一種補骨脂提取物及其制備方法和用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及中藥領(lǐng)域，具體而言，本發(fā)明涉及中草藥補骨脂鮮品或干品的提取物 及其制備方法以及這種提取物作為藥物的用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 補骨脂（Psoralea corilifolia Linn.)為豆科補骨脂屬植物成熟果實，性溫，味 辛、苦，有補腎助陽，納氣止瀉之功效?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究證明，補骨脂具有多種藥理活性，如 抗癌活性，雌激素樣作用，提高免疫系統(tǒng)的功能，促進骨骼的再生與重建，抑菌等。其中補骨 脂提取物用于骨質(zhì)疏松癥的防治具有悠久的歷史，在傳統(tǒng)的中醫(yī)方劑中均有體現(xiàn)，近年來 用補骨脂提取物或是含補骨脂的方劑治療骨質(zhì)疏松已經(jīng)成為骨科基礎(chǔ)研究的領(lǐng)域熱點之 〇
[0003] 補骨脂酚最早由Mehta等于1966年從補骨脂種子中分離得到，至今仍主要從補骨 脂種子等其他豆科植物和蝶形花科植物中提取分離。眾多文獻研究表明，補骨脂酚在補骨 脂中的含量較高。有關(guān)補骨脂酚的合成研究也有相關(guān)報道，使得補骨脂酚的來源比較豐富。 補骨脂酚屬單萜烯化合物，易氧化，具有隨水蒸氣溢出的性質(zhì)。常溫下為淺黃色油狀液體。 其具有如下結(jié)構(gòu)式：
[0005] 中國申請專利200510051551. 1《包含補骨脂酚的用于治療婦女乳癌的醫(yī)藥組合 物》與專利200510051550. 7《包含補骨脂酚的用于治療婦女骨質(zhì)疏松癥的醫(yī)藥組合物》中研 究表明補骨脂酚具有治療骨質(zhì)疏松與預(yù)防婦女乳癌的作用。補骨脂酚通過激活受體ERP， 從而抑制腫瘤細胞的增殖，同時補骨脂酚能促進骨骼細胞的再生達到治療骨質(zhì)疏松與預(yù)防 乳癌的多重功效，因此目前在該領(lǐng)域，制備不含補骨脂素與異補骨脂素，同時高含量的補骨 脂酚制備方法是目前開發(fā)其制備工藝的熱點。但是在制備方法中，如專利200680024989. 3 《補骨脂酚的組合物及其制備方法》中制備補骨脂酚的方法采用了大量的有機溶劑，如石 油醚等有機溶劑提取，在安全上與環(huán)境污染上帶來較大影響，同時其所得補骨脂酚的收率 較低（原料中補骨脂酚：產(chǎn)品中補骨脂酚=23-37% )，即原料中的補骨脂酚在制備過程中 有較多的損失，并不是理想的生產(chǎn)工藝。專利200810182713. 9《補骨脂提取物、含有它的 藥物組合物及制備方法和用途》中制備成產(chǎn)品最高補骨脂酚含量在71%，其提取物產(chǎn)率為 6. 99% (補骨脂酚：藥材），但是工藝中不斷調(diào)酸調(diào)堿，工藝較復(fù)雜，因補骨脂酚長時間在強 堿性體系的不穩(wěn)定性會造成原料中補骨脂酚的損失，因此仍然有進一步的提高產(chǎn)品中補骨 脂酚含量與收率的空間，以使制備工藝更加適合工業(yè)生產(chǎn)。
[0006] 本發(fā)明的目的是尋找種從中藥材補骨脂中分離提取不含補骨脂素與異補骨脂素， 同時補骨脂酚重量含量在80%以上，產(chǎn)品收率在10% (補骨脂酚：藥材）以上的補骨脂提 取物制備方法。并以此高補骨脂酚含量的提取物，或含它的配方組合測定其對骨質(zhì)疏松治 療效果。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 因此，本發(fā)明的目的是提供了一種補骨脂鮮品或干品的提取物；
