一種雷公藤免疫納米粒及用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體地說，是一種雷公藤免疫納米粒及用途。
【背景技術(shù)】
[0002]肥大細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞是過敏反應(yīng)的主要效應(yīng)細(xì)胞，細(xì)胞表面表達(dá)特異性受體IgE高親和力受體(Fe ε RI)，該受體可與IgE高親和力結(jié)合，當(dāng)多價(jià)抗原與細(xì)胞表面的IgE結(jié)合后，多個(gè)Fe ε RI受體分子發(fā)生交聯(lián)，導(dǎo)致細(xì)胞的活化和生物活性物質(zhì)的釋放，發(fā)生I型超敏反應(yīng)。近年來越來越多的研宄證實(shí)，肥大細(xì)胞還參與其他多種疾病的發(fā)生和發(fā)展，如肥大細(xì)胞增多癥、腫瘤、自身免疫性疾病和心血管疾病。肥大細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞凋亡可能是治療過敏及肥大細(xì)胞相關(guān)疾病的有效手段。
[0003]雷公藤來源于植物雷公藤的根部，是臨床上治療自身免疫性疾病的有效藥物。
[0004]雷公藤含有多種活性成分，如三萜類、二萜類和生物堿類。研宄表明雷公藤具有抗炎、抗神經(jīng)退行性變和抗腫瘤的作用。近年來研宄發(fā)現(xiàn)，雷公藤及其單體成分具有肥大細(xì)胞凋亡作用，其主要作用機(jī)制是使促凋亡基因(baX、c-myc)表達(dá)增加，使抗凋亡基因(bcl_2)的表達(dá)減少。在體內(nèi)，肥大細(xì)胞凋亡形成的凋亡小體可被巨噬細(xì)胞吞噬，而不引起顆粒內(nèi)容物釋放。因此，雷公藤及單體成分可能成為過敏性疾病或者肥大細(xì)胞相關(guān)疾病治療的理想藥物。
[0005]然而，雷公藤難溶于水，制成藥物制劑有一定困難。此外，雷公藤對(duì)細(xì)胞的凋亡作用是非組織、器官和細(xì)胞特異的，這些特性導(dǎo)致了雷公藤體內(nèi)應(yīng)用時(shí)的毒副反應(yīng)，特別是對(duì)生殖的抑制，使其臨床應(yīng)用范圍受到極大限制。因此，如何克服雷公藤的水不溶性和毒性、增加生物利用度是目前亟待解決的問題。而制備靶向給藥系統(tǒng)成了雷公藤臨床應(yīng)用的關(guān)鍵。
[0006]納米材料在生物領(lǐng)域的應(yīng)用為藥物的研發(fā)提供了廣闊的平臺(tái)。納米載體具有增溶、生物相容性好、緩釋、循環(huán)時(shí)間長(zhǎng)、靶向性等優(yōu)點(diǎn)，在生物制藥領(lǐng)域應(yīng)用廣泛，目前常用的納米載體有脂質(zhì)體、樹枝狀聚合物、納米碳管和磁性納米粒、聚合物納米粒子。
[0007]Fe ε RI是IgE高親和力受體，是由α、β和兩個(gè)γ亞單位組成的四聚體，α鏈?zhǔn)荌gE的結(jié)合部位，主要表達(dá)于肥大細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞表面，并且在疾病狀態(tài)時(shí)肥大細(xì)胞膜表面的受體的表達(dá)量顯著增加。Fe ε RI表達(dá)的局限性、疾病狀態(tài)表達(dá)量增加的特性、Fe ε RI α為IgE結(jié)合部位的生物優(yōu)越性使其成為肥大細(xì)胞有效的靶分子。
[0008]關(guān)于本發(fā)明的一種雷公藤免疫納米粒及用途目前還未見報(bào)道，本發(fā)明以納米材料為載體，包裹雷公藤，偶聯(lián)抗Fe ε RI α抗體，構(gòu)建雷公藤-納米-抗人Fe ε RI α單抗三聚物，所形成的雷公藤免疫納米粒既可以增加雷公藤的溶解度，提高藥物的生物利用度；又能將雷公藤定向攜帶至表達(dá)Fe ε RI的肥大細(xì)胞或嗜堿性粒細(xì)胞使其凋亡，從而可以有效地緩解過敏性炎癥和過敏癥狀，降低毒副作用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0009]本發(fā)明的目的是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供一種雷公藤免疫納米粒。
[0010]本發(fā)明的再一的目的是，提供一種雷公藤免疫納米粒的制備方法。
