射用 水中，使其完全分散，充分溶脹，勿使粘結成團，攪拌30分鐘左右即可完全溶解。
[0023] 2.分別將硼砂、乙二胺四乙酸鈉和對羥基苯甲酸乙酯加入到上述透明質(zhì)酸鈉溶液 中，攪勻溶解，然后定容至l〇〇ml，即得pH7. 1的滴眼液空白基質(zhì)。
[0024] 3.將重組水蛭素加入到上述滴眼液空白基質(zhì)中，攪勻溶解，通過0. 22um濾器過 濾除菌，然后分裝，即得重組水蛭素滴眼液。
[0025] 實施例3 本發(fā)明滴眼液的配方： 重組水輕素 0. 02g 透明質(zhì)酸鈉 〇.Ig 磷酸鹽緩沖液 I.Og 氯化鈉 0.5g 乙二胺四乙酸二鈉 0. 5g 苯扎溴銨 0. 03g 注射用水定容至 100mL 制備工藝： 1.在60-80°C的水浴條件下，快速攪拌并緩緩將0.Ig透明質(zhì)酸鈉加入到70ml注射用 水中，使其完全分散，充分溶脹，勿使粘結成團，攪拌30分鐘左右即可完全溶解。
[0026] 2.分別將磷酸、氯化鈉、乙二胺四乙酸鈉和苯扎溴銨加入到上述透明質(zhì)酸鈉溶液 中，攪勻溶解，然后定容至l〇〇ml，即得pH7.2的滴眼液空白基質(zhì)。
[0027] 3.將重組水蛭素加入到上述滴眼液空白基質(zhì)中，攪勻溶解，通過0. 22um濾器過 濾除菌，然后分裝，即得重組水蛭素滴眼液。
[0028] 實施例4 本發(fā)明滴眼液的配方： 重組水輕素 0. 02g 透明質(zhì)酸鈉 〇.Ig 磷酸 l.〇g 硼砂 0.5g 乙二胺四乙酸二鈉 0. 5g 苯扎溴銨 0. 02g 硫柳汞 0.Olg 注射用水定容至 100mL 制備工藝： 1.在60-80°C的水浴條件下，快速攪拌并緩緩將0.Ig透明質(zhì)酸鈉加入到70ml注射用 水中，使其完全分散，充分溶脹，勿使粘結成團，攪拌30分鐘左右即可完全溶解。
[0029] 2.分別將磷酸、硼砂、乙二胺四乙酸鈉和苯扎溴銨加入到上述透明質(zhì)酸鈉溶液中， 攪勻溶解，然后定容至l〇〇ml，即得pH7. 4的滴眼液空白基質(zhì)。
[0030] 3.將重組水蛭素加入到上述滴眼液空白基質(zhì)中，攪勻溶解，通過0. 22um濾器過 濾除菌，然后分裝，即得重組水蛭素滴眼液。
[0031] 實施例5 兔眼刺激實驗 將實施例1~4中重組水蛭素滴眼液按照新藥臨床前指導原則方法進行刺激性考察，選 擇健康新西蘭兔8只，分為4組，左眼每日給本發(fā)明實施例1~4重組水蛭素滴眼液5次，右 眼分別給生理鹽水做空白對照，在l，24,48,72h進行眼部檢查，觀察結膜、角膜、虹膜及其 他可見損傷，連續(xù)觀察7d，根據(jù)眼刺激反應分值標準記錄眼部反應的分值（結果見表1)。
[0032] 表1各個觀察時間各組眼睛最后得分
由表1可知，重組水蛭素滴眼液給藥一側眼睛眼角膜、虹膜和結膜未出現(xiàn)刺激性，與對 照一側眼睛一樣，由此證明重組水蛭素III滴眼液無眼刺激性。
[0033] 實施例6 穩(wěn)定性實驗 重組水蛭素滴眼液測定抗凝活力后，分別置于4°C冰箱及室溫，在放置1，2,4周和3,6， 12個月后，其抗凝活力及pH值沒有變化，外觀形狀、澄明度及無菌檢查均符合中華人民共 和國藥典（二部）附錄IIIA對滴眼液的要求。
[0034] 實施例7 藥效學實驗對D-半乳糖誘導的白內(nèi)障大鼠的治療作用 實驗藥物：實施例1~4中的重組水蛭素滴眼液 實驗動物：SD大鼠，雌雄各半，130±20g 實驗方法和結果： I.SD大鼠白內(nèi)障模型建立 取42只SD大鼠隨機分成7組，每組均為6只（雌雄各半），分別為正常對照組、模型 對照組、白內(nèi)停對照組和重組水蛭素滴眼液（2000ATU/ml)組。除正常對照組外，其它組SD 大鼠均腹腔注射〇. 08%的D-半乳糖溶液25mL/kg，相當于20mg/kg，每日分2次給藥，上下 午各1次，連續(xù)給14d，并飲用10%D-半乳糖溶液，正常對照組按同樣方式腹腔注射同體積 的生理鹽水。造模成功后，各組分別雙眼點滴給藥，各組給藥容積均為IOOuL/只/次，每日 分3次給藥，連續(xù)30天。
