甲氰咪胍在制備自身免疫性結膜炎治療藥物中的應用
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術領域，進一步涉及物質的新的醫(yī)藥用途，具體涉及甲氰咪胍 在制備自身免疫性結膜炎治療藥物中的應用。
【背景技術】
[0002] 甲氰咪胍又名西咪替丁、泰胃美，作為可選擇性H2受體拮抗劑，在現(xiàn)有技術中主 要用于消化性潰瘍的治療，其藥理作用主要包括抑制胃酸分泌、抑制基礎和夜間胃酸分泌， 也能抑制由組胺、分肽胃泌素、胰島素和食物等刺激引起的胃酸分泌，并使其酸度降低，對 因化學刺激引起的腐蝕性胃炎有預防和保護作用，對應激性胃潰瘍和上消化道出血也有明 顯療效。西咪替丁為白色或類白色結晶性粉末；幾乎無臭，味苦；在甲醇中易溶，在乙醇中 溶解，在異丙醇中略溶，在水中微溶，在稀鹽酸中易溶。
[0003] 結膜炎是眼科常見的致盲眼病之一。按照病因可分為感染性結膜炎和非感染性結 膜炎。其中，非感染性結膜炎被認為是一類自身免疫性眼病。現(xiàn)有技術中對結膜炎的治療 方法主要為散瞳、抗炎和免疫治療，其中散瞳和抗炎主要是針對癥狀所采取的治療手段，而 免疫治療更側重于去除病因?，F(xiàn)有技術中針對結膜炎的免疫治療藥物主要為免疫抑制劑， 例如硫唑嘌呤通過競爭性的抑制腺嘌呤和鳥嘌呤，從而抑制DNA合成及RNA轉錄，減少外周 T淋巴細胞、B淋巴細胞數(shù)量，抑制免疫淋巴反應，而環(huán)磷酰胺對于靜止期和分裂期的淋巴 細胞均具有細胞毒性作用，從而抑制免疫反應。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明旨在針對現(xiàn)有技術的技術缺陷，提供甲氰咪胍在制備自身免疫性結膜炎治 療藥物中的新用途，從而為自身免疫性結膜炎的治療提供一種新的藥物選擇。
[0005] 本發(fā)明要解決的另一技術問題是擴展了甲氰咪胍作為藥物的適應癥范圍；
[0006] 本發(fā)明要解決的再一技術問題是提升自身免疫性結膜炎的治療效果。
[0007] 為解決以上技術問題，本發(fā)明采用以下技術方案：
[0008] 式⑴化合物用于制備自身免疫性結膜炎治療藥物的應用，
[0009]
[0010] 優(yōu)選地，所述藥物是以降低Thl淋巴細胞含量為藥理作用的藥物。
[0011] 優(yōu)選地，所述藥物是以降低Thl7淋巴細胞含量為藥理作用的藥物。
[0012] 優(yōu)選地，所述藥物是以抑制Thl淋巴細胞分泌IFN-γ為藥理作用的藥物。
[0013] 優(yōu)選地，所述藥物是以抑制Thl7淋巴細胞分泌IL-17A為藥理作用的藥物。
[0014] 優(yōu)選地，所述藥物是以抑制眼結膜巨噬細胞浸潤為藥理作用的藥物。
[0015] 在以上技術方案中，所述藥物是以口服形式給藥的內(nèi)用藥。本發(fā)明創(chuàng)新性的發(fā)現(xiàn) 甲氰咪胍可調節(jié)免疫系統(tǒng)效應，從而用于治療相關病理損傷。具體而言，可下調Thl細胞亞 群、Thl7細胞亞群比例，維持血眼結膜屏障完整性，抑制巨噬細胞浸潤，抑制眼內(nèi)炎癥反應。 同時能夠抑制眼結膜STATUSTAT3及其磷酸化蛋白表達量，抑制NF-κBp65的表達量，其抗 炎癥作用是通過抑制STAT1、STAT3途徑及NF-κB信號轉導通路實現(xiàn)的。
[0016] 基于甲氰咪胍的以上新性質，本發(fā)明確定了利用其治療結膜炎的新用途，臨床應 用發(fā)現(xiàn)，甲氰咪胍對自身免疫性結膜炎的治療起效快、療效確切，且未發(fā)現(xiàn)副作用，具有突 出的推廣前景。
【附圖說明】
[0017] 圖1是本發(fā)明實施例中對照組小鼠和甲氰咪胍治療組實驗動物眼底圖像；其中A 部分為對照組實驗動物眼底表現(xiàn)，B部分為甲氰咪胍治療組實驗動物眼底表現(xiàn)。
[0018] 圖2是本發(fā)明實施例中對照組小鼠和甲氰咪胍治療組實驗動物臨床評分結果。
[0019] 圖3是本發(fā)明實施例中對照組小鼠和甲氰咪胍治療組實驗動物組織學評分結果。
[0020] 圖4是本發(fā)明實施例中對照組小鼠和甲氰咪胍治療組實驗動物眼結膜血管灌注 造影眼結膜鋪片；其中A部分為對照組小鼠結果，B部分為甲氰咪胍治療組小鼠結果。
[0021] 圖5是本發(fā)明實施例中對照組小鼠和甲氰咪胍治療組實驗動物輔助T淋巴細胞亞 群分布情況圖。
