構(gòu)(2)，以膠帶(19和20)密封后，組裝形成微流控芯片。頂板和底板的成型材料為聚合物，包含但不限于聚苯乙烯、聚氯乙烯、聚丙烯、環(huán)氧樹脂等，膠帶可為雙面膠或單面膠，其中雙面膠可用兩片單面膠替代。如圖1所示，頂板結(jié)構(gòu)由氣栗(3)、加樣口(4)、標(biāo)記抗體存儲池(5)、蓋子(11)、樣本填充區(qū)(12)和樣本混合區(qū)(13)組成。底板結(jié)構(gòu)由過濾區(qū)￠)、磁顆粒包被區(qū)(7)、檢測區(qū)(8)、清洗液存儲池(9)、發(fā)光基底液存儲池(10)、清洗區(qū)(14)、廢液池(15)和液體釋放通道(16)。如圖2所示，在發(fā)光基底液和清洗液存儲池區(qū)域，以及磁鐵滑軌區(qū)域，在頂板上需留出存儲池和磁鐵滑軌的讓位孔(分別為17和18)，在雙膠帶上應(yīng)留出存儲池和樣本混合液流入過濾區(qū)時的讓位孔(分別為21和22)。
[0027]本發(fā)明的存儲池為液體密封池，所用密封材料包含玻璃、塑料、橡膠、鋁箔和高阻隔薄膜，其中密封材料可為同種材料組成，也可為多種材料組合而成。在物理擠壓下，存儲池可局部破裂，從而把密封的液體釋放出來。其中酶標(biāo)配體存儲池、清洗液存儲池、發(fā)光基底液存儲池可采用相同或不同材料和方法制作。在本發(fā)明的一個實(shí)施例中，酶標(biāo)配體存儲池、清洗液存儲池、發(fā)光基底液存儲池均采用塑料和彈性橡膠密封而成。本發(fā)明的另一個實(shí)施例中，酶標(biāo)配體存儲池采用塑料和彈性橡膠密封而成，而清洗液存儲池、發(fā)光基底液存儲池采用高阻隔薄膜密封而成。
[0028]本發(fā)明的過濾區(qū)包含濾血膜，其中濾血膜可通過物理孔徑或生物/化學(xué)試劑使液體與細(xì)胞分離，實(shí)現(xiàn)血漿與紅細(xì)胞分離，血漿流到磁顆粒包被區(qū)，而紅細(xì)胞停留在濾血膜上，從而減少紅細(xì)胞對試驗(yàn)結(jié)果的干擾。其中所述生物/化學(xué)試劑包含凝血劑等，可使紅細(xì)胞間連接，形成凝塊，增大尺寸，更容易被濾血膜的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)阻擋。
[0029]本發(fā)明的微流控芯片，當(dāng)存在發(fā)光基底液存儲池A(23)和發(fā)光基底液存儲池B (24)，應(yīng)在底板上增加發(fā)光基底液預(yù)混合通道(25)，該預(yù)混合通道可為蛇形通道或上下結(jié)構(gòu)混合通道，如圖3所示。
[0030]在一個實(shí)施例中，標(biāo)記抗體存儲池(5)封入HRP標(biāo)記抗NT-proBNP抗體，包被區(qū)包被磁顆粒標(biāo)記抗NT-proBNP抗體(與酶標(biāo)抗體不同)，以磁微粒酶促化學(xué)發(fā)光法檢測NT-proBNP。另一個實(shí)施例中，標(biāo)記抗體存儲池(5)封入吖啶酯標(biāo)記抗NT-proBNP抗體，包被區(qū)包被磁顆粒標(biāo)記抗NT-proBNP抗體(與吖啶酯標(biāo)記抗體不同)，以磁微粒酶促化學(xué)發(fā)光法檢測 NT-proBNP。
