專利名稱：抗癌新藥粉萆解總皂甙的制備方法
技術領域：
本發(fā)明步及醫(yī)藥技術領域，確切地說它是一種抗癌新藥粉草解總皂甙的制備方法。
粉草解為薯蕷科薯蕷屬植物粉背薯蕷(Dioscorea collettii var.hypoglauca)的干燥塊莖，主產于我國的浙江、江西等華東地區(qū)，能祛風、利濕，主治風濕頑痹、腰膝疼痛、小便不利、淋濁、遺精、濕熱瘡毒等癥[江蘇新醫(yī)學院編，中藥大辭典(1997年，上海人民出版社)，pp.2001-2004]。在民間，粉草解常與其他中草藥配伍，用來治療子宮頸癌[王冰主編，抗癌中藥方選(1992年，人民軍醫(yī)出版社)，pp.185-187]和膀胱腫瘤[王冰主編，抗癌中藥方選(1992年，人民軍醫(yī)出版社)，pp.210-211]?！吨腥A人民共和國藥典》的1985版[中華人民共和國衛(wèi)生部藥典委員會編，中華人民共和國藥典1985版一部(1985，人民衛(wèi)生出版社、化學工業(yè)出版社)，p.259]、1990版[中華人民共和國衛(wèi)生部藥典委員會編，中華人民共和國藥典1990版一部(1990，人民衛(wèi)生出版社、化學工業(yè)出版社)，pp.262-263]和1995版[中華人民共和國衛(wèi)生部藥典委員會編，中華人民共和國藥典1995版一部(1995，廣東科技出版社、化學工業(yè)出版社)，pp.260-261]均將粉草解作為中藥材收入其中。然而迄今為止，對中藥粉草解的研究甚少。婁偉、唐世蓉等人在對其化學成分研究中，分別從中分離得到9個甾體皂甙元[婁偉等，云南植物研究1984，26，461-462]以及4個甾體皂甙[唐世蓉等，植物學報1984，26，419-424；唐世蓉等，植物學報1986，28，453-456]。除此之外，未見任何有關粉草解的藥理活性報道，尤其是沒有系統(tǒng)全面的抗癌活性報道，其抗癌有效部位尚未清楚。本發(fā)明人在尋找中草藥抗癌活性成份過程中，發(fā)現(xiàn)粉草解的總皂甙具有很好的抗腫瘤活性，并且從總皂甙活性部位中獲得多個具有抗癌活性甾體皂甙類化合物。
本發(fā)明的目的是提供一種具有抗癌功能的抗癌新藥粉草解總皂甙的制備方法，不但開發(fā)了粉草草解的抗癌新用途，而且提供了簡單實用的工藝路線。
本發(fā)明是這樣實現(xiàn)的以中藥粉草解或者新鮮采集的粉草解為原料，采用溶劑提取法、溶劑萃取法、樹脂吸附法、正相柱層析法、反相柱層析法等工藝中的一種或者多種工藝，并結合濃縮干燥、冷凍干燥、噴霧干燥等常用干燥方法制備成粉草解總皂甙。將制成的粉草解總皂甙作為抗癌活性成分，使之與適宜的賦形劑相結合，按照常規(guī)方法制成散劑、顆粒劑、片劑、膠囊劑、丸劑、栓劑、腸溶劑、注射劑、糖漿劑、乳劑、混懸劑、酊劑、膏劑、噴霧劑等劑型，用于治療包括肺癌、白血病、膀胱癌、乳腺癌、卵巢癌、結腸癌、肝癌、皮膚癌、前列腺癌、鼻咽癌、絨毛膜上皮癌、腎臟腫瘤、胃癌、直腸癌、子宮癌、口腔癌、食道癌、膽癌、膽道癌、膽管癌、胰腺癌、骨癌、喉癌、舌癌、胸腺癌、淋巴瘤、惡性甲狀腺腫瘤、腦腫瘤、中樞神經系統(tǒng)腫瘤、縱隔腫瘤、黑色素瘤、肉瘤在內的等多種癌癥疾病。
所采用的溶劑提取法中，可選用水、甲醇、乙醇、正丁醇或者其他低級脂肪醇中的一種溶媒，也可選用其中的任意兩種或多種溶劑以任意比例所組成的混合溶媒，在室溫上浸潤提取或者用超聲波振蕩儀超聲振蕩提取，或者在加熱狀態(tài)下浸潤提取或回流提取。提取次數(shù)可以是一次，也可以是多次。
