專利名稱：Il－8受體拮抗劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及新的苯并異噻唑取代的化合物、藥物組合物、其制備方法及其在治療IL-8、GROα、GROβ、GROγ、ENA-78和NAP-2介導(dǎo)的疾病中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
白介素-8(IL-8)已經(jīng)有很多不同的的名字，如嗜中性吸引劑／激活蛋白-1(NAP-1)、單核細(xì)胞衍生的嗜中性趨化因子(MDNCF)、嗜中性激活因子(NAF)和T-細(xì)胞淋巴細(xì)胞趨化因子。白介素-8是嗜中性白細(xì)胞、嗜堿細(xì)胞和T-細(xì)胞亞型的化學(xué)吸引劑。它是由多數(shù)暴露到TNF、IL-1α、IL-1β或LPS中的有核細(xì)胞包括巨噬細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞和上皮細(xì)胞產(chǎn)生的，和由暴露到LPS或趨化因子如FMLP中的嗜中性白細(xì)胞本身產(chǎn)生的。M．Baggiolini er al．，J．Clin．Invest．84，1045(1989)；J．Schroder et al．，J．Immunol．139，3474(1987)和J．Immunol．144，2223(1990)；Strieter，et al．，Science 243，1467(1989)和J．Biol．Chem．264，10621(1989)；Cassatella etal．，J．Immunol．148，3216(1992)。
GROα、GROβ、GROγ、和NAP-2也屬于α族趨化因子(chemokine)。如同白介素IL-8，這些趨化因子也以不同的名字提到過。例如GROα、β、γ分別是指MGSAα、β和γ(刺激黑素瘤生長活性)，見Richmond etal．，J．Cell Physiology 129，375(1986)和Chang et al．，J．Immunol 148，451(1992)。所以這些在CXC基序前具有ELR基序的α族趨化因子都連接到IL-8B受體上。
在體外，IL-8、GROα、GROβ、GROγ、NAP-2和ENA-78可興奮許多功能。它們都顯示出具有嗜中性白細(xì)胞(盡管IL-8和GROα已證明是T-淋巴細(xì)胞)的化學(xué)吸引性和嗜堿細(xì)胞化學(xué)趨化性。另外，IL-8可誘導(dǎo)組胺從來自正常和特應(yīng)性個(gè)體GROα的噬堿細(xì)胞中釋放，并且另外IL-8可誘導(dǎo)溶菌體(lysozomal)酶從嗜中性白細(xì)胞中釋放和呼吸破裂。IL-8也顯示增加Mac-1(CD11b／CD18)在嗜中性白細(xì)胞上的表面表達(dá)而沒有新蛋白質(zhì)的合成。這可起增加嗜中性白細(xì)胞與血管內(nèi)皮細(xì)胞粘著性的作用。許多已知疾病的特征是不能濾過大量的嗜中性白細(xì)胞。因?yàn)镮L-8、GROα、GROβ、GROγ和NAP-2促進(jìn)嗜中性白細(xì)胞的積累和活化，這些趨化因子廣泛參與急性和慢性炎性疾病包括牛皮癬和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，Baggiolini等人，F(xiàn)EBS Lett．307，97(1992)；Miller等人，Crit．Rev．Immunol．12，17(1992)；Oppenheim等人，Annu．Rev．Immunol．9，617(1991)；Seitz等人，J．Clin．Invest．87，463(1991)；Miller等人，Am．Rev．Respir．Dis．146，427(1992)；Donnely等人，Lancet 341，643(1993)。另外，ELR趨化因子(那些在CXC基序之前含有氨基酸ELR基序的)也參與血管郁積(angiostasis)。Strieter等人，Science 258，1798(1992)。
在體外，IL-8、GROα、GROβ、GROγ和NAP-2通過結(jié)合并活化七-橫跨膜(G-蛋白-連接類)受體，特別是通過結(jié)合IL-8受體，最明顯的是B-受體來誘導(dǎo)嗜中性白細(xì)胞形狀改變、化學(xué)毒性、顆粒釋放和呼吸急促(burst)。Thomas等人，J．Biol．Chem．266，14839(1991)；和Holmes等人，Science 253，1278(1991)。以前開發(fā)了該類受體膜的非肽小分子拮抗劑。參見R．Freidinger的Progress in DrugResearch，第40卷，33-98頁，Birkhauser Verlag，Basel 1993。因此，IL-8受體代表開發(fā)新抗炎劑的有希望的靶向物。
兩類高親和性人IL-8受體(77％同源性)已被確定IL-8Rα(它僅僅與IL-8具有結(jié)合高親和性)和IL-8Rβ(它與IL-8以及GRO-α、GROβ、GROγ和NAP-2都具有高親和性)。參見Holmes等人，同上；Murphy等人，Science 253，1280(1991)；Lee等人，J．Biol．Chem．267，16283(1992)；LaRosa等人，J．Biol．Chem．267，25402(1992)；和Gayle等人，J．Biol．Chem．268，7283(1993)。
本領(lǐng)域仍需要用于治療的能夠結(jié)合IL-8α和β受體的化合物。所以，作為IL-8受體結(jié)合抑制劑的化合物應(yīng)當(dāng)對與IL-8產(chǎn)生(它負(fù)責(zé)將嗜中性白細(xì)胞和T-細(xì)胞亞型趨化到炎癥部位)增加有關(guān)的疾病有益。
發(fā)明概要本發(fā)明提供一種治療趨化因子介導(dǎo)的疾病的方法，其中所述趨化因子連接到IL-8α或β受體上并且該方法包括給予有效量式(Ⅰ)化合物或其可藥用鹽。尤其，該趨化因子是IL-8。
本發(fā)明也涉及抑制需要該治療的哺乳動物的IL-8連接到其受體上的方法，它包括給予所述哺乳動物有效量式(Ⅰ)化合物。