[0008] 本發(fā)明的另一發(fā)明目的是提供了一種制備補骨脂提取物的方法；
[0009] 本發(fā)明的另一發(fā)明目的是提供了含有本發(fā)明提取物的藥物組合物；
[0010] 本發(fā)明的另一發(fā)明目的是提供了補骨脂提取物用于制備增加骨質(zhì)疏松癥的骨密 度，用于預(yù)防和治療骨質(zhì)疏松的藥物或保健品方面的用途；
[0011] 本發(fā)明是通過下述方法實現(xiàn)的：
[0012] 為了找到一種從中藥材補骨脂中富集高含量補骨脂酚同時不含補骨脂素與異補 骨脂素的簡便、經(jīng)濟，且提取物中補骨脂酚經(jīng)HPLC重量含量大于80%，收率在10%以上的 方法。本發(fā)明采用堿水解，和大孔樹脂富集相結(jié)合得到相關(guān)規(guī)格補骨脂提取物。并以此高 補骨脂酚含量的提取物，或含它的配方組合測定其對骨質(zhì)疏松的治療效果。
[0013] 其技術(shù)方案如下：
[0014] (1)補骨脂全草的鮮品或干品經(jīng)體積分數(shù)80-85 %的醇浸泡過夜，回流提取2-3 次，每次1-2小時；
[0015] (2)將步驟⑴濾液中的醇除去，加入質(zhì)量分數(shù)0.2-2 %的堿液，室溫下水解 3〇-80min ；
[0016] (3)經(jīng)步驟（2)處理的水解樣品經(jīng)大孔樹脂柱洗脫，去離子水、體積分數(shù)30-60% 的醇、體積分數(shù)95 %的醇洗脫，濃縮干燥得到提取物。
[0017] 所述大孔樹脂為D101、AB-8、UniPS 30、UniPS 50樹脂中一種。
[0018] 所述醇選自甲醇、乙醇、異丙醇或正丁醇中的一種或幾種；所述堿為氫氧化鈉，碳 酸鈉或氫氧化鈣中的一種或幾種。
[0019] 所述含量分析按高效液相色譜法測定。色譜條件以十八烷基鍵合硅膠為填充劑， 以甲醇-水為流動相梯度洗脫，檢測波長為246nm，理論塔板數(shù)按補骨脂酚計算應(yīng)不低于 3000 〇
[0020] 所述藥物復(fù)配組合，主要指包含該專利中制備所得補骨脂提取物與常規(guī)治療和預(yù) 防骨質(zhì)疏松的藥物如大豆異黃酮，斷續(xù)等復(fù)配組合。
[0021] 經(jīng)研究表明，本發(fā)明的補骨脂提取物與能顯著增加斑馬魚骨質(zhì)疏松癥的骨密度和 促進正常斑馬魚的骨骼發(fā)育鈣化的作用。因此，可以預(yù)期本發(fā)明的補骨脂提取物或含有它 的藥物組合物可以用于治療骨質(zhì)疏松?；蛘撸景l(fā)明的補骨脂提取物或含有它的藥物組合 物可用于制備藥物，該藥物用于治療骨質(zhì)疏松或骨骼發(fā)育鈣化作用。
【附圖說明】
[0022] 圖1是原料中補骨脂酚、補骨脂素與異補骨脂素 HPLC圖譜
[0023] 圖2是提取物B-I中補骨脂酚HPLC圖譜
[0024] 圖3是提取物B-2中補骨脂酚HPLC圖譜
[0025] 圖4是提取物B-3中補骨脂酚HPLC圖譜
[0026] 圖5是提取物B-4中補骨脂酚HPLC圖譜
[0027] 圖6是本發(fā)明方法所得補骨脂提取物增加骨質(zhì)疏松癥斑馬魚骨密度的表型圖
[0028] 圖7是本發(fā)明方法所得補骨脂提取物促進正常斑馬魚骨骼發(fā)育鈣化的表型圖
[0029] 其中A-補骨脂酚、B-補骨脂素、C-異補骨脂素；實線框定區(qū)域為截取圖片部分， 虛線框定區(qū)域為定量分析部分；1-空白組、2-模型組、3-陰性對照組、4-依替膦酸二鈉、 5-0. 05 μ g/mL、6_0. 17 μ g/mL、7_0. 5 μ g/mL、8_ 維生素 D3。 實施例
