度對不結(jié)球白菜抗氧化活性物質(zhì)提取的影響。
[0028] 最佳超聲波功率研究 準(zhǔn)確稱取5.0g不結(jié)球白菜粉，乙醇濃度70%，超聲時間60min，料液比1:20,考察 100W、200W、300W、400W、500W及600W的超聲功率對不結(jié)球白菜抗氧化活性物質(zhì)提取的影 響。
[0029] 步驟二、響應(yīng)面試驗 在單因素試驗的基礎(chǔ)上，選擇乙醇濃度（A)、料液比（B)、提取溫度（C)、提取時間（D)， 利用Design-Expert 8.0.6軟件中的Box-Behnken功能，以測得Trolox濃度為響應(yīng)值， 采用四因素三水平的響應(yīng)面分析法優(yōu)化不結(jié)球白菜抗氧化活性物質(zhì)的提取條件。
[0030] 不結(jié)球白菜活性物質(zhì)的抗氧化性試驗 DPPH自由基清除率的測定采用DPPH95%乙醇體系法；羥自由基清除率的測定采用二 價鐵離子測定法；超氧陰離子自由基清除率的測定采用光照核黃素測定法。
[0031] 步驟三、結(jié)果與分析 標(biāo)準(zhǔn)曲線 回歸方程為：Y= -〇· 0005X+0. 701，R2 = 0· 9983,表明Trolox濃度在 01 000 μmol/L范圍內(nèi)與吸光度有良好的線性關(guān)系。 單因素試驗結(jié)果與分析 單因素試驗結(jié)果見圖1 (圖中每個值表示3次測量，每次測量為3個重復(fù)的平均 值。不同小寫字母表示處理間差異顯著（P〈〇. 05)，相同小寫字母表示處理間差異不顯 著（P>0. 05))，由圖1A得知，當(dāng)料液比從1: 10到1: 20變化時，Trolox濃度顯著增大 (P〈0. 05)，這時隨著有機(jī)溶劑的量逐漸增多，促使越來越多的不結(jié)球白菜活性成分溶于其 中，但當(dāng)料液比從1: 20到1: 35，Trolox濃度沒有較為明顯的變化（P>0. 05)，這可能是 因為當(dāng)有機(jī)溶劑增加到一定程度時，不結(jié)球白菜中的活性物質(zhì)大多都已經(jīng)溶解出來，再繼 續(xù)增加有機(jī)溶劑的含量并不會對提取有太大的影響，故本試驗料液比采用1 : 20(m:V); 由圖1B可知，當(dāng)超聲時間從30min到60min時，Trolox濃度呈現(xiàn)顯著上升趨勢（P〈0. 05)， 說明隨著超聲時間的延長，超聲波作用于不結(jié)球白菜細(xì)胞壁的效果增強(qiáng)，使其破碎更為徹 底，其中的活性成分能夠更容易被有機(jī)溶劑溶出。但當(dāng)超聲時間從60min延長到80min 的過程中，Trolox濃度上升幅度減小，且相鄰兩處理間差異不顯著（P>0. 05)，這可能還是 因為不結(jié)球白菜活性成分的溶出已經(jīng)達(dá)到較為飽和的狀態(tài)，這時超聲時間即使再繼續(xù)延長 也不會對抗氧化效果造成影響。因此，從該單因素試驗可以得出超聲波的最佳提取時間控 制在60min較宜；從圖1C可以看出，隨著乙醇濃度的逐漸增加，Trolox濃度呈現(xiàn)顯著增 加的趨勢（P〈〇. 05)，當(dāng)乙醇濃度為70%時，Trolox濃度最大；這說明在較高濃度的乙醇溶 液里更有利于不結(jié)球白菜活性成分的溶出。但當(dāng)乙醇濃度繼續(xù)增大時，Trolox濃度呈現(xiàn)下 降趨勢（P>〇. 05)，這說明不結(jié)球白菜活性成分的溶出隨著乙醇濃度的增加沒有明顯的正相 關(guān)關(guān)系。因此，從該單因素試驗可以得出最佳乙醇濃度為70% ;從圖1D可以看出，當(dāng)超聲功 率從100W增加到300W的過程中，Trolox濃度逐漸增大（P〈0. 