專利名稱：一種重組雙功能水蛭素口服制劑及其制備方法
技術領域：
本發(fā)明屬藥劑學領域，涉及重組雙功能水蛭素特殊口服制劑及其制備方法。
背景技術：
重組雙功能水蛭素(r-RGD-Hirudin)是蛋白質(zhì)/多肽類藥物，目前一般將r-RGD-Hirudin制備成靜脈注射用粉針劑，因其直接口服，容易被胃酸、胃腸道蛋白酶破壞而失去生物學活性，故導致臨床應用范圍有限，尚不宜用于治療和預防慢性的血栓性疾病。
本領域公知，胃腸道對蛋白質(zhì)/多肽類藥物口服吸收構成三大屏障，包括酶的降解、黏液層的擴散屏障以及粘膜的吸收屏障。常規(guī)制劑工藝多需使用高溫、水和/或有機溶劑，極易使蛋白質(zhì)降解或活性喪失，以致給制備蛋白質(zhì)/多肽類藥物口服制劑帶來很大難度。近年來口服結腸靶向給藥系統(tǒng)和超臨界流體包衣技術在理論和實踐上的發(fā)展，為能有效地解決蛋白質(zhì)/多肽類藥物口服吸收的靶向部位及工藝敏感性等問題帶來希望。
根據(jù)解剖特點，結腸部位蛋白水解酶少、活力低，能避免蛋白質(zhì)/多肽類藥物的降解；結腸對大分子藥物的吸收屏障作用較小腸小、藥物在結腸滯留時間長、結腸部位水分少使藥物濃度高等因素也有利于蛋白質(zhì)/多肽類藥物的吸收。因此結腸是蛋白質(zhì)/多肽類藥物口服給藥在胃腸道吸收的最佳部位。已有的研究表明，如，將降鈣素以0.1-5.0mg/kg劑量直接給大鼠結腸給藥，其血藥濃度顯著升高，幅度達12％-38％。因此，降鈣素結腸給藥制劑已進入人體臨床試驗階段。此外，研究表明，胰島素、萬古霉素或人生長激素等均可通過結腸吸收。
常規(guī)結腸靶向制劑工藝中的傳統(tǒng)包衣工藝，往往使蛋白質(zhì)/多肽類藥物變性失活。
近年發(fā)展起來的超臨界流體技術工作環(huán)境溫和，不用或少用水及有機溶劑、在室溫常壓下呈氣態(tài)而易與產(chǎn)品分離，目前，最常用的超臨界流體是CO2，無毒、不易燃、價廉易得，而且臨界點參數(shù)低，在室溫常壓下呈氣態(tài)而易與所制得產(chǎn)品分離。近年來發(fā)展了的有關技術還包括超臨界流體快速膨脹法、超臨界流體抗溶劑法、氣溶膠溶劑萃取系統(tǒng)和超臨界流體強制分散技術等。
經(jīng)查閱文獻，目前尚無r-RGD-Hirudin口服制劑及其相關研究報道。因此，研究開發(fā)r-RGD-Hirudin的口服緩釋制劑具有重要現(xiàn)實意義。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種重組雙功能水蛭素口服制劑及其制備方法。
本發(fā)明的進一步目的是將r-RGD-Hirudin制成特殊口服制劑后，擴展其臨床適應癥和臨床使用范圍。
本發(fā)明重組雙功能水蛭素口服制劑由重組雙功能水蛭素和結腸靶向性聚合物聚乳酸及藥物輔料組成。
所述的重組雙功能水蛭素(專利號01105798.X)，其分子的第32至35位和第53至66位氨基酸序列為Arg32-Gly33-Asp34-Ser35；Gln53-Gly54-Asp55-Phe56-Glu57-Pro58-Ile59-Pro60-Glu61-Asp62-Ala63-Tyr64-Asp65-Glu66。
所述的聚乳酸是良好的包衣材料，具有安全無毒性，可生物降解等特點(市購)。
本發(fā)明的目的通過下述技術方案實現(xiàn)， 利用超臨界流體抗溶劑技術，將結腸靶向性聚合物聚乳酸先溶于溶劑中形成溶液，將該溶液迅速噴灑在流化的r-RGD-Hirudin顆粒表面，由于溫度和壓力的變化，聚合物的溶解度降低而包覆在r-RGD-Hirudin的表面上，制成口服顆粒制劑，通過動物實驗，證實所得的r-RGD-Hirudin口服制劑具有抗凝作用和緩釋作用。
