石榴花多酚在制備舒張血管平滑肌的藥物中的用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種石榴花多酚在制備舒張血管平滑肌的藥物中的用途。
【背景技術(shù)】
[0002]流行病學調(diào)查顯示，約80%的2型糖尿病患者最終死于心血管疾病，糖尿病患者罹患心血管疾病的危險是無糖尿病者的2?4倍。我國現(xiàn)已成為糖尿病患者最多的國家，且青少年發(fā)病率也在日益增長?？刂坪皖A防糖尿病的心血管并發(fā)癥的發(fā)生迫在眉睫。
[0003]糖尿病血管病變早期以血管內(nèi)皮依賴性舒張功能受損為主，它可能是糖尿病血管病變發(fā)生的始動因素和基本病理生理改變。發(fā)病機制十分復雜，傳統(tǒng)觀點認為與遺傳易感性、胰島素抵抗、長期慢性的高血糖、脂質(zhì)代謝紊亂、血液流變學改變及內(nèi)皮細胞功能紊亂等多方面的因素相關(guān)。2型糖尿病大血管并發(fā)癥危險因素可分為兩類，一類是與糖代謝直接相關(guān)聯(lián)的，如胰島素抵抗、高胰島素血癥、胰島素分泌不足、高血糖、血糖波動等；一類與脂代謝相關(guān)。大量研宄表明:胰島素抵抗及其所伴隨的高血壓，糖、脂代謝異常等因素與血管內(nèi)皮功能損傷密切相關(guān)，且損傷的程度與胰島素抵抗嚴重程度呈正相關(guān)。在胰島素抵抗狀態(tài)下，內(nèi)皮依賴性舒張功能受損是聯(lián)系胰島素抵抗和心血管疾病的中心環(huán)節(jié)。因此保護血管依賴舒張功能，改善胰島素抵抗可能成為防治2型糖尿病血管并發(fā)癥的核心。
[0004]石植(Punicagranatum L.)是石植科(Punicaceae)植物，落葉灌木或小喬木。石榴的各部分含有豐富的活性物質(zhì)，表現(xiàn)出很強的生物活性，其中石榴花為中藥和維吾爾常用藥，性平、濕，作為中藥可用于治療中耳炎、鼻衄、創(chuàng)傷出血；在維吾爾族醫(yī)學中素以“阿娜爾”之稱而入藥，用于退翳，治神經(jīng)衰弱和惡心；尤其是石榴花具有治療糖尿病的作用，在國外長期以來被用于治療糖尿病及其并發(fā)癥。
[0005]近幾年，本課題組在對維吾爾藥石榴花對糖尿病大鼠的影響的系列研宄中發(fā)現(xiàn)，石植花多酸(pomegranate flower polyphone，PFP)能顯著降低糖尿病大鼠的空腹血糖，緩解胰島素抵抗，并可調(diào)節(jié)血清中甘油三酯和總膽固醇的含量，因此動物實驗顯示石榴花多酚對糖尿病具有良好的防治作用。
[0006]然而石榴花多酚(PFP)對糖尿病血管病變引起的血管舒張能力下降的療效卻尚無文獻報道，本研宄旨在通過觀察石榴花多酚(PFP)對大鼠離體胸主動脈舒張作用的影響，探討石榴花多酚(PFP)舒張血管機制，為石榴花多酚(PFP)在治療糖尿病血管并發(fā)癥中的應用提供實驗依據(jù)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]本發(fā)明目的在于，提供一種石榴花多酚在制備舒張血管平滑肌的藥物中的用途，經(jīng)過大量的實驗研宄證明:石榴花多酚(PFP)對離體大鼠胸主動脈環(huán)有濃度依賴性舒張作用，內(nèi)皮完整血管與去內(nèi)皮的血管相比，其舒張作用沒有明顯差異。因此，石榴花多酚(PFP)所致的血管舒張直接作用于血管平滑肌而發(fā)揮作用。
[0008]本發(fā)明所述的一種石榴花多酚的用途，該石榴花多酚在制備舒張血管平滑肌的藥物中的用途。
【附圖說明】
[0009]圖1為本發(fā)明內(nèi)皮對石榴花多酚舒張作用的影響圖；
[0010]圖2為本發(fā)明鉀離子通道阻斷劑對石榴花多酚舒張作用的影響圖；
[0011]圖3為本發(fā)明石榴花多酚對CaCl2量效曲線的影響圖；
[0012]圖4為本發(fā)明石榴花多酚對內(nèi)鈣釋放的影響。
【具體實施方式】
[0013]實施例
[0014]本發(fā)明所述的一種石榴花多酚的用途，該石榴花多酚在制備舒張血管平滑肌的藥物中的用途，具體操作按下列步驟進行:
[0015]本實驗觀察鉀通道是否參與石榴花多酚(PFP)的舒張血管作用，用三種不同的鉀通道阻斷劑格列苯脲(Glib)、大電導激活性鉀通道(BKca)阻斷劑四乙基氯化銨(TEA)、Kir阻斷劑氯化鋇(BaCl2)預處理后石榴花多酚(PFP)的舒張血管作用有明顯下降(圖2)，初步推測石榴花多酚(PFP)的舒張血管作用與鉀通道有關(guān):