05)，當(dāng)超聲功率達(dá)到300 W時，Trolox濃度達(dá)到最大值，但當(dāng)超聲功率從300W繼續(xù)增加到600W的過程中，Trolox 濃度反而有所下降，分析其原因可能是由于當(dāng)超聲功率增大到一定程度時，其對不結(jié)球白 菜細(xì)胞壁的破碎程度達(dá)到最大，此時其中的大部分活性成分己隨著有機(jī)溶劑溶出，如果在 這之后再繼續(xù)增強(qiáng)超聲功率就不會對Trolox濃度造成太大影響。因此，從該單因素試驗可 以得出最佳超聲功率為300W。
[0032] 在單因素試驗的基礎(chǔ)上，用響應(yīng)面法優(yōu)化不結(jié)球白菜活性物質(zhì)的超聲波提取條 件。結(jié)果表明，超聲功率、料液比和乙醇濃度對Trolox濃度的影響顯著，超聲功率與料液 比交互作用對Trolox濃度影響顯著。對Trolox濃度的影響從大到小的順序依次為超聲功 率、乙醇濃度、料液比、超聲時間。優(yōu)化后不結(jié)球白菜活性物質(zhì)的最佳提取工藝為：超聲功 率317W、超聲時間60min、料液比1:20、乙醇濃度70%。
[0033] 添加不結(jié)球白菜提取物（NCCE)的動物飼養(yǎng)試驗 試驗一：不結(jié)球白菜提取物（NCCE)對AA肉雞免疫功能及抗氧化功能的影響 1.試驗動物分組處理與飼養(yǎng)管理 試驗用雞隨機(jī)分為4組，每組3個重復(fù)，每個重復(fù)20羽，試驗期35天，4組雞飼養(yǎng)條件 一致，均采用地面平養(yǎng)，自由采食及飲水，給24h光照。對照組飼喂基礎(chǔ)日糧（玉米-豆柏 型），配制參照NRC1994《家禽的營養(yǎng)需要量》，基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平見表1。試驗組I 組、II組、III組為分別在基礎(chǔ)日糧中添加100,500,900mg/kg的不結(jié)球白菜提取物（NCCE)。 按常規(guī)免疫程序?qū)λ性囼炿u進(jìn)行免疫接種。
[0034] 表1基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平
注：a預(yù)混料向每千克日糧提供，鐵60mg，銅7. 5mg，鋅65mg，猛110mg，碘1. 1mg， 硒 0· 4mg，桿菌肽鋅 30mg，VA4 500IU，VD3 1 000IU，VK1. 3mg，VB! 2. 2mg，VB2 10 mg，VB3 10mg，氯化膽喊 400mg，VB5 50mg，VB6 4mg，VH0· 04mg，VBn1mg，VB12 1. 013 mg〇
[0035] 1. 1測定指標(biāo)及檢測方法 1.1.1生產(chǎn)性能的測定分別在21、35日齡時，將每組肉雞個體空腹稱重，統(tǒng)計耗料 量，計算各階段平均日增重、及料肉比。
[0036] 1. 1.2屠宰性能及免疫器官指數(shù)的測定肉雞在35日齡時，每組隨機(jī)選取體重 相近的健康雞9羽，早晨空腹12h，稱重，采用頸外放血致死，分別測定其屠體重、全凈膛 重、腹脂重和屠宰性能[8]，取胸腺、法氏囊及脾臟，剔出脂肪并用濾紙吸干血液后稱重，計 算免疫器官指數(shù)，免疫器官指數(shù)（g/kg)=器官重量/體重。
[0037] 1. 3. 3血清抗體和補體C3、C4的測定肉雞在35日齡時，每組隨機(jī)選取體重相 近的健康雞9羽，早晨空腹12h，心臟采血，3 000r/min離心10min，取血清采用免疫比濁 法測定抗體IgG、IgM、IgA及補體C3、C4,按試劑盒操作說明進(jìn)行試驗，試驗試劑盒均購自南 京建成生物有限公司。