實現(xiàn)所述技術方案的方法包括下述步驟 1、r-RGD-Hirudin超細顆粒制備 將藥用淀粉加入r-RGD-Hirudin原液10mg/mL，終濃度為5％，混勻，冷凍干燥，將凍干粉研磨，80目篩后，制成r-RGD-Hirudin超細顆粒； 2、CO2超臨界包衣 以聚乳酸為包衣材料，放入CO2超臨界包衣反應器的萃取釜中，將r-RGD-Hirudin超細顆粒放入流化床。CO2經(jīng)一定溫度(Tc＝31℃)和壓力(Pc＝7.38Mpa)處理后，加入萃取釜，反應15min后，將萃取釜中的流體導入流化床，在這一過程中，將溫度和壓力恢復到正常狀態(tài)，聚乳酸重新析出晶體，在r-RGD-Hirudin超細顆粒表面形成包衣。本發(fā)明選用的聚乳酸分子量為4.0×104-1.0×105。
所采用的CO2超臨界包衣技術的主要原理是在一定的溫度和壓力下，CO2形成流體，非極性的包衣材料可溶解在CO2流體中，而蛋白質(zhì)/多肽類藥物是極性分子，不能溶解在CO2流體中，呈固體狀態(tài)。改變反應體系的溫度和壓力，CO2流體汽化，CO2釋放，包衣材料從流體中析出，在蛋白質(zhì)/多肽類藥物顆粒表面形成均勻的包衣。由于這種包衣材料能抵抗胃酸的破壞，并且崩解的時間較長，口服后需6-8小時才崩解，蛋白質(zhì)/多肽類藥物達到結腸后吸收。
3、大鼠口服r-RGD-Hirudin，戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉，取血，枸櫞酸鈉抗凝，測定血液學指標，作為自身空白對照；口服藥物后2、4、6、8hr，再次取血，枸櫞酸鈉抗凝，測定血液學指標。
4、觀察指標取血，測定給藥前和給藥后2、4、6、8hr的凝血酶原時間、凝血酶時間、部分凝血活酶時間和最大血小板聚集率。
5、數(shù)據(jù)統(tǒng)計采用SSPS軟件。
本發(fā)明所制備r-RGD-Hirudin制劑顆粒規(guī)則，表面光滑，外觀均勻，無粘連，平均粒徑在70-105μm，載藥量、包封率高。通過動物實驗，結果表明具有抗凝作用，口服后24小時內(nèi)有效，具有緩釋作用，能克服現(xiàn)有技術的缺陷，拓寬了臨床應用范圍，宜用于治療和預防慢性的血栓性疾病。
圖1是用藥前后，凝血酶原時間的變化。
圖2是用藥前后，凝血酶時間的變化。
圖3是用藥前后，部分凝血活酶時間的變化。
圖4是用藥前后，最大血小板聚集率的變化。
具體實施例方式 下面通過實施實例對本發(fā)明的技術方案作進一步的描述。
實施例1 1、制備r-RGD-Hirudin超細顆粒 將藥用淀粉加入濃度為10mg/mL的r-RGD-Hirudin原液，藥用淀粉的終濃度為10％，混勻，冷凍干燥。將凍干粉充分研磨，80目篩后，制成r-RGD-Hirudin超細顆粒。
2、CO2超臨界包衣制劑以聚乳酸為包衣材料，稱取20克，放置入CO2超臨界包衣反應器的萃取釜中，稱取步驟1中獲得的r-RGD-Hirudin超細顆粒20克，放入超臨界包衣反應器的流化床。高純度CO2經(jīng)31℃保溫和7.38Mpa加壓處理后，導入萃取釜，反應15分鐘。將萃取釜中的CO2流體導入流化床，在導入過程中，將溫度恢復到20℃，壓力恢復到大氣壓，聚乳酸在相變過程中，重新析出晶體，并在r-RGD-Hirudin超細顆粒表面形成包衣。所制得的口服顆粒制劑平均粒徑為70-105μm。
本發(fā)明實驗選用的聚乳酸分子量為4.0×104-1.0×105。
