丹參酮ⅱa在制備治療肌腱粘連的藥物中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種丹參酮II A在制備治療肌腱粘連的藥物中的 應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 肌腱粘連是指肌腱損傷修復(fù)過程中周圍組織的增生和侵入，造成肌腱運動功能障 礙。外傷術(shù)后肌腱粘連是肌腱損傷后常見問題之一，是手外科尚未解決的難題之一，迄今為 止仍無有效的解決方法。
[0003] 肌腱粘連發(fā)生的原因可能為機械性和化學(xué)性的損傷誘發(fā)組織間質(zhì)細(xì)胞、肥大細(xì)胞 釋放多種活性物質(zhì)，包括凝血酶、組胺、肝素及其它血管活性物質(zhì)，使組織產(chǎn)生炎性反應(yīng)，毛 細(xì)血管通透性增加，大量漿液滲出。這些滲出物如不能被分解吸收，則促使纖維蛋白積聚， 繼而發(fā)生纖維細(xì)胞浸潤和新生毛細(xì)血管地長入，最后形成纖維粘連。目前認(rèn)為肌腱的愈合 由內(nèi)、外兩種機制完成。內(nèi)源性機制指通過肌腱細(xì)胞增生、分泌膠原纖維修復(fù)損傷肌腱；外 源性機制指通過腱周組織增生，成纖維細(xì)胞增殖，產(chǎn)生膠原纖維修復(fù)損傷肌腱。肌腱損傷 輕，縫合質(zhì)量好，營養(yǎng)供給充分，則以內(nèi)源性修復(fù)為主要途徑；而當(dāng)肌腱損傷嚴(yán)重、縫合質(zhì)量 差，肌腱本身的血供和滑液彌散系統(tǒng)受到破壞時，則外源性修復(fù)占優(yōu)勢形成粘連，因此粘連 是肌腱外源性修復(fù)的必然結(jié)果。
[0004] 目前發(fā)現(xiàn)與肌腱損傷修復(fù)過程有關(guān)的主要細(xì)胞因子包括：轉(zhuǎn)化生長因子 β (transforming growth factor-β，TGF-β)、骨形態(tài)發(fā)生蛋白 12(bone morphogenetic protein-12，BMP-12)、膜島素樣生長因子 I (insulin-like growth factor- I，IGF-1)、 堿性成纖維細(xì)胞生長因子（basic fibroblast growth factor，bFGF)、血管內(nèi)皮生長因子 (vascular endothelial growth factor，VEGF)，血小板源性生長因子（plateled derived 區(qū)1*〇￥1:11€3(31:〇1'，1306?)等。16#1]是一個相對分子質(zhì)量為2.5\10 4的同源二聚體蛋白，人類 有TGF-β 1、TGF-β 2、TGF-β 3三個同分異構(gòu)體，其中TGF-β I在人體內(nèi)的分布最多且與肌 腱損傷修復(fù)的關(guān)系也最密切。Natsu等[2]發(fā)現(xiàn)正常肌腱細(xì)胞和腱鞘細(xì)胞都能產(chǎn)生TGF-β 1， 該因子在肌腱損傷時被激活，其mRNA上調(diào)明顯。樸英杰等[3]針對TGF-β 1對人胚腱細(xì)胞 的劑量效應(yīng)和時間效應(yīng)以及TGF-β 1對細(xì)胞周期及增殖指數(shù)的影響進行觀察，結(jié)果發(fā)現(xiàn) TGF-β 1可刺激腱細(xì)胞DNA合成，且指出TGF-β 1可能通過促進腱細(xì)胞增殖參與肌腱的修 復(fù)。Beredjiklian等[4]通過對羊胚胎肌腱損傷模型研宄發(fā)現(xiàn)，胚胎肌腱損傷后是無瘢痕愈 合，而胚胎環(huán)境中TGF-β 1及其mRNA含量明顯低于成年組織，這提示胚胎的無瘢痕愈合機 制可能就是這種低濃度的TGF- β 1環(huán)境造成的。