[0038] 1.1.4 血清抗氧化水平的測定血清S0D活性測定采用黃嘌呤氧化物酶法、 T-A0C采用比色法測定，GSH-Px采用二硫代二硝基苯甲酸法測定、MDA含量采用硫巴比妥 酸法（TBA)測定。按試劑盒操作說明進(jìn)行試驗，試驗試劑盒均購自南京建成生物有限公司。
[0039] 1. 2數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計分析 試驗數(shù)據(jù)均為3次重復(fù)試驗結(jié)果的平均值，以平均數(shù)土標(biāo)準(zhǔn)偏差（土SD)表示。采 用SPSS19. 0軟件One-WayAN0VA方法進(jìn)行統(tǒng)計分析，并采用LSD法多重比較。
[0040] 2結(jié)果與分析 2. 1不結(jié)球白菜提取物（NCCE)對肉雞生產(chǎn)性能的影響 由表2可知，在肉雞飼養(yǎng)前期（0-21天），各試驗組與對照組間的日增重與料肉比差 異均不顯著（P>0. 05);但在飼養(yǎng)后期（21 -35天），各試驗組與對照組相比，日增重均有 所提高，其中，試驗I組和試驗II組較對照組分別提高了 4. 92%和7. 88%，具有顯著性差異 (P〈0. 05)。飼養(yǎng)后期各試驗組與對照組相比，料肉比均有所下降，其中，試驗II組與對照組 相比，料肉比降低了 9. 92%，達(dá)到了顯著性差異水平（P〈0. 05)。
[0041] 表2NCCE對肉雞日增重和料肉比的影響
注：同列數(shù)據(jù)后不同小寫字母表示差異顯著（代〇. 05)，無字母或相同字母表示差異 不顯著（/^>0.05)，下表同。
[0042] 2. 2不結(jié)球白菜提取物（NCCE)對肉雞屠宰性能的影響 由表3可知，各試驗組與對照組相比，肉雞活重均有所增加，試驗I組和試驗II組較對 照組分別增加了 3. 23%和4. 48%，達(dá)到了顯著性差異水平（P〈0. 05);各試驗組與對照組相 比，肉雞的屠宰率均有所增加，但增加不顯著（P>〇. 05);各試驗組與對照組相比，肉雞的全 凈膛率均有所增加，其中，試驗III組比對照組增加了 3. 59%，具有顯著性差異（P〈0. 05);各 試驗組與對照組相比，肉雞的腹脂率均有所下降，試驗I組、試驗II組和試驗III組較對照組 分別下降了 18. 26%、21. 58%和23. 65%，達(dá)到了顯著性差異水平（P〈0. 05)。
[0043] 表3NCCE對肉雞屠宰性能的影響
2. 3不結(jié)球白菜提取物（NCCE)對肉雞免疫器官指數(shù)的影響 由表4可知，試驗I組和試驗II組與對照組相比，肉雞的脾臟指數(shù)均有所增加，但增加 不顯著（P>0. 05);各試驗組與對照組相比，法氏囊指數(shù)均有顯著性增加（P〈0. 05);各試驗 組與對照組相比，胸腺指數(shù)也有增加趨勢，其中，試驗II組和試驗III與對照組具有顯著性差 異（Ρ〈0· 05) 〇
[0044] 表4NCCE對肉雞免疫器官指數(shù)的影響
2. 5不結(jié)球白菜提取物（NCCE)對肉雞血清免疫指標(biāo)的影響 由表5可見，與對照組相比，試驗I組和II組均能不同程度的提高肉雞血清的免疫水 平。其中血清IgG的含量分別提高了 49. 9% (Ρ〈0· 05)和63. 8% (Ρ〈0· 05);血清IgM含量分 別提高了 21% (Ρ>0· 05)和 68%(Ρ〈0· 05);血清IgA含量分別提高了 6. 4% (Ρ>0· 05)和 0· 4% (Ρ>0. 05);血清補體C3含量分別提高了 0. 2% (Ρ>0. 05)和38. 7% (Ρ〈0. 05);試驗I組血清 補體C4含量比對照提高了 27. 2% (Ρ〈0. 05)，但試