【具體實施方式】
[0022] 以下將對本發(fā)明的【具體實施方式】進行詳細描述。為了避免過多不必要的細節(jié)，在 以下實施例中對屬于公知的結構或功能將不進行詳細描述。
[0023] 以下實施例中所使用的近似性語言可用于定量表述，表明在不改變基本功能的情 況下可允許數(shù)量有一定的變動。因此，用"大約"、"左右"等語言所修正的數(shù)值不限于該準 確數(shù)值本身。在一些實施例中，"大約"表示允許其修正的數(shù)值在正負百分之十（10%)的 范圍內(nèi)變化，比如，"大約1〇〇"表示的可以是90到110之間的任何數(shù)值。此外，在"大約第 一數(shù)值到第二數(shù)值"的表述中，大約同時修正第一和第二數(shù)值兩個數(shù)值。在某些情況下，近 似性語言可能與測量儀器的精度有關。
[0024] 除有定義外，以下實施例中所用的技術和科學術語具有與本發(fā)明所屬領域技術人 員普遍理解的相同含義。
[0025] 1患病模型的建立
[0026] 取6-8周齡小鼠，體重15_20g，飼養(yǎng)于標準化無特定病原體動物（SPF)級動物 房，實驗動物用標準顆粒飼料喂養(yǎng)，自由飲水攝食，室溫為（22±2)°C，，適應性飼養(yǎng)2-7d 后皮下注射乳化的IRBPi2。于模型組小鼠一側后足掌墊、雙側尾根及后臀部，共注射抗原 300μg，同時腹腔內(nèi)注射百日咳菌液1μg破壞小鼠的全身免疫耐受，以增強免疫效果，免 疫當天記作第0天（day0)。
[0027] 2給藥方式
[0028]自免疫造模前3天（day-3)開始以25mg/kg·day的劑量每日連續(xù)對甲氰咪胍組 小鼠進行灌胃給藥，直至免疫造模后第21天（day21)。由于甲氰咪胍為有機化合物，溶于 有機溶劑DMSO而不溶于PBS，故甲氰咪胍以10μ1DMS0+140μ1PBS溶解，對照組采用同樣的 方式以空白溶媒10μ1DMS0+140μ1PBS灌胃處理。
[0029] 3治療效果觀察
[0030]于免疫后第12天（day12)起每日連續(xù)觀察對照組及甲氰咪胍組小鼠眼底損傷情 況，方法為：復方托吡卡胺滴眼液充分散瞳后，使用雙目間接檢眼鏡，輔助+90D前置鏡暗室 檢查。
[0031] 于免疫后第21天（day21)對兩組小鼠進行小鼠眼底損傷的臨床評分，評分標準 見表1。由兩位眼科醫(yī)師共同對所有小鼠雙側眼底損傷情況進行隨機雙盲打分。
[0032] 表1患病小鼠臨床評分標準
[0033]
[0034] 4小鼠眼底圖像采集
[0035] 于免疫后第21天（day21)對兩組小鼠進行眼底圖像采集。用復方托吡卡胺滴眼 液充分散瞳、鹽酸奧布卡因滴眼液表面麻醉，角膜表面涂以醫(yī)用透明質酸鈉凝膠，上覆蓋玻 片消除角膜曲率的影響。以〇度耳鏡窺入眼底，計算機成像系統(tǒng)采集眼底圖像。
[0036] 分別取對照組和甲氰咪胍組小鼠眼球的HE染色切片在光學顯微鏡下觀察眼結膜 及玻璃體腔的組織結構、炎性細胞浸潤情況，并進行組織病理學評分，評分標準見表2。由兩 位眼科病理學醫(yī)師共同對兩組小鼠眼球切片分別進行隨機雙盲打分。
[0037] 表2患病小鼠組織病理學評分標準
[0038]
[0039] 5伊文思藍（EB)血管灌注造影眼結膜鋪片
[0040] 于免疫后第21天（day21)將對照組和甲氰咪胍組分別取4只小鼠，進行EB血管 灌注造影眼結膜鋪片。
[0041] (1)麻醉：稱重后10%水合氯醛以30011^/1^腹腔注射麻醉；
[0042] (2)EB注射：29G針頭穿刺入尾靜脈內(nèi)注射2%EB100μ1，循環(huán)2小時；
[0043] (3)固定：處死小鼠，摘取眼球，置于濃度為4%多聚甲醛溶液中固定3小時；
[0044] (4)剝離眼結膜：在手術顯微鏡下用角鞏膜剪于眼球角鞏膜緣后約0. 5mm處剪開， 除去角膜、虹膜，娩出晶狀體和玻璃體。將眼結膜以視盤為中心放射狀剪開4刀，置于載玻 片上，用顯微有齒鑷小心將鞏膜翻轉，完整分離出眼結膜，平鋪于載玻片上；
[0045] (5)封片：滴少許封片劑后以蓋玻片封片；
[0046] (6)照相：立即置于激光掃描共聚焦熒光顯微鏡下觀察、照相。
[0047] 6小鼠脾細胞流式細胞術
[0048] 于免疫后第21天（day21)檢測治療組小鼠和PBS對照組脾臟Thl7細胞、Thl細 胞占單個核細胞比例，Treg細胞、ThO細胞分別