[0035] 2.重組水蛭素III滴眼液對白內(nèi)障大鼠的治療作用 給藥30天后，使用復方托吡卡胺滴眼液散瞳，用裂隙燈顯微鏡定期觀察大鼠晶狀體的 混濁程度，觀察后記錄結果。晶狀體混濁程度按表3標準分別賦予不同分值，進行組間t檢 驗。模型組大鼠未經(jīng)藥物治療，隨著時間的延長其晶狀體的混濁程度越來越高。重組水蛭 素滴眼液組與模型組晶狀體混濁程度相比，有極顯著差異（P< 0. 01)，表明重組水蛭素滴 眼液可顯著緩解晶狀體混濁（見表2)。
[0036] 表2 rHVIII滴眼液對SD大鼠晶狀體混濁程度的影響（n= 6)
注A:無渾池；B:輕微渾池；C:中等渾池；D:嚴重渾池；vs模型組，*p< 0. 05,**p < 0.Olo
[0037] 給藥30天后，將大鼠處死取眼球，分離出晶狀體。分別檢測大鼠晶狀體SOD活性、 MDA含量和AR活性。與模型組比較，白內(nèi)停對照組和重組水蛭素滴眼液組均能極顯著升高SOD活性（p< 0.01)以及極顯著降低MDA含量（p< 0.01)，并且能顯著降低AR活性 (見表3)。
[0038] 表3重組水蛭素III滴眼液對SD大鼠晶狀體SOD活性、MDA含量及AR活性的 影響（n= 6)
注：vs模型組，*p< 0? 05,#p< 0? 01。
[0039] 實驗結論： 重組水蛭素滴眼液能明顯減輕晶狀體混濁度，緩解半乳糖性白內(nèi)障癥狀的發(fā)展，并且 能增大SOD活性，降低MDA含量，降低AR活性，顯著改善大鼠半乳糖性白內(nèi)障嚴重程度。
【主權項】
1. 一種重組水蛭素滴眼液，其特征在于：以重組水蛭素為有效成分，透明質(zhì)酸鈉為增 稠劑，還含有等滲調(diào)節(jié)劑、金屬絡合劑、防腐劑以及藥學上可接受的載體；滴眼液中透明質(zhì) 酸鈉、重組水蛭素、等滲調(diào)節(jié)劑、金屬絡合物和防腐劑的質(zhì)量比為10:2:15. 27:50:3。2. 根據(jù)權利要求1所述的滴眼液，其特征在于：所述的等滲調(diào)節(jié)劑選自氯化鈉、硼酸 鹽緩沖液或者磷酸鹽緩沖液中的一種或幾種。3. 根據(jù)權利要求2所述的滴眼液，其特征在于：所述的緩沖溶液的pH值為4. 0~7. 5。4. 根據(jù)權利要求1所述的滴眼液，其特征在于：所述的金屬絡合劑為乙二胺四乙酸二 鈉。5. 根據(jù)權利要求1所述的滴眼液，其特征在于：所述的防腐劑為對羥基苯甲酸甲酯、對 羥基苯甲酸乙酯、對羥基苯甲酸丙酯、苯扎溴銨或硫柳汞中的一種或幾種。6. 根據(jù)權利要求1所述的滴眼液，其特征在于：所述的藥學上可接受的載體是注射用7. 根據(jù)權利要求1所述滴眼液，其特征在于，其制備方法為：將透明質(zhì)酸鈉、等滲調(diào)節(jié) 劑、金屬絡合劑和防腐劑溶解于藥學上可接受的載體制成滴眼液空白基質(zhì)，然后將重組水 蛭素溶解于該滴眼液空白基質(zhì)中，混勻、過濾、除菌分裝，制得重組水蛭素滴眼液。
【專利摘要】本發(fā)明公開一種重組水蛭素滴眼液，以重組水蛭素為有效成分，透明質(zhì)酸鈉為增稠劑，還含有等滲調(diào)節(jié)劑、金屬絡合劑、防腐劑以及藥學上可接受的載體；滴眼液中透明質(zhì)酸鈉、重組水蛭素、等滲調(diào)節(jié)劑、金屬絡合物和防腐劑的質(zhì)量比為10:2:15.27:50:3。其制備方法為將透明質(zhì)酸鈉、等滲調(diào)節(jié)劑、金屬絡合劑和防腐劑溶解于藥學上可接受的載體制成滴眼液空白基質(zhì)，然后將重組水蛭素溶解于該滴眼液空白基質(zhì)中，混勻、過濾、除菌分裝，制得重組水蛭素滴眼液。本發(fā)明的滴眼液一方面可以使重組水蛭素長時間滯留病灶區(qū)，又不會對敏感的眼組織產(chǎn)生刺激作用，同時還可以保證重組水蛭素滴眼液的儲存穩(wěn)定性。
【IPC分類】A61K9/08, A61K47/36, A61K47/16, A61K38/58, A61P27/12
【公開號】CN104906037
【申請?zhí)枴緾N201510345194
【發(fā)明人】謝海林
【申請人】廣西復鑫益生物科技有限公司平南分公司
【公開日】2015年9月16日
【申請日】2015年6月23日