本發(fā)明也提供新的式(Ⅰ)化合物及其包含式(Ⅰ)化合物和可藥用載體或稀釋劑的藥物組合物。
本發(fā)明中所使用的式(Ⅰ)化合物或其可藥用鹽可用結(jié)構(gòu)式(Ⅰ)表示
其中R是-NH-C(X)-NH-(CR13R14)v-Z；Z是W、未取代的或取代的雜芳基、未取代的或取代的C5-8環(huán)烷基、未取代的或取代的C1-10烷基、未取代的或取代的C2-10烯基、或未取代的或取代的C2-10炔基；X是=O或者=S；A是CR20R21；R1獨(dú)立地選自氫；鹵素；硝基；氰基；鹵代C1-10烷基；C1-10烷基；C2-10烯基；C1-10烷氧基；鹵代C1-10烷氧基；疊氮化物；(CR8R8)qS(O)tR4；羥基；羥基C1-4烷基；芳基；芳基C1-4烷基；芳氧基；芳基C1-4烷氧基；雜芳基；雜芳基烷基；雜環(huán)基；雜環(huán)基C1-4烷基；雜芳基C1-4烷氧基；芳基C2-10烯基；雜芳基C2-10烯基；雜環(huán)基C2-10烯基；(CR8R8)qNR4R5；C2-10烯基C(O)NR4R5；(CR8R8)qC(O)NR4R5；(CR8R8)qC(O)NR4R10；S(O)3H；S(O)3R8；(CR8R8)qC(O)R11；C2-10烯基C(O)R11；C2-10烯基C(O)OR11；(CR8R8)qC(O)OR11；(CR8R8)qC(O)OR12；(CR8R8)qOC(O)R11；(CR8R8)qNR4C(O)R11；(CR8R8)qC(NR4)NR4R5；(CR8R8)qNR4C(NR5)R11；(CR8R8)qNHS(O)2R17；(CR8R8)qS(O)2NR4R5；或者兩個(gè)R1部分一起形成-O-(CH2)sO-或5-6元飽和或不飽和環(huán)，并且其中含芳基、雜芳基和雜環(huán)基的環(huán)可以是未取代的或取代的；
n是1-3的整數(shù)；m是1或3的整數(shù)；q是0或1-10的整數(shù)；t是0、1或2；s是1-3的整數(shù)；v是0或1-4的整數(shù)；R4和R5獨(dú)立地為氫、未取代的或取代的C1-4烷基、未取代的或取代的芳基、未取代的或取代的芳基C1-4烷基、未取代的或取代的雜芳基、未取代的或取代的雜芳基C1-4烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基C1-4烷基、或者R4和R5與它們所連接的氮原子一起形成5-7元包含或不包含其它選自O(shè)／N／S雜原子的環(huán)；Y獨(dú)立地選自氫；鹵素；硝基；氰基；鹵代C1-10烷基；C1-10烷基；C2-10烯基；C1-10烷氧基；鹵代C1-10烷氧基；疊氮化物；(CR8R8)qS(O)tR4；羥基；羥基C1-4烷基；芳基；芳基C1-4烷基；芳氧基；芳基C1-4烷氧基；雜芳基；雜芳基烷基；雜芳基C1-4烷氧基；雜環(huán)基；雜環(huán)基C1-4烷基；芳基C2-10烯基；雜芳基C2-10烯基；雜環(huán)基C2-10烯基；(CR8R8)qNR4R5；C2-10烯基C(O)NR4R5；(CR8R8)qC(O)NR4R5；(CR8R8)qC(O)NR4R10；S(O)3H；S(O)3R8；(CR8R8)qC(O)R11；C2-10烯基C(O)R11；C2-10烯基C(O)OR11；(CR8R8)qC(O)OR11；(CR8R8)qC(O)OR12；(CR8R8)qOC(O)R11；(CR8R8)qNR4C(O)R11；(CR8R8)qC(NR4)NR4R5；(CR8R8)qNR4C(NR5)R11；(CR8R8)qNHS(O)2R18；(CR8R8)qS(O)2NR4R5；或者兩個(gè)Y部分一起形成-O-(CH2)sO-或5-6元飽和或不飽和環(huán)，并且其中含芳基、雜芳基和雜環(huán)基的環(huán)可以是未取代的或取代的；R6和R7獨(dú)立地為氫或C1-4烷基，或者R6和R7與它們所連接的氮原子一起形成5-7元包含或不包含其它選自氧、氮或硫雜原子的環(huán)；R8獨(dú)立地為氫或C1-4烷基；R10為C1-10烷基C(O)2R8；R11為氫、C1-4烷基、未取代的或取代的芳基、未取代的或取代的芳基C1-4烷基、未取代的或取代的雜芳基、未取代的或取代的雜芳基C1-4烷基、未取代或取代的雜環(huán)基、未取代的或取代的雜環(huán)基C1-4烷基；R12為氫、C1-10烷基、未取代的或取代的芳基或未取代的或取代的芳基烷基；R13和R14獨(dú)立地為氫、未取代的或取代的C1-4烷基，或者R13和R14中的一個(gè)可以是未取代的或取代的芳基；R15和R16獨(dú)立地為氫或者未取代的或取代的C1-4烷基；R17為C1-4烷基、芳基、芳基烷基、雜芳基、雜芳基C1-4烷基、雜環(huán)基或雜環(huán)基C1-4烷基，其中芳基、雜芳基和雜環(huán)都可以是未取代的或取代的；R18為NR6R7、烷基、芳基C1-4烷基、芳基C2-4烯基、雜芳基、雜芳基C1-4烷基、雜芳基C2-4烯基、雜環(huán)基、雜環(huán)基C1-4烷基，其中芳基、雜芳基和雜環(huán)都可以是未取代的或取代的；R20和R21獨(dú)立地為氫、鹵素、氰基、鹵代C2-10烷基；C1-10烷基、芳基、芳基C1-4烷基、雜芳基、雜芳基烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基C1-4烷基、(CR8R8)qOR4、(CR8R8)qC(O)R11、(CR8R8)qC(O)OR11、(CR8R8)qC(O)OR12、(CR8R8)qOC(O)R11、(CR8R8)qNR4R5、(CR8R8)qNR4C(O)R11、(CR8R8)qC(O)NR4R5、(CR8R8)qC(O)NR4R10，或者R20和R21一起形成=R22；并且其中含芳基、雜芳基和雜環(huán)基的環(huán)可以是未取代的或取代的；此外前體條件是R20和R21都不是氫；R22為C1-4烷基、芳基、芳基C1-4烷基、雜芳基、雜芳基烷基、雜環(huán)基或雜環(huán)基C1-4烷基，并且其中所以這些部分都可以是取代的或未取代的；
含E的環(huán)可選擇地選自
