、具有生物膜性的閉合結(jié)構(gòu) 和細(xì)胞區(qū)室。
[0027] 作為優(yōu)選，所述的步驟3)制得的材料溶解在氯仿溶劑中，加入到容器內(nèi)，減壓蒸 發(fā)使得生物膜在容器表面上鋪展，蒸發(fā)至恒重后加入PBS緩沖溶液并緩慢搖動(dòng)0. 5~3h，于 100, 000~200, OOOXg，30~90min，1~6°C條件下超速離心，棄上清，收集沉淀，即為所需的生 物膜、具有生物膜性的閉合結(jié)構(gòu)和細(xì)胞區(qū)室。
[0028] 本發(fā)明生物膜、具有生物膜性的閉合結(jié)構(gòu)或細(xì)胞區(qū)室的脂質(zhì)雙分子結(jié)構(gòu)使得其與 細(xì)胞膜具有很好的相似相容性，能被細(xì)胞膜吸附，再通過膜的融合或細(xì)胞的內(nèi)吞作用，偶爾 也通過直接滲透作用，因而可以作為外源物質(zhì)如DNA進(jìn)入細(xì)胞的載體。DNA傳遞進(jìn)入細(xì)胞， 形成包涵體或進(jìn)入溶酶體，其中一小部分DNA能從包涵體內(nèi)釋放并進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)中，再進(jìn)一 步進(jìn)入核內(nèi)轉(zhuǎn)錄、表達(dá)。同時(shí)，生物膜的天然來源性，幾乎不產(chǎn)生細(xì)胞毒性。
【附圖說明】
[0029] 圖1為乙型肝炎表面抗原含量。
[0030] 圖2為苯乙基間苯二酚一生物膜使用效果圖。
[0031] 圖3為不同時(shí)間下透皮吸收濃度。
[0032] 圖4黑色素合成抑制率。
【具體實(shí)施方式】
[0033] 下面結(jié)合具體實(shí)施例及附圖，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)當(dāng)理解，這些實(shí)施例僅用于說 明本發(fā)明而不能用于限制本發(fā)明的范圍。下列實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，通常 按照常規(guī)條件，或按照制造廠商所建議的條件。
[0034] 實(shí)施例1生物膜的提取、純化 采用密度梯度離心法提取、純化得到所需的生物膜。具體過程如下： (1) 將斷食18_24h的新西蘭大白兔處死取肝臟，去掉大的血管后，將肝臟剪成2mm3左 右的小塊，并用生理鹽水沖洗至組織塊變白； (2) 制備勻漿液：lmmol/L CaCl2,50mmol/L HEPES(pH 7.4)，lmmol/L PMSF，2yg/mL 抑 肽酶，2 y g/mL Antipain ; (3) 將肝臟組織和勻漿液按質(zhì)量：體積的比例加入8倍體積的勻漿液，并在冰浴環(huán)境中 用電動(dòng)勻漿機(jī)15, OOOrpm勻漿至組織液化； (4) 將勻漿液經(jīng)四層紗布過濾，濾液在1，000Xg，10min，4°C條件下離心，收集沉淀； (5) 沉淀用鹿糖溶液A (0. 3mol/L鹿糖，50mmol/L Tris，3mmol/L MgCl2)充分懸浮沉 淀，加入9倍體積的鹿糖溶液B (2mol/L鹿糖，50mmol/L Tris，3mmol/L MgCl2)，上層用鹿 糖溶液 C (0? 25mol/L 鹿糖，10mmol/L HEPES, lmmol/L EDTA)填滿離心管，在 90, 000Xg， 150min，4°C條件下離心，收集上層膜層； (6) 該膜層用洗液（50mmol/L HEPES，lmmol/L PMSF，2 y g/mL 抑肽酶，2 y g/mL Antipain)洗滌，在90, 000X g，60min，4°C條件下離心，收集沉淀，即為所需的生物膜。
[0035] 實(shí)施例2生物膜的提取、純化 采用兩相分配法提取、純化得到所需的生物膜。具體過程如下： (1) 篩選飽滿一致的正常玉米種子，經(jīng)l%NaC10浸泡消毒lOmin，沖洗干凈，在25°C恒溫 黑暗條件下催芽72h ; (2) 取玉米上胚軸，以質(zhì)量：體積的比例加入2倍體積的提取緩沖液（5mmol/L EDTA， 25mmol/L Tris，0.25mmol/L 蔗糖，lmmol/L MgSO4,0.2% (W/V)BSA，0.5% (W/V)PVP-10,10% (W/V)甘油，15mmol/L 0 -疏基乙醇，lmmol/L PMSF，lmmol/L DTT)，冰浴研磨至液化； (3) 將研磨液經(jīng)四層紗布過濾，濾液在12, OOOXg，15min，4°C條件下離心，取上清液； (4) 上清液在80, 000乂8,301^11，4°(：條件下離心，收集沉淀； (5) 沉淀用懸浮液（25mmol/L Tris，0.25mmol/L 蔗糖，0.2% (W/V)BSA，10% (W/V)甘 露醇，lmmol/L DTT)充分懸浮沉淀； (6) 將懸浮液加入兩相系統(tǒng)(每IOg兩相系統(tǒng)中含：1.7g蔗糖，0. 003g DTT，2. 25mL 水，50mmol/L KCl 0.5mL，1.63 PEG，3.25g Dextran T_500,200mmol/L PBS 0.5mL)，上下 搖勻50次，在4, 000 X g，5min，4°C條件下離心，取上相和下相繼續(xù)進(jìn)入兩相系統(tǒng)，分離三次 后合并上相，稀釋5倍后，在80, 000X g，60min，4°C條件下離心，收集沉淀，即為所需的生物 膜。
