人參皂苷Rd在制備預(yù)防和/或治療小膠質(zhì)細(xì)胞介導(dǎo)疾病藥物的新用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及人參皂苷Rd的新用途，即在制備預(yù)防和/或治療抗小膠質(zhì)細(xì)胞介導(dǎo)疾 病藥物方面的新用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 小膠質(zhì)細(xì)胞（microglia)的異常激活在多發(fā)性硬化等疾病中都發(fā)揮重要作用，是 上述疾病病理發(fā)展過(guò)程中造成神經(jīng)損傷的主要病因之一。在病理狀態(tài)下，微環(huán)境的微小變 化即可激活小膠質(zhì)細(xì)胞，激活的小膠質(zhì)細(xì)胞可以上調(diào)許多神經(jīng)毒性因子的分泌水平，如一 氧化氮（NO)、活性氧簇（R0S)和類花生酸類（如前列腺素E2)等，從而導(dǎo)致繼發(fā)性腦損害。 因此，抑制小膠質(zhì)細(xì)胞的過(guò)度活化，可以有效防治、多發(fā)性硬化等疾病。
[0003]人參皂苷 Rd(Ginsenoside Rd，分子量：947. 12,分子式：C48H82018, CAS 號(hào)： 52705-93-8)。從五加科植物人參[Panax ginseng C.A.Mey er(P.schinseng Nees)] 或三七[Panax Notoginseng(Burk. )F. H. Chen]等的根、花蕾、葉、蘆頭、莖或萌蘆科 (Cucurbifaceae)絞股藍(lán)[Gynostemma pentaphyllum(Thunb.)Mak.]的葉中提取得到，以 三七含量最為豐富。人參皂苷Rd易溶于水、甲醇、乙醇，不溶于乙醚、苯。文獻(xiàn)報(bào)道，人參皂 苷Rd具有防治中風(fēng)（藥學(xué)學(xué)報(bào)，2005,40 (12) : 1144-1146)、血栓形成（中國(guó)藥理學(xué)通報(bào)， 2005，11 :1400-1401)等心腦血管疾病的作用。
[0004]
[0005] 但目前沒(méi)有文獻(xiàn)報(bào)道人參皂苷Rd可抑制小膠質(zhì)細(xì)胞相關(guān)的免疫毒性，亦沒(méi)有報(bào) 道公開(kāi)人參皂苷Rd能防治肌萎縮性脊髓側(cè)索硬化癥、艾滋病相關(guān)癡呆、瘋牛病等疾病。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的是提供人參皂苷Rd在制備預(yù)防和/或治療小膠質(zhì)細(xì)胞介導(dǎo)疾病藥 物的新用途；
[0007] 本發(fā)明的另一目的是提供用于制備預(yù)防和/或治療小膠質(zhì)細(xì)胞介導(dǎo)疾病藥物的 人參皂苷Rd的制備方法。
[0008] 本發(fā)明的目的是通過(guò)下列的技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：
[0009] 本發(fā)明原料來(lái)源：人參皂苷Rd主要來(lái)源于五加科植物三七Panax notoginseng (Burk.) F. H. Chen 或人參 Panax ginseng C. A. Mey. 〇
[0010] 發(fā)明人在研宄小膠質(zhì)細(xì)胞介導(dǎo)疾病的治療過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，人參皂苷Rd能減少活化 小膠質(zhì)細(xì)胞NO等細(xì)胞毒性炎癥介質(zhì)的產(chǎn)生，抑制小膠質(zhì)細(xì)胞激活誘導(dǎo)細(xì)胞死亡，從而為 三七及三七提取物應(yīng)用于活化小膠質(zhì)細(xì)胞介導(dǎo)的神經(jīng)毒性作用所引起的腦部炎癥相關(guān)疾 病，如肌萎縮性脊髓側(cè)索硬化癥、艾滋病相關(guān)癡呆、瘋牛病等疾病的防治提供了直接有力的 實(shí)驗(yàn)依據(jù)和理論基礎(chǔ)，既有很強(qiáng)的科學(xué)性和創(chuàng)新性，又有很高的開(kāi)發(fā)應(yīng)用價(jià)值。
[0011] 因此，本發(fā)明所述小膠質(zhì)細(xì)胞介導(dǎo)疾病包括多發(fā)性硬化、肌萎縮性脊髓側(cè)索硬化 癥、艾滋病癡呆癥、瘋牛病。