3、r-RGD-Hirudin包衣制劑的藥效學研究取SD大鼠16只，分為2組，每組8只，分別灌胃，口服r-RGD-Hirudin包衣制劑。劑量為r-RGD-Hirudin 5mg/kg、20mg/kg?？诜?，大鼠腹腔注射戊巴比妥鈉麻醉，劑量為40mg/kg。麻醉后，分離左頸總動脈，插入動脈導管(5分鐘內(nèi)完成)，取血1.35mL，3.8％枸櫞酸鈉抗凝，抗凝劑量為全血體積∶抗凝劑體積＝1∶9，測定凝血酶原時間、凝血酶時間、部分凝血活酶時間和最大血小板聚集率4項血液學指標，作為自身空白對照?？诜-RGD-Hirudin包衣制劑后2、4、6、8小時，再次取血1.35mL，3.8％枸櫞酸鈉抗凝，抗凝劑量為全血體積∶抗凝劑體積＝1∶9，測定凝血酶原時間、凝血酶時間、部分凝血活酶時間和最大血小板聚集率4項血液學指標。數(shù)據(jù)統(tǒng)計用SPSS軟件作組內(nèi)T檢驗。
4、藥效學研究大鼠口服r-RGD-Hirudin包衣制劑，結果表明，口服用藥5mg/kg，血液學指標幾乎沒有變化，口服用藥20mg/kg，口服后6小時，凝血酶原時間、凝血酶時間、部分凝血活酶時間均顯著的延長，其中部分凝血活酶時間在口服后2小時就有顯著延長，口服用藥20mg/kg后4小時，最大血小板聚集率顯著下降，作用持續(xù)4小時左右。
表1為口服用藥5mg/kg后，血液學指標的變化。
表2為口服用藥20mg/kg后，血液學指標的變化。
其中，*表示顯著差異，P＜0.05；**表示極顯著差異，P＜0.01。
表1.
表2.
權利要求
1.一種重組雙功能水蛭素口服制劑，其特征是由重組雙功能水蛭素和聚乳酸及藥物輔料組成，所述的重組雙功能水蛭素其分子的第32至35位和第53至66位氨基酸序列為Arg32-Gly33-Asp34-Ser35；Gln53-Gly54-Asp55-Phe56-Glu57-Pro58-Ile59-Pro60-Glu61-Asp62-Ala63-Tyr64-Asp65-Glu66。
2.權利要求1的重組雙功能水蛭素口服制劑的制備方法，其特征是利用超臨界流體抗溶劑技術，將聚乳酸溶于溶劑中形成溶液后，將該溶液噴灑并包覆在流化的重組雙功能水蛭素顆粒表面，制成口服顆粒制劑，包括下述步驟
(1)制備重組雙功能水蛭素超細顆粒
將藥用淀粉加入r-RGD-Hirudin原液10mg/mL，終濃度為5％，混勻，冷凍干燥，將凍干粉研磨，80目篩后，制成r-RGD-Hirudin超細顆粒；
(2)CO2超臨界包衣
以聚乳酸為包衣材料，放入CO2超臨界包衣反應器的萃取釜中，將重組雙功能水蛭素超細顆粒放入流化床，CO2經(jīng)31℃保溫和7.38Mpa加壓處理后，加入萃取釜，反應15min后，將萃取釜中的流體導入流化床，將溫度和壓力恢復到正常狀態(tài)，聚乳酸析出晶體，在重組雙功能水蛭素超細顆粒表面形成包衣。
3.按權利要求2所述的方法，其特征是所述的步驟2的聚乳酸分子量為4.0×104-1.0×105。
4.按權利要求2所述的方法，其特征是所述的口服顆粒制劑平均粒徑為70-105μm。
5.權利要求1的重組雙功能水蛭素口服制劑在制備抗凝口服藥物中的用途。
6.權利要求1的重組雙功能水蛭素口服制劑在制備緩釋口服藥物中的用途。
7.權利要求1的重組雙功能水蛭素口服制劑在制備治療慢性的血栓性疾病口服藥物中的用途。
全文摘要
本發(fā)明屬藥劑學領域，涉及重組雙功能水蛭素特殊口服制劑及其制備方法。本發(fā)明利用超臨界CO2流體包衣技術，以聚乳酸為包衣材料包覆重組雙功能水蛭素藥物顆粒，制成口服制劑，所制備的制劑顆粒規(guī)則，表面光滑，外觀均勻，無粘連，平均粒徑在70-105μm，載藥量、包封率高。通過動物實驗，結果表明具有抗凝作用，口服后24小時內(nèi)有效，具有緩釋作用，能克服現(xiàn)有技術的缺陷，拓寬了臨床應用范圍，宜用于治療和預防慢性的血栓性疾病。
文檔編號A61K38/18GK101176785SQ20061011819
公開日2008年5月14日 申請日期2006年11月9日 優(yōu)先權日2006年11月9日
發(fā)明者宋后燕, 偉 莫 申請人:復旦大學