r)。
[0041] 免疫檢測方法是以一種抗體或多種抗體作為分析試劑，對待測物進行定量或定 性分析的檢測方法。其基本原理是抗體和抗原之間的相互作用。為提高抗原和抗體檢測 的敏感性，將已知抗體或抗原標記上易顯示的物質(zhì)，通過檢測標記物，反映有無抗原抗體反 應，從而間接測出微量的抗原或抗體。常用的標記物有酶、熒光素、放射性同位素、膠體金 及電子致密物質(zhì)等。這種抗原或抗體標記上顯示物所進行的特異性反應稱為免疫標記技術 (immunolabelling technique)。目前應用最廣的免疫檢測技術主要有：酶聯(lián)免疫吸附試驗 (enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)，膠體金免疫層析法等。
[0042] 酶聯(lián)免疫吸附試驗原理是將抗原或抗體與底物（酶）結合，使其保持免疫反應和 酶的活性。把標記的抗原或抗體與包被于固相載體上的配體結合，再使之與相應的無色底 物作用而顯示顏色，根據(jù)顯色深淺程度目測或用酶標儀測定OD值判定結果。
[0043] 膠體金試紙條一般由樣品墊、金標墊、層析膜、吸水墊四部分組成。層析材料有硝 化纖維膜（NC)、聚酯膜、尼龍膜和PVDF膜等，根據(jù)試驗需要可選擇不同要求的膜，其中NC膜 最為常用，使用前可根據(jù)試驗具體情況確定是否需要活化或處理，多數(shù)情況下無需處理，即 可直接使用。將金標蛋白溶液均勻噴涂在金標墊上，于室溫下晾干備用。NC膜可捕獲一定 量的包被（抗體）和二抗作為檢測線和質(zhì)控線。最后將樣品墊、金標墊、NC膜和吸水紙依 次固定于PVC板，即成試紙條。
[0044] 所述抑制劑和/或抑制劑組合物下調(diào)mir-326和/或miR-326的轉錄和/或阻 斷miR-326的活性屬于使miRNA功能喪失，理論上可以對miRNA合成及發(fā)揮功能過程中的 多個關鍵步驟進行干預：1)阻斷pri-miRNA或pre-miRNA的加工及出核過程；2)通過與 pre-miRNA結合，阻止其被加工和進入誘導沉默復合體（RISC) ;3)通過與RISC中的成熟 miRNA結合，發(fā)揮競爭性抑制作用。但目前主要通過導入外源性miRNA拮抗劑以阻斷其對 革巴基因的作用。具體干預方法包括：反義寡核苷酸（antisense miRNA oligonucleotides， AM0s)，antagomiRs、miRNA 海綿（miRNA Sponge)、miRNA Erasers、Target Masking 和多革巴 點反義寡核苷酸（multiple target AMU，MTg AMU)等。
[0045] 反義寡核苷酸技術即根據(jù)堿基配對原則，人工合成的與成熟的miRNA互補的單鏈 逆序核苷酸鏈，發(fā)揮競爭性抑制劑的作用。為了防止被核酸酶和磷酸二酯酶等的降解，需對 該反義核糖核酸鏈進行不同的化學修飾，實際應用中常采取多種技術混合修飾的方式以獲 得最佳的穩(wěn)定性。本發(fā)明中作為有效成分利用的反義寡核苷酸具有與在序列表中SEQ ID NO 2的核苷酸序列中的第1-第8、第2-第8或第2-第7核苷酸序列互補的序列。最優(yōu)選 的，本發(fā)明中作為有效成分利用的反義寡核苷酸具有與序列表SEQ ID NO 2的整個核苷酸 序列互補的序列。
[0046] antagomiRs技術即對反義寡核苷酸鏈的3'端進行膽固醇修飾和4個硫代磷酸位 點修飾，5'端進行2個硫代磷酸位點修飾，全鏈采用2' -OMe-AMOs修飾。該技術優(yōu)點在于， 硫代磷酸修飾降低了 antagomiR二聚體的解鏈溫度，從而保證了其穩(wěn)定性。
[0047] miRNA Sponge技術即多個重復的反義miRNA寡核苷酸片段，該序列與革E miRNA的 種子序列部分互補，將其插入到己構建好的綠色熒光蛋白報告基因的3' UTR中，由巨細胞 病毒啟動子引導，發(fā)揮多結合域競爭性抑制劑的作用。為了與靶miRNA更穩(wěn)定的結合，在 AG02的剪切區(qū)域（第9-12位核苷酸）設計了 4個不配對的堿基對。實驗證明，miRNA ponge 具有和AMOs相似的作用效果。該技術常被用來抑制某個miRNA家族的功能。