星點(diǎn)*表示環(huán)的連接點(diǎn)。發(fā)明詳細(xì)描述式(Ⅰ)化合物也可以在獸醫(yī)學(xué)中用于人以外的哺乳動物的治療，所述哺乳動物需要抑制IL-8或其它結(jié)合到IL-8α和β受體上的趨化因子。治療或預(yù)防性治療哺乳動物中由趨化因子介導(dǎo)的疾病包括本文治療方法部分中所提到的那些疾病。
在式(Ⅰ)化合物中，適宜的R1獨(dú)立地選自氫；鹵素；硝基；氰基；鹵代C1-10烷基如CF3；C1-10烷基如甲基、乙基、異丙基或正丙基；C2-10烯基；C1-10烷氧基如甲氧基或乙氧基；鹵代C1-10烷氧基如三氟甲氧基；疊氮化物；(CR8R8)qS(O)tR4，其中t是0、1或2；羥基；羥基C1-4烷基如甲醇或乙醇；芳基如苯基或萘基；芳基C1-4烷基如芐基；芳氧基如苯氧基；芳基C1-4烷氧基如芐氧基；雜芳基；雜芳基烷基；雜芳基C1-4烷氧基；芳基C2-10烯基；雜芳基C2-10烯基；雜環(huán)基C2-10烯基；(CR8R8)qNR4R5；C2-10烯基C(O)NR4R5；(CR8R8)qC(O)NR4R5；(CR8R8)qC(O)NR4R10；S(O)3H；S(O)3R8；(CR8R8)qC(O)R11；C2-10烯基C(O)R11；C2-10烯基C(O)OR11；(CR8R8)qC(O)OR11；(CR8R8)qC(O)OR12；(CR8R8)qOC(O)R11；(CR8R8)qNR4C(O)R11；(CR8R8)qC(NR4)NR4R5；(CR8R8)qNR4C(NR5)R11；(CR8R8)qNHS(O)2R17；(CR8R8)qS(O)2)NR4R5；或者兩個(gè)R1部分一起形成-O-(CH2)sO-或5-6元飽和或不飽和環(huán)。上述所有含芳基、雜芳基和雜環(huán)基的部分可以是未取代的或取代的。
適宜的s是1-3的整數(shù)。
適宜的q是0或1-10的整數(shù)。
已知，如果可能，R1部分可以被取代在苯環(huán)或含A環(huán)上，優(yōu)選在苯環(huán)上。
當(dāng)R1形成二氧橋時(shí)，優(yōu)選地，s是1。當(dāng)R1形成其它飽和或不飽和環(huán)時(shí)，優(yōu)選地，該環(huán)是產(chǎn)生萘環(huán)系統(tǒng)的6元不飽和環(huán)。這些環(huán)可以是未取代的或由上述定義的其它R1部分獨(dú)立地取代1-3次。
適宜地，R4和R5獨(dú)立地為氫、未取代的或取代的C1-4烷基、未取代的或取代的芳基、未取代的或取代的芳基C1-4烷基、未取代的或取代的雜芳基、未取代的或取代的雜芳基C1-4烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基C1-4烷基、或者R4和R5與它們所連接的氮原子一起形成5-7元包含或不包含其它選自O(shè)／N／S雜原子的環(huán)。
適宜地，R6和R7獨(dú)立地為氫或C1-4烷基，或者R6和R7與它們所連接的氮原子一起形成5-7元包含或不包含其它選自氧、氮或硫雜原子的環(huán)。
適宜地，R8獨(dú)立地為氫或C1-4烷基。
適宜地，R10為C1-10烷基C(O)2R8，如CH2C(O)2H、CH2C(O)2CH3。
適宜地，R11為氫、C1-4烷基、芳基、芳基C1-4烷基、雜芳基、雜芳基C1-4烷基、雜環(huán)基或雜環(huán)基C1-4烷基。
適宜地，R12為氫、C1-10烷基、未取代的或取代的芳基或未取代的或取代的芳基烷基。
適宜地，R13和R14獨(dú)立地為氫、未取代的或取代的C1-4烷基，該烷基可以是本文所定義直鏈或支鏈烷基，或者R13和R14中的一個(gè)是未取代的或取代的芳基；v是0或1-4的整數(shù)。
當(dāng)R13和R14是未取代的或取代的烷基時(shí)，烷基部分可獨(dú)立地由鹵素取代1-3次；鹵代C1-4烷基如三氟甲基；羥基；羥基C1-4烷基；C1-4烷氧基如甲氧基或乙氧基；鹵代C1-10烷氧基；S(O)tR4；芳基；NR4R5；NHC(O)R4；C(O)NR4R5；或C(O)OR8。
適宜地，R17為C1-4烷基、芳基、芳基烷基、雜芳基、雜芳基C1-4烷基、雜環(huán)基或雜環(huán)基C1-4烷基，其中芳基、雜芳基和雜環(huán)都可以是未取代的或取代的。
適宜地，Y獨(dú)立地選自氫；鹵素；硝基；氰基；鹵代C1-10烷基；C1-10烷基；C2-10烯基；C1-10烷氧基；鹵代C1-10烷氧基；疊氮化物；(CR8R8)qS(O)tR4；羥基；羥基C1-4烷基；芳基；芳基C1-4烷基；芳氧基；芳基C1-4烷氧基；雜芳基；雜芳基烷基；雜芳基C1-4烷氧基；雜環(huán)基；雜環(huán)基C1-4烷基；芳基C2-10烯基；雜芳基C2-10烯基；雜環(huán)基C2-10烯基；(CR8R8)qNR4R5；C2-10烯基C(O)NR4R5；(CR8R8)qC(O)NR4R5；(CR8R8)qC(O)NR4R10；S(O)3H；S(O)3R8；(CR8R8)qC(O)R11；C2-10烯基C(O)R11；C2-10烯基C(O)OR11；(CR8R8)qC(O)OR11；(CR8R8)qC(O)OR12；(CR8R8)qOC(O)R11；(CR8R8)qNR4C(O)R11；(CR8R8)qC(NR4)NR4R5；(CR8R8)qNR4C(NR5)R11；(CR8R8)qNHS(O)2R18；(CR8R8)qS(O)2)NR4R5；或者兩個(gè)Y部分一起形成-O-(CH2)sO-或5-6元飽和或不飽和環(huán)。上述含芳基、雜芳基和雜環(huán)部分可以是未取代的或取代的。
當(dāng)Y形成二氧橋時(shí)，優(yōu)選地，s是1。當(dāng)Y形成其它飽和或不飽和環(huán)時(shí)，優(yōu)選地，該環(huán)是產(chǎn)生萘環(huán)系統(tǒng)的6元不飽和環(huán)。這些環(huán)可以是未取代的或由上述定義的其它Y部分取代1-3次。
適宜地，R18為NR6R7、烷基、芳基C1-4烷基、芳基C2-4烯基、雜芳基、雜芳基C1-4烷基、雜芳基C2-4烯基、雜環(huán)基、雜環(huán)基C1-4烷基，其中芳基、雜芳基和雜環(huán)都可以是未取代的或取代的。