Malmstrom等[5]研宄發(fā)現(xiàn)TGF- β 1通過促 使成纖維細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的募集、血管的生成、刺激膠原的產(chǎn)生、下調(diào)基質(zhì)金屬蛋白酶的活 性和增加基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑的活性而發(fā)揮作用，是一個在急性炎癥及傷口愈合中起重 要作用的細(xì)胞因子，它的過分表達(dá)可導(dǎo)致過度瘢痕增生和纖維化。
[0005] 丹參為唇形科鼠尾草屬植物丹參（Salviamiltior-rhiza bunge)的干燥根及根 莖，具有抗菌、消炎、擴張血管、抗血小板凝集等作用[6]，其有效成分主要是丹參素（P-3, 4 二羥基苯基乳酸）及丹參酮。丹參酮II A經(jīng)磺化后得到的丹參酮II A磺酸鈉的滅菌水溶液， 大大增強了藥物的水溶性，獲得了更高的療效。傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)認(rèn)為，丹參走血分，通血脈，功擅活 血化瘀?！秼D人明理論》記載："一味丹參，功同四物"。李時珍在《本草綱目》中也稱丹參具有 四物湯的功效。丹參主產(chǎn)于四川、山西、河北、江蘇、安徽等地，藥用部位取根及根莖部，以條 粗、內(nèi)紫黑色及有菊花狀白點者為佳，其性微寒、味苦，入心、心包經(jīng)及肝經(jīng)。國家藥典（2005 年版）歸納丹參的功效為"祛瘀止痛，活血通經(jīng)，清心除煩。用于月經(jīng)不調(diào)、經(jīng)閉痛經(jīng)、癥瘕 積聚、胸腹刺痛，熱痹疼痛、瘡瘍腫痛、心煩不眠，肝脾腫大，心絞痛。"丹參因其肯定的活血 化瘀作用而被用于肝病、心血管疾病的治療，并取得了顯著療效。其有效成分有水溶性和脂 溶性兩大類，水溶性部分主要為酚酸類化合物（包括丹參素、原兒茶醛、丹酚酸等），脂溶性 部分主要為二萜醌類化合物（包括丹參酮、隱丹參酮等）。楊偉峰等 [7]發(fā)現(xiàn)，丹參酮可劑量 依賴性地抑制HSC增殖，不同程度抑制I型膠原、透明質(zhì)酸和層粘連蛋白分泌，提示其在細(xì) 胞水平有抗肝纖維化效應(yīng)。孫興旺等 [8]證實丹參酮II A磺酸鈉（DS-201)抑制人腎間質(zhì)纖維 化來源的成纖維細(xì)胞（hRIFs)體外增殖，可能是通過抑制細(xì)胞中cyclin E基因的表達(dá)阻滯 細(xì)胞通過G1/S關(guān)卡，從而延長細(xì)胞周期實現(xiàn)的，這種顯著抑制作用可能是其治療腎間質(zhì)纖 維化的機制之一。王禎苓等通過丹參治療肝纖維化大鼠實驗，認(rèn)為丹參抑制肝臟膠原增生， 可促進沉積的纖維降解吸收。膠原降解主要受MMPs活性調(diào)控，Wasser等 [9]發(fā)現(xiàn)丹參可提 高肝纖維化大鼠肝組織MMP mRNA表達(dá)抑制金屬蛋白酶組織抑制因子21 (Tissue inhibitor of metalloproteinase 21，HMP21)mRNA表達(dá)。