[0036] 實(shí)施例3生物膜的提取、純化 采用差速離心法提取、純化得到所需的生物膜。具體過程如下： (1) 南極冰藻（si/Acawt/a te)是從南極海冰中分離純化而來； (2) 將南極冰藻按1:100的比例接種到培養(yǎng)基中（每10L培養(yǎng)基中含21. 2g NaCl，3. 6g NaSO4,0.6g KC1,0. 3g NaHCO3,0.1 g KBr,0.1 g H3BO3, 0.1 g NaF, 9. 6g MgCl2 ? 6H20,1. Og CaCl2,0.1 g SrCl2 ? 6H20)，置于可控光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。在-4°C，光強(qiáng)為1300~19001x，光 照周期12明/12暗，每天搖動(dòng)4~5次條件下培養(yǎng)14天； (3) 將冰藻培養(yǎng)液在4, OOOrpm，20min，4°C條件下離心，收集冰藻沉淀，并用預(yù)冷的蒸餾 水迅速?zèng)_洗2次，以除去細(xì)胞外黏稠物、表面鹽分及培養(yǎng)液中的雜質(zhì)； (4) 將上述收集到的冰藻沉淀按質(zhì)量：體積的比例加入4倍體積的勻漿緩沖液 (0.5mol/L K0H，0.5mol/L 蔗糖，3mmol/L EDTA，0. 6% PVP，lmmol/L PMSF，lmmol/L DTT， 5mmol/L抗壞血酸，0.6% BSA)，用擠壓式細(xì)胞破碎儀破碎細(xì)胞； (5) 將得到的細(xì)胞勻漿液在8, OOOrpm，20min，4°C條件下離心，收集上清液； (6) 上清液在145,000\8,601^11，4°(：條件下離心，收集沉淀，即為所需的生物膜。
[0037] 實(shí)施例4細(xì)胞區(qū)室的分離、純化 采用雙相萃取法分離、純化得到所需的細(xì)胞區(qū)室。具體過程如下： (1) 水雙相系統(tǒng)的制備：將混合物(每300g中含90g 20%(W/W)Dextran T-500,45g 40% (W/W)PEG 3350,33.9g 蔗糖，7.5g 0.2mmol/L PBS，0.45g 2mmol/L KC1)在離心管中混合 均勻，制成等濃度葡聚糖/聚乙二醇（Dextran T-500 / PEG 3350)的水雙相混合物，于分 液漏斗中混合均勻，4°C靜置過夜分層，小心分離上下層，制成新鮮的上相和下相，于4°C分 別保存，用于后續(xù)純化步驟； (2) 將實(shí)施例3中獲得的生物膜沉淀用重懸浮緩沖液（5mmol/L PBS，0. 33mol/L蔗糖， 3mmol/L KC1，lmmol/L DIT，lmmol/L PMSF，0. lmmol/L EDTA)重懸浮； (3) 將上述重懸浮液以質(zhì)量比1:3的比例加到步驟（I)中制備的Dextran T-500 / PEG 3350水雙相混合物中，上下輕輕顛倒30~40次混合均勻； (4)混合液在1，500rpm，10min，4°C條件下離心，取上相液和下相液繼續(xù)進(jìn)入兩相系統(tǒng)， 分離三次后合并上相分離液，稀釋5倍后，在100,000Xg，60min，4°C條件下離心，收集沉 淀，即為所需的細(xì)胞區(qū)室，且富含類囊體。
[0038] 實(shí)施例5細(xì)胞區(qū)室的分離、純化 采用密度梯度離心法分離、純化得到所需的細(xì)胞區(qū)室。具體過程如下： (1) 選取IOg生長(zhǎng)健壯，最好是連續(xù)幾個(gè)晴天下生長(zhǎng)的菠菜葉片，洗凈后去除中脈，按 質(zhì)量：體積的比例加入6倍體積的提取緩沖液（50mmol/L磷酸鉀緩沖液，0. 3mmol/L山梨 醇，2mmol/L EDTA, lmmol/L MgCl2, lmmol/L MnCl2,1% BSA, lmmol/L DTT)，冰浴研磨； (2) 配置 Percoll 分層液（50mmol/L HEPES-K0H，0.3mmol/L 山梨醇，2mmol/L EDTA， lmmol/L MgCl2, lmmol/L MnCl2，l% BSA，3%PEG 6000, l%Ficoll)，在 30, OOOXgJOminJcC 條件下預(yù)先離心； (3) 將研磨液四層紗布過濾，在3, 000Xg，15min，4°C條件下離心，收集沉淀，沉淀用 2ml提取緩沖液懸浮，并置于步驟（2)離心過的Percoll分層液上，在15, 000 X g，20min，4°C 條件下離心，吸取下層，即為所需的細(xì)胞區(qū)室，且富含葉綠體。
[0039] 實(shí)施例6生物膜的制備 采用自組裝技術(shù)制備所需的生物膜。具體過程如下： (1) 將上述實(shí)施例1或?qū)嵤├?或者實(shí)施例3中得到的生物膜溶解在足量的氯仿溶劑 中； (2) 將上述生物膜氯仿溶液加入到圓底燒瓶?jī)?nèi)，減壓蒸發(fā)使得生物膜在燒瓶表面上鋪 展，蒸發(fā)至恒重后加入PBS緩沖溶液并緩慢搖動(dòng)2h ; (3) 將上述溶液在6, OOOrpm，20min，4 °C條件下離心，收集沉淀，并用重懸緩沖液 (20mmol/L Tris,0. lmol/L NaCl,2mmol/L MgCl2, lmmol/L DTT)重懸沉淀； (4) 將重