，221：在N2保護(hù)下攪拌5h，過濾除氫 化鈉，旋蒸除甲苯，真空干燥12h，得C 6tl丙二酸酯衍生物；將衍生物C6tl丙二酸酯衍生物溶于 30ml甲苯，加入380mg氫化鈉，80°C在隊(duì)保護(hù)下油浴反應(yīng)IOh ;除去甲苯，加20ml濃鹽酸過 濾，得濾餅，將濾餅溶于50ml甲醇中，過濾除去甲醇不溶物，旋蒸除去甲醇，50°C真空干燥 得丙二酸取代的C 6tl即C 6Q-C00H ; 稱取C6Q-C00H50mg充分溶解于IOml由乙二醇和二縮醇組成的混合溶劑中，乙二醇和二 縮醇的體積比為1:19,加入醋酸鈉0. 75g，硫酸鐵0. 27g，超聲溶解，然后將所得溶液轉(zhuǎn)移至 反應(yīng)釜中，200°C反應(yīng)10h，冷至室溫，反應(yīng)產(chǎn)物用無水乙醇洗絳3次，水洗3次，真空干燥，得 四氧化三鐵負(fù)載的C 6tl,即C6tl-Fe3O4; 2) 氨基化核殼式上轉(zhuǎn)換熒光材料的合成（UCNPs-NH2):將0. 40g的GdCl3 ? 6H20,0. 06g 的Yb2O3和0. 04g的TmCl 3 ? 6H20置于50ml三口燒瓶中，加8ml油酸，Ilml十八碳烯，先升 溫到160°C，保持30分鐘，降至室溫，成混合溶液，將含有0. 10gNa0H，0. 15gMgFj^甲醇溶 液加入混合溶液中，在20°C反應(yīng)30分鐘，除去甲醇，210°C反應(yīng)3h，冷至室溫，再加入丙酮 20ml，12000r/min離心10分鐘，得沉淀，沉淀用無水乙醇洗3次，重新分散于正己烷中，即得 NaGdF 4: Yb, Tm上轉(zhuǎn)換材料；以NaGdF4: Yb, Tm上轉(zhuǎn)換材料為內(nèi)核，按上述制備NaGdF4: Yb, Tm方法再合成外層上轉(zhuǎn)換材料，得核殼式上轉(zhuǎn)換熒光材料； 稱取0. 02g上述核殼式上轉(zhuǎn)換熒光材料，溶于70ml乙醇中，超聲完全溶解，置于35°C 水浴中，加體積濃度為15%的NH3 ? H2OlOml攪拌10分鐘，加正硅酸乙酯40 y 1，攪拌2h，然 后加3-氨丙基三乙氧基硅烷0. 2ml，攪拌4h，12000r/min離心，得沉淀，用無水乙醇和水分 別洗3次，真空干燥，即得氨基化核殼式上轉(zhuǎn)換熒光材料； 3. C6tl上負(fù)載光/磁成像對比劑：將IgC 6(l-Fe304和3gUCNPs-NH 2，溶于IOml水中，再加 入EDC0.0 10g，NHSO. Olg，室溫反應(yīng)10h，磁鐵收集產(chǎn)物，干燥，得C6tZFe3O4-UCNPs ; 4) 光敏殼聚糖膠束的合成：Ig殼聚糖溶于IOOrnl醋酸-甲醇溶液中，醋酸和甲醇溶液 的體積比為1:1，然后滴加質(zhì)量濃度為15%的丁二酸酐丙酮溶液20ml，攪拌18h，最后，用質(zhì) 量濃度為5%的NaOH溶液調(diào)pH至10,過濾，濾液用無水乙醇重結(jié)晶，離心，沉淀真空干燥，即 得N-琥珀酰殼聚糖； 稱取Ig鄰硝基苯甲醇和〇. 8g 丁二酸酐溶于IOml吡啶中，50°C水浴反應(yīng)24h，將產(chǎn)物用 乙酸乙酯萃取，酯層依次用水、飽和碳酸氫鈉溶液洗滌，然后棄去乙酸乙酯層，水層加入體 積濃度為10%的鹽酸溶液調(diào)pH=5,再沉淀真空干燥，得N-琥珀酰鄰硝基苯甲醇； 稱取0. 2g N-琥珀酰鄰硝基苯甲醇和EDC、NHS，三者重量比為5:2:1，用二甲基甲酰胺 溶解，室溫反應(yīng)24h，成混合溶液，取0. 8gN-琥珀酰殼聚糖溶解，逐滴加入混合溶液中，暗處 反應(yīng)24h，產(chǎn)物用分子量為8000-12000的透析袋透析3天，冷凍干燥，即得光敏殼聚糖膠束 (SNSC)； 5)近紅外激光觸發(fā)的復(fù)合納米劑的制備：取0. 