所采用的溶劑萃取法中，可將經水或者低級脂肪醇中的一種溶媒或者混合溶媒提取所獲得的提取物混懸于水中，用正丁醇或含水正丁醇直接進行萃取，或者經低極性溶媒(如石油醚、二氯甲烷、三氯甲烷等中的一種或多種)脫脂后，再用正丁醇或含水正丁醇進行萃取。萃取次數(shù)可以是一次，也可以是多次。
所采用的樹脂吸附法中，樹脂可選用D-101型吸附樹脂、XAD-2型吸附樹脂或者CHP-20P型吸附樹脂以及其他類型的吸附樹脂，洗脫溶媒用水、甲醇、乙醇、丙酮、含水甲醇、含水乙醇或者含水丙酮中的一種或多種。洗脫時可以濃度洗脫，也可以梯度洗脫。
所采用的正相柱層析法中，可選用常壓或加壓硅膠柱層析，所用柱填料可選柱層析用硅膠或者薄層層析用硅膠，洗脫劑可選用苯/丙酮、二氯甲烷/丙酮、三氯甲烷/丙酮、苯/甲醇、二氯甲烷/甲醇、三氯甲烷/甲醇、乙酸乙酯/甲醇、苯/丙酮/水、二氯甲烷/丙酮/水、三氯甲烷/丙酮/水、二氯甲烷/甲醇/水、三氯甲烷/甲醇/水或者乙酸乙酯/甲醇/水等中溶媒的一種或者多種。洗脫時可以等濃度洗脫，也可以梯度洗脫。
所采用的反相柱層析法，可選用常壓或加壓反相柱層析，所用柱填料可選十八烷基鍵合相(ODS)或八烷基鍵合相，洗脫劑用含水甲醇或含水乙腈。洗脫時可以等濃度洗脫，也可以梯度洗脫。
所采用的干燥方法包括濃縮干燥、冷凍干燥、噴霧干燥等常用方法。
作為抗癌活性成分，粉草解總皂甙的用量為成年人每日1～100mg，優(yōu)選30～800mg/天，每日服用2～3次。
口服給藥可制成片劑、散劑、顆粒劑、膠囊劑等常用劑型，至少需要一種賦型劑，如淀粉、乳糖、蔗糖、甘露糖、羥甲基纖維素等，片劑還可包衣。除這些賦型劑以外，還可使用硬脂酸鎂、月桂醇硫酸鈉、滑石粉等作為潤滑劑，糊精、結晶纖維素、聚乙烯吡略烷酮、阿拉伯膠、玉米淀粉、明膠等作為粘合劑，馬鈴薯淀粉、羥甲基纖維素作為崩解劑。此外，還可制成糖漿劑、乳劑、混懸劑等。對于這些劑型，可加入矯味劑、矯臭劑或著色劑等。
外用劑型包括栓劑、軟膏劑、外用散劑、噴霧劑、灌腸劑、乳劑等等。這里所使用的固體或液體添加劑是在本技術領域中經常使用的。對于軟膏劑，選用由水、脂肪、脂肪油、羊毛脂、凡士林、甘油、蜂蠟、石蠟、液體石蠟、樹脂、高級醇、塑料、表面活性劑組成的疏水性基質或親水性基質(包括乳劑性基質、水溶性基質懸濁性基質)等在內的添加劑。
制成注射劑時，一般用注射用蒸餾水、生理鹽水、葡萄糖水溶液、注射用植物油、丙二醇、聚乙二醇等。必要時，還可加入適宜的等張劑、助溶劑、抗氧劑、防腐劑等。
實施例1、溶劑提取法/溶劑萃取法合用提取制備粉草解總皂甙中藥粉草解的干燥根莖1.5kg用95％乙醇(151×3)在90℃下回流，合并提取液，濃縮得到133g乙醇提取物。將乙醇提取物混懸于水中，用正丁醇萃取，經濃縮干燥即可得到總皂甙，收率為1.0％。
2、溶劑提取法/樹脂吸附法合用提取制備粉草解總皂甙中藥粉草解的干燥根莖1.0kg用95％乙醇(101×3)在90℃下回流，合并提取液，濃縮得到95.3g乙醇提取物。乙醇提取物上D-101型吸附樹脂柱，先用水、5％乙醇/水洗脫以除去色素和雜質，而后用60％乙醇/水洗脫。其中60％乙醇/水洗脫部分減壓濃縮除乙醇，再經冷凍干燥可得到總皂甙，收率為1.1％。
