專利名稱：局部缺血再灌流障礙預(yù)防和治療劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及新型局部缺血再灌流障礙預(yù)防和治療劑。更具體地說(shuō)，涉及以水溶性苯并二氫吡喃醇配糖體為有效成分的局部缺血再灌流障礙預(yù)防和治療劑。
背景技術(shù)：
人體細(xì)胞或組織，若長(zhǎng)時(shí)間處于局部缺血狀態(tài)，就會(huì)受到嚴(yán)重?fù)p害，最終導(dǎo)致細(xì)胞死亡。另一方面，在通過(guò)一定時(shí)間的局部缺血再灌流來(lái)急激增加氧負(fù)荷的情況下，會(huì)引起更加嚴(yán)重的障礙。這樣的局部缺血再灌流障礙，以前是作為臨床上對(duì)器官移植或心肌硬塞進(jìn)行冠狀血管再造術(shù)時(shí)可以看到的疾病來(lái)認(rèn)識(shí)的，但自從近年來(lái)有人指出用貓小腸進(jìn)行局部缺血再灌流而引起的組織障礙中與自由基反應(yīng)有關(guān)以來(lái)(Granger，D．N．等人貓小腸局部缺血中的超氧化物自由基，Gastroenterol，22-29，1981)，這個(gè)領(lǐng)域的研究已經(jīng)擴(kuò)大了，不僅涉及小腸，而且也有涉及腦、心臟、胃、肝臟、腎臟等的局部缺血再灌流障礙與活潑氧自由基的關(guān)系的報(bào)告。在這一方面，雖然從通過(guò)給藥外因性自由基清除劑能否減輕病態(tài)的觀點(diǎn)來(lái)看許多研究正在取得進(jìn)展，但還有體內(nèi)動(dòng)態(tài)和反應(yīng)場(chǎng)等各種各樣的問(wèn)題，還不能說(shuō)只要有自由基清除劑就能有效地抑制局部缺血再灌流引起的組織障礙(一守康史等人提到了關(guān)于再灌流障礙與自由基的問(wèn)題，J．Act．Oxyg．FreeRad．757-766，1991)。而且，這件事，從自由基清除劑作為醫(yī)藥品還沒(méi)有達(dá)到幾乎受認(rèn)可的現(xiàn)狀來(lái)看，也是顯而易見(jiàn)的。
另一方面，本發(fā)明中使用的苯并二氫吡喃醇配糖體是已知化合物(特開(kāi)平7-118287號(hào)公報(bào))。該苯并二氫吡喃醇配糖體是代表性的維生素E即α-生育酚的苯并二氫吡喃環(huán)的2位植基用醇取代再與糖結(jié)合而得到的，因而有高水溶性和優(yōu)異的抗氧化作用。但是，該苯并二氫吡喃醇配糖體用于局部缺血再灌流障礙的預(yù)防和治療是未知的。
本發(fā)明就是針對(duì)上述先有技術(shù)上存在的問(wèn)題，其目的是提供一種不伴隨副作用且用量少就能有效起作用、能預(yù)防局部缺血再灌流所引起的各種障礙、或者能改善、治愈病態(tài)的新型局部缺血再灌流障礙預(yù)防和治療劑。
本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種有優(yōu)異抗氧化作用、能有效地抑制、調(diào)節(jié)各種臟器的局部缺血再灌流障礙患部的自由基反應(yīng)的、新型局部缺血再灌流障礙預(yù)防和治療劑。
本發(fā)明的又一個(gè)目的是提供一種能制成以高濃度含有有效成分的水基制劑的新型局部缺血再灌流障礙預(yù)防和治療劑。
發(fā)明公開(kāi)本發(fā)明者等人，就局部缺血再灌流障礙的預(yù)防和治療劑反復(fù)進(jìn)行銳意研究的結(jié)果，發(fā)現(xiàn)上述苯并二氫吡喃醇配糖體能劇烈地預(yù)防和改善局部缺血再灌流障礙的病變，從而完成本發(fā)明。
即，本發(fā)明是以下述通式(1)所示苯并二氫吡喃醇配糖體為有效成分的局部缺血再灌流障礙預(yù)防和治療劑 〔但式中R1、R2、R3和R4相同或不同，各表示氫原子或低級(jí)烷基，R5表示氫原子、低級(jí)烷基或低級(jí)?；?，X表示糖殘基中羥基的氫原子也可以有低級(jí)烷基或低級(jí)?；〈膯翁菤埢蚬烟菤埢?，n是0～6的整數(shù)，和m是1～6的整數(shù)〕。
本發(fā)明也是上述苯并二氫吡喃醇配糖體為2-(α-D-吡喃型葡萄糖基)甲基-2，5，7，8-四甲基苯并二氫吡喃-6-醇的上述局部缺血再灌流障礙預(yù)防和治療劑。
本發(fā)明還是上述局部缺血再灌流障礙為小腸粘膜障礙、心肌局部缺血再灌流障礙或腦局部缺血再灌流障礙的上述局部缺血再灌流障礙預(yù)防和治療劑。
本發(fā)明又是水基制劑的上述局部缺血再灌流障礙預(yù)防和治療劑。
實(shí)施本發(fā)明的最佳形態(tài)本發(fā)明的局部缺血再灌流障礙預(yù)防和治療劑的特征在于以上述通式(1)所示苯并二氫吡喃醇配糖體為有效成分。
上述通式(1)中，R1、R2、R3、R4和R5的低級(jí)烷基，可以是碳原子數(shù)1～8、較好1～6的低級(jí)烷基，例如，可以列舉甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、戊基、異戊基、己基、庚基、辛基等。這些基團(tuán)中，較好的是甲基或乙基。而且，作為R5的低級(jí)?；梢允翘荚訑?shù)1～8、較好1～6的低級(jí)?；?，例如，可以列舉甲?；⒁阴；?、丙酰基、丁酰基、異丁?；⑽祯；愇祯；?、新戊?；?、己?；?、庚酰基、辛?；?。這些基團(tuán)中，較好的是乙?；?、丙?；蚨□；?。此外，作為X的單糖殘基，可以列舉葡萄糖、半乳糖、巖藻糖、木糖、甘露糖、鼠李糖、果糖、阿拉伯糖、來(lái)蘇糖、核糖、阿洛糖、阿卓糖、艾杜糖、塔羅糖、脫氧核糖、2-脫氧核糖、奎諾糖、阿比可糖等的糖殘基。作為X的寡糖殘基，可以列舉2～4個(gè)上述單糖結(jié)合而成者，例如麥芽糖、乳糖、纖維素二糖、棉子糖、木二糖、蔗糖的糖殘基。