05gC6(l/Fe304-UCNPs，0.0 lg多西他賽溶 于IOml超純水中，超聲2h，然后加入0? 05gSNSC，室溫攪拌12h，離心，沉淀用pH7. 2-7. 4的 PBS復(fù)溶，即成SNSC@C6(l/Fe304-UCNPs/DTX復(fù)合納米制劑。6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的近紅外激光觸發(fā)的復(fù)合納米診療劑的制備方法，其特征在于 包括以下步驟： 1) 將C6tl進(jìn)行磁性修飾，形成C6tl-Fe3O4，方法是：50mg C6tl溶于50ml甲苯，加0. 5g氫化 鈉，超聲使其完全溶解，加入〇. 4ml溴代丙二酸二乙酯，251：在N2保護(hù)下攪拌5h，過濾除氫 化鈉，旋蒸除甲苯，真空干燥12h，得C 6tl丙二酸酯衍生物；將衍生物C6tl丙二酸酯衍生物溶于 30ml甲苯，加入380mg氫化鈉，80°C在隊(duì)保護(hù)下油浴反應(yīng)IOh ;除去甲苯，加20ml濃鹽酸過 濾，得濾餅，將濾餅溶于50ml甲醇中，過濾除去甲醇不溶物，旋蒸除去甲醇，50°C真空干燥 得丙二酸取代的C 6tl即C 6Q-C00H ; 稱取C6Q-C00H50mg充分溶解于IOml由乙二醇和二縮醇組成的混合溶劑中，乙二醇和二 縮醇的體積比為1:19,加入醋酸鈉0. 75g，硫化鐵0. 27g，超聲溶解，然后將溶液轉(zhuǎn)移至反應(yīng) 釜中，200°C反應(yīng)10h，冷至室溫，產(chǎn)物用無水乙醇洗絳3次，水洗3次，真空干燥，得四氧化三 鐵負(fù)載的 C6tl (C6tl-Fe3O4); 2) 氨基化核殼式上轉(zhuǎn)換熒光材料（UCNPs-NH2)的合成：將0. 40g的GdCl3 ? 6H20,0. 08g 的Yb2O3和0. 08g的TmCl 3 WH2O置于50ml三口燒瓶中，加9ml油酸，12ml十八碳烯，先升溫 到160°C，保持30分鐘，待其降至室溫后，將含有0. 10gNa0H，0. 15gCaF2的甲醇溶液加入上 述溶液中，在25°C反應(yīng)30分鐘，除去甲醇，280°C反應(yīng)3h，冷至室溫后，加丙酮20ml，12000r/ min離心10分鐘，沉淀用無水乙醇洗3次，沉淀重新分散于正己燒中，即得NaGdF 4 = Yb, Tm上 轉(zhuǎn)換材料，以NaGdF4: Yb, Tm上轉(zhuǎn)換材料為內(nèi)核，按上述制備NaGdF4: Yb, Tm方法再合成外層 上轉(zhuǎn)換材料，即得核殼式上轉(zhuǎn)換熒光材料； 稱取0. 02g上述核殼式上轉(zhuǎn)換熒光材料，溶于70ml乙醇中，超聲完全溶解，置于35°C 水浴中，加入積濃度為15%的NH3 ? H2O攪拌10分鐘，加正硅酸乙酯40 y 1，攪拌2h，然后加 3_氨丙基三乙氧基硅烷0. 2ml，攪拌4h，12000r/min離心，用無水乙醇和水分別洗3次，沉 淀真空干燥，即得氨基化核殼式上轉(zhuǎn)換熒光材料； 3. C6tl上負(fù)載光/磁成像劑：將IgC 6(l-Fe304和7gUCNPs-NH 2，溶于IOml水中，再加入 EDC0.0 10g，NHSO. Olg，室溫反應(yīng) 20h，磁鐵收集產(chǎn)物，干燥，得 C6tZFe3O4-UCNPs ; 4) 光敏殼聚糖膠束的合成：Ig殼聚糖溶于100mL醋酸-甲醇溶液中，醋酸和甲醇溶液 的體積比為1:1，然后滴加質(zhì)量濃度為15%的丁二酸酐丙酮溶液20ml，攪拌24h，最后，用質(zhì) 量濃度為5%的NaOH溶液調(diào)pH至10,過濾，濾液用無水乙醇重結(jié)晶，離心，沉淀真空干燥，即 得N-琥珀酰殼聚糖； 稱取Ig鄰硝基苯甲醇和〇. 