[0011]本發(fā)明的另一的目的是，提供一種雷公藤免疫納米粒的用途。
[0012]為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案是:一種雷公藤免疫納米粒，所述的雷公藤免疫納米粒為包封了細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)劑的納米粒，所述的細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)劑為雷公藤或雷公藤單體成分，所述的納米粒表面有抗體修飾。
[0013]所述的雷公藤單體成分為雷公藤紅素、雷公藤酮、雷酚酮內(nèi)酯、雷公藤對(duì)醌A、雷公藤三萜酸B、雷公藤內(nèi)酯甲、雷公藤內(nèi)酯乙、雷公藤內(nèi)酯醇、雷公藤內(nèi)酯二醇、雷公藤內(nèi)酯酮、雷公藤喊戊、雷公藤內(nèi)醋、雷公藤吉喊、雷公藤特喊、雷公藤次喊、雷公藤春喊、雷公藤晉喊、雷公藤靈堿、雷公藤增堿或雷公藤異春堿。
[0014]所述的雷公藤免疫納米粒的載體材料為聚合物納米粒子、脂質(zhì)體、樹枝狀聚合物、磁性納米?；蚣{米碳管。
[0015]所述的抗體為識(shí)別并結(jié)合肥大細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞表面IgE高親和力受體α鏈的抗體或者抗體Fab片段或者人源化抗體或者單鏈抗體。
[0016]所述的抗體為抗人Fe ε RI α抗體、抗人Fee RIa抗體Fab片段、人源化抗人Fe ε RI α抗體、抗鼠Fe ε RI α抗體、抗鼠Fe ε RI α抗體Fab片段、單鏈抗人Fe ε RI α抗體或單鏈抗鼠Fe ε RI α抗體。
[0017]所述的雷公藤免疫納米粒通過如下方法制得:由雷公藤和羧基修飾的納米材料反應(yīng)制得羧基修飾的雷公藤納米粒，然后與抗Fe ε RI α單抗反應(yīng)制得抗Fe ε RI α單抗-納米粒-雷公藤三聚物，即雷公藤免疫納米粒。
[0018]為實(shí)現(xiàn)上述第二個(gè)目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案是:一種雷公藤免疫納米粒的制備方法，所述的制備方法包括以下步驟:
[0019]a)將納米材料包裹細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)劑得到雷公藤納米粒；
[0020]b)將抗體和雷公藤納米粒連接得到內(nèi)包裹雷公藤外連接抗體的雷公藤免疫納米粒。
[0021]為實(shí)現(xiàn)上述第三個(gè)目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案是:所述的雷公藤免疫納米粒在制備治療肥大細(xì)胞或嗜堿性粒細(xì)胞相關(guān)的疾病的藥物中的應(yīng)用。
[0022]所述的肥大細(xì)胞相關(guān)疾病為過敏性疾病、肥大細(xì)胞增多癥、器官纖維化、自身免疫病、心血管疾病或腫瘤。
[0023]本發(fā)明優(yōu)點(diǎn)在于:
[0024]本發(fā)明中雷公藤免疫納米粒的用途為特異地誘導(dǎo)表達(dá)Fe ε RI α陽性細(xì)胞凋亡，包括肥大細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞，治療肥大細(xì)胞相關(guān)疾病包括過敏性疾病、肥大細(xì)胞增多癥、腫瘤、自身免疫性疾病和心血管疾病。
【具體實(shí)施方式】
[0025]下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明提供的【具體實(shí)施方式】作詳細(xì)說明。
[0026]實(shí)施例1羧基修飾的雷公藤紅素膠束的制備
[0027]稱取雷公藤紅素和羧基修飾的Pluronic Ρ123嵌段共聚物，加入二氯甲烷攪拌至完全溶解，蒸發(fā)至有機(jī)溶劑完全蒸干，真空干燥過夜去除殘留溶劑，獲得干燥藥膜。加入PBS重懸，去除未包封的雷公藤紅素，獲得羧基修飾的雷公藤紅素膠束。
[0028]實(shí)施例2雷公藤紅素免疫膠束的制備
[0029]取羧基修飾的雷公藤紅素膠束，加入適量EDC，室溫條件下活化15min ;取已活化的雷公藤紅素膠束，加入抗Fe ε RI α單抗Fab，室溫反應(yīng)2小時(shí)，獲得抗Fe ε RI α單抗Fab-膠束-雷公藤紅素三聚物，即雷公藤紅素免疫膠束。