這些當(dāng)中，較好的是葡萄糖、半乳糖、巖藻糖、木糖、鼠李糖、甘露糖、果糖等的單糖殘基。而且，X的糖殘基中羥基的氫原子也可以有低級(jí)烷基、較好碳原子數(shù)1～8的低級(jí)烷基、或者低級(jí)?；?、較好碳原子數(shù)1～10的低級(jí)?；〈?。進(jìn)而，n為0～6、較好1～4的整數(shù)，m為1～6、較好1～3的整數(shù)。作為通式(1)所示苯并二氫吡喃醇配糖體的較好實(shí)例，可以列舉2-(α-D-吡喃型葡萄糖基)甲基-2，5，7，8-四甲基苯并二氫吡喃-6-醇、2-(β-D-吡喃型半乳糖基)甲基-2，5，7，8-四甲基苯并二氫吡喃-6-醇、2-(β-L-吡喃型巖藻糖基)甲基-2，5，7，8-四甲基苯并二氫吡喃-6-醇、2-(α-L-吡喃型鼠李糖基)甲基-2，5，7，8-四甲基苯并二氫吡喃-6-醇、2-(β-D-吡喃型木糖基)甲基-2，5，7，8-四甲基苯并二氫吡喃-6-醇、2-(β-D-吡喃型葡萄糖基)甲基-2，5，7，8-四甲基苯并二氫吡喃-6-醇、2-(β-D-吡喃型果糖基)甲基-2，5，7，8-四甲基苯并二氫吡喃-6-醇、2-(α-D-吡喃型甘露糖基)甲基-2，5，7，8-四甲基苯并二氫吡喃-6-醇等。
本發(fā)明中使用的苯并二氫吡喃醇配糖體可以按照諸如特開(kāi)平7-118287號(hào)公報(bào)中記載的方法，在下述通式(2) (但式中R1、R2、R3、R4、R5和n是與上述同義的)所示2-取代醇和能催化寡糖類、可溶性淀粉、淀粉或環(huán)糊精發(fā)生相應(yīng)糖轉(zhuǎn)位作用的酶的存在下反應(yīng)，并通過(guò)包括使糖的特定羥基特異性地與2-取代醇的2位羥基結(jié)合在內(nèi)的酶反應(yīng)來(lái)制造(酶法)。
上述反應(yīng)中，作為原料使用的通式(2)所示2-取代醇(以下簡(jiǎn)稱“2-取代醇”)是眾所周知的物質(zhì)，可以按照諸如特公平1-43755號(hào)公報(bào)或特公平1-49135號(hào)公報(bào)等中公開(kāi)的方法得到。而且，例如，通式(2)中R1、R2、R3和R4為甲基、R5為氫原子、n為1的2-取代醇，通過(guò)在氫化鋁鋰的存在下，在二乙醚中，使トロロツケス加熱回流處理等，就可以容易地得到。
上述反應(yīng)中使用的、能催化糖轉(zhuǎn)位作用的酶，因各該反應(yīng)中所用糖的種類而異，較好能像以下那樣靈活運(yùn)用。
(1)2-取代醇中α-鍵上結(jié)合葡萄糖殘基的情況(a)對(duì)于從麥芽糖到麥芽四糖級(jí)的麥芽寡糖來(lái)說(shuō)，較好以α-葡糖苷酶(α-glucosidase，EC 3．2．1．20)起作用。作為α-葡糖苷酶，可以幾乎完全采用其起源由來(lái)物，具體地說(shuō)，可以列舉來(lái)源于東洋紡織株式會(huì)社制酵母屬(Saccharomyces sp．)的α-葡糖苷酶、來(lái)源于東方人酵母工業(yè)株式會(huì)社制啤酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)的α-葡糖苷酶、來(lái)源于天野制藥株式會(huì)社制黑曲霉(Aspergillus niger)的α-葡糖苷酶、來(lái)源于和光純藥工業(yè)株式會(huì)社制酵母屬(Saccharomysessp．)的α-葡糖苷酶、來(lái)源于SIGMA公司制面包酵母的α-葡糖苷酶、來(lái)源于芽孢桿菌屬(Bacillus)的α-葡糖苷酶等。
(b)對(duì)于可溶性淀粉或淀粉來(lái)說(shuō)，較好以4-α-葡聚糖轉(zhuǎn)移酶(4-α-D-glucanotransferase，EC2．4．1．25)起作用。
(2)2-取代醇中α-鍵上結(jié)合葡萄糖殘基或麥芽寡糖殘基的情況對(duì)于麥芽寡糖、可溶性淀粉、淀粉或環(huán)糊精(α、β、γ)等來(lái)說(shuō)，較好以環(huán)糊精葡聚糖轉(zhuǎn)移酶(cyclodextrin glucanotransferase，EC2．4．1．19)起作用。作為代表性實(shí)例，可以列舉來(lái)源于天野制藥株式會(huì)社制軟化芽孢桿菌(Bacillus macerans)的環(huán)糊精葡聚糖轉(zhuǎn)移酶、來(lái)源于株式會(huì)社林原生物化學(xué)研究所制嗜熱硬脂芽孢桿菌(Bacillusstearothermophilus)的環(huán)糊精葡聚糖轉(zhuǎn)移酶，以及來(lái)源于巨大芽孢桿菌(Bacillus megaterium)、環(huán)狀芽孢桿菌ATCC9995(Bacillus circulansATCC 9995)的環(huán)糊精葡聚糖轉(zhuǎn)移酶等。
(3)2-取代醇中β-鍵上結(jié)合葡萄糖殘基的情況(a)對(duì)于纖維二糖、卡杜蘭或昆布多糖等包含β-鍵的寡糖來(lái)說(shuō)，較好以β-葡糖苷酶(β-glucosidase，EC3．2．1．21)起作用。
(b)對(duì)于磷酸存在下的纖維二糖來(lái)說(shuō)，較好以纖維二糖磷酸化酶(cellobiose phosphorylase，EC2．4．1．20)起作用。
(4)2-取代醇中α-鍵上結(jié)合半乳糖殘基的情況(a)對(duì)于蜜二糖或棉子糖(蜜三糖)來(lái)說(shuō)，較好以α-半乳糖苷酶(α-galactosidase，EC3．2．1．22)起作用。
(5)2-取代醇中β-鍵上結(jié)合半乳糖殘基的情況(a)對(duì)于乳糖等來(lái)說(shuō)，較好以β-半乳糖苷酶(β-galactosidase，EC3．2．1．23)起作用。
(b)對(duì)于阿拉伯半乳聚糖等來(lái)說(shuō)，較好以內(nèi)切-l，4-β-半乳聚糖酶(Endo-1，4-β-galactanase，EC3．2．1．89)起作用。
