槲皮素在制備預(yù)防及治療與ApoE蛋白水平有關(guān)疾病的藥物中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及槲皮素，尤其是涉及槲皮素在制備預(yù)防及治療與ApoE蛋白水平有關(guān)疾病的藥物中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]阿爾茨海默病(alzheimer s disease， AD)是一種與年齡密切相關(guān)的神經(jīng)退行性疾病，主要病理特征為腦神經(jīng)細(xì)胞外出現(xiàn)淀粉樣蛋白(Αβ)聚集的老年斑和腦神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)Tau蛋白異常聚集形成的神經(jīng)纖維纏結(jié)。大量證據(jù)表明，Αβ在大腦中的積累、沉積是AD發(fā)病早期重要特征和發(fā)病機(jī)制。Αβ的積累、聚集和沉積在AD發(fā)病過程中起著重要作用，大腦中過量的Αβ會(huì)引起神經(jīng)炎癥和神經(jīng)毒性從而引發(fā)AD。因此，促進(jìn)Αβ從大腦中清除，減少Αβ在大腦中積累是治療AD的有效途徑。載脂蛋白E(apolipoprotein E，ApoE)是一種與膽固醇類物質(zhì)運(yùn)輸相關(guān)的血漿蛋白，能結(jié)合血液中的脂肪和細(xì)胞表面受體，在生物體內(nèi)起著十分重要的作用。ApoE是一種多態(tài)性蛋白，與多種疾病相關(guān)。其中，ApoE的基因型多態(tài)性與AD的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)高度相關(guān)，并且ApoE在Αβ代謝過程中起重要作用。增加AD大腦內(nèi)ApoE水平可以促進(jìn)大腦Aβ清除，提高膽固醇的運(yùn)輸，維持突觸可塑性和減弱神經(jīng)炎癥反應(yīng)，這些因素與AD發(fā)病密切相關(guān)。在AD患者中，ApoE在血漿及腦脊液中的表達(dá)水平往往低于正常人。因此，通過提高ApoE的水平促進(jìn)Αβ代謝、提高膽固醇的運(yùn)輸、維持突觸可塑性和減弱神經(jīng)炎癥反應(yīng)可能預(yù)防或推遲AD的發(fā)生和發(fā)展。最近研究發(fā)現(xiàn)RXRs的激動(dòng)劑bexarotene和LXRs激動(dòng)劑Τ0901317能提高大腦中ApoE的水平，促進(jìn)Αβ42的清除，緩和AD小鼠的認(rèn)知和記憶缺陷[13—15]。另外，P1glitazone(—種PPARy的激動(dòng)劑)，也可以增加ApoE表達(dá)，減少淀粉樣斑的形成，改善AD小鼠記憶[9]。這些研究表明，提高ApoE的表達(dá)水平與脂化程度可以有效促進(jìn)Αβ清除，減少AD模型小鼠淀粉樣斑形成并改善小鼠AD相關(guān)癥狀，對(duì)以ApoE作為AD治療靶點(diǎn)具有重要的指導(dǎo)意義。
[0003]實(shí)驗(yàn)中所用ApoE3或apoE4基因替換星形膠質(zhì)細(xì)胞系(immortalized astrocytes)來(lái)源于人類ApoE3或apoE4基因替換小鼠Apoe基因的轉(zhuǎn)基因小鼠轉(zhuǎn)基因小鼠模型為表達(dá)5種家族性AD突變基因(3xAPP[K670N/M671L(Swedish) + I716V(Florida)+V717I(London)and 2xPSl [M146L+L286V]])的轉(zhuǎn)基因小鼠模型[17]。實(shí)驗(yàn)中分別用TBS緩沖液(Tris-HCl), TBSX緩沖液(包含1 % Triton X-100)和⑶N-HC1 (含5M鹽酸胍緩沖液)分別提取TBS可溶性，TBSX緩沖液可溶和不溶性(GDN-HC1中可溶)Αβ[18]。
[0004]參考文獻(xiàn):
[0005][l]Blennow,K., de Leon , Μ.J., Zetterberg , H.,2006.Alzheimer'sdisease.Lancet 368，387-403.
[0006][2]Bu，G.，2009.Apolipoprotein E and its receptors in Alzheimer’sdisease:pathways,pathogenesis and therapy.Nat Rev Neurosci 10,333-344.
