基上。從圖中可以 看出，在通氣和厭氧兩種條件下，ydr026cA突變體顯示出分別為33天和20天的提高的世 代壽命。
[0100] 實(shí)施例4
[0101] 從圖4中可以看出，F(xiàn)K-506(藤霉素）延長了釀酒酵母（S.cerevisiae)的世代 壽命。以0.lng/ml向培養(yǎng)基中添加藤霉素對(duì)細(xì)胞的世代壽命沒有顯著的影響（與對(duì)照相 比），但是添加lng/ml以上具有顯著的影響，提高了酵母細(xì)胞的平均壽命（與對(duì)照相比）。 使用Murakami，C?和Kaeberlein，M. ((2009)J.Vis.Exp，27)所述的生長暈法（outgrowth method)測量壽命。
[0102] 簡而言之，酵母的世代壽命表示為衰老酵母培養(yǎng)物隨時(shí)間的生存力曲線。為了對(duì) 此進(jìn)行測量，使這種酵母培養(yǎng)物生長在液體培養(yǎng)基中知道葡萄糖碳源耗盡并且細(xì)胞停止分 裂。此時(shí)，使用Bioscreen?C機(jī)（OyGrowthCurvesAbLtd，芬蘭）通過觀察衰老培養(yǎng)物 的新鮮接種物的生長暈特征來測量存活細(xì)胞與能夠分裂的細(xì)胞的比例。比較各個(gè)不同的時(shí) 間點(diǎn)的生存力來確定培養(yǎng)物的世代壽命。
[0103] 實(shí)施例5
[0104] 從圖5可以看出，添加FK-506以劑量依賴模式延長了秀麗隱桿線蟲的壽命，添 加4yg/ml導(dǎo)致生物體的生存力（世代壽命）的顯著提高。在同步產(chǎn)卵階段（timedegg layingstage)將FK-506添加到秀麗隱桿線蟲中，并按Sutphin，G.L?和Kaeberlein， M.，（(2009)J.Vis.Exp，27.)所述的方法測量壽命。簡而言之，該方法包括使蟲群同步并 在一定范圍的時(shí)間點(diǎn)測量活蟲的百分比，根據(jù)它們能夠響應(yīng)物理刺激的能力對(duì)活蟲進(jìn)行打 分。
[0105] 實(shí)施例6
[0106] 圖6顯示，F(xiàn)K-506呈現(xiàn)出逆轉(zhuǎn)MRC5人類纖維原細(xì)胞系中的細(xì)胞分裂速度的衰老 依賴型降低。這表明FK506提高了這些細(xì)胞的復(fù)制壽命。使用Fairweather，D.S.，M.Fox 和G.P.Margison( (1987)，ExpCellRes，168(1):第 153-9 頁）的方法測量細(xì)胞分裂速度。 簡而言之，通過將MRC5細(xì)胞在培養(yǎng)皿表面上生長直到達(dá)成匯合（此時(shí)它們以1:2的比例分 裂，即以1稀釋為2)測量MRC5細(xì)胞的復(fù)制壽命。培養(yǎng)物分裂的次數(shù)等于細(xì)胞能夠經(jīng)歷的 分裂次數(shù)，這就是培養(yǎng)物復(fù)制壽命。MCR5細(xì)胞僅能夠分裂有限的次數(shù)，并且隨著它們到達(dá)它 們生命的末期，它們經(jīng)歷細(xì)胞分裂所需的時(shí)間增加。在這種情況中，細(xì)胞分裂的速度被當(dāng)作 發(fā)老指標(biāo)使用。
[0107] 可以看出，在39次分裂后添加FK-506導(dǎo)致分裂時(shí)間的降低（與沒有添加FK-506 的對(duì)照相比）。
[0108] 在較高濃度，F(xiàn)K506對(duì)細(xì)胞具有毒性，因此限制了細(xì)胞復(fù)制能力。
[0109] 數(shù)據(jù)表明，F(xiàn)K506在人類和秀麗隱桿線蟲中均能夠延遲衰老的開始。秀麗隱桿線 蟲的衰老主要是肌肉和腸細(xì)胞的衰老。數(shù)據(jù)顯示FK506延長了秀麗隱桿線蟲的壽命，因此 必然延遲了這些組織的衰老。這表明FK506將延遲人類肌肉細(xì)胞衰老的影響，并且將可用 于治療諸如少肌癥之類的疾病。這種疾病的發(fā)展是與臥床休息或化學(xué)療法（惡病質(zhì)）關(guān)聯(lián) 的肌肉喪失，這被機(jī)械地認(rèn)為是一種非常類似的過程。
[0110] 數(shù)據(jù)還表明，F(xiàn)K-506能夠延遲衰老的開始，因此可以用于提高受誘導(dǎo)的多潛能干 細(xì)胞和直接人造細(xì)胞（directlyconvertedcell)的效率，這可以在干細(xì)胞治療中加以利 用。
[0111] 實(shí)施例7