(6)2-取代醇中β-鍵上結(jié)合果糖殘基的情況(a)對(duì)于蔗糖、棉子糖或蜜二糖等來(lái)說(shuō)，較好以果聚糖蔗糖酶(levansucrase，EC2．4．1．10)起作用。
(b)對(duì)于蔗糖來(lái)說(shuō)，較好以β-呋喃果糖苷酶(β-fructofuranosidase，EC3．2．1．26)起作用。
(c)對(duì)于菊粉等來(lái)說(shuō)，較好以菊粉果糖轉(zhuǎn)移酶(inulinfructotransferase，EC2．4．1．93)起作用。
上述反應(yīng)中的反應(yīng)條件因所使用的苯并二氫吡喃醇配糖體或酶的種類而異，例如，在用α-葡糖苷酶合成通式(1)中m為1的苯并二氫吡喃醇配糖體的情況下，較好把2-取代醇溶解在糖溶液中。為此，較好添加有機(jī)溶劑，例如，可以列舉二甲基亞砜、N，N-二甲基甲酰胺、甲醇、乙醇、丙酮、和乙腈等，如果考慮到提高α-葡糖苷酶的轉(zhuǎn)移活性這一點(diǎn)，則較好能使用二甲基亞砜或N，N-二甲基甲酰胺。有機(jī)溶劑的添加濃度為1～50％(體積)，如果考慮到反應(yīng)效率，則較好是5～35％(體積)。
2-取代醇的濃度，較好在反應(yīng)液中是飽和濃度或與其相近的濃度。所用糖的種類可以是麥芽糖到麥芽四糖這樣的低分子糖，較好的是麥芽糖。糖的濃度是1～70％(重量／體積)、較好是30～60％(重量／體積)。pH是4．5～7．5、較好是5．0～6．5。反應(yīng)溫度是10～70℃、較好是30～60℃。反應(yīng)時(shí)間是1～40小時(shí)、較好是2～24小時(shí)。但這些條件當(dāng)然會(huì)受到所使用酶的數(shù)量等的影響。反應(yīng)結(jié)束后，反應(yīng)液通過(guò)用XAD(ORGANO株式會(huì)社)作為載體的柱色譜法處理，可以以高純度得到目標(biāo)苯并二氫吡喃醇配糖體。
此外，例如，作為在用環(huán)糊精葡聚糖轉(zhuǎn)移酶合成通式(1)中m為1的苯并二氫吡喃醇配糖體的情況下的反應(yīng)條件，較好是使2-取代醇溶解在糖溶液中。為此，較好添加有機(jī)溶劑，可以列舉二甲基亞砜、N，N-二甲基甲酰胺、甲醇、乙醇、丙酮和乙腈等。所添加有機(jī)溶劑的濃度是1～50％(體積)，若考慮到反應(yīng)效率，則較好是5～35％(體積)。2-取代醇的濃度，較好在反應(yīng)液中是飽和濃度或與此相近的高濃度。
作為上述反應(yīng)中所采用的糖的種類，較好可以列舉具有麥芽三糖以上聚合度的麥芽寡糖、可溶性淀粉、淀粉和環(huán)糊精(α、β、γ)等。糖的濃度是1～70％(重量／體積)、較好是5～50％(重量／體積)。pH是4．5～8．5、較好是5．0～7．5。反應(yīng)溫度是10～70℃、較好是30～60℃。反應(yīng)時(shí)間是1～60小時(shí)、較好2～50小時(shí)。但這些條件受所使用酶的數(shù)量影響。通過(guò)這樣的反應(yīng)而得到的苯并二氫吡喃醇配糖體是m為1～8的混合物。因此，這種混合物用葡糖淀粉酶(EC3．2．1．3)處理時(shí)，只能得到通式(1)中m為1的苯并二氫吡喃醇配糖體。此時(shí)的反應(yīng)溫度為20～70℃、較好30～60℃，反應(yīng)時(shí)間是0．1～40小時(shí)、較好1～24小時(shí)。但這些條件受所使用酶的數(shù)量影響。然后，將上述葡糖淀粉酶處理后的溶液通過(guò)用XAD(ORGANO株式會(huì)社)作為載體的柱色譜法處理，就能以高純度得到通式(1)中m為1的苯并二氫吡喃醇配糖體。
在得到通式(1)中m為2的苯并二氫吡喃醇配糖體的情況下，在與上述同樣的條件下，用環(huán)糊精葡聚糖轉(zhuǎn)移酶得到的、具有通式(1)中m為1～8的混合物的形態(tài)的苯并二氫吡喃醇配糖體以β-淀粉酶(EC3．2．1．2)作用，只能得到通式(1)中m為1或2的苯并二氫吡喃醇配糖體。此時(shí)的反應(yīng)溫度是20～70℃、較好是30～60℃，反應(yīng)時(shí)間是0．1～40小時(shí)、較好是1～24小時(shí)。但這些條件受所使用酶的數(shù)量影響。β-淀粉酶處理后的溶液通過(guò)用XAD(ORGANO株式會(huì)社)作為載體的柱色譜法處理，能以高純度得到通式(1)中m為2的苯并二氫吡喃醇配糖體，與此同時(shí)，還能得到通式(1)中m為1的苯并二氫吡喃醇配糖體。
在得到通式(1)中m為3以上的苯并二氫吡喃醇配糖體的情況下，在與上述同樣的條件下，用環(huán)糊精葡聚糖轉(zhuǎn)移酶得到的、具有通式(1)中m為1～8的混合物的形態(tài)的苯并二氫吡喃醇配糖體通過(guò)用配備HPLC的分級(jí)色譜法處理，就可以得到各m值的高純度苯并二氫吡喃醇配糖體。
上述實(shí)施形態(tài)中，記載了以葡萄糖殘基或麥芽寡糖殘基作為糖殘基與2-取代醇結(jié)合的情況下的形態(tài)，但以半乳糖殘基、β-葡萄糖殘基、甘露糖殘基、果糖殘基等作為糖殘基與2-取代醇結(jié)合的形態(tài)也可以較好地用于本發(fā)明中。在這樣的形態(tài)中，除分別使用在催化上述糖轉(zhuǎn)位作用的酶項(xiàng)中所說(shuō)明的恰當(dāng)酶外，通過(guò)進(jìn)行與上述實(shí)施形態(tài)同樣的操作，就可以得到高純度的目標(biāo)苯并二氫吡喃醇配糖體(特開(kāi)平9-249688號(hào)公報(bào)、特愿平9-176174號(hào))。
另一方面，本發(fā)明中使用的苯并二氫吡喃醇配糖體，也可以通過(guò)使按照特愿平10-75599號(hào)公報(bào)中記載的方法，用保護(hù)基保護(hù)了上述2-取代醇的6位羥基的衍生物(以下稱“糖受體”)，與在端基位引進(jìn)了離去基團(tuán)且用保護(hù)基保護(hù)了另一個(gè)羥基的糖衍生物(以下稱“糖供體”)發(fā)生縮合反應(yīng)來(lái)制造(有機(jī)合成法)。
