r>[0061] 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0062] 體外實(shí)驗(yàn)表明，組合物具有很強(qiáng)的抗幽門螺旋桿菌活性，紙片法顯示其抑菌圈直 徑為26mm(ATCC43504)。用瓊脂稀釋法顯示它能完全抑制5個隨機(jī)的臨床菌株和1個標(biāo)準(zhǔn) 菌株（ATCC43504)的生長，最小抑菌濃度（MIC)均為3.0yg/ml。用氨芐西林作陽性對照， 其對6株測試菌完全抑制的最小濃度（MIC)為1. 5μg/ml?；衔颕II和化合物IV無抗幽 門螺旋桿菌活性。
[0063] 結(jié)論：組合物具有較強(qiáng)的抑制幽門螺旋桿菌活性，說明對于與幽門螺旋桿菌密切 相關(guān)的急、慢性胃炎、胃、十二脂腸潰瘍等疾病來講，組合物是一個極具開發(fā)潛力的藥物。它 可直接用于相應(yīng)疾病的治療以及相關(guān)藥物的制備?；衔颕II和化合物IV無抗幽門螺旋 桿菌活性，不可以用于相應(yīng)疾病的治療以及相關(guān)藥物的制備。
[0064] 實(shí)施例7組合物抗細(xì)菌活性
[0065] 抗菌活性實(shí)驗(yàn)是采用濃度稀釋的方法，每次測定重復(fù)三次，測試病原菌有大腸桿 菌、熒光假單孢菌、金黃色葡萄球、變形桿菌、新生隱球菌，菌液濃度為1〇 5個/mL。藥物起始 濃度為50. 00μg/mL(5 %二甲基亞砜DMS0)，梯度稀釋至0. 10μg/mL，等量體積的菌液和測 試樣品混合培養(yǎng)在96孔板中（形成的最終濃度有：25. 00、12. 50、6. 25、3. 13、1. 56、0. 78、 0. 39、0. 20、0. 10和0. 05μg/mL)，細(xì)菌培養(yǎng)溫度分別為37°C，培養(yǎng)時間24h后觀察，若發(fā)現(xiàn) 沒有菌落形成的處理孔中最低的那個濃度為樣品最低抗菌濃度，即MIC值。組合物抗菌結(jié) 果見表2。
[0066] 表2組合物抗細(xì)菌MIC值（μ g/mL)
[0067]
[0068] 結(jié)論：組合物具有很強(qiáng)的抗細(xì)菌活性，因此本發(fā)明的組合物有望被用于制備新型 抗細(xì)菌藥物?；衔颕II和化合物IV無抗細(xì)菌活性，不能被用于制備新型抗細(xì)菌藥物。
[0069] 實(shí)施例8組合物抗結(jié)核菌活性
[0070] (1)固體培養(yǎng)基稀釋法測定組合物抗卡介苗（BCG)絕對濃度
[0071] 從斜面上刮取卡介苗培養(yǎng)物，加入到3mlMiddlebrook7H9肉湯培養(yǎng)基中，加入 少量玻璃珠，旋緊試管蓋，于漩渦振蕩器上劇烈振動研磨，與標(biāo)準(zhǔn)麥?zhǔn)媳葷峁埽∕acFarland No. 1)比池，即配成lmg/ml的卡介苗（BCG)菌懸液。
[0072] 將藥物用DMS0配成高濃度的原液，用含5%的吐溫-80無菌超純水稀釋原液至 所需濃度，將稀釋好的藥物按所需劑量加入到4mlMiddlebrook7Hll瓊脂培養(yǎng)基（該培養(yǎng) 基已經(jīng)121°C高壓蒸汽滅菌15分鐘、冷卻至50~55°C)，混勻，制成含藥物，濃度分別為 6.Oug/ml，4.Oug/ml，3.Oug/ml，2.Oug/ml，1. 5ug/ml，1.Oug/ml，0· 75ug/ml，0· 5ug/ml等濃 度的斜面培養(yǎng)基。
[0073] 將濃度為lmg/ml的卡介苗（BCG)菌懸液用接種環(huán)蘸取數(shù)環(huán)，分別接種于含各個藥 物系列濃度的培養(yǎng)基和空白對照培養(yǎng)基斜面上，置于37°C培養(yǎng)4~8周，觀察實(shí)驗(yàn)結(jié)果，結(jié) 果如表3所;