優(yōu)選地，Y是鹵素、C1-4烷氧基、未取代的或取代的芳基、未取代的或取代的芳氧基或芳烷氧基、亞甲基二氧基、NR4R5、硫代C1-4烷基、硫代芳基、硫代烷氧基、未取代的或取代的C1-4烷基或羥基烷基。更優(yōu)選地，Y是一取代的鹵素、二取代的鹵素、一取代的烷氧基、二取代的烷氧基、亞甲基二羥基、芳基或烷基，更優(yōu)選地，這些基團(tuán)是在2’-位或2’-、3’-位一取代或二取代的。
盡管Y可以在環(huán)上5個(gè)部位的任一部位取代，但優(yōu)選地，Y在2’或3’位一取代，同時(shí)優(yōu)選地4’-位是未取代的。如果該環(huán)是二取代的，那么優(yōu)選地，取代基在單環(huán)的2’或3’位。盡管R1和Y可以都是氫，但優(yōu)選至少一個(gè)環(huán)是取代的，并且優(yōu)選兩個(gè)環(huán)都是取代的。
適宜地，X是=O或=S。
適宜地，A是CR20R21。
適宜地，R20和R21獨(dú)立地為氫、鹵素、氰基、鹵代C1-10烷基；C1- 10烷基、芳基、芳基C1-4烷基、雜芳基、雜芳基C1-4烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基C1-4烷基、(CR8R8)qOR4、(CR8R8)qC(O)R11、(CR8R8)qC(O)OR11、(CR8R8)qC(O)OR12、(CR8R8)qOC(O)R11、(CR8R8)qNR4R5、(CR8R8)qNR4C(O)R11、(CR8R8)qC(O)NR4R10或(CR8R8)qC(O)NR4R5；并且其中含芳基、雜芳基和雜環(huán)基的環(huán)可以是未取代的或取代的，前題條件是R20和R21都不是氫；或者R20和R21一起形成連接到R22基上的雙鍵，如=R22。
適宜地，R22為C1-4烷基、芳基、芳基C1-4烷基、雜芳基、雜芳基烷基、雜環(huán)基或雜環(huán)基C1-4烷基，并且其中所有這些部分都可以是未取代的或取代的。優(yōu)選地，R20和R21一起形成亞甲基。
適宜地，R15和R16獨(dú)立地為氫，或如R13和R14中所定義的那樣未取代的或取代的C1-4烷基。
在式(Ⅰ)化合物中，適宜地，Z是W、未取代的或取代的雜芳基、未取代的或取代的C5-8環(huán)烷基、未取代的或取代的C1-10烷基、未取代的或取代的C2-10烯基或未取代的或取代的C2-10炔基。
適宜地，含E的環(huán)選擇地選自
由其通過星點(diǎn)(*)的連接點(diǎn)表示的含E的環(huán)可存在或不存在。如果存在，該環(huán)是由所顯示的苯基部分被Y取代。E環(huán)可由任何飽和或不飽和環(huán)的(Y)n部分取代，并且此處為本文目的僅顯示在不飽和環(huán)上取代的。
當(dāng)Z是未取代的或取代的C5-8環(huán)烷基環(huán)時(shí)，該環(huán)可以是未取代的或由上述定義的(Y)n取代。
當(dāng)Z是未取代的或取代的C1-10烷基、未取代的或取代的C2-10烯基或未取代的或取代的C2-10炔基部分時(shí)，這些部分可以是未取代的或由鹵素；硝基；氰基；鹵代C1-10烷基如三氟甲基；C1-10烷氧基；鹵代C1-10烷氧基；S(O)tR4；羥基；羥基C1-4烷基；芳氧基；芳基C1-4烷氧基；雜芳氧基；雜芳基C1-4烷氧基；雜環(huán)基；雜環(huán)基C1-4烷基；雜環(huán)氧基；雜環(huán)基C1-4烷氧基；NR4R5；C(O)NR4R5；C(O)NR4R10；S(O)3H；S(O)3R8；C(O)R11；C(O)OR12；OC(O)R11或NR4C(O)R11取代1-3次。
當(dāng)是未取代的或取代的C2-10烯基或未取代的或取代的C2-10炔基時(shí)，除了上述那些取代基外，這些部分也可以是未取代的或由芳基、芳基C1-4烷基、雜芳基和雜芳基C1-4烷基(含芳基和雜芳基部分也可以未取代的或取代的)取代。
在式(Ⅰ)化合物中，當(dāng)Z是雜芳基(HET)環(huán)時(shí)，雜芳基環(huán)或環(huán)系統(tǒng)是適宜的。如果HET部分是多環(huán)系統(tǒng)，那么含雜原子的環(huán)不必直接連接到脲部分。在該環(huán)系統(tǒng)中，所有的環(huán)都可以未取代的或如本文所定義的取代。優(yōu)選地，HET部分是吡啶基，該吡啶基可以是2-、3-或4-吡啶基。如果該環(huán)是多環(huán)系統(tǒng)，那么優(yōu)選苯并咪唑、二苯并噻吩或吲哚環(huán)。其它有益的雜環(huán)包括但不限制于噻吩、呋喃、嘧啶、吡咯、吡唑、喹啉、異喹啉、喹唑啉、吡啶、噁唑、噻唑、噻二唑、三唑、咪唑或苯并咪唑。
在式(Ⅰ)化合物中，HET環(huán)可以是未取代的或獨(dú)立地由上述定義的(Y)n取代。
除非特別定義，本文所使用的“未取代的或取代的”是指基團(tuán)如鹵素，如氟、氯、溴或碘；羥基；羥基取代的C1-10烷基；C1-10烷氧基如甲氧基或乙氧基；S(O)m’C1-10烷基，其中m’是0、1、或2，如甲硫基、甲基亞磺?；蚣谆酋；话被?，一和二取代氨基，如NR4R5；NHC(O)R4；C(O)NR4R5；C(O)OH；S(O)2R4R5；NHS(O)2R19，C1-10烷基，如甲基、乙基、丙基、異丙基或叔丁基；鹵代C1-10烷基，如CF3；未取代的或取代的芳基，如苯基、或未取代的或取代的芳烷基，如芐基或苯乙基，未取代的或取代的雜環(huán)基，未取代的或取代的雜環(huán)基烷基，未取代的或取代的雜芳基，未取代的或取代的雜芳基烷基，其中這些芳基、雜芳基或雜環(huán)基部分可以由鹵素；羥基；羥基取代的烷基；C1-10烷氧基；S(O)m’C1-10烷基；氨基、一取代和二取代的氨基，如NR4R5；C1-10烷基或鹵代C1-10烷基，如CF3取代1-2次。
適宜地R19是C1-4烷基，芳基，芳基C1-4烷基，雜芳基，雜芳基C1-4烷基，雜環(huán)基，雜環(huán)基C1-4烷基。