作為能保護(hù)上述反應(yīng)中使用的糖受體的6位羥基的保護(hù)基，可以列舉乙?；?、苯甲?；?、新戊?；?、氯乙?；?、乙酰丙酰基、芐基、對(duì)甲氧基芐基、烯丙基、叔丁基二甲基甲硅烷基、叔丁基二苯基甲硅烷基、三甲基甲硅烷基和三苯甲基等，特別好的是乙?；捅郊柞；?br> 作為上述反應(yīng)中所使用的糖供體的端基位上導(dǎo)入的離去基團(tuán)，可以列舉氯、溴或氟等鹵素原子，硫甲基、硫乙基或硫苯基等含硫化合物、和三氯乙酰亞胺基等，特別好的是溴、氯、硫甲基、硫乙基、硫苯基和三氯乙酰亞胺基。此外，作為保護(hù)除端基位以外的羥基的保護(hù)基，可以列舉乙?；?、苯甲酰基、新戊?；?、氯乙?；鸵阴１；弱；惐Ｗo(hù)基，和芐基、對(duì)甲氧基芐基、烯丙基、叔丁基二甲基甲硅烷基、叔丁基二苯基甲硅烷基、三甲基甲硅烷基和三苯甲基等醚類保護(hù)基，其中較好的是酰基類保護(hù)基、特別好的是乙?；?br> 這些糖供體，用眾所周知的方法給糖的全部羥基引進(jìn)保護(hù)基，然后把端基位置換成離去基團(tuán)，就可以容易地制備。
關(guān)于上述糖受體與糖供體的縮合反應(yīng)，首先，把糖受體與糖供體溶解在非極性溶劑中。糖受體和糖供體的加入量，糖供體對(duì)糖受體的摩爾比是1．0～1．5、較好是1．1～1．3。作為非極性溶劑，可以列舉二氯甲烷、苯等。
然后，在無(wú)水條件下，在活化劑的存在下，進(jìn)行糖供體與糖受體的縮合反應(yīng)。作為活化劑，可以列舉三氟化硼-醚配合物、過(guò)氯酸銀、三氟甲磺酸銀、溴化汞、氰化汞、N-碘琥珀酰亞胺-三氟甲磺酸、三氟甲磺酸二甲基甲硫基锍鎓、對(duì)甲苯磺酸等，尤其在使用溴作為糖衍生物的離去基團(tuán)的情況下，較好使用過(guò)氯酸銀等重金屬鹽。反應(yīng)溫度是5～30℃、較好10～25℃，反應(yīng)時(shí)間12～48小時(shí)、較好20～30小時(shí)。
然后，所得到的反應(yīng)物用硅膠柱色譜法等精制，用氫氧化鈉和甲醇-鹽酸等使保護(hù)基脫保護(hù)，就可以得到2-(β-L-吡喃型巖藻糖基)甲基-2，5，7，8-四甲基苯并二氫吡喃-6-醇、2-(α-L-吡喃型鼠李糖基)甲基-2，5，7，8-四甲基苯并二氫吡喃-6-醇、2-(β-D-吡喃型木糖基)甲基-2，5，7，8-四甲基苯并二氫吡喃-6-醇等(特愿平10-75599號(hào))。
用上述酶法或有機(jī)合成法得到的苯并二氫吡喃醇配糖體，一般具有極高的水溶性(約100g／100ml)，而且也是富于油溶性(辛醇／水分配系數(shù)＞3)的親油親水性分子。換言之，按照本發(fā)明的苯并二氫吡喃醇配糖體，可以說(shuō)是具有高親脂性的水溶性維生素E。因此，按照本發(fā)明的苯并二氫吡喃醇配糖體，不同于先有技術(shù)上不溶于或不良溶于水的維生素E衍生物，即使溶于水中使用也能保持高親脂性，因而可以透過(guò)細(xì)胞膜、進(jìn)而進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，從而增強(qiáng)了生物體內(nèi)的抗氧化防御體系，有效地抑制、調(diào)節(jié)局部缺血再灌流障礙患部中的活性氧和自由基，預(yù)防局部缺血再灌流障礙，或大幅度改善局部缺血再灌流障礙的病態(tài)。而且，上述反應(yīng)得到的苯并二氫吡喃醇配糖體，即使就熱穩(wěn)定性和pH穩(wěn)定性而言，與生育酚(即維生素E)、トロロツクス或2-取代醇相比，也有顯著提高。
本發(fā)明的局部缺血再灌流障礙的預(yù)防和治療劑，可以使上述苯并二氫吡喃醇配糖體與醫(yī)藥上可接受的載體配合或者溶解或懸浮在醫(yī)藥上可接受的溶劑中而制成組合物，再經(jīng)口或非經(jīng)口地對(duì)患者給藥。
本藥劑在用于經(jīng)口給藥的情況下，可使上述苯并二氫吡喃醇配糖體與適當(dāng)添加劑，例如乳糖、蔗糖、甘露糖醇、玉米淀粉、合成或天然橡膠、結(jié)晶纖維素等賦形劑，淀粉、纖維素衍生物、阿拉伯膠、明膠、聚乙烯基吡咯烷酮等粘結(jié)劑，羧甲基纖維素鈣、羧甲基纖維素鈉、淀粉、玉米淀粉、藻酸鈉等崩解劑，滑石、硬脂酸鎂、硬脂酸鈉等潤(rùn)滑劑，碳酸鈣、碳酸鈉、磷酸鈣、磷酸鈉等填充劑或稀釋劑等適當(dāng)混合，制成片劑、散劑(粉末劑)、丸劑、和顆粒劑等固形制劑。而且，也可以用硬質(zhì)或軟質(zhì)明膠膠囊等制成膠囊劑。對(duì)這些固形制劑，也可以用羥丙基甲基纖維素鄰苯二甲酸酯、羥丙基甲基纖維素乙酸酯琥珀酸酯、纖維素乙酸酯鄰苯二甲酸酯、甲基丙烯酸酯共聚物等包衣用基劑實(shí)施腸溶性包衣。進(jìn)而，上述苯并二氫吡喃醇配糖體也可以通過(guò)溶解在精制水等一般使用的惰性稀釋劑中，必要時(shí)向此溶液中適當(dāng)添加濕潤(rùn)劑、乳化劑、分散助劑、表面活性劑、增甜劑、矯味矯臭劑、芳香物質(zhì)等，制成糖漿劑、酏劑等液態(tài)制劑。
此外，本發(fā)明的局部缺血再灌流障礙的預(yù)防和治療劑在非經(jīng)口給藥用的情況下，可以使上述苯并二氫吡喃醇與精制水，磷酸緩沖液等適當(dāng)緩沖液，生理食鹽水、林格氏溶液、洛克氏溶液等生理鹽類溶液，乙醇、甘油和慣用表面活性劑等適當(dāng)組合，而制成無(wú)菌的水溶液、非水溶液、懸浮液、脂質(zhì)體或乳液，較好制成注射用、輸注用或噴霧用無(wú)菌水溶液，經(jīng)靜脈內(nèi)、皮下、肌肉內(nèi)、腹腔內(nèi)、腸內(nèi)、支氣管內(nèi)等給藥。此時(shí)，液態(tài)制劑較好有生理學(xué)上的pH、更好在6～8范圍內(nèi)的pH。進(jìn)而，本發(fā)明的局部缺血再灌流障礙的預(yù)防和治療劑也可以借助于植入片埋入、或用栓劑用基劑制成栓劑再給藥。