3、粉草解總皂甙的體外抑瘤實驗粉草解總皂甙對K562白血病瘤株和腸癌Intestine 407瘤株均顯示較強的體外抑制活性，IC50值分別為1.2μg/ml和4.0μg/ml。
4、粉草解總皂甙抑制乳癌p815瘤株在DBA/2小鼠體內肝轉移和脾轉移實驗粉草解總皂甙對乳癌p815瘤株在DBA/2小鼠體內的肝轉移和脾轉移具有明顯的抑制效果，實驗結果見下表。給藥劑量肝轉移 脾轉移粉草解總皂甙(150mg/kg)24.3±6.20.8±0.8陰性對照H2O(0.1ml/10g) 33.8±7.42.5±1.45、粉草解總皂甙50g與微晶纖維素45g及硬脂酸鎂5g混合，混合物用單沖壓片機打成Φ6mm，重量300mg的片劑。本片劑中，每片含總皂甙150mg。結合癥狀，每次1～2片，每日服用2～3次。
6、粉草解總皂甙10g與玉米淀粉40g混合，加水制成軟材，過12目篩造粒，干燥，得顆粒劑。本顆粒劑中，每500mg中含總皂甙100mg。結合癥狀，每次0.5～1.0g，每日服用2～3次。
7、粉草解總皂甙80g與乳糖110g、硬脂酸鎂10g混合，以每600mg填充膠囊。本膠囊劑中，每個膠囊含總皂甙150mg。結合癥狀，每次1～2個，每日服用2～3次。
8、粉草解總皂甙30g，加水300ml溶解，加橙皮甙4ml，加單糖漿至100ml得糖漿劑。本糖漿劑1ml中含總皂甙30mg。結合癥狀，每次6～10ml，每日服用2～3次。
9、粉草解總皂甙50g與微晶纖維素90g及硬脂酸鎂10g混合，混合物用單沖壓片機打成Φ6mm的片劑，并用CAP薄膜包衣，制成重量300mg的腸溶制劑。本處方中每片含總皂甙100mg。結合癥狀，每次2～3片，每日服用2～3次。
10、粉草解總皂甙40g與乳糖100g、硬脂酸鎂10g混合，以每600mg填充腸溶膠囊。本腸溶膠囊劑中，每個膠囊含總皂甙160mg。結合癥狀，每次1～2個，每日服用2～3次。
11、粉草解總皂甙25g以普通注射劑制造法，用加熱至60℃的注射用蒸餾水1000ml溶解，用NaCl調解等張，封入安瓶。本注射劑中，每10ml含總皂甙250mg。結合癥狀，每次肌肉注射10ml，每日注射2～3次。
權利要求
1.一種抗癌新藥粉草解總皂甙的制備方法，其特征在于以中藥粉草解或者新鮮采集的粉背薯蕷(Dioscorea collettii var.hypoglauca)的干燥塊莖為原料，采用溶劑提取法、溶劑萃取法、樹脂吸附法、正相柱層析法、反相柱層析法等工藝中的一種或者多種工藝，并結合濃縮干燥、冷凍干燥、噴霧干燥等常用干燥方法制備成粉草解總皂甙，使之作為抗癌活性成分與賦形劑相結合，按照常規(guī)方法制成的口服給藥的內用劑型及非口服給藥的注射劑和外用劑型在癌癥治療中進行應用。
2.一種如權利要求1所述的抗癌新藥粉草解總皂甙的制備方法，其特征在于所采用的溶劑提取法中，可選用水、甲醇、乙醇、正丁醇或者其他低級脂肪醇中的一種溶媒，也可選用其中的任意兩種或多種溶劑以任意比例所組成的混合溶媒，在室溫下浸潤提取或者用超聲波振蕩儀超聲振蕩提取，或者在加熱狀態(tài)下浸潤提取或回流提取，提取次數(shù)可以是一次，也可以是多次。
3.一種如權利要求1所述的抗癌新藥粉草解總皂甙的制備方法，其特征在于所采用的溶劑萃取法中，可將經水或者低級脂肪醇中的一種溶媒或者混合溶媒提取所獲得的提取物混懸于水中，用正丁醇或含水正丁醇直接進行萃取，或者經低極性溶媒(如石油醚、二氯甲烷、三氯甲烷等中的一種或多種)脫脂后，再用正丁醇或含水正丁醇進行萃取。萃取次數(shù)可以是一次，也可以是多次。