適宜地，可藥用鹽是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的并且包括無機(jī)和有機(jī)酸的堿鹽，所述酸如鹽酸、氫溴酸、硫酸、磷酸、甲磺酸、乙磺酸、乙酸、蘋果酸、酒石酸、檸檬酸、乳酸、草酸、琥珀酸、富馬酸、馬來酸、苯甲酸、水楊酸、苯乙酸和苦杏仁酸。另外，例如，如果取代基包含羧基部分，那么，式(Ⅰ)化合物的可藥用鹽也可以由可藥用陽離子形成。適宜的可藥用陽離子是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的并且包括堿金屬、堿土金屬、銨和季銨陽離子。
本文所使用的下列術(shù)語是指●“鹵素”-所有鹵素，即氯、氟、溴和碘。
●“C1-4烷基”或“烷基”-1-110個(gè)碳原子的直鏈和支鏈基團(tuán)，除非另外限定，鏈的長度包括但不限制于甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、仲丁基、異丁基、叔丁基、正戊基等。
●本文所使用的“環(huán)烷基”是指優(yōu)選3-8個(gè)碳原子的環(huán)狀基團(tuán)，它包括但不限制于環(huán)丙基、環(huán)戊基、環(huán)己基等。
●本文所使用的“烯基”是指2-10個(gè)碳原子的直鏈或支鏈基團(tuán)，除非另外限定，鏈的長度包括但不限制于乙烯基、1-丙烯基、2-丙烯基、2-甲基-1-丙烯基、1-丁烯基、2-丁烯基等。
●“芳基”-苯基和萘基；●“雜芳基”(本身或其任何組合形式，如“雜芳氧基”或“雜芳基烷基”)-5-10元芳環(huán)系統(tǒng)，其中一個(gè)或多個(gè)環(huán)包含一個(gè)或多個(gè)選自N、O或S的雜原子，如包括但不限制于吡咯、吡唑、呋喃、噻吩、喹啉、異喹啉、喹唑啉、吡啶、嘧啶、噁唑、噻唑、噻二唑、三唑、咪唑、苯并咪唑或苯并噻唑。
●“雜環(huán)基”(本身或其任何組合形式，如“雜環(huán)基烷基”)-飽和或部分不飽和4-10元環(huán)系統(tǒng)，其中一個(gè)或多個(gè)環(huán)包含一個(gè)或多個(gè)選自N、O或S的雜原子，如包括但不限制于吡咯烷、哌啶、哌嗪、嗎啉、四氫呋喃或咪唑啉。
●本文所使用的“芳烷基”或“雜芳烷基”或“雜環(huán)烷基”是指連接到本文所定義的芳基、雜芳基或雜環(huán)基部分上的上述定義的C1-10烷基，除非另外說明。
●“亞磺?；?相應(yīng)硫化物的氧化物S(O)，術(shù)語“硫代”是指硫化物，術(shù)語“磺?；笔侵竿耆趸腟(O)2部分。
●本文所使用的術(shù)語“其中兩個(gè)R1部分(或兩個(gè)Y部分)可以一起形成5或6元飽和的或不飽和的環(huán)”是指環(huán)系統(tǒng)的形成，如連接一6元部分不飽和環(huán)，如C6環(huán)烯基即己烯，或C5環(huán)烯基即環(huán)戊烯的萘環(huán)系統(tǒng)或苯基部分。
式(Ⅰ)化合物的實(shí)例包括N-[(1，3)-二氫-2，2-二氧-3-甲基-4-氯-2，1-苯并異噻唑)-7-基]-N’-[2-溴苯基]脲N-[(1，3)-二氫-2，2-二氧-3-丙基-4-氯-2，1-苯并異噻唑)-7-基]-N’-[2-溴苯基]脲N-[1-氫-2，2-二氧-3，3-二甲基-4-氯-2，1-苯并異噻唑)-7-基]-N’-[2-溴苯基]脲N-[(1，3)-二氫-2，2-二氧-3-氟-4-氯-2，1-苯并異噻唑)-7-基]-N’-[2-溴苯基]脲N-[(1，3)-二氫-2，2-二氧-3-甲酰胺-4-氯-2，1-苯并異噻唑)-7-基]-N’-[2-溴苯基]脲N-[(1，3)-二氫-2，2-二氧-3-甲基-3-甲酰胺-4-氯-2，1-苯并異噻唑)-7-基]-N’-[2-溴苯基]脲N-[(1，3)-二氫-2，2-二氧-3-亞甲基-4-氯-2，1-苯并異噻唑)-7-基]-N’-[2-溴苯基]脲N-[(1，3)-二氫-2，2-二氧-3-(苯并噻唑-2-基)-4-氯-2，1-苯并異噻唑)-7-基]-N’-[2-溴苯基]脲已知，本發(fā)明化合物可存在立體異構(gòu)體、區(qū)域異構(gòu)體(regioisomer)或非對映異構(gòu)體。這些化合物可包含一個(gè)或多個(gè)不對稱的碳原子并且可存在外消旋形式和任選活性形式。所有這些化合物都包括在本發(fā)明范圍內(nèi)。制備方法可通過應(yīng)用合成方法得到式(Ⅰ)化合物，其中一些合成方法在下列流程式中說明。這些流程式中提供的合成方法可用于制備具有各種不同的Z、R1和E’基的式(Ⅰ)，通過使用可適宜地保護(hù)起來以便獲得相容性的取代基，將所述取代基與本文所描述的反應(yīng)物反應(yīng)。然后脫保護(hù)，得到通常已公開的化合物。一旦建立了脲核，那么就可以通過應(yīng)用本領(lǐng)域公知的標(biāo)準(zhǔn)的官能團(tuán)相互轉(zhuǎn)換技術(shù)來制備具有這些結(jié)構(gòu)式的其它化合物。盡管流程式是通過各種式(Ⅰ)化合物來顯示的，但這僅僅用于說明而不是限制利用這些方法獲得的合成方法的范圍。
如果所需要的雜環(huán)化合物5-流程式1不能通過商業(yè)渠道獲得，那么可用硫代乙酸鉀處理通過商業(yè)渠道獲得的2，6-二氯芐基溴得到硫代乙酸酯2-流程式1，然后通過在AcOH／H2O中用氯氣或用硫酰氯和乙酸酐氧化得到磺酰氯3-流程式1?？赏ㄟ^使用NH4OH，然后酸化或使用氨氣在適宜的有機(jī)溶劑如二氯甲烷中，將磺酰氯轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的磺酰胺4-流程式1?？稍趬A性條件如碳酸鉀和催化劑銅金屬存在下，將磺酰胺5-流程式1環(huán)化，然后酸化。
可通過優(yōu)選烯丙基化合物用烯丙基溴和堿如氫化鈉保護(hù)含氮化合物1-流程式2，來制備環(huán)狀磺酰胺4-流程式2。在適宜的堿如六甲基二硅氮烷鈉存在下，用所需要的烷基鹵將2-流程式2烷基化得到化合物3-流程式2。通過在適宜的條件下，優(yōu)選在還原劑如硼氫化鈉、氫化三丁基錫或有機(jī)酸如2-乙基己酸存在下，用鈀催化劑除掉烯丙基，得到化合物4-流程式2?？赏ㄟ^使用標(biāo)準(zhǔn)的硝化條件如在硫酸和水中的硝酸鈉，硝酸銨和三氟乙酸，或硝酸在乙酸酐中的存在下，從4-流程式2開始制備硝基化合物5-流程式2。