上述中，較好的制劑或給藥形態(tài)等由主治醫(yī)生選擇。
本發(fā)明局部缺血再灌流障礙預(yù)防和治療劑中所含苯并二氫吡喃醇配糖體的濃度因給藥形態(tài)、疾病的種類或嚴(yán)重程度、或目標(biāo)給藥量等而異，但一般來(lái)說(shuō)，相對(duì)于原料總重量而言，是0．1～100％(重量)、較好1～90％(重量)。具體地說(shuō)，本發(fā)明制劑在經(jīng)口給藥的情況下，相對(duì)于原料總重量而言是1～100％(重量)、較好5～90％(重量)；在非經(jīng)口給藥的情況下，相對(duì)于原料總體積而言是0．1～90％(體積)、較好1～80％(體積)。此時(shí)，苯并二氫吡喃醇配糖體的濃度若超過(guò)上述上限值則不能達(dá)到與過(guò)剩給藥量相稱的病態(tài)改善效果，而若低于上述下限值則不能充分期待病態(tài)改善效果，因而都不好。
本發(fā)明局部缺血再灌流障礙預(yù)防和治療劑的上述給藥量因患者的年齡、體重和癥狀、目標(biāo)給藥形態(tài)或方法、治療效果、處置延續(xù)時(shí)間等而異，正確量要由醫(yī)生決定，但通常本劑在經(jīng)口給藥的情況下，以苯并二氫吡喃醇配糖體給藥量計(jì)，給藥量范圍為0．1～10000mg／kg體重／日，1日分1～3次給藥。此時(shí)，在每1日經(jīng)口給藥量多的情況下，也可以一次給藥多個(gè)片劑等制劑。而且，在本發(fā)明局部缺血再灌流障礙預(yù)防和治療劑非經(jīng)口給藥的情況下，以苯并二氫吡喃醇配糖體的給藥量計(jì)，給藥量為0．01～1000mg／kg體重／日，1日分1～3次給藥。
本發(fā)明局部缺血再灌流障礙預(yù)防和治療劑，可以用來(lái)預(yù)防和治療局部缺血再灌流引起的心臟、胃、小腸、肝臟、胰臟、腎臟、腦、眼球、皮膚等各部位的障礙或臟器移植等中的各種障礙。具體地說(shuō)，包括腦局部缺血再灌流障礙或心肌局部缺血再灌流障礙等，腦梗塞、心肌梗塞、肺梗塞等各種梗塞中的血流重建時(shí)、心肺分流形成術(shù)時(shí)、臟器移植時(shí)等產(chǎn)生的障礙，小腸粘膜障礙等起因于應(yīng)激反應(yīng)等的消化道粘膜或眼球表面等的微循環(huán)障礙等。上述腦局部缺血再灌流障礙包括局部缺血性腦浮腫等，上述心肌局部缺血再灌流障礙包括冠狀動(dòng)脈痙攣(spasm)解除或血栓溶解引起的血流再開(kāi)通后所看到的心室性不規(guī)則脈搏，梗塞組織內(nèi)出血引起的心臟破裂，心臟手術(shù)時(shí)遭遇的人工心肺脫離后心臟機(jī)能恢復(fù)不全或心肌震昏(stunned myocardium)等。
藥理試驗(yàn)以下通過(guò)用動(dòng)物進(jìn)行的藥理試驗(yàn)，更詳細(xì)地說(shuō)明本發(fā)明局部缺血再灌流障礙預(yù)防和治療劑的藥理效果。
在各藥理試驗(yàn)中，作為苯并二氫吡喃醇配糖體，采用的是按照特開(kāi)平7-118287號(hào)公報(bào)實(shí)施例1中記載的方法制造的以下式(3)所示2-(α-D-吡喃型葡萄糖基)甲基-2，5，7，8-四甲基苯并二氫吡喃-6-醇(TMG)。 〔小腸局部缺血再灌流障礙模型的病變抑制效果〕將大鼠腹腔動(dòng)脈結(jié)扎，同時(shí)用小鉗使上腸間膜動(dòng)脈血流中斷30分鐘，再灌流60分鐘后評(píng)價(jià)小腸粘膜障礙，制成小腸局部缺血再灌流障礙模型。如果發(fā)生小腸粘膜病變，則可確認(rèn)小腸管腔內(nèi)出血、蛋白漏出、或粘膜中硫巴比妥酸(TBA)反應(yīng)物質(zhì)(脂質(zhì)過(guò)氧化指標(biāo))增加。以這些物質(zhì)為指標(biāo)，用同一模型，考察苯并二氫吡喃醇配糖體對(duì)局部缺血再灌流障礙病變的控制效果。
SD品系雄性大鼠(體重180～200g)1組6只，禁食18小時(shí)后使用。在烏拉坦(1000mg／kg)麻醉下，從正中開(kāi)腹，將腹腔動(dòng)脈結(jié)扎后用小鉗使上腸間膜動(dòng)脈根部的血流中斷，制造局部缺血狀態(tài)。30分鐘后，TMG以0．8mg／ml的濃度完全溶解于生理食鹽水中并經(jīng)調(diào)整的TMG制劑以4mg／kg體重的劑量經(jīng)靜脈注射給藥，然后取下鉗子，使血液重新流通。再灌流60分鐘后從大動(dòng)脈放血宰殺，取出小腸，定量小腸管腔漏出血紅蛋白、漏出蛋白以及小腸粘膜內(nèi)TBA反應(yīng)物質(zhì)。
這些結(jié)果，連同不進(jìn)行局部缺血再灌流處理和TMG制劑給藥的正常組，以及局部缺血后再灌流前以等量生理食鹽水代替TMG制劑進(jìn)行靜脈注射給藥的對(duì)照組的結(jié)果一起列于表1中。要說(shuō)明的是，上述評(píng)價(jià)項(xiàng)目是按以下方法測(cè)定的。
(1)小腸管腔漏出紅血球和漏出蛋白測(cè)定法作為局部缺血再灌流小腸粘膜障礙的指標(biāo)，測(cè)定了小腸管腔內(nèi)的漏出紅血球和漏出蛋白。截取從離回腸末端5cm的部位起在口側(cè)方向上30cm長(zhǎng)的一段小腸，用冷生理食鹽水10ml從口側(cè)洗滌小腸管腔內(nèi)，回收的洗滌液用于測(cè)定。漏出紅血球按照氰化正鐵血紅蛋白法(Cannan，R．K．Am．J．Clin．Path．，44，207-210，1965)，用血紅蛋白測(cè)定用試劑盒(Hemoglobin-Testworker，和光純藥工業(yè)株式會(huì)社制)測(cè)定。即，在發(fā)色試劑5ml(0．78mM氰化鉀+0．61mM高鐵氰化鉀)中混合腸管洗滌液0．2ml后在室溫靜置5分鐘，用分光光度計(jì)(JASCO Ubest-30，UV／VIS Spectrophotometer，JASCO Engineering公司制)測(cè)定波長(zhǎng)540nm的吸光度。從事先用氰化正鐵血紅蛋白標(biāo)準(zhǔn)液(血紅蛋白18g／dl+3．1mM氰化鉀+0．61mM高鐵氰化鉀)得到的校正曲線算出洗滌液中的血紅蛋白量，表達(dá)為小腸每單位長(zhǎng)度的血紅蛋白量。而漏出蛋白是按照Lowry法(Lowry，O．H．J．Biol．Chem．，193，265-275，1951)，用蛋白定量試劑盒(Sigma化學(xué)公司制)測(cè)定的。