[0031]本發(fā)明的清洗液，用于清洗磁顆粒，去除非特異性吸附的NT-proBNP、酶或發(fā)光劑標(biāo)記物及其他影響檢測結(jié)果的物質(zhì)。清洗液主要包含緩沖體系、蛋白質(zhì)、表面活性劑和防腐劑，其中緩沖體系包含但不限于硼酸鹽、磷酸鹽、Tris-HCl和醋酸鹽等。清洗液pH 6.0?10.0，當(dāng)檢測樣本為強(qiáng)酸或強(qiáng)堿性時，pH范圍可放寬。其中蛋白質(zhì)包含但不限于牛血清白蛋白、酪蛋白等。其中表面活性包含但不限于可包括吐溫20、吐溫80、曲拉通X-100、聚乙二醇和聚乙烯基吡咯烷酮等。
[0032]作為優(yōu)選，本發(fā)明一個實(shí)施例中，清洗液為包含牛血清白蛋白、曲拉通X-100和Proclin300的pH7.0 Tris-HCl緩沖液。另一個實(shí)施例中，清洗液為牛血清白蛋白、吐溫20、曲拉通X-100和Proclin300的ρΗ7.4磷酸鹽緩沖液。
[0033]本發(fā)明的樣本體積在10?500 μ 1，優(yōu)選20?100 μ 1。作為優(yōu)選，在實(shí)施例中加樣體積為50 μ 1。
[0034]本發(fā)明的微流控芯片為快速檢測，檢測時間應(yīng)小于30分鐘，作為優(yōu)選，實(shí)施例中采用15分鐘。
[0035]本發(fā)明的抗體儀器包含擠壓氣栗和存儲池，磁鐵移動，發(fā)光檢測系統(tǒng)等功能，應(yīng)可包含擠壓裝置、磁鐵及移動裝置、檢測系統(tǒng)、控制分析模塊和軟件系統(tǒng)。
[0036]本發(fā)明所述微流控芯片的測試流程包括:
[0037]步驟1)將全血樣本滴入加樣口(4)后，微流控芯片放入配套儀器中，從標(biāo)記配體存儲池(5)釋放酶或發(fā)光劑標(biāo)記抗NT-proBNP抗體，擠壓氣栗(3)使樣本經(jīng)樣本填充區(qū)
(12)和酶或發(fā)光劑標(biāo)記抗NT-proBNP抗體在樣本混合區(qū)(13)混合均勻，然后注入底板過濾區(qū)⑶；
[0038]步驟2)樣本經(jīng)過濾區(qū)后，溶解磁顆粒包被區(qū)(7)包被的磁顆粒標(biāo)記抗NT-proBNP抗體，充分反應(yīng)后磁鐵收集磁顆粒，清洗液存儲池(9)釋放清洗液，將磁顆粒清洗后，移至檢測區(qū)，發(fā)光基底液存儲池(10)釋放發(fā)光基底液，儀器檢測系統(tǒng)檢測發(fā)光信號強(qiáng)度，進(jìn)而實(shí)現(xiàn)NT-proBNP的定量檢測。
[0039]本發(fā)明可應(yīng)用于心血管疾病尤其是心力衰竭中NT-proBNP的定量檢測。
[0040]本發(fā)明的核心是采用磁微?；瘜W(xué)發(fā)光免疫檢測技術(shù)在微流控芯片實(shí)現(xiàn)NT-proBNP的快速、高靈敏度、準(zhǔn)確定量檢測。
[0041]微流控芯片技術(shù)是把生物、化學(xué)、醫(yī)學(xué)分析過程的樣品制備、反應(yīng)、分離、檢測等基本操作單元集成到一塊微米尺度的芯片上，自動完成分析全過程。
[0042]本發(fā)明在微流控芯片將檢測過程所需的所有試劑組分(酶標(biāo)抗體、磁顆粒標(biāo)記抗體、清洗液、發(fā)光基底液等)均集成、內(nèi)置到微流控芯片中，并通過巧妙溝道設(shè)計(jì)，在配套儀器的操作下，實(shí)現(xiàn)微流控芯片的一鍵式檢測(只需按開始鍵就能實(shí)現(xiàn)檢測，無需復(fù)雜操作)，實(shí)現(xiàn)全血分離、免疫反應(yīng)、清洗分離、化學(xué)發(fā)光檢測，從而避免了現(xiàn)有微流控芯片中結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)簡單、檢測時操作復(fù)雜等不足和缺陷。還克服了傳統(tǒng)化學(xué)發(fā)光儀只能進(jìn)行血清或血漿檢測，而不能對全血樣本進(jìn)行檢測的缺點(diǎn)。