[0012] 本發(fā)明采用獨(dú)特提取、純化工藝所得人參皂苷Rd，人參皂苷Rd含量不低于80%， 用此三七提取物制備的藥物，預(yù)防和/或治療小膠質(zhì)細(xì)胞介導(dǎo)疾病效果更顯著。
[0013] 本發(fā)明藥物臨床應(yīng)用時(shí)，服用量最佳治療效果為每日劑量以人參皂苷Rd計(jì)為1~ 100mg/kg 體重。
[0014] 本發(fā)明還提供人參皂苷Rd與醫(yī)藥學(xué)上可接受的載體配合制成在制備治療和/或 預(yù)防小膠質(zhì)細(xì)胞介導(dǎo)疾病藥物方面的新用途。人參皂苷Rd配合醫(yī)藥學(xué)上可接受的載體和 藥用輔料按照藥學(xué)領(lǐng)域常規(guī)方法制備為口服、注射或粘膜給藥，可以制成片劑、膠囊、粉劑、 顆粒、錠劑等劑型。
[0015]本發(fā)明專利臨床應(yīng)用的安全性較高，在治療小膠質(zhì)細(xì)胞介導(dǎo)疾病的藥物治療中不 失為一種好藥，其拓寬了治療小膠質(zhì)細(xì)胞介導(dǎo)疾病的新方法，同時(shí)為患者解決了現(xiàn)有技術(shù) 治療小膠質(zhì)細(xì)胞介導(dǎo)疾病時(shí)出現(xiàn)的不良反應(yīng)。
[0016] 因此，申請(qǐng)人提供人參皂苷Rd制備預(yù)防和/或治療小膠質(zhì)細(xì)胞介導(dǎo)疾病藥物方面 的新用途。特別是含量高于80%的人參皂苷Rd制備預(yù)防和/或治療小膠質(zhì)細(xì)胞介導(dǎo)疾病 藥物方面的新用途。
[0017] 本發(fā)明還公開(kāi)了預(yù)防和/或治療小膠質(zhì)細(xì)胞介導(dǎo)疾病藥物所用人參皂苷Rd的制 備方法，包括以下步驟：
[0018] 1)取三七或人參藥材加水或體積百分比濃度為25~96%的乙醇提取，將提取液 回收乙醇，得二七提取液；
[0019] 2)三七或人參提取液脫脂后，經(jīng)D型大孔樹(shù)脂純化后，濃縮，減壓干燥，制成干燥 品；
[0020] 3)干燥品加體積百分比濃度為95. 0%以上的乙醇溶解，濾去不溶物，然后經(jīng)過(guò)單 分散聚合硅膠層析柱吸附洗脫純化，用紫外檢測(cè)器在線檢測(cè)洗脫液紫外吸光度，檢測(cè)波長(zhǎng) 為203nm，收集主含人參皂苷Rd的洗脫液，回收溶媒并濃縮、減壓干燥，即得。
[0021] 優(yōu)選地，步驟1)中所得三七或人參提取液含固形物5 - 25%。
[0022] 優(yōu)選地，步驟2)經(jīng)D型大孔樹(shù)脂純化時(shí)，用水：95%乙醇按梯度洗脫法洗去除Rd 外的三醇苷類成分以及多數(shù)二醇苷類成分，再單獨(dú)以70~95 %乙醇液洗脫以人參皂苷Rd 為主的皂苷類成分，收集洗脫液并脫色后，回收溶媒。
[0023] 優(yōu)選地，步驟3)濾去不溶物是采用1~50 y m濾膜過(guò)濾。
[0024] 優(yōu)選地，步驟3)經(jīng)單分散聚合硅膠層析柱吸附后，洗脫純化是用水及體積百分比 濃度為95. 0%~99. 9%的乙醇液按梯度洗脫法洗脫純化。
[0025] 優(yōu)選地，紫外檢測(cè)器在線檢測(cè)采用的檢測(cè)波長(zhǎng)為203nm。
[0026] 本發(fā)明提供的人參皂苷Rd制備預(yù)防和/或治療小膠質(zhì)細(xì)胞介導(dǎo)疾病藥物方面的 新用途具有以下優(yōu)點(diǎn)：
[0027] 1、本發(fā)明所用人參皂苷Rd為天然中藥提取物，安全無(wú)毒，可長(zhǎng)期服用。在"人參皂 苷Rd對(duì)小膠質(zhì)細(xì)胞細(xì)胞活力的影響"實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)：人參皂苷Rd對(duì)小膠質(zhì)細(xì)胞活力無(wú)抑制 作用，不會(huì)引起小膠質(zhì)細(xì)胞死亡。
[0028] 2、"人參皂苷Rd對(duì)激活小鼠小膠質(zhì)細(xì)胞系BV-2產(chǎn)生炎癥介質(zhì)（NO)水平的影響" 實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)人參皂苷Rd干預(yù)能明顯抑制LPS引起的NO的釋放，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明人參皂苷Rd 對(duì)激活的小膠質(zhì)細(xì)胞具有明顯的抑制作用。