[0030] 下面通過實施例對本發(fā)明作進一步說明。應(yīng)該理解的是，本發(fā)明實施例所述方 法僅僅是用于說明本發(fā)明，而不是對本發(fā)明的限制，在本發(fā)明的構(gòu)思前提下對本發(fā)明制備 方法的簡單改進都屬于本發(fā)明要求保護的范圍。實施例中用到的所有原料和溶劑，除有 特殊說明之外，均購自 Sigma Biochemical and Organic Compounds for Research and Diagnostic Clinical Reagents 公司。
[0031] 實施例一：
[0032] 將500g補骨脂藥材（購自南方藥材有限公司），加入4000mL80-85%乙醇浸泡過 夜，回流提取2小時，提取2次，傾出提取液，藥渣再加入4000mL 80-85%乙醇回流提取2小 時，提取液合并后過濾，將濾液回收乙醇至盡，不斷攪拌下加入0. 2 %的氫氧化鈉水溶液至 完全溶解后在室溫水解30min，直接上預(yù)處理好的大孔吸附樹脂（D101)(天津南開大學(xué)化 工廠），流速lh/BV (BV :樹脂床體積），上柱完畢用6BV去離子水沖洗，然后用2BV 60 %乙醇 沖洗樹脂，最后用4BV 95%乙醇洗脫，洗脫液濃縮回收乙醇至盡得油狀本發(fā)明補骨脂提取 物 63. 5g，批號 B-1。
[0033] 實施例二：
[0034] 將500g補骨脂藥材（購自南方藥材有限公司），加入4000mL80-85%乙醇浸泡過 夜，回流提取2小時，提取3次，傾出提取液，藥渣再加入4000mL 80-85%乙醇回流提取2小 時，提取液合并后過濾，將濾液回收乙醇至盡，不斷攪拌下加入0. 5 %的氫氧化鈉水溶液至 完全溶解后在室溫水解40min，直接上預(yù)處理好的大孔吸附樹脂（D101)(天津南開大學(xué)化 工廠），流速l_2h/BV (BV :樹脂床體積），上柱完畢用6BV去離子水沖洗，然后用2BV 60 %乙 醇沖洗樹脂，最后用4BV 95%乙醇洗脫，洗脫液濃縮回收乙醇至盡得油狀本發(fā)明補骨脂提 取物61.8g，批號B-2。
[0035] 實施例三：
[0036] 將500g補骨脂藥材（購自南方藥材有限公司），加入4000mL80-85%乙醇浸泡過 夜，回流提取2小時，提取2次，傾出提取液，藥渣再加入4000mL 80-85%乙醇回流提取2 小時，提取液合并后過濾，將濾液回收乙醇至盡，不斷攪拌下加入1 %的氫氧化鈉水溶液至 完全溶解后室溫水解60min，直接上預(yù)處理好的大孔吸附樹脂（D101)(天津南開大學(xué)化工 廠），流速l_2h/BV (BV :樹脂床體積），上柱完畢用6BV去離子水沖洗，然后用2BV 60 %乙醇 沖洗樹脂，最后用4BV 95%乙醇洗脫，洗脫液濃縮回收乙醇至盡得油狀本發(fā)明補骨脂提取 物 61.6g，批號 B-3。
[0037] 實施例四：
[0038] 將500g補骨脂藥材（購自南方藥材有限公司），加入4000mL80-85%乙醇浸泡過 夜，回流提取2小時，提取3次，傾出提取液，藥渣再加入4000mL 80-85%乙醇回流提取2小 時，提取液合并后過濾，將濾液回收乙醇至盡，不斷攪拌下加入1. 5%的氫氧化鈉水溶液至 完全溶解后室溫水解80min，直接上預(yù)處理好的大孔吸附樹脂（DlOl)(天津南開大學(xué)化工 廠），流速l_2h/BV (BV :樹脂床體積），上柱完畢用6BV去離子水沖洗，然后用2BV 60 %乙醇 沖洗樹脂，最后用4BV 95%乙醇洗脫，洗脫液濃縮回收乙醇至盡得油狀本發(fā)明補骨脂提取 物 62. 4g，批號 B-4。
[0039] 實施例五：
[0040] 使用高效液相色譜法對本發(fā)明補骨脂提取物中的成分進行了分析和含量測定。所 用的色譜條件如下：以十八烷基鍵合硅膠為填充劑，以甲醇-水為流動相梯度洗脫，檢