劉成海等[1°]以TGF-β 1刺激的體外原代培 養(yǎng)大鼠 HSC活化，同時以丹參酸作用，結(jié)果發(fā)現(xiàn)丹參酸抑制細(xì)胞膠原分泌、α -平滑肌肌動 蛋白（a-smooth muscle actin，a-SM)與纖維蛋白酶原激活物抑制因子的蛋白表達(dá)，下 調(diào)I型前膠原基因表達(dá)；并且抑制細(xì)胞質(zhì)與細(xì)胞核內(nèi)Smad 2、3的蛋白表達(dá)，抑制Smad2蛋 白胞內(nèi)磷酸化及其核轉(zhuǎn)位，說明丹參酸抗肝纖維化、抑制HSC活化的機制在于抑制TGFβ 1 在HSC的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)。王曉玲等[11]認(rèn)為丹參酸可抑制TGF- β 1促進細(xì)胞I型膠原mRNA表達(dá) 的作用以及干預(yù)TGF-β 1在HSC胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)中的轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)及其生物效應(yīng)。丹參也被 應(yīng)用于創(chuàng)面修復(fù)領(lǐng)域，人成纖維細(xì)胞（fibroblasts，F(xiàn)B)可自分泌胰島素樣生長因子、血小 板衍生生長因子、TGF-β 1和EGF等[12'13]。其中TGF-β 1是創(chuàng)傷修復(fù)過程中的重要因子，它 能提供正常愈合的信號物質(zhì)，影響愈合過程的所有階段。實驗證明[14' 15]TGF-f3 1的主要功 能是促進FB的增殖，調(diào)節(jié)膠原合成與降解間的平衡并引起細(xì)胞外基質(zhì)沉積，TGF-β 1還可 誘導(dǎo)平滑肌肌動蛋白在FB中的表達(dá)，刺激I型膠原纖維的合成，通過膠原酶選擇性地?fù)p傷 III型膠原纖維，使I /III型膠原比率上升，這一結(jié)果與其后發(fā)生的病理性創(chuàng)傷收縮及瘢痕 形成密切相關(guān)。而適量的TGF-β 1有益于組織愈合，過度表達(dá)卻有可能導(dǎo)致瘢痕和纖維化 形成，應(yīng)用與TGF-β 1互補的反義寡核苷酸則可減少瘢痕形成[16]。
[0006] 肌腱粘連屬中醫(yī)"筋傷"，"痹證"范疇。傷后早期積血成瘀，痰凝積滯，筋拘不伸， 血絡(luò)不活故關(guān)節(jié)僵硬，活動不利最后甚至萎廢不用。目前中醫(yī)藥對肌腱粘連主要采用中醫(yī) 理論的動靜結(jié)合、中醫(yī)手法和中藥外敷、熏洗綜合治療此類粘連疾患。治療手法以揉法、滾 法舒筋活絡(luò)，配合手指的捻、擼、拔伸，松動患手、腕關(guān)節(jié)，使肌腱完全放松，使用抬腕叩指法 使肌腱滑動、伸張、震動。屈指彈指法可使屈肌腱快速滑動，并帶動腕部活動，一般在術(shù)后8 周左右進行，操作要點以輕柔、圓潤、循序進行，忌暴力。中藥熏洗有疏經(jīng)活絡(luò)、活血祛瘀、通 利關(guān)節(jié)的功效可配合手法治療，清代吳師機著《理瀹駢文》曰："外治之理即內(nèi)治之理，外治 之藥即內(nèi)治之藥，所異者法耳。"損傷術(shù)后6周促進腫脹吸收、活絡(luò)關(guān)節(jié)緩解拘急有確切療 效。常用的藥物組成有：威靈仙，生川、草烏，炮穿山甲，生半夏，雞血藤，杭白芍，油松節(jié)，伸 筋草，透骨草，川桂枝，白酒等。
[0007] "瘀"在"痹"的形成過程中起到重要的作用，瘀的狀態(tài)貫穿痹證始終?！端貑?痹 論》中有"心痹者脈不通"、"病久入深，營衛(wèi)之行澀，經(jīng)絡(luò)時疏，故不通"之句，其他如"經(jīng)脈流 行不止，環(huán)周不休，寒氣入經(jīng)而稽遲，泣而不行……故卒然而痛"（《舉痛論》），"寒氣客于經(jīng) 脈之中則血泣，"（《癰疽》）。"脈澀曰痹"（《素問?平人氣象論》），"痹在于脈則血