用。30. 權(quán)利要求25-28中任一項(xiàng)的藥物組合物，供腫瘤切除手術(shù)的圍手術(shù)期過程中與β腎 上腺素能受體阻斷劑和/或COX2抑制劑一起使用。31. 權(quán)利要求25-30中任一項(xiàng)的藥物組合物，其中所述GLA具有如下結(jié)構(gòu)式(I): ....| ! OH 一 c) X "w f、擻 (I) 其中： R1，R3，R5 和 R6 為 CH-C2。經(jīng)基;且 R2 和 R4 為 c12-c2。經(jīng)基。32. 權(quán)利要求31的藥物組合物，其中R1，R3，R5和R6為^^一烷基且R 2和R4為十三烷基。33. 權(quán)利要求25-30中任一項(xiàng)的藥物組合物，其中所述GLA具有如下結(jié)構(gòu)式(II): \ \ r-；^/1 γ為 ??Γ^ ^ % crN 4 ?，Μθ Rs%Y 人 ! CSH OH ... (Ι?) 其中： U，L2，L3，L4，LdPL6為相同或不同的，且獨(dú)立地為-o-，-NH-或-(CH 2)-; L7，Ls，L9，和Lio為相同或不同的，且獨(dú)立地為不存在或?yàn)?C( = 0)-; Υι為酸官能團(tuán)； Y2和Y3為相同或不同的，且獨(dú)立地為-OH，-SH，或酸官能團(tuán)； Υ4 為-0Η 或-SH; R!，R3，R#PR6為相同或不同的，且獨(dú)立地為C8-C13經(jīng)基;且 R2和R4為相同或不同的，且獨(dú)立地為C6-Cn烴基。34.權(quán)利要求25的藥物組合物，其中所述GLA具有如下結(jié)構(gòu)： 〇 HO-R r-〇H HQ °^0' NH ^ Λ〇 〇?Ροη ?
【專利摘要】提供了包含吡喃葡萄糖基脂質(zhì)佐劑(GLA)的組合物和利用其減少或防止癌癥轉(zhuǎn)移形成的方法。所述組合物可配制用于局部-區(qū)域遞送。所述組合物可以是基本上沒有癌抗原的。用GLA的治療可與用COX2抑制劑和β腎上腺素能受體阻斷劑的治療組合。
【IPC分類】A61K39/39
【公開號(hào)】CN105473159
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201480043921
【發(fā)明人】S·本-埃利亞胡, P·馬茨納, S·G·里德
【申請(qǐng)人】傳染性疾病研究院
【公開日】2016年4月6日
【申請(qǐng)日】2014年6月4日
【公告號(hào)】CA2914501A1, EP3003367A1, US20150087615, WO2014197629A1