同時(shí)的化學(xué)療法和免疫療法
【專利說明】同時(shí)的化學(xué)療法和免疫療法
[0001] 本申請是分案申請，原申請的申請日為2006年11月2日、申請?zhí)枮?200680044649. 7 (PCT/US2006/042812)、發(fā)明名稱為"同時(shí)的化學(xué)療法和免疫療法"。
[0002] 本發(fā)明是在美國政府國家衛(wèi)生研宄所（National Institute of Health)的資金 號ROl CA097222的支持下完成的。所以，美國政府保留本發(fā)明的某些權(quán)利。
[0003] 本申請要求2005年11月2日提交的美國臨時(shí)申請60/732, 741的權(quán)益，其全部內(nèi) 容在此明確引入。
[0004] 本發(fā)明的技術(shù)領(lǐng)域
[0005] 本發(fā)明涉及癌癥免疫療法的領(lǐng)域。特別地，其涉及對腫瘤疫苗的增強(qiáng)的應(yīng)答。
[0006] 發(fā)明背景
[0007] 盡管有廣泛手術(shù)切除、大劑量集中放射性療法和化學(xué)療法，被診斷患有GBM的 患者在診斷后的平均存活時(shí)間小于15個(gè)月（Stupp等，Optimal role of temozolomide in the treatment of malignant gliomas，Curr Neurol Neurosci Rep. 2005 年 5 月； 5(3) :198-206)。治療的失敗至少可被部分歸因于相對較窄的治療指數(shù)，以至于增大劑量 的嘗試導(dǎo)致劑量限制的全身或神經(jīng)性毒性。雖然免疫療法的使用很有希望成為這些腫瘤 的潛在治療方式，但是直到最近，幾乎沒有顯示出臨床效力。若干用選定患者進(jìn)行的臨 床實(shí)驗(yàn)，包括用樹突細(xì)胞（DCs)及酸洗脫的肽（Ashkenazi等，A selective impairment of the IL-2system in lymphocytes of patients with glioblastomas: increased level of soluble IL-2R and reduced protein tyrosine phosphorylation, Neuroimmunomodulation. 1997 ；Kolenko 等，Tumor-induced suppression of T lymphocyte proliferation coincides with inhibition of Jak3expression and IL_2receptor signaling: role of soluble products from human renal cell carcinomas. J Tmmunol · 1997 年 9 月 15 日；159 (6):3057-67 ;Liau 等，Dendritic cell vaccination in glioblastoma patients induces systemic and intracranial T-cell responses modulated by the local central nervous system tumor microenvironment. Clin Cancer Res. 2005 年 8 月 I 日；11 (15) :5515-25)或抗原特異性肽（Heimberger AB,Archer GE 等，Dendritic cells pulsed with a tumor-specific peptide induce long-lasting immunity and are effective against murine intracerebral melanoma. Neurosurgery. 2002年I月；50 (I) : 158-64 ;討論164-6)接種神經(jīng)膠質(zhì)瘤患者，已經(jīng)通過提 高平均存活時(shí)間到20-31個(gè)月的范圍顯示出希望。而且，在最近完成的使用抗原特異性免 疫治療方法的Π 期臨床試驗(yàn)中，GBM患者病情發(fā)展的時(shí)間（time to progression(TTP))被 延遲到15個(gè)月，這與具有7個(gè)月TTP時(shí)間（Stupp等，2005,上文）和平均生存時(shí)間為29個(gè)月 (Heimberger等，J Transl Med. 2005年 10月 19 日；3:38The natural history of EGFR and EGFRvIII in glioblastoma patients)的包含放射性療法和替莫挫胺（temozolomide)的 護(hù)理標(biāo)準(zhǔn)明顯形成對照?？