[0074] 本實(shí)施例中所用Middlebrook7H9肉湯培養(yǎng)基和Middlebrook7Hll瓊脂培養(yǎng)基為 本領(lǐng)域技術(shù)人員進(jìn)行結(jié)核菌培養(yǎng)時的常用培養(yǎng)基，其配方采用常規(guī)配方即可。
[0075] (2)固體培養(yǎng)基稀釋法測定組合物抗結(jié)核分枝桿菌標(biāo)準(zhǔn)株H37Rv株絕對濃度
[0076] 從斜面上刮取結(jié)核分枝桿菌標(biāo)準(zhǔn)株H37Rv株培養(yǎng)物，加入到3mlMiddlebrook7H9 肉湯培養(yǎng)基中，加入少量玻璃珠，旋緊試管蓋，于漩渦振蕩器上劇烈振動研磨，與標(biāo)準(zhǔn)麥?zhǔn)?比池管（MacFarlandNo. 1)比池，即配成lmg/ml的H37Rv株菌懸液。
[0077] 將藥物分別用DMS0配成高濃度的原液，用含5%的吐溫-80無菌超純水稀釋原液 至所需濃度，將稀釋好的藥物按所需劑量加入到4mlMiddlebrook7Hll瓊脂培養(yǎng)基（該培 養(yǎng)基已經(jīng)121°C高壓蒸汽滅菌15分鐘、冷卻至50~55°C)，混勻，制成含藥物，濃度分別為 6. 0ug/ml，4. 0ug/ml，3. 0ug/ml，2. 0ug/ml，1. 5ug/ml，1. 0ug/ml，0· 75ug/ml，0· 5ug/ml等濃 度的斜面培養(yǎng)基。
[0078] 將濃度為lmg/ml的H37Rv株菌懸液用接種環(huán)蘸取數(shù)環(huán)，分別接種于含藥物系列濃 度的培養(yǎng)基和空白對照培養(yǎng)基斜面上，置于37°C培養(yǎng)4~8周，觀察實(shí)驗(yàn)結(jié)果，結(jié)果如表3 所示。
[0079] (3)固體培養(yǎng)基稀釋法測定藥物抗結(jié)核分支桿菌臨床分離耐ISREMTB株絕對濃 度
[0080] 從斜面上刮取結(jié)核分枝桿菌臨床分離耐ISREMTB株（耐異煙肼、鏈霉素、利福 平、乙胺丁醇結(jié)核分枝桿菌臨床分離柱）培養(yǎng)物，加入到3ml Middlebrook7H9肉湯培養(yǎng) 基中，加入少量玻璃珠，旋緊試管蓋，于漩渦振蕩器上劇烈振動研磨，與標(biāo)準(zhǔn)麥?zhǔn)媳葷峁?(MacFarland No. 1)比池，即配成lmg/ml的菌懸液。
[0081] 將藥物分別用DMS0配成高濃度的原液，用含5%的吐溫-80無菌超純水稀釋原液 至所需濃度，將稀釋好的藥物按所需劑量加入到4mlMiddlebrook7Hll瓊脂培養(yǎng)基（該培 養(yǎng)基已經(jīng)121°C高壓蒸汽滅菌15分鐘、冷卻至50~55°C)，混勻，制成含藥物，濃度分別為 6.Oug/ml，4.Oug/ml，3.Oug/ml，2.Oug/ml，1. 5ug/ml，1.Oug/ml，0· 75ug/ml，0· 5ug/ml等濃 度的斜面培養(yǎng)基。
[0082] 將濃度為lmg/ml的結(jié)核分枝桿菌臨床分離耐ISRE MTB株菌懸液用接種環(huán)蘸取 數(shù)環(huán)，分別接種于含各個藥物系列濃度的培養(yǎng)基和空白對照培養(yǎng)基斜面上，置于37°C培養(yǎng) 4~8周，觀察實(shí)驗(yàn)結(jié)果，結(jié)果如表3所示。
[0083] 表3固體培養(yǎng)基稀釋法測定組合物抗結(jié)核菌絕對濃度結(jié)果