(2)小腸粘膜內(nèi)TBA反應(yīng)物質(zhì)測(cè)定法用Ohkawa法測(cè)定(Ohkawa，H．Anal．Biochem．，95，351-358，1979)。從離回腸末端5cm的部位起截取口側(cè)方向上10cm長(zhǎng)的一段小腸，在長(zhǎng)軸方向上切開(kāi)后借助于2枚載玻片剝離粘膜。用10mM磷酸緩沖液-30mM氯化鉀溶液以10倍(重量％)稀釋勻漿(Pyrex 10ml勻漿器用玻璃，Digital Homogenizer 1000rpm，并內(nèi)盛榮堂株式會(huì)社)，向其中的0．2ml中添加蒸餾水0．6ml和8．1％硫酸氫鈉0．2ml，再添加pH 3．5的20％磷酸緩沖液1．5ml、0．8％TBA 1．5ml和1％BHT40μl，用油浴(OH-50P，Taitech公司制)在95℃加熱1小時(shí)后冷卻10分鐘。進(jìn)而，添加蒸餾水1．0ml和丁醇-吡啶(丁醇∶吡啶=15∶1，體積比)5．0ml、攪拌，在室溫離心分離后(1500g，10分鐘)得到的上清液用分光光度計(jì)(JASCO Ubest-30，UV／VIS Spectrophotometer，JASCO Engineering公司制)測(cè)定波長(zhǎng)535nm的吸光度。小腸粘膜勻漿0．2ml和蒸餾水0．6ml代之以0．8ml蒸餾水作為空白，以蒸餾水0．3ml和TEP 0．5ml作為標(biāo)準(zhǔn)，從兩者得到校準(zhǔn)曲線，測(cè)定試樣的TBA反應(yīng)物質(zhì)。
表1 結(jié)果為平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤差。
顯著性檢定是通過(guò)進(jìn)行一元分散分析，在顯著的情況下再做Scheffe多重檢定來(lái)進(jìn)行的。
*相對(duì)于對(duì)照組而言是顯著的(P＜0．05)**相對(duì)于對(duì)照組而言是顯著的(P＜0．01)從表1中可以清楚地看出，在局部缺血再灌流障礙模型(對(duì)照組)中，可以確認(rèn)小腸管腔內(nèi)出血、蛋白漏出和粘膜中TBA反應(yīng)物質(zhì)增加，但在TMG制劑給藥組中這些指標(biāo)受到顯著抑制，表明本發(fā)明的局部缺血再灌流障礙預(yù)防和治療劑顯著抑制了局部缺血再灌流引起的小腸粘膜障礙。
〔心肌局部缺血再灌流障礙模型的病變抑制效果〕用摘出大鼠灌流心臟標(biāo)本(Langendorff標(biāo)本)進(jìn)行30分鐘全缺血后20分鐘再灌流，制作心肌局部缺血再灌流障礙模型。已知在相同模型中出現(xiàn)心臟機(jī)能低下，或再灌流脈搏不規(guī)則，特別是心室細(xì)動(dòng)的出現(xiàn)頻度和持續(xù)時(shí)間與先前的缺血時(shí)間之間存在著鐘形曲線關(guān)系，30分鐘缺血后再灌流時(shí)以100％頻度出現(xiàn)心室細(xì)動(dòng)(Okabe等人，Eur．J．Pharmacol．，24833，1993)。以心臟機(jī)能的各參數(shù)和脈搏不規(guī)則的出現(xiàn)為指標(biāo)，用相同模型考察苯并二氫吡喃醇配糖體對(duì)心肌局部缺血再灌流障礙的病變抑制效果。
用肝素處理(200單位，靜脈注射)的SD品系雄性大鼠(體重190～210g)在二乙醚麻醉下以背位固定、開(kāi)腹。沿肋骨下緣切斷橫隔膜，沿正中線開(kāi)胸，迅速摘出心臟。在事先盛滿灌流液的皿內(nèi)剝離心臟周圍的組織，和大動(dòng)脈內(nèi)插入導(dǎo)管，制成Langendorff標(biāo)本(LangendorffPflugers Arch．，61291，1895)。標(biāo)本制作后，立即將灌流壓調(diào)到100cmH2O柱，經(jīng)由導(dǎo)管開(kāi)始逆行性灌流。灌流液采用的是由氯化鈉118mM、氯化鉀4．7mM、氯化鈣2．5mM、硫酸鎂1．2mM、磷酸二氫鉀1．2mM、碳酸氫鈉25mM和葡萄糖11mM組成的改性Krebs-Henseleit溶液(37℃±0．5℃，pH7．4)，并通入了95％氧氣-5％二氧化碳混合氣體。
左心室內(nèi)連接一個(gè)壓力換能器(TP-400T，日本光電，東京)，其中插入事先灌滿了蒸餾水的膠乳制氣球。最大左心室壓力(LVDP)通過(guò)壓力測(cè)定用放大器(AP-621G，日本光電)測(cè)定，左心室壓力一次微分值(LVdP／dtmax)通過(guò)微分演算單元(EQ-621G，日本光電)測(cè)定。心拍數(shù)(HR)是由左心室壓力脈沖波驅(qū)動(dòng)心拍計(jì)(AT-601G，日本光電)測(cè)定的。此外，以從冠狀靜脈洞排出的灌流液數(shù)量作為冠狀灌流量(CF)，用滴數(shù)計(jì)(DCBF-1，Technical Supply公司)測(cè)定。