傊@些免疫療法實(shí)驗(yàn)說明盡管惡性神經(jīng)膠質(zhì)瘤患者有內(nèi)在的 免疫抑制，但是仍然能夠產(chǎn)生有效的免疫應(yīng)答。然而，考慮到最近建立的護(hù)理標(biāo)準(zhǔn)和總體較 差的預(yù)后，不使用某些形式的化學(xué)療法治療GBM患者是勉強(qiáng)的。
[0008] 在本領(lǐng)域內(nèi)，有開發(fā)出通常地治療腫瘤和特別地治療膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的更好的方法 的持續(xù)需求。
[0009] 發(fā)明概述
[0010] 提供了一種治療受治療者腫瘤的方法。給予受治療者治療有效量的EGFRvin肽 和治療有效量的、引發(fā)淋巴細(xì)胞減少癥的化學(xué)治療劑。
[0011] 根據(jù)另一個(gè)實(shí)施方式，提供了一種治療受治療者體內(nèi)腫瘤的方法。治療有效量的 與KLH結(jié)合的EGFRvIII肽被給予患有腫瘤的受治療者。粒細(xì)胞/巨噬細(xì)胞集落刺激因子 (Granulocyte/macrophage colony stimulating factor (GM-CSF))作為佐劑，也以有效量 與EGFRvIII肽同時(shí)給予受治療者。治療有效量的烷化劑也給予受治療者。
[0012] 根據(jù)其它另一實(shí)施方式，提供了一種治療受治療者腫瘤的方法。治療有效量的抗 腫瘤疫苗和治療有效量的替莫唑胺或其藥物上可接受的鹽被給予受治療者。
[0013] 根據(jù)另一實(shí)施方式，提供了一種治療受治療者腫瘤的方法。治療有效量的抗腫瘤 疫苗和治療有效量的，引發(fā)淋巴細(xì)胞減少癥的化學(xué)治療劑被給予受試者。
[0014] 這些以及其它在本領(lǐng)域普通技術(shù)人員閱讀本說明書后明了的實(shí)施方式為本領(lǐng)域 提供了治療難以治療的腫瘤的方法。
[0015] 發(fā)明詳述
[0016] 由于擔(dān)心化學(xué)療法引起的淋巴細(xì)胞減少癥會抵消免疫療法的治療效力，化學(xué)療法 和免疫療法的同時(shí)施用被認(rèn)為是不當(dāng)?shù)?。替莫唑胺對患有惡性神?jīng)膠質(zhì)瘤的患者已經(jīng)顯示 出有效的化學(xué)治療，而使患有膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的患者喪失這種試劑以便用免疫療法治療是有 爭議的。盡管有傳統(tǒng)的教條，發(fā)明人演示了化學(xué)療法和免疫療法能夠被同時(shí)給予而不抵消 免疫療法的效力。事實(shí)上，替莫唑胺引發(fā)的淋巴細(xì)胞減少癥實(shí)際可與肽疫苗協(xié)同作用。盡管 申請人不希望被特定的有關(guān)作用機(jī)理的理論所限制，觀察到的協(xié)同可能從屬于調(diào)節(jié)性T細(xì) 胞（Tregs)的抑制或Tregs恢復(fù)的失敗，這允許效應(yīng)物（effector)細(xì)胞毒性（cytotoxic) ⑶8+T細(xì)胞增加。可能也涉及其它機(jī)理。
[0017] "EGFRvIII" 或"表皮生長因子受體突變體 III (Epidermal Growth Factor Receptor mutation III)"是表皮生長因子受體的已知突變形式。見，例如美國專利號 6, 503, 503 ;也參見美國專利號 6, 900, 221 ;6, 673, 602 ;6, 479, 286 和 6, 129, 915。引起 vIII 蛋白產(chǎn)生的突變體通常由801對堿基對從胞外域一致的和腫瘤特異性的符合讀碼框的缺 失來表征，所述缺失將一個(gè)密碼子分開并在融合點(diǎn)產(chǎn)生一個(gè)新的甘氨酸。