[0043]由于磁顆粒易沉淀，傳統(tǒng)化學(xué)發(fā)光儀采用手工混合，并以持續(xù)振蕩維持磁顆粒的懸浮狀態(tài)，但微流控芯片內(nèi)磁顆?；炀僮麟y以在小型便攜儀器中實(shí)現(xiàn)。
[0044]本發(fā)明將磁顆粒包被、干燥于微流控芯片溝道中，并設(shè)計(jì)了磁鐵主動驅(qū)動磁顆粒(而傳統(tǒng)微流控芯片一般采用流體驅(qū)動或電驅(qū)動)，從而使磁顆粒復(fù)溶，并在微流控芯片不同區(qū)域?qū)崿F(xiàn)免疫反應(yīng)、清洗、發(fā)光。此設(shè)計(jì)不僅解決了磁顆粒應(yīng)用于微流控芯片時易沉淀、重復(fù)性差等問題，還實(shí)現(xiàn)了更可控的免疫反應(yīng)和物理清洗，提高了靈敏度和重復(fù)性。其中磁鐵磁性和磁顆粒尺寸對檢測效果了明顯影響，本發(fā)明選擇磁鐵磁感應(yīng)強(qiáng)度為500?30000高斯，優(yōu)選1000?8000高斯；磁顆粒尺寸為0.1?10 μπι，優(yōu)選1?3 μπι。
[0045]本發(fā)明中微流控芯片配套儀器與微流控芯片無液體接觸，無需要清洗的部件，避免了傳統(tǒng)大型化學(xué)發(fā)光儀需要攪拌或加樣、清洗等操作而產(chǎn)生的交叉干擾及污染。
[0046]所以本發(fā)明并非簡單疊加磁微?；瘜W(xué)發(fā)光技術(shù)和微流控芯片技術(shù)，而是通過液體密封設(shè)計(jì)、溝道設(shè)計(jì)，把檢測所需所有化學(xué)組分集成、內(nèi)置到微流控芯片中，并以磁鐵主動驅(qū)動，實(shí)現(xiàn)一鍵式的磁微粒化學(xué)發(fā)光免疫檢測，從而在便攜配套儀器中實(shí)現(xiàn)NT-proBNP的快速、高靈敏度、準(zhǔn)確定量檢測。
[0047]本發(fā)明的主要優(yōu)點(diǎn)如下:
[0048]1)本發(fā)明采用化學(xué)發(fā)光方法，具有背景低、靈敏度高、線性范圍寬的優(yōu)點(diǎn)。
[0049]2)本發(fā)明采用磁顆粒技術(shù)，具有磁富集功能，增強(qiáng)并放大信號；并能利用磁鐵把磁顆粒轉(zhuǎn)移區(qū)域(如由包被區(qū)-清洗區(qū)-檢測區(qū))，減少樣本基質(zhì)的影響。
[0050]3)本發(fā)明采用微流控芯片技術(shù)，把樣本混合、反應(yīng)、分離和檢測集成在芯片上，并把反應(yīng)所需的所有試劑組分集成到芯片上。
[0051]4)本發(fā)明操作簡便，檢測時，只需加入樣本，蓋上蓋子，把芯片放入小型便攜配套儀器中即可。
[0052]5)本發(fā)明配套儀器是小型便攜儀器，儀器只與芯片發(fā)生物理接觸，芯片內(nèi)液體不與儀器接觸，不會污染儀器而產(chǎn)生交叉干擾。
【附圖說明】
[0053]圖1為微流控芯片主體結(jié)構(gòu)示意圖，