心電圖是通過(guò)裝到標(biāo)本上的2根鉑電極記錄的(Okabe等人Eur．J．Pharmacol．，24833，1993)。缺血再灌流實(shí)驗(yàn)方案由30分鐘全缺血后20分鐘再灌流構(gòu)成，再灌流不規(guī)則脈搏出現(xiàn)情況的評(píng)價(jià)是按照Lanbeth Conventions的指導(dǎo)準(zhǔn)則(Walker等人Cardiovasc．Res．，22447，1988)判定分類的?？偠灾?，心室頻拍(VT)就是心電圖上連續(xù)4個(gè)以上的心室期外收縮(PVC)，心室細(xì)動(dòng)(VF)就是形成了不可能QRS識(shí)別的波形。而心跳停止(CA)就是心電圖波形變得平坦的情況，其潛時(shí)為最大600秒。
進(jìn)行約10分鐘灌流而達(dá)到穩(wěn)定后，停止灌流30分鐘作為如上所述的缺血處置，然后迅速再開(kāi)灌流，觀察20分鐘。在缺血處置前5分鐘或灌流再開(kāi)后立即算起10分鐘，經(jīng)由設(shè)置在大動(dòng)脈導(dǎo)管中部的藥液注入通道將TMG注入導(dǎo)管內(nèi)。TMG的注入速度用注射泵(HarvardApparatus，901型，美國(guó))調(diào)整，達(dá)到冠狀灌流量的大約萬(wàn)分之一量。TMG溶解在改性Krebs-Henseleit溶液中，最終濃度為1～10μM。在這種情況下，pH7．4是穩(wěn)定的，滲透壓也要在290～325mosmol范圍內(nèi)。
對(duì)于正常灌流時(shí)的心臟機(jī)能而言，TMG5分鐘處置的作用列于表2中。此外，對(duì)于摘出大鼠灌流標(biāo)本的局部缺血再灌流障礙引起的心臟機(jī)能低下而言，缺血前5分鐘的TMG處置效果列于表3，再灌流開(kāi)始立即算起10分鐘的TMG處置效果列于表4中，而對(duì)于再灌流引起的不規(guī)則脈搏出現(xiàn)者，缺血前5分鐘和再灌流開(kāi)始后立即算起10分鐘的TMG處置效果列于表5中。只從藥液注入通道注入改性Krebs-Henseleit溶液者為對(duì)照組。
表2 結(jié)果為平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤差(n=4)
表3 結(jié)果為平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤差(n=4)顯著性檢定是通過(guò)進(jìn)行一元分散分析，在顯著的情況下做Dunnett多重比較檢定進(jìn)行的。a相對(duì)于缺血前數(shù)值的比例，*相對(duì)于對(duì)照組而言是顯著的(P＜0．05)，**相對(duì)于對(duì)照組而言是顯著的(P＜0．01)。
表4 結(jié)果為平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤差(n=4)顯著性檢定是通過(guò)進(jìn)行一元分散分析，在顯著的情況下做Dunnett多重比較檢定進(jìn)行的。a相對(duì)于缺血前數(shù)值的比例，*相對(duì)于對(duì)照組而言是顯著的(P＜0．05)，**相對(duì)于對(duì)照組而言是顯著的(P＜0．01)。
表5 結(jié)果為平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤差(括號(hào)內(nèi)為n數(shù))顯著性檢定是通過(guò)進(jìn)行一元分散分析，在有意義的情況下做學(xué)生t檢定來(lái)進(jìn)行的。*相對(duì)于對(duì)照組而言是顯著的(P＜0．05)，**相對(duì)于對(duì)照組而言是顯著的(P＜0．01)。
從表2可以清楚地確認(rèn)，TMG給藥對(duì)最大左心室壓力(LVDP)、左心室壓力一次微分值(LVdP／dtmax)、左心室擴(kuò)張最終壓力(LVEDP)、冠狀灌流量(CF)和心拍數(shù)(HR)中任何一項(xiàng)均不產(chǎn)生影響。
從表3和4清楚地看出，TMG給藥組濃度依賴性地改善了再灌流后出現(xiàn)的LVDP、LVdP／dtmax和CF的低下，而且濃度依賴性地抑制了LVEDP的上升。此外，HR在再灌流開(kāi)始初期(5～10分鐘后)顯示出顯著減少，但在TMG給藥組中這種減少也受到抑制。
進(jìn)而，從表5清楚地看出，TMG缺血前處置和再灌流后立即處理的情況，均可減少不規(guī)則脈搏的出現(xiàn)頻度，顯著縮短再灌流時(shí)出現(xiàn)的不規(guī)則脈搏的持續(xù)時(shí)間，同時(shí)使正常心律的縮短顯著延長(zhǎng)。
〔腦局部缺血再灌流障礙模型的病變抑制效果〕作為使用了大鼠的前腦局部缺血再灌流模型，使用的是4血管閉塞模型(腦神經(jīng)，47卷，369-375頁(yè)，1995年)，通過(guò)5分鐘腦缺血后進(jìn)行120分鐘再灌流，制作了腦局部缺血再灌流障礙模型。局部缺血再灌流的結(jié)果，可以確認(rèn)引起了腦實(shí)質(zhì)的細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞外腔、有時(shí)兩者中都有異常的水分貯留、增加，從而發(fā)生病態(tài)的腦浮腫。以腦浮腫為指標(biāo)、用同樣的模型，考察苯并二氫吡喃醇配糖體對(duì)腦局部缺血再灌流障礙的病變抑制效果。
Wistar品系雄性大鼠(體重250～300g)1組6只用于實(shí)驗(yàn)。麻醉是在實(shí)施椎骨動(dòng)脈閉塞時(shí)經(jīng)腹腔內(nèi)給藥泡水三氯乙醛(360mg／kg)。實(shí)驗(yàn)中大鼠的體溫用暖墊、曖棉卷使直腸溫度維持37℃的。