[0018] "EGFRvIII肽"用在此處是指合適長度的肽，如至少10個(gè)或12個(gè)氨基酸，以及達(dá) 到16個(gè)、20個(gè)或30個(gè)氨基酸或更多，該肽跨過對應(yīng)EGFRvIII蛋白的突變剪接點(diǎn)。例子包 括但不限于：H-LEEKKGNYWTDHS-OH或"PEP-3"。所述EGFRvIII肽可能來自（或在序列上對 應(yīng)于）任何哺乳動物物種的EGFRvIII，但是優(yōu)選的是人類。特定的野生型EGFR序列在SEQ ID N0:6到9中顯示。
[0019] "載體蛋白"用在這里是指與在該物種中發(fā)現(xiàn)的，接受本發(fā)明所述組合物并引起 免疫應(yīng)答的蛋白不具有高同源性的蛋白。按照用于比較兩個(gè)氨基酸序列的已知數(shù)學(xué)算 法確定，一種蛋白與另一蛋白如果至少75 %相同，更優(yōu)選地至少85%相同或至少90%相 同，那么該蛋白與另一蛋白具有高同源性（參見，例如Karlin and Altschul，1990, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87:2264-2268 ;Karlin 和 Altschul，1993, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:5873-5877 ;Torellis 和 Robotti，1994，Comput Appl. Biosci. 10:3-5 ;及 Pearson 和 Lipman，1988, Proc. Natl. Acad. Sci. 85:2444-8)。優(yōu)選地，兩個(gè)氨基酸序列的相同百分?jǐn)?shù)用 XBLAST程序，得分=50,字長=3,由BLAST蛋白質(zhì)搜索確定。異源載體蛋白的例子包括，但 不限于KLH，PhoE，mLT，TraT或來自BhV-I病毒的gD。參見，例如美國專利號6, 887, 472。 這些載體蛋白可能根據(jù)已知技術(shù)直接或通過一個(gè)間插接頭片段（intervening linker segment)，如一個(gè)或多個(gè)（如2個(gè)、4個(gè)、6個(gè)）間插氨基酸（如間插半胱氨酸（CYS)殘基） 的鏈，與腫瘤抗原結(jié)合（conjugated)或連接（linked)。
[0020] "KLH"或"匙孔血藍(lán)蛋白（keyhole-limpet hemocyanin) "是一種已知的載體蛋白， 其可根據(jù)已知技術(shù)與另一種蛋白結(jié)合。參見如美國專利號6, 911，204。
[0021] "佐劑"用在此處是指增強(qiáng)與佐劑同時(shí)給藥的疫苗治療效力的不同種類化合物中 的任何一種。在一些實(shí)施方式中，所述佐劑是造血細(xì)胞生長因子，如GM-CSF。常見的佐劑的 例子包括但不限于氫氧化鋁、磷酸鋁或氧化鋁；基于例如礦物油的水包油型或油包水型乳 劑，如Bayol Fo或Marcol 52TM，或植物油的水包油型或油包水型乳劑，如醋酸維生素 E、皂 草戒（saponins)、卡介菌（BCG)、M.vaccae、破傷風(fēng)類毒素 （Tetanus toxoid)、白喉類毒素 (Diphtheria toxoid)、百日咳博德特氏菌（Bordetella pertussis)、白細(xì)胞介素2、白細(xì)胞 介素12、白細(xì)胞介素4、白細(xì)胞介素7、完全弗氏佐劑、不完全弗氏佐劑和非特異性佐劑。參 見，例如美國專利號6, 699, 483。
[0022] "造血細(xì)胞生長因子（hematopoietic growth factors) "或"HGFs"已公知。參見， 例如美國專利號6, 863, 885。通常，HGFs是調(diào)控造血祖細(xì)胞（hematopoietic protenitor cells)增殖和分化的糖蛋白細(xì)胞因子。打算在本發(fā)明中使用的造血細(xì)胞生長因子可選自 G-CSF(粒細(xì)胞集落刺激因子）、SCF(干細(xì)胞因子）、GM-CSF(粒細(xì)胞/巨噬細(xì)胞集落刺激 因子）、IL-I (白細(xì)胞介素-I)、IL-3、IL-6、IL-8、IL-11、IL-12、LIF(白血病抑制因子）、 FGF-β (成纖維細(xì)胞生長因子f3)、FLT-3或它們組合的種類。這些生長因子可以購買（如， R&D Systems，Minneapolis，MN)或按照通常在本領(lǐng)域內(nèi)和在描述這些因子的文獻(xiàn)中所述 的步驟制備。此外，所述造血細(xì)胞生長因子可以是該因子的修飾形式或選自GCSF、SCF、 GM-CSF、IL-I、IL-3、IL-6、IL-8、I