[0048] miRNA Erasers技術。與miRNA Sponge技術相似，但僅將2個重復的反義miRNA 寡核苷酸片段插入到報告基因的3'UTR中，且與靶miRNA完全互補，在U6啟動子的控制下， 通過腺病毒載體轉染細胞。由于其并非種子序列特異性，所以僅被用來抑制某個miRNA的 功能。miRNA Erasers技術的作用持續(xù)時間也比miRNA Spong技術短。
[0049] miR-Masking技術。1種miRNA迪常有多個革巴mRNA結合位點，同時調(diào)控著多種蛋白 質(zhì)的表達。因此，抑制某1種miRNA的表達，不僅可對目標mRNA進行調(diào)控，還可能會產(chǎn)生不 需要的"革E外效應（off-target effect) 〃。而miR-Masking技術的出現(xiàn)較好地解決了這一 問題。它是1段與靶mRNA結合的反義核苷酸序列，以極高的親和性與miRNA的某個靶mRNA 3' UTR端互補結合，從而特異地阻斷miRNA和該靶mRNA的相互作用，對該miRNA的水平或 其它功能并不產(chǎn)生影響。
[0050] 多靶點反義寡核苷酸技術即指將多個反義寡核苷酸片段設計到同1條核苷酸鏈 上，使其具有同時抑制多個miRNA的活性，進而調(diào)節(jié)多種靶蛋白質(zhì)。該技術適用于同時調(diào)節(jié) 作用于某mRNA的多個miRNA。
[0051] 包含在本發(fā)明的藥劑學組合物的藥劑學上許可的載體為在制劑時通常利用的載 體，該載體包含乳糖（lactose)、右旋糖（dextrose)、鹿糖（sucrose)、山梨醇（sorbitol)、 甘露醇（mannitol)、淀粉、阿拉伯橡膠、磷酸媽、藻酸鹽（alginate)、凝膠（gelatin)、娃酸 媽、微晶纖維素、聚乙稀吡略燒酮（polyvinylpyrrolidone)、纖維素（cellulose)、水、糖 楽·、甲基纖維素 （methyl cellulose)、羥基苯甲酸甲醋（methyl hydroxybenzoate)、丙基輕 基苯甲酸丙醋（propyl hydroxybenzoate)、滑石、硬脂酸儀（stearic acid magnesium)及 礦物油（mineral oil)等，但并非局限于此。
[0052] 本發(fā)明的藥劑學組合物除了上述成分以外還可以包含潤滑劑、濕潤劑、甜味劑、香 味劑、乳化劑、懸浮劑、防腐劑等。藥劑學上許可的適合的載體和制劑詳細記載于雷明登氏 藥學全書。
[0053] 本發(fā)明的藥劑學組合物能通過口服或非口服進行給藥，作為非口服給藥時，能通 過靜脈內(nèi)注射，鼻腔內(nèi)注射，局部注射，腦室內(nèi)注射，脊髓腔注射，皮下注射，腹腔注射，經(jīng)皮 給藥等方式進行給藥。
[0054] 本發(fā)明的藥劑學組合物的適合的給藥劑量根據(jù)制劑化方法、給藥方式、患者的年 齡、體重、性別、病態(tài)、食物、給藥時間、給藥途徑、排泄速度及反應靈敏性之類的因素而可以 進行多種處方，通常，熟練的醫(yī)生能夠容易地決定及處方對所希望的治療或預防有效的給 藥劑量。
[0055] 本發(fā)明的藥劑學組合物根據(jù)本發(fā)明所屬技術領域的普通技術人員可以容易實施 的方法，利用藥劑學上能接受的載體和/或賦形劑來進行制劑化，從而能夠以單位用量形 態(tài)制備或者內(nèi)裝在多容量容器內(nèi)來制備。此時，劑型是油性或者水性介質(zhì)中的溶液、懸浮液 或乳化液形態(tài)，或者也可以是浸膏劑、粉末劑、顆粒劑、片劑或者膠囊劑形態(tài)，還可以包括分 散劑或者穩(wěn)定劑。
【附圖說明】
[0056] 圖I RT-PCR檢測鼻咽癌組織miR-326表達水平
【具體實施方式】
[0057] 下面結合具體實施例，進一步闡述本發(fā)明，僅用于解釋本發(fā)明，而不能理解為對本 發(fā)明的限制。本領域的普通技術人員可以理解：在不脫離本發(fā)明的原理和宗旨的情況下可 以對這些實施例進行多種變化、修改、替換和變型，本發(fā)明的范圍由權利要求及其等同物限 定。下列實施例中未注明具體條件的實驗方法，通常按照常規(guī)條件或按照廠商所建議的