使大鼠呈腹臥姿態(tài)，將頭部固定在大鼠固定器上，從后頸部正中切開(kāi)約2cm。此時(shí)用顯微鏡(Nagashima醫(yī)學(xué)儀器公司，日本)，剝離第2頸椎部位兩側(cè)后頭直肌，確認(rèn)左右椎骨動(dòng)脈，并分別與結(jié)締組織剝離、露出。使用顯微外科用雙極凝固器(bipolar coagulator)，選擇性地在第2頸椎部位使左右頸椎動(dòng)脈分別電凝固。進(jìn)而，用顯微外科用剪刀切斷凝固部位，使切斷面電凝固，從而使椎骨動(dòng)脈確實(shí)閉塞。用絲線縫合皮膚，結(jié)束椎骨動(dòng)脈處理。然后，使大鼠呈背臥姿態(tài)，在前頸部正中縱切開(kāi)約2cm后，在同樣的顯微鏡下剝離、露出兩側(cè)總頸動(dòng)脈，把絲線收納在左右總頸動(dòng)脈的缺口創(chuàng)部中，用外科纖維(staple)封閉創(chuàng)部。手術(shù)次日，拆除前頸創(chuàng)部的外科纖維(staple)，輕輕提起收納的絲線，在總頸動(dòng)脈上用Sugita的腦動(dòng)脈瘤用夾子(52號(hào))使兩側(cè)總頸動(dòng)脈左右分別閉塞，制成4血管閉塞模型。
兩側(cè)總頸動(dòng)脈閉塞時(shí)間為5分鐘，使前腦缺血，臨再灌流前靜脈注射TMG以1．5mg／ml濃度完全溶解在生理食鹽水中配制的TMG制劑4mg／kg體重，取下總頸動(dòng)脈的夾子進(jìn)行再灌流。再灌流120分鐘后立即斷頭，迅速采集兩側(cè)大腦半球，測(cè)定濕重量。然后測(cè)定在干燥器中以100℃、干燥48小時(shí)的腦重量，求出與干燥前的重量差為水分重。然后，求出相對(duì)于干燥前腦重量而言的水分量之比(腦含水比例)。
此結(jié)果，連同缺血后臨再灌流前以等量生理食鹽水代替TMG制劑經(jīng)靜脈注射給藥的對(duì)照組的結(jié)果一起，列于表6中。
表6

結(jié)果為平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差顯著性檢定是通過(guò)Student t-檢定進(jìn)行的。
*相對(duì)于對(duì)照組而言是顯著的(P＜0．05)從表6可以清楚地看到，TMG給藥組的腦含水比例受到顯著抑制。
急性毒性試驗(yàn)對(duì)本發(fā)明的血管障礙性腦浮腫預(yù)防和治療劑進(jìn)行急性毒性試驗(yàn)，以確認(rèn)其安全性。用4～5周齡ICR品系小鼠1組3只，把作為苯并二氫吡喃醇配糖體的、與上述相同的TMG懸浮于5％阿拉伯膠液中之后，以TMG計(jì)500mg／kg經(jīng)口給藥1周、觀察。此時(shí)，作為對(duì)照組，經(jīng)口給藥0．3ml 5％阿拉伯膠液。其結(jié)果，任何一個(gè)給藥組中均未發(fā)現(xiàn)小鼠死亡例。
制劑例〔制劑例1〕TMG 100g、乳糖800g和玉米淀粉100g用摻合機(jī)混合，得到散劑。
〔制劑例2〕TMG 100g、乳糖450g和低取代度羥丙基纖維素100g混合后，加10％羥丙基纖維素水溶液混煉。將此物擠出、用造粒機(jī)造粒、干燥，得到顆粒劑。
〔制劑例3〕TMG 100g、乳糖550g、玉米淀粉215g、結(jié)晶纖維素130g和硬脂酸鎂5g用摻合機(jī)混合后，用壓片機(jī)壓片，得到片劑。
〔制劑例4〕TMG 10g、乳糖110g、玉米淀粉58g和硬脂酸鎂2g用V型混合機(jī)混合后，填充到3號(hào)膠囊中，每個(gè)180mg，得到膠囊劑。
〔制劑例5〕TMG 200mg和葡萄糖100mg溶解在精制水2ml中后過(guò)濾，濾液分裝到2ml安瓿中，密封后滅菌，得到注射劑。
產(chǎn)業(yè)上利用的可能性如上所述，本發(fā)明的局部缺血再灌流障礙預(yù)防和治療劑以苯并二氫吡喃醇配糖體為有效成分，因而能增強(qiáng)生物體內(nèi)的抗氧化防御體系，從而可以有效地抑制、調(diào)節(jié)局部缺血再灌流障礙患部中的活性氧和自由基，顯著抑制局部缺血再灌流障礙的病變，和大幅度改善病態(tài)。
此外，本發(fā)明是以具有高水溶性的苯并二氫吡喃醇配糖體為有效成分的，因而，除作為固形制劑使用外，還可以制成含有高濃度有效成分的水基制劑，少用量就能有效地作用于患部，從而可以預(yù)防、治療局部缺血再灌流障礙，同時(shí)不伴隨副作用，可以極安全地使用。
本發(fā)明的局部缺血再灌流障礙預(yù)防和治療劑，可以用于預(yù)防和治療由局部缺血再灌流引起的心臟、胃、小腸、肝臟、胰臟、腎臟、腦、眼球、皮膚等各部位的障礙，或臟器移植等中的障礙等。
權(quán)利要求
1．一種以下述通式(1)所示苯并二氫吡喃醇配糖體為有效成分的局部缺血再灌流障礙預(yù)防和治療劑 〔但式中R1、R2、R3和R4相同或不同，各表示氫原子或低級(jí)烷基，R5表示氫原子、低級(jí)烷基或低級(jí)酰基，X表示糖殘基中羥基的氫原子也可以有低級(jí)烷基或低級(jí)?；〈膯翁菤埢蚬烟菤埢琻是0～6的整數(shù)，和m是1～6的整數(shù)〕。
2．權(quán)利要求1記載的局部缺血再灌流障礙預(yù)防和治療劑，其中所述苯并二氫吡喃醇配糖體為2-(α-D-吡喃型葡萄糖基)甲基-2，5，7，8-四甲基苯并二氫吡喃-6-醇。
3．權(quán)利要求1～3記載的局部缺血再灌流障礙預(yù)防和治療劑，其中所述局部缺血再灌流障礙為小腸粘膜障礙、心肌局部缺血再灌流障礙或腦局部缺血再灌流障礙。
4．呈水基制劑的權(quán)利要求1～3記載的局部缺血再灌流障礙預(yù)防和治療劑。
全文摘要
以通式(1)所示苯并二氫吡喃醇配糖體為有效成分的局部缺血再灌流障礙預(yù)防和治療劑:式中R
文檔編號(hào)A61K31/7028GK1290169SQ99802737
公開(kāi)日2001年4月4日 申請(qǐng)日期1999年1月5日 優(yōu)先權(quán)日1998年2月6日
發(fā)明者吉川敏一, 村瀨博宣, 吉田憲正 申請(qǐng)人:Cci株式會(huì)社, 吉川敏一