可通過在適宜的有機(jī)溶劑如THF中，從磺酰胺2-流程式3開始用所需要的2-取代烷基鹵和堿如六甲基二硅氮烷烷基化，然后消除污染物，制備不飽和的環(huán)狀磺酰胺3-流程式3?？赏ㄟ^標(biāo)準(zhǔn)條件如在還原劑如硼氫化鈉、氫化三丁基錫或有機(jī)酸如2-乙基己酸存在下，用鈀催化劑先除掉磺酰胺3-流程式3的烯丙基，再通過使用標(biāo)準(zhǔn)硝化條件如在硫酸和水中的硝酸鈉，硝酸銨和三氟乙酸，或硝酸在乙酸酐中存在下，引入硝基官能團(tuán)制得硝基化合物4-流程式3。
R20=Me，HR21=Me，F(xiàn)a)NaNO3，H2SO4／H2O b)NaH，烯丙基溴c)NaH，Mel or Li[(CH3)3Si]N，(PhSO2)2NF d)NaBH4，Pd(Ph3)4在流程式3中顯示了制備硝基化合物5-流程式-2的另一種方法?？稍跇?biāo)準(zhǔn)硝化條件，如在硫酸和水中的硝酸鈉，硝酸銨和三氟乙酸，或在硝酸乙酸酐中存在下，從1-流程式3制備硝基化合物2-流程式3。可用相同的系列反應(yīng)和在上述化合物5-流程式2所描述的條件下得到化合物5-流程式3。
可通過使用標(biāo)準(zhǔn)還原條件，優(yōu)選在EtOH中的SnCl2，將硝基化合物1-流程式4還原得到苯胺2-流程式4來制備化合物3-流程式4?？稍跇?biāo)準(zhǔn)條件下，如在質(zhì)子惰性溶劑如DMF中，在室溫或加熱下，將所需要的異氰酸芳基酯(可通過商業(yè)渠道獲得)與相應(yīng)的苯胺2-流程式4縮合制備3-流程式4中的鄰位取代的雜環(huán)苯基脲。
本發(fā)明另一目的是提供制備式(Ⅰ)化合物的類似的方法，該方法包括將式(Ⅳ)化合物
其中A、R1和m如式(Ⅰ)的定義；與下式化合物反應(yīng)NH2-C(X)-N-(CR13R14)v-Z；其中X、R13R14、v和Z如式(Ⅰ)的定義；得到式(Ⅰ)化合物并且在此之后，如果必要，脫保護(hù)，或?qū)1、A或Z的前體轉(zhuǎn)化為R1、A或Z基。
在該方法中，通過在堿(如碳酸鉀)存在下將胺2-流程式4與三光氣縮合或者通過在堿(如三乙胺)存在下將羧酸與二苯基磷疊氮化物反應(yīng)制備所述異氰酸酯，即式(Ⅳ)化合物。
另一制備式(Ⅰ)化合物的方法是下列方法，它包括a)、將式(Ⅱ)化合物
其中A、R1和m如式(Ⅰ)的定義；與下式化合物反應(yīng)
C(X)-N-(CR13R14)v-Z；其中A、R1、m、X、R13R14、v和Z如式(Ⅰ)的定義；得到式(Ⅰ)化合物，并且在此之后，如果必要，脫保護(hù)，或?qū)1、A或Z的前體轉(zhuǎn)化為R1、A或Z基。
本發(fā)明另一目的是提供制備式(Ⅱ)化合物的方法
其中R1、m和A如式(Ⅰ)的定義；該方法包括在適宜的條件下，將式(Ⅳ)化合物還原
其中R1、m和A如式(Ⅰ)的定義；得到式(Ⅱ)化合物。
本發(fā)明另一目的是提供新的由下列結(jié)構(gòu)式表示的式(Ⅲ)化合物
其中R1、m和A如式(Ⅰ)的定義。
本發(fā)明另一目的是提供新的由下列結(jié)構(gòu)式表示的式(Ⅱ)化合物
其中R1、m和A如式(Ⅰ)的定義。
合成實(shí)施例下面將通過參考下列僅用于說明而不是限制本發(fā)明范圍的實(shí)施例來描述本發(fā)明。所有使用的溫度都是攝氏度，所有的溶劑都是可獲得的最高純度并且所有的反應(yīng)都是在無水條件下，在氬環(huán)境下，除非另外說明。
在所述實(shí)施例中，所有的溫度都是攝氏度(℃)。除非另外說明，在VG Zab質(zhì)譜儀上，用快速原子轟擊法進(jìn)行質(zhì)譜測定。在250 MHz下，用Bruker AM 250或Am 400光譜計(jì)記錄1H-NMR(下文“NMR”)。所顯示多重峰是s=單峰，d=雙峰，t=三峰，q=四峰，m=多峰并且br表示寬峰。Sat表示飽和溶液，eq表示涉及主要反應(yīng)的試劑摩爾當(dāng)量的比例。
實(shí)施例1N-[(1，3)-二氫-2，2-二氧-3-甲基-4-氯-2，1-苯并異噻唑)-7-基]-N’-[2-溴苯基]脲的制備a)、2，6-二氯芐基硫代乙酸酯的制備向2，6-二氯芐基溴(30克(下文“g”)，125．5毫摩爾(下文“mmol”))的DMF(30毫升(下文“ml”))溶液中加入硫代乙酸鉀(15．65g，138mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌大約1小時(shí)。然后將其在乙酸乙酯和水之間分配。將合并的有機(jī)相干燥并濃縮得到所需產(chǎn)品(29．3g，99％)。EI-MS m／z 241(M+)。b)、2，6-二氯芐基磺酰氯的制備將2，6-二氯芐基硫代乙酸酯(29g，121mmol)和乙酸鈉(68g)溶解在冰醋酸(646ml)和水(141ml)中。將氯氣通入該溶液中大約10分鐘。將該混合物蒸發(fā)并將殘?jiān)靡宜嵋阴ヌ崛?。將合并的有機(jī)相干燥并濃縮得到所需產(chǎn)品(27g，86％)。EI-MS m／z 260．5(M+)。c)、2，6-二氯芐基磺酰胺的制備將在氫氧化銨(270ml)中的2，6-二氯芐基磺酰氯(27g，103．6mmol)在室溫下攪拌大約3小時(shí)。用冷卻的濃鹽酸酸化后，將沉淀分離出來并過濾，得到所需產(chǎn)品(16g，64％)。EI-MS m／z 239(M+)。d)、1，3-二氫-2，2-二氧-4-氯-2，1-苯并異噻唑的制備將2，6-二氯芐基磺酰胺(8g，33．47mmol)加到在圓底燒瓶中的碳酸鉀(4．62g，33．47mmol)、銅粉(560毫克(下文“mg”))和N，N-二甲基苯胺(10ml)中。將該反應(yīng)混合物在170℃下攪拌大約4小時(shí)，然后冷卻至室溫并在乙酸乙酯和10％HCl水溶液之間分配。將合并的有機(jī)相干燥并濃縮。將殘?jiān)诠枘z上色譜層析(30％乙酸乙酯／己烷)，得到所需產(chǎn)品(4g，59％)。EI-MS m／z 204．5(M+)。e)、1-烯丙基-3-氫-2，2-二氧-4-氯-2，1-苯并異噻唑的制備向1，3-二氫-2，2-二氧-4-氯-2，1-苯并異噻唑(3．18g，15．63mmol)的DMF(15ml)溶液中加入氫化鈉(60％，625mg，15．63mmol)和烯丙基溴(1．