[0084]
[0085] 表4固體培養(yǎng)基稀釋法測定化合物III抗結(jié)核菌絕對濃度結(jié)果
[0086]
[0087] 表5固體培養(yǎng)基稀釋法測定化合物IV抗結(jié)核菌絕對濃度結(jié)果
[0088]
[0089] 結(jié)論：組合物具有很強(qiáng)的抗結(jié)核菌和抗耐藥性結(jié)核菌活性，可作為治療結(jié)核菌感 染疾病的先導(dǎo)化合物，也可用于制備治療結(jié)核病藥物。化合物III和化合物IV無抗結(jié)核菌 和抗耐藥性結(jié)核菌活性，不能作為治療結(jié)核菌感染疾病的先導(dǎo)化合物，也不能用于制備治 療結(jié)核病藥物。
[0090] 實(shí)施例9本發(fā)明所涉及組合物片劑的制備
[0091] 取2克組合物，加入制備片劑的常規(guī)輔料18克，混勻，常規(guī)壓片機(jī)制成100片。
[0092] 實(shí)施例10本發(fā)明所涉及組合物膠囊的制備
[0093] 取2克組合物，加入制備膠囊劑的常規(guī)輔料如淀粉18克，混勻，裝膠囊制成100 粒。
【主權(quán)項】
1. 一種組合物，其特征為該組合物由化合物III和化合物IV組成，該組合物中化合物 III和化合物IV的質(zhì)量百分?jǐn)?shù)分別為80%和20%，2. 如權(quán)利要求1所述的組合物的制備方法，其特征為：將化合物III的粉末和化合物 IV的粉末按照質(zhì)量百分?jǐn)?shù)分別為80%和20%充分混合。3. -種如權(quán)利要求1所述的組合物在抗菌藥物中的應(yīng)用。4. 如權(quán)利要求3所述的組合物在抗菌藥物中的應(yīng)用，其特征為：所述菌為細(xì)菌。5. 如權(quán)利要求3所述的組合物在抗菌藥物中的應(yīng)用，其特征為：所述菌為真菌。6. 如權(quán)利要求3所述的組合物在抗菌藥物中的應(yīng)用，其特征為：所述菌為幽口螺桿菌。7. 如權(quán)利要求3所述的組合物在抗菌藥物中的應(yīng)用，其特征為：所述菌為結(jié)核菌。8. 如權(quán)利要求5所述的組合物在抗菌藥物中的應(yīng)用，其特征為：所述真菌為紅色毛癖 菌、羊毛狀小抱子菌或者斷發(fā)癖菌。9. 如權(quán)利要求4所述的組合物在抗菌藥物中的應(yīng)用，其特征為：所述細(xì)菌為大腸桿菌、 巧光假單抱菌、金黃色葡萄球、變形桿菌或者新生隱球菌。10. 如權(quán)利要求7所述的組合物在抗菌藥物中的應(yīng)用，其特征為：所述結(jié)核菌為卡介 苗、結(jié)核分枝桿菌標(biāo)準(zhǔn)株H37RV株和耐多藥結(jié)核分枝桿菌。
【專利摘要】一種組合物及其在抗菌藥物中的應(yīng)用，本發(fā)明涉及有機(jī)合成和藥物化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及組合物、制備方法及其在制備抗菌藥物上的用途。本發(fā)明公開了一種組合物及其制備方法。藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)表明，本發(fā)明的組合物具有抗菌作用，具有開發(fā)抗菌藥物的價值。
【IPC分類】A61K31/5375, A61K31/4453, A61P31/10, A61P31/04, A61P31/06
【公開號】CN105395556
【申請?zhí)枴緾N201510746307
【發(fā)明人】丁秋菊
【申請人】南京海澳斯生物醫(yī)藥科技有限公司
【公開日】2016年3月16日
【申請日】2015年11月5日