[0112] 通過使YDR026c基因座缺失提高分裂干細(xì)胞的復(fù)制壽命（RLS)。使用顯微操縱 器（SingerInstruments)測量復(fù)制壽命。這包括物理解剖由在YPD瓊脂培養(yǎng)基（2%葡萄 糖，2%酵母提取物，1%細(xì)菌用蛋白胨，2%瓊脂）生長的單個(gè)母細(xì)胞的生命期產(chǎn)生的每個(gè) 姐妹細(xì)胞。由10至50個(gè)母細(xì)胞得到的數(shù)據(jù)求平均值以得到每株及其野生型親本的平均壽 命。需要謹(jǐn)慎以確保由小的（因而是年輕的）母細(xì)胞生成初始處女型細(xì)胞[Kaeberlein， M.，Kirkland，K.T.，F(xiàn)ields，S.&Kennedy，B.K.，基因確定在長存活遺傳背景中的酵母復(fù) 制壽命（Genesdeterminingyeastreplicativelifespaninalong-livedgenetic background).MechAgeingDev126,491-504 (2005)和Kaeberlein，M?等。通過TOR和 Sch9 響應(yīng)營養(yǎng)而調(diào)控酵母復(fù)制壽命（Regulationofyeastreplicativelifespanby TORandSch9inresponsetonutrients).Science310,1193-1196(2005)]〇
[0113]表1
[0114]
[0115] 從表1可以看出，BY4741 (野生型對(duì)照）的平均壽命為25代，而缺少Ydr026c的 株的平均壽命是30代。
[0116] 實(shí)施例8
[0117] 圖8顯示的是基于圖7中所示數(shù)據(jù)的模型。該模型顯示，Obdl缺失依賴型壽命延 長是由于0BD1對(duì)Sir2所產(chǎn)生的抑制作用的緣故。這說明通過激活Sir2延長壽命的任何 機(jī)制將都受到Obdl引起的抑制作用的限制。
[0118] 圖7顯示了其中obdl和/或sir2已經(jīng)受到破壞的酵母株BY4741的平均壽命。使 用以前描述的基于Bioscreen?C的程序計(jì)算壽命。按照Longtine等（Yeast，第14卷第 953頁，用于在釀酒酵母中基于通用經(jīng)濟(jì)型PCR的基因缺失和修飾的附加模塊（Additional modulesforversatileandeconomicalPCR-basedgenedeletionandmodification inSaccharomycescerevisiae)制得酵母株。
[0119] 數(shù)據(jù)清楚顯示，obdl的破壞顯著地提高了世代壽命，但是sir2的破壞顯著地降低 了世代壽命（與對(duì)照比較）。有趣的是，obdl和sir2均受破壞的雙突變體導(dǎo)致世代壽命的 顯著降低。
[0120] 另外，表2中示出的數(shù)據(jù)顯示obdl對(duì)sir2活性的上位作用。
[0121]
[0122] 通過觀察酵母菌落中的顏色變化測量ADE+回復(fù)體的數(shù)量來測量重組率。ERC是核 糖體外染色體（extra-ribosomal-chromosome)，其是由于無效重組而出現(xiàn)的，結(jié)果是短的 環(huán)形DNA序列出現(xiàn)在細(xì)胞核中，可以通過Southern印跡測量其水平。該數(shù)據(jù)顯示，在沒有 obdl的情況下，sir2表達(dá)導(dǎo)致世代壽命的提高和重組率的降低。
[0123] 在以上說明中提及的所有出版物在此通過參考方式整體引入。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng) 該明了對(duì)本發(fā)明的所述方法和系統(tǒng)進(jìn)行的各種修改和改變并沒有脫離本發(fā)明的范圍和實(shí) 質(zhì)。盡管已經(jīng)結(jié)合具體的優(yōu)選實(shí)施方式對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了描述，但是應(yīng)當(dāng)理解的是，所要求保 護(hù)的本發(fā)明不應(yīng)當(dāng)過度受限于這些具體的實(shí)施方式。實(shí)際上，對(duì)于生物化學(xué)和生物技術(shù)或 相關(guān)領(lǐng)域的技術(shù)人員而言明了的用于實(shí)施本發(fā)明的所述方式的各種修改擬包括在所附的 權(quán)利要求的范圍內(nèi)。
[0124] 參考文獻(xiàn)
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