4.一種如權利要求1所述的抗癌新藥粉草解總皂甙的制備方法，其特征在于所采用的樹脂吸附法中，樹脂可選用D-101型吸附樹脂、XAD-2型吸附樹脂或者CHP-20P型吸附樹脂以及其他類型的吸附樹脂，洗脫溶媒用水、甲醇、乙醇、丙酮、含水甲醇、含水乙醇或者含水丙酮中的一種或多種，洗脫時可以濃度洗脫，也可以梯度洗脫。
5.一種如權利要求1所述的抗癌新藥粉草解總皂甙的制備方法，其特征在于所采用的正相柱層析法中，可選用常壓或加壓硅膠柱層析，所用柱填料可選柱層析用硅膠或者薄層層析用硅膠，洗脫劑可選用苯/丙酮、二氯甲烷/丙酮、三氯甲烷/丙酮、苯/甲醇、二氯甲烷/甲醇、三氯甲烷/甲醇、乙酸乙酯/甲醇、苯/丙酮/水、二氯甲烷/丙酮/水、三氯甲烷/丙酮/水、二氯甲烷/甲醇/水、三氯甲烷/甲醇/水或者乙酸乙酯/甲醇/水等中溶媒的一種或者多種，洗脫時可以等濃度洗脫，也可以梯度洗脫。
6.一種如權利要求1所述的抗癌新藥粉草解總皂甙的制備方法，其特征在于所采用的反相柱層析法，可選用常壓或加壓反相柱層析，所用柱填料可選十八烷基鍵合相(ODS)或八烷基鍵合相，洗脫劑用含水甲醇或含水乙腈，洗脫時可以等濃度洗脫，也可以梯度洗脫。
7.一種如權利要求1所述的抗癌新藥粉草解總皂甙的制備方法，其特征在于蒸餾濃縮的同時回收有機溶媒。
8.一種如權利要求1所述的抗癌新藥粉草解總皂甙的制備方法，其特征在于所述的內用劑型、非口服給藥的注射劑和外用劑型為散劑、顆粒劑、片劑、膠囊劑、丸劑、栓劑、腸溶劑、注射劑、糖漿劑、乳劑、混懸劑、酊劑、膏劑、噴霧劑等等。
9.一種如權利要求1所述的抗癌新藥粉草解總皂甙的制備方法，其特征在于作為抗癌活性成分的粉草解總皂甙，其用量為成年人每日1～1000mg，優(yōu)選30～800mg/天，每日服用2～3次。
10.一種如權利要求1所述的抗癌新藥粉草解總皂甙的制備方法，其特征在于將制成的粉草解總皂甙作為抗癌活性成分，使之與適宜的賦形劑相結合，按照常規(guī)方法制成的口服給藥的內用劑型及非口服給藥的注射劑和外用劑型在癌癥治療中進行應用，所制成的抗癌制劑，可用于治療包括肺癌、白血病、膀胱癌、乳腺癌、卵巢癌、結腸癌、肝癌、皮膚癌、前列腺癌、鼻咽癌、絨毛膜上皮癌、腎臟腫瘤、胃癌、直腸癌、子宮癌、口腔癌、食道癌、膽癌、膽道癌、膽管癌、胰腺癌、骨癌、喉癌、舌癌、胸腺癌、淋巴瘤、惡性甲狀腺腫瘤、腦腫瘤、中樞神經系統(tǒng)腫瘤、縱隔腫瘤、黑色素瘤、肉瘤等在內的多種癌癥痰病。
全文摘要
本發(fā)明涉及抗癌新藥粉萆解總皂甙的制備方法,以中藥粉萆解或者新鮮采集的粉背薯蕷(Dioscorea collettii var.hypoglauca)的干燥塊莖為原料,采用溶劑提取法、溶劑萃取法、樹脂吸附法、正相柱層析法、反相柱層析法等工藝中的一種或者多種工藝,并結合濃縮干燥、冷凍干燥、噴霧干燥等常用干燥方法制備成粉萆解總皂甙。將制成的粉萆解總皂甙作為抗癌活性成分,使之與適宜的賦形劑相結合制成各種劑型用于治療多種癌癥疾病。本發(fā)明開發(fā)了粉萆解的抗癌新用途。
文檔編號A61P35/00GK1244535SQ9911311
公開日2000年2月16日 申請日期1999年7月20日 優(yōu)先權日1999年7月20日
發(fā)明者姚新生, 胡柯 申請人:沈陽藥科大學