6ml，17．2mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌大約16小時(shí)。然后將其在乙酸乙酯和10％HCl水溶液之間分配。將合并的有機(jī)相干燥并濃縮。將殘?jiān)诠枘z上色譜層析(20％乙酸乙酯／己烷)，得到所需產(chǎn)品(3g，79％)。EI-MS m／z 244．5(M+)。f)、1-烯丙基-3-氫-2，2-二氧-3-甲基-4-氯-2，1-苯并異噻唑的制備在-78℃下，向1-烯丙基-3-氫-2，2-二氧-4-氯-2，1-苯并異噻唑(456mg，1．87mmol)的THF(10ml)溶液中加入雙(三甲硅烷基)酰胺鈉(1．0M的THF溶液，1．87ml，1．87mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌大約30分鐘。然后再冷卻至-78℃，加入碘甲烷(0．14ml，2．25mmol)。將該反應(yīng)混合物在室溫下攪拌1小時(shí)。然后將其在乙酸乙酯和10％HCl水溶液之間分配。將合并的有機(jī)相干燥并濃縮。將殘?jiān)诠枘z上色譜層析(10％乙酸乙酯／己烷)，得到所需產(chǎn)品(330g，68％)。EI-MS m／z 258．5(M+)。g)、1，3-二氫-2，2-二氧-4-氯-3-甲基-2，1-苯并異噻唑的制備向1-烯丙基-3-氫-2，2-二氧-4-氯-3-甲基-2，1-苯并異噻唑(330mg，1．27mmol)的THF(10ml)溶液中加入硼氫化鈉(104．6mg，2．54mmol)和四(三苯基膦)鈀(0)(59mg，0．05mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌16小時(shí)。然后將其在乙酸乙酯和10％HCl水溶液之間分配。將合并的有機(jī)相干燥并濃縮。將殘?jiān)诠枘z上色譜層析(50％乙酸乙酯／己烷)，得到所需產(chǎn)品(200g，72％)。EI-MS m／z 218．5(M+)。h)、1，3-二氫-2，2-二氧-4-氯-7-硝基-3-甲基-2，1-苯并異噻唑的制備將1，3-二氫-2，2-二氧-4-氯-3-甲基-2，1-苯并異噻唑(200mg，0．92mmol)溶解在二氯甲烷(30ml)中，然后加入硝酸鈉(86mg，1．01mmol)。加入硫酸(0．18ml／3M)，然后加入催化量亞硝酸鈉。將該混合物攪拌。24小時(shí)后，將該反應(yīng)混合物用二氯甲烷稀釋并用水提取。將有機(jī)層用MgSO4干燥并過濾。將溶劑蒸發(fā)掉并將所得到的固體在硅膠上色譜層析(50％乙酸乙酯／己烷)，得到所需產(chǎn)品(50mg，21％)。EI-MS m／z 263．5(M+)。i)、1，3-二氫-2，2-二氧-4-氯-3-甲基-7-氨基-2，1-苯并異噻唑的制備向1，3-二氫-2，2-二氧-4-氯-3-甲基-7-硝基-2，1-苯并異噻唑(50mg，0．19mmol)的乙醇(5ml)溶液中加入氯化錫(Ⅱ)(214mg，0．95mmol)。將反應(yīng)混合物在回流下攪拌大約4小時(shí)。然后冷卻至室溫。將NaHCO3(水溶液)加到反應(yīng)混合物中直至pH=7。然后將該溶液用乙酸乙酯提取(3×)。將合并的有機(jī)層用MaSO4干燥、過濾并減壓濃縮，得到所需產(chǎn)品(32mg，72％)。EI-MS m／z 233．5(M+)。j)、N-[(1，3)-二氫-2，2-二氧-3-甲基-4-氯-2，1-苯并異噻唑)-7-基]-N’-[2-溴苯基]脲的制備向2-溴苯基異氰酸酯(26mg，0．13mmol)的DMF(1．0ml)溶液中加入1，3-二氫-2，2-二氧-4-氯-7-氨基-2，1-苯并異噻唑(32mg，0．13mmol)。將該反應(yīng)混合物在室溫下攪拌大約16小時(shí)。將所得到的液體在硅膠上色譜層析(50％乙酸乙酯／己烷)，得到所需產(chǎn)品(30mg，50％)。EI-MS m／z 430(M+)。
實(shí)施例2N-[(1，3)-二氫-2，2-二氧-3-丙基-4-氯-2，1-苯并異噻唑)-7-基]-N’-[2-溴苯基]脲的制備a)、1-烯丙基-3-氫-2，2-二氧-3-丙基-4-氯-2，1-苯并異噻唑的制備除了用碘丙烷代替碘甲烷外，按照實(shí)施例(1f)的方法制備標(biāo)題化合物，產(chǎn)率43％。EI-MS m／z 286．5(M+)。b)、1，3-二氫-2，2-二氧-4-氯-3-丙基-2，1-苯并異噻唑的制備按照實(shí)施例(1g)的方法制備標(biāo)題化合物，產(chǎn)率76％。EI-MS m／z224．1(M+)。c)、1，3-二氫-2，2-二氧-4-氯-3-丙基-7-硝基-2，1-苯并異噻唑的制備將1，3-二氫-2，2-二氧-4-氯-3-丙基-2，1-苯并異噻唑(131mg，0．54mmol)溶解在氯仿(30ml)中，然后加入硝酸銨(44mg，0．54mmol)和三氟乙酸酐(397mg，214．4mmol)。將該混合物攪拌。24小時(shí)后，將該反應(yīng)混合物用氯仿稀釋并用水提取。將有機(jī)層用MgSO4干燥并過濾。將溶劑蒸發(fā)掉并將所得到的固體在硅膠上色譜層析(50％乙酸乙酯／己烷)，得到所需產(chǎn)品(28mg，20％)。EI-MS m／z 289．1(M+)。d)、1，3-二氫-2，2-二氧-4-氯-3-丙基-7-氨基-2，1-苯并異噻唑的制備按照實(shí)施例(1i)的方法制備標(biāo)題化合物，產(chǎn)率92％。EI-MS m／z261．1 (M+)。e)、N-[(1，3)-二氫-2，2-二氧-3-丙基-4-氯-2，1-苯并異噻唑)-7-基]-N’-[2-溴苯基]脲的制備按照實(shí)施例(1j)的方法制備標(biāo)題化合物，產(chǎn)率49％。EI-MS m／z456．1，458．2(M+)。