8g 丁二酸酐溶于IOml吡啶中，50°C水浴反應(yīng)24h，將產(chǎn)物用 乙酸乙酯萃取，酯層依次用水、飽和碳酸氫鈉溶液洗滌，然后棄去乙酸乙酯層，水層用體積 濃度為10%的鹽酸溶液調(diào)pH=5,沉淀真空干燥，即得N-琥珀酰鄰硝基苯甲醇； 稱取0. 2g N-琥珀酰鄰硝基苯甲醇和EDC、NHS，三者重量比為5:2:1，用二甲基甲酰胺 溶解，室溫反應(yīng)24h，成混合溶液，然后取0. 8gN-琥珀酰殼聚糖溶解于20ml超純水，逐滴加 入混合溶液中，暗處反應(yīng)24h，產(chǎn)物用分子量為8000-12000的透析袋透析3天，冷凍干燥，即 得光敏殼聚糖膠束（SNSC); 5)近紅外激光觸發(fā)的復(fù)合納米制劑的制備：取0. 05gC6(l/Fe304-UCNPs，0.0 lg多西他賽 溶于IOml超純水中，超聲2h，然后加入0? 05gSNSC，室溫攪拌12h，離心，沉淀用pH7. 2-7. 4 的PBS復(fù)溶，即成S復(fù)合納米制劑。7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的近紅外激光觸發(fā)的復(fù)合納米制劑的制備方法，其特征在于包 括以下步驟： 1) 將C6tl進(jìn)行磁性修飾，形成C6tl-Fe3O4，方法是：50mg C6tl溶于50ml甲苯，加0. 5g氫化 鈉，超聲完全溶解，加入〇. 5ml溴代丙二酸二乙酯，201：在N2保護(hù)下攪拌5h，過濾除氫化鈉， 旋蒸除甲苯，真空干燥12h，得C 6tl丙二酸酯衍生物；將干燥的C6tl丙二酸酯衍生物溶于30ml 甲苯，加入380mg氫化鈉，80°C在隊(duì)保護(hù)下油浴反應(yīng)IOh ;除去甲苯，加20ml濃鹽酸過濾，得 濾餅，將濾餅溶于50ml甲醇中，過濾除去甲醇不溶物，旋蒸除去甲醇，50°C真空干燥得丙二 酸取代的C 6tl即C6tl-COOH; 稱取C6Q-C00H50mg充分溶解于IOml由乙二醇和二縮醇組成的混合溶劑中，乙二醇和二 縮醇的體積比為1:19,加入醋酸鈉0. 75g，磷酸鐵0. 27g，超聲溶解，然后將溶液轉(zhuǎn)移至反應(yīng) 釜中，200°C反應(yīng)10h，冷至室溫，產(chǎn)物用無水乙醇洗絳3次，水洗3次，真空干燥，得四氧化三 鐵負(fù)載的 C6 (C6tl-Fe3O4); 2) 氨基化核殼式上轉(zhuǎn)換熒光材料（UCNPs-NH2)的合成：將0. 50g的Y2O3,0.1 Og的 YbCl3，6H20和0.1 Og的ErCl3，6H20置于50ml三口燒瓶中，加IOml油酸，15ml十八碳烯，先 升溫到160°C，保持30分鐘，降至室溫時，將含有0. 10gNa0H，0. 15g氟化銨的甲醇溶液加入 上述溶液中，在50°C反應(yīng)30分鐘，除去甲醇，320°C反應(yīng)5h，冷至室溫，加丙酮20ml，12000r/ min離心10分鐘，沉淀用無水乙醇洗3次，重新分散于正己燒，即得NaYF 4:Yb, Er上轉(zhuǎn)換材 料，以NaYF4:Yb，Er上轉(zhuǎn)換材料為內(nèi)核，按上述制備NaYF4:Yb，Er方法再合成外層上轉(zhuǎn)換材 料，即得核殼式上轉(zhuǎn)換熒光材料； 稱取0. 02g上述核殼式上轉(zhuǎn)換熒光材料，溶于70ml乙醇中，超聲完全溶解，置于35°C 水浴中，加體積濃度為15%的NH3 ? H2O攪拌10分鐘，加正硅酸乙酯40 y 1，攪拌2h，然后加 3_氨丙基三乙氧基硅烷0. 