[0007][3]Selkoe,D.J.,2002.Deciphering the genesis and fate of amyloid beta-protein yields novel therapies for Alzheimer disease.J Clin Invest 110,1375-1381.
[0008][4]Hardy,J.,Selkoe,D.J.,2002.The amyloid hypothesis of Alzheimer’sdisease: progress and problems on the road to therapeutics.Science 297,353-356.
[0009][5]LaFerla,F.M.,Green,K.N.,0ddo,S.,2007.1ntracellular amyloid-beta inAlzheimer’s disease.Nat Rev Neurosci 8，499-509.
[0010][6]Bachmeier，C.，Beaulieu_Abdelahad，D., Crawford,F.，Mullan，M.，Paris，D.，2013.Stimulat1n of the retinoid X receptor facilitates beta-amyloidclearance across the blood—brain barrier.J Mol Neurosci 49，270—276.
[0011][7]R.ff.Mahley,Αροlipoprotein E: cholesterol transport protein withexpanding role in cell b1logy.Science 240,622-630(1988).
[0012][8]Corder，E.H.，Saunders , A.M.，Strittmatter，W.J.，Schmechel，D.E.，Gaskell,P.C.，Small,G.ff.，Roses,A.D.，Haines ,J.L.,Pericak-Vance,M.A.，1993.Genedose of apolipoprotein E type 4 allele and the risk of Alzheimer’s disease inlate onset families.Science 261,921-923.
[0013][9]Mandrekar-Colucci，S.，Karlo，J.C.，Landreth，G.E.,2012.Mechanismsunderlying the rapid peroxisome proliferator-activated receptor-gamma-mediated amyloid clearance and reversal of cognitive deficits in a murinemodel of Alzheimer’s disease.J Neurosci 32，10117-10128.
[0014][10]Roses,A.D.,1996.Apolipoprotein E alleles as risk factors inAlzheimer’s disease.Annu Rev Med 47,387-400.
[0015][11]Liu,C.C.,Kanekiyo,T.，Xu，H.，Bu，G.，2013a.Apolipoprotein E andAlzheimer disease:risk,mechanisms and therapy.Nat Rev Neurol 9，106—118.
[0016][12]Cruchaga，C.，Kauwe，J.S.，Nowotny，P., Bales,K.，Pickering，E.H.，Mayo，K.，Bertelsen，S.，Hinrichs，A.，Alzheimer’s Disease Neuroimaging,1.,Fagan,Α.Μ.，Holtzman,D.M.,Morris,J.C.,Goate,A.M.,2012.Cerebrospinal fluid APOE levels:anendophenotype for genetic studies for Alzheimer’s disease.Hum Mol Genet 21，4558-4571.
[0017][13]Cramer,Ρ.Ε.，Cirrito，J.R.,ffesson,D.ff.，Lee，C.Y.，Karlo，J.C.，Zinn，A.E.,Casali,Β.T.,Restivo,J.L.，Goebel,ff.D.，James,M.J.，Brunden,K.R.，Wilson，D.A.,Landreth,G.E.,2012.ApoE-directed therapeutics rapidly clear beta-amyloidand reverse deficits in AD mouse models.Science 335，1503—1506.
[0018][14]iddell，D.R.，Zhou，H.，Comery，T.A.，Kouranova，E.，Lo，C.F.,Warwick，H.K.,Ring,R.H.，Kirksey，Y.，Aschmies，S.,Xu,J.，Kubek，K., Hirst,ff.D., Gonzales,C.，Chen,Y.,Murphy,E.，Leonard，S.,Vasylyev,D.，0ganesian，A.,Martone,R.L.，Pangalos，M.N.,Reinhart,Ρ.Η.,Jacobsen,J.S.,2007.The LXR agonist T0901317 selectivelylowers hippocampal Abeta42 and improves memory in the Tg2576 mouse model ofAlzheimer’s disease.Mol Cell Neurosci 34,621-628.
[0019][15]Vanmierlo，T.，Rutten，K.，Dederen，J.，Bloks，V.W.，van Vark-van derZee,L.C.，Kuipers，F(xiàn).，Kiliaan，A.，Blokland，A.，Sijbrands，E.J.，Steinbusch，H.，Prickaerts，J.，Lutjohann,D.,Mulder,M.,2011.Liver X receptor ac