[0016]材料和方法
[0017]I動物:SD大鼠(250_300g)，雄性，清潔級，由新疆醫(yī)科大學動物中心提供；
[0018]2藥品和試劑:
[0019]2.1石榴花多酚(PFP)由中國科學院新疆理化技術(shù)研宄所提供，分裝后，于溫度-20°C避光保存?zhèn)溆茫脮r以蒸餾水配制，現(xiàn)配先用；
[0020]2.2乙酰膽堿、去氧腎上腺素、格列苯脲、四乙基氯化銨、氯化鋇、福司柯林(forskolin)乙二醇二乙醚二胺四乙酸，均購自sigma公司(德國)；
[0021]除格列苯脲(Glib)和福司柯林(forskolin)外，其它試劑均用無菌蒸餾水溶解，Glib、和forskolin用二甲基亞砜溶解，對照組已證明最高濃度二甲基亞砜(1: 400)對血管張力無影響，BL-420生物信號記錄分析系統(tǒng)由四川泰盟公司生產(chǎn)；
[0022]3 方法:
[0023]3.1大鼠胸主動脈環(huán)的制備:
[0024]參考葉挺梅等方法略有修改，大鼠斷頸致死后，迅速打開胸腔取出胸主動脈，立即放入 Kreb-Henseleit (K-H)液(NaCl 118mmo1 /T,, KCl 4.7mmo1 /T,, NaHC0325mmoI/L,KH2PO41.2mmol/L, MgCl2L 2mmol/L, CaCl22.5mmol/L，葡萄糖 2g/L，pH 7.4 中，并置于冰上，去除動脈周圍結(jié)締組織后，統(tǒng)一切割成3mm長的動脈環(huán)，分別保留內(nèi)皮和去除內(nèi)皮，去除內(nèi)皮方法為在主動脈環(huán)內(nèi)壁用牙簽來回滾動，將動脈環(huán)置于溫度37°C恒溫浴槽中，持續(xù)通入濃度為95% 02和5% CO2的混合氣體，動脈環(huán)固定于掛鉤上，掛鉤另一端連接張力換能器，用BL-420生物信號記錄分析系統(tǒng)記錄血管的等張收縮力，調(diào)整動脈環(huán)靜息負荷2g，每20min換K-H液I次，穩(wěn)定90min，實驗前應用60mmol/L KCl收縮2次，收縮良好的血管環(huán)用于實驗；
[0025]3.2血管內(nèi)皮功能檢測用乙酰膽堿(Ach)檢驗血管內(nèi)皮的活性:
[0026]用Ιμπιο?/L PE預收縮血管環(huán)，待反應達到平衡后以0.01 — lOymol/L乙酰膽堿(Ach)舒張血管，最后加入I μmol/L forskolin使其達到100%舒張，以0.1 μmol/L乙酰膽堿(Ach)舒張達到15% — 20%, I μ mol/L乙酰膽堿(Ach)達到60%，10 μ mol/L乙酰膽堿(Ach)達到80%以上為內(nèi)皮完好，以對乙酰膽堿(Ach)幾乎沒有舒張反應為內(nèi)皮被破壞判斷標準；
[0027]3.3PFP舒張血管的最適濃度:
[0028]血管環(huán)加入I μ mol/L苯腎上腺素(PE)預收縮血管達穩(wěn)定后，逐步累積加入石榴花多酚(PFP) (l、10、100、1000)mg/L，前I個劑量達平衡后再給下I個劑量，最后加入I μ mol/L forskolin至最大舒張，并以此作為100%舒張，記錄濃度舒張曲線，找到舒張明顯的濃度范圍，重新設(shè)計濃度梯度，反復試驗以上實驗過程；
[0029]3.4內(nèi)皮對PFP血管舒張作用的影響:
[0030]內(nèi)皮完整和去除內(nèi)皮血管環(huán)加入I ymol/L苯腎上腺素(PE)預收縮血管達穩(wěn)定后，逐步累積加入石榴花多酚(PFP) (100、300、500、700、900)mg/L，前I個劑量達平衡后再給下I個劑量，最后加入I μ mol/L forskolin至最大舒張，并以此作為100%舒張，記錄濃度舒張曲線；
[0031 ] 3.5鉀離子通道阻斷劑對PFP舒張作用的影響:
[0032]去內(nèi)皮血管環(huán)分別用大電導媽激活性鉀通道(large conductance calciumactivate K+channels，BKCa)阻斷劑 TEA 3m mol/L、ATP 敏感性鉀通道(ATP sensitiveK+channels, KATP)阻斷劑 Gl ib