[0029] 3、本發(fā)明所述人參皂苷Rd制備方法以D型大孔樹(shù)脂吸附后，先用水：95%乙醇梯 度洗脫去除Rd外的三醇苷類成分以及多數(shù)二醇苷類成分，再單獨(dú)以70~95%乙醇液洗脫 以人參皂苷Rd為主的皂苷類成分，可以在前期獲得人參皂苷Rd較高的洗脫液，再通過(guò)進(jìn)一 步的純化處理，獲得用于治療小膠質(zhì)細(xì)胞介導(dǎo)疾病有顯著效果的人參皂苷Rd。
【具體實(shí)施方式】
[0030] 下面通過(guò)實(shí)施例進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明。應(yīng)該理解的是，本發(fā)明的實(shí)施例是用于說(shuō)明 本發(fā)明而不是對(duì)本發(fā)明的限制。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)質(zhì)對(duì)本發(fā)明進(jìn)行的簡(jiǎn)單改進(jìn)都屬于本發(fā)明 要求保護(hù)的范圍。除非另有說(shuō)明，本發(fā)明中的乙醇量的百分?jǐn)?shù)是體積百分?jǐn)?shù)，V/V表示溶液 的體積比。
[0031] 實(shí)施例1 :人參皂苷Rd的制備
[0032] 1)取三七藥材加水提取，提取液濃縮成含固形物25%的三七提取液；
[0033] 2)三七提取液脫脂后，經(jīng)D型大孔樹(shù)脂純化，用水：95%乙醇按梯度洗脫法洗去除 Rd外的三醇苷類成分以及多數(shù)二醇苷類成分，再單獨(dú)以70 %乙醇洗脫以人參皂苷Rd為主 的皂苷類成分，收集洗脫液并脫色后，回收溶媒后，濃縮，減壓干燥，制成干燥品；
[0034] 3)干燥品加濃度為95. 0%乙醇溶解，用50 y m濾膜濾去不溶物，然后經(jīng)過(guò)單分散 聚合硅膠層析柱吸附后，用水及濃度為95. 0%乙醇按梯度洗脫法洗脫純化，用紫外檢測(cè)器 在線檢測(cè)洗脫液紫外吸光度，檢測(cè)波長(zhǎng)為203nm，收集主含人參皂苷Rd的洗脫液，回收溶媒 并濃縮、減壓干燥，即得。
[0035] 采用HPLC法測(cè)定，人參皂苷Rd含量為80%。
[0036] 實(shí)施例2 :人參皂苷Rd的制備
[0037] 1)取人參藥材加濃度為25%的乙醇提取，將提取液回收乙醇，得含固形物20%的 二七提取液；
[0038] 2)人參提取液脫脂后，經(jīng)D型大孔樹(shù)脂純化，用水：95%乙醇按梯度洗脫法洗去除 Rd外的三醇苷類成分以及多數(shù)二醇苷類成分，再單獨(dú)以95 %乙醇洗脫以人參皂苷Rd為主 的皂苷類成分，收集洗脫液并脫色后，回收溶媒后，濃縮，減壓干燥，制成干燥品；
[0039] 3)干燥品加濃度為96%乙醇溶解，用45 y m濾膜濾去不溶物，然后經(jīng)過(guò)單分散聚 合硅膠層析柱吸附后，用水及濃度為97%乙醇按梯度洗脫法洗脫純化，用紫外檢測(cè)器在線 檢測(cè)洗脫液紫外吸光度，檢測(cè)波長(zhǎng)為203nm，收集主含人參皂苷Rd的洗脫液，回收溶媒并濃 縮、減壓干燥，即得。
[0040] 采用HPLC法測(cè)定，人參皂苷Rd含量為92 %。
[0041] 實(shí)施例3 :人參皂苷Rd的制備
[0042] 1)取三七藥材加濃度為96%乙醇提取，將提取液回收乙醇，得含固形物5%的 二七提取液；
[0043] 2)三七提取液脫脂后，經(jīng)D型大孔樹(shù)脂純化，用水：95%乙醇按梯度洗脫法洗去除 Rd外的三醇苷類成分以及多數(shù)二醇苷類成分，再單獨(dú)以95%乙醇液洗脫以人參皂苷Rd為 主的皂苷類成分，收集洗脫液并脫色后，回收溶媒后，濃縮，減壓干燥，制成干燥品；
[0044] 3)干燥品加濃度為98. 0%乙醇溶解，用1ym濾膜濾去不溶物，然后經(jīng)過(guò)單分散聚 合硅膠層析柱吸附后，用水及濃度為98%乙醇按梯度洗脫法洗脫純化，用紫外檢測(cè)器在線 檢測(cè)洗脫液紫外吸光度，檢測(cè)波長(zhǎng)為203nm，收集主含人參皂苷Rd的洗脫液，回收溶媒并濃 縮、減壓干燥，即得。
[0045] 采用HPLC法測(cè)定，人參皂苷Rd含量為97 %。
[0046] 實(shí)施例4 :人參皂苷Rd的制備
[0047] 1)取人參藥材加濃度為80%乙醇提取，將提取液回收乙醇，得含固形物15%的 二七提取液；
[0048] 2)人參提取液脫脂后，經(jīng)D型大孔樹(shù)脂純化，用水：95%乙醇按梯度洗脫法洗去除 Rd外的三醇苷類成分以及多數(shù)二醇苷類成分，再單獨(dú)以70~95%乙醇洗脫以人參皂苷Rd 為主的皂苷類成分，收集洗脫液并脫色后，回收溶媒后，濃縮，減壓干燥，制成干燥品；
[0049] 3)干燥品加濃度為99.