2ml，攪拌4h，12000r/min離心，用無水乙醇和水分別洗3次，沉 淀真空干燥，即得氨基化核殼式上轉(zhuǎn)換熒光材料； 3. C6(I上負(fù)載光/磁成像對比劑：將IgC6tl-Fe3O4和IOgUCNPs-NH 2，溶于IOml水中，再加 入EDC0.0 10g，NHSO. Olg，室溫反應(yīng)24h，磁鐵收集產(chǎn)物，干燥，得C6tZFe3O4-UCNPs ; (4)光敏殼聚糖膠束的合成：Ig殼聚糖溶于100mL醋酸-甲醇溶液中，醋酸和甲醇溶液 的體積比為1:1，然后滴加質(zhì)量濃度為15%的丁二酸酐丙酮溶液20ml，攪拌48h，最后，用質(zhì) 量濃度為5%的NaOH溶液調(diào)pH至10,過濾，濾液用無水乙醇重結(jié)晶，離心，沉淀真空干燥，得 N-琥珀酰殼聚糖； 稱取Ig鄰硝基苯甲醇和〇. 8g 丁二酸酐溶于IOml吡啶中，50°C水浴反應(yīng)24h，將產(chǎn)物用 乙酸乙酯萃取，酯層依次用水、飽和碳酸氫鈉溶液洗滌，然后棄去乙酸乙酯層，水層加入10% 鹽酸溶液調(diào)pH=5,沉淀真空干燥，即得N-琥珀酰鄰硝基苯甲醇； 稱取0. 2g N-琥珀酰鄰硝基苯甲醇和EDC、NHS，三者重量比為5:2:1，用二甲基甲酰胺 溶解，室溫反應(yīng)24h，成混合溶液，然后取0. 8gN-琥珀酰殼聚糖溶解，逐滴加入混合溶液中， 避光反應(yīng)24h，產(chǎn)物用分子量為8000-12000的透析袋透析3天，冷凍干燥，即得光敏殼聚糖 膠束（SNSC); 5)近紅外激光觸發(fā)的復(fù)合納米制劑的制備：取0. 05gC6(l/Fe304-UCNPs，0.0 lg多西他賽 溶于IOml超純水中，超聲2h，然后加入0? 05gSNSC，室溫攪拌12h，離心，沉淀用pH 7. 2-7. 4 的PBS復(fù)溶，即成SNSC@C6(l/Fe304-UCNPs/DTX復(fù)合納米制劑。8. 權(quán)利要求1或2-7任一項(xiàng)所述的方法制備的近紅外激光觸發(fā)的復(fù)合納米制劑作為腫 瘤診療劑的應(yīng)用。9. 權(quán)利要求1或2-7任一項(xiàng)所述方法制備的近紅外激光觸發(fā)的復(fù)合納米制劑作為診斷 治療腫瘤注射劑、注射用無菌粉針、分散劑、貼劑、凝膠劑和植入劑的應(yīng)用。
【專利摘要】本發(fā)明涉及近紅外激光觸發(fā)的復(fù)合納米制劑的制備方法，利用近紅外980nm激光照射該納米制劑，借助其中上轉(zhuǎn)換納米粒的發(fā)射光觸發(fā)光敏膠束釋放藥物，達(dá)到診斷治療的目的，解決可見光穿透能力差，診斷治療二次服藥的問題，采用近紅外光980nm激光照射深層組織，使C60產(chǎn)生活性氧，避免紫外光照射引起膠束破膜釋藥對組織造成的損傷，對腫瘤的治療更加精準(zhǔn)，安全，有效，本發(fā)明制備的復(fù)合納米制劑可在近紅外光980nm照射下，定時定位釋藥，同時能使C60在較深的組織內(nèi)產(chǎn)生活性氧，協(xié)同化療殺死腫瘤細(xì)胞，結(jié)合熒光成像和磁共振成像，實(shí)現(xiàn)診斷治療一體化，避免二次服藥的問題，原料來源豐富，成本低，使用效果好。
【IPC分類】A61K31/337, A61K47/36, A61K49/00, A61K47/02, A61K49/06, A61P35/00, A61K41/00
【公開號】CN104984341
【申請?zhí)枴緾N201510432200
【發(fā)明人】杜斌, 韓淑萍, 趙飛飛, 蘇湘潔, 王宇輝, 曹小會, 屈甜甜
【申請人】鄭州大學(xué)
【公開日】2015年10月21日
【申請日】2015年7月22日