實(shí)施例3N-[(1-氫-2，2-二氧-3，3-二甲基-4-氯-2，1-苯并異噻唑)-7-基]-N’-[2-溴苯基]脲的制備a)、1，3-二氫-2，2-二氧-4-氯-7-硝基-2，1-苯并異噻唑的制備將1，3-二氫-2，2-二氧-4-氯-2，1-苯并異噻唑(1．5mg，0．92mmol)溶解在二氯甲烷(30ml)中，然后加入硝酸鈉(86mg，1．01mmol)。加入硫酸(0．18ml／3M)，然后加入催化量硝酸鈉。將該混合物攪拌、大約24小時(shí)后，將該反應(yīng)混合物用二氯甲烷稀釋并用水提取。將有機(jī)層用MgSO4干燥并過濾。將溶劑蒸發(fā)掉并將所得到的固體在硅膠上色譜層析(50％乙酸乙酯／己烷)，得到所需產(chǎn)品(50mg，21％)。EI-MS m／z263．5(M+)。b)、1-烯丙基-2，2-二氧-3，3-二氫-4-氯-7-硝基-2，1-苯并異噻唑的制備向1，3-二氫-2，2-二氧-4-氯-2，1-苯并異噻唑(1．1g，4．43mmol)的DMF(20ml)溶液中加入氫化鈉(60％，178mg，4．43mmol)和烯丙基溴(0．42ml，4．87mmol)。將反應(yīng)混合物在60℃下攪拌大約3小時(shí)然后冷卻至室溫大約16小時(shí)。然后將其在乙酸乙酯和10％HCl水溶液之間分配。將合并的有機(jī)相干燥并濃縮。將殘?jiān)诠枘z上色譜層析(20％乙酸乙酯／己烷)，得到所需產(chǎn)品(800mg，65％)。EI-MS m／z289．1(M+)。c)、1-烯丙基-2，2-二氧-3，3-二甲基-4-氯-7-硝基-2，1-苯并異噻唑的制備向1-丙烯基-2，2-二氧-3，3-二氫-4-氯-7-硝基-2，1-苯并異噻唑(100mg，0．35mmol)的DMF(5ml)溶液中加入氫化鈉(60％，28mg，0．7mmol)。在室溫下攪拌大約30分鐘后，加入碘甲烷(99．4mg，0．7mmol)。然后將該反應(yīng)混合物在70℃下攪拌2小時(shí)。將該反應(yīng)混合物在乙酸乙酯和10％HCl水溶液之間分配。將合并的有機(jī)相干燥并濃縮。將殘?jiān)诠枘z上色譜層析(10％乙酸乙酯／己烷)，得到所需產(chǎn)品(87mg，80％)。EI-MS m／z 317．2(M+)。d)、1-氫-2，2-二氧-3，3-二甲基-4-氯-7-硝基-2，1-苯并異噻唑的制備按照實(shí)施例(1g)的方法制備標(biāo)題化合物，產(chǎn)率45％。EI-MS m／z277．2(M+)。e)、1-氫-2，2-二氧-3，3-二甲基-4-氯-7-氨基-2，1-苯并異噻唑的制備按照實(shí)施例(1i)的方法制備標(biāo)題化合物，產(chǎn)率98％。EI-MS m／z247．1(M+)。f)、N-[(1-氫-2，2-二氧-3，3-二甲基-4-氯-2，1-苯并異噻唑)-7-基]-N’-[2-溴苯基]脲的制備按照實(shí)施例(1j)的方法制備標(biāo)題化合物，產(chǎn)率52％。EI-MS m／z443．1，445．2(M+)。
實(shí)施例4N-[(1，3)-二氫-2，2-二氧-3-氟-4-氯-2，1-苯并異噻唑)-7-基]-N’-[2-溴苯基]脲的制備a)、1-烯丙基-3，3-二氫-2，2-二氧-4-氯-7-硝基-2，1-苯并異噻唑的制備在-78℃下，向1-烯丙基-2，2-二氧-3，3-二氫-4-氯-7-硝基-2，1-苯并異噻唑(358mg，1．24mmol)的THF(15ml)溶液中加入雙(三甲硅烷基)酰胺鋰(1．0M的THF溶液，1．49ml，1．49mmol)。將反應(yīng)混合物在-78℃下攪拌大約1小時(shí)，然后加入N-氟苯磺酰胺(547mg，2．25mmol)。將該反應(yīng)混合物在室溫下攪拌1小時(shí)。然后將其在乙酸乙酯和10％HCl水溶液之間分配。將合并的有機(jī)相干燥并濃縮。將殘?jiān)诠枘z上色譜層析(10％乙酸乙酯／己烷)，得到所需產(chǎn)品(200g，53％)。EI-MS m／z 307．1(M+)。b)、除了用1-氫-2，2-二氧-3-氫-3-氟-4-氯-7-硝基-2，1-苯并異噻唑代替1，3-二氫-2，2-二氧-3-甲基-4-氯-2，1-苯并異噻唑外，按照實(shí)施例(1g)的方法制備標(biāo)題化合物，產(chǎn)率62％。EI-MS m／z 267．1(M+)。c)、1，3-二氫-2，2-二氧-3-氟-4-氯-3-甲基-7-氨基-2，1-苯并異噻唑的制備向1，3-二氫-2，2-二氧-4-氯-3-氟-7-硝基-2，1-苯并異噻唑(100mg，0．4mmol)的乙醇(10ml)溶液中加入氯化錫(Ⅱ)(443mg，2．0mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌16小時(shí)。將溶劑蒸發(fā)掉。將殘?jiān)诠枘z上色譜層析(50％乙酸乙酯／己烷)，得到所需產(chǎn)品(43mg，47％)。EI-MS m／z 237．2(M+)。d)、N-[(1，3)-二氫-2，2-二氧-3-氟-4-氯-2，1-苯并異噻唑)-7-基]-N’-[2-溴苯基]脲的制備向2-溴苯基異氰酸酯(25mg，0．13mmol)的DMF(1．0ml)溶液中加入1，3-二氫-2，2-二氧-3-氟-4-氯-7-氨基-2，1-苯并異噻唑(30mg，0．13mmol)。將該反應(yīng)混合物在室溫下攪拌大約16小時(shí)。將產(chǎn)品通過在二氯甲烷和己烷中沉淀純化并過濾(17mg，31％)。EI-MS m／z 434．1，436．1(M+)。
用上述類似的方法制備下列化合物實(shí)施例5N-[(1，3)-二氫-2，2-二氧-3-甲酰胺-4-氯-2，1-苯并異噻唑)-7-基]-N'-[2-溴苯基]脲 MS(EI)m／e 473．2(m-H-)實(shí)施例6N-[(1，3)-二氫-2，2-二氧-3-甲基-3-甲酰胺-4-氯-2，1-苯并異噻唑)-7-基]-N’-[2-溴苯基]脲MS(EI)m／e 473．2(m-H-)實(shí)施例7N-[(1，3)-二氫-2，2-二氧-3-亞甲基-4-氯-2，1-苯并異噻唑)-7-基]-N’-[2-溴苯基]脲 MS(EI)m／e 472．2(m-H-)實(shí)施例8N-[(1，3)-二氫-2，2-二氧-3-(苯并噻唑-2-基)-4-氯-2，1-苯并異噻唑)-7-基]-N’-[2-溴苯基]脲 m．p．145-152℃。治療方法式(Ⅰ)化合物或其可藥用鹽可用于產(chǎn)生預(yù)防和治療人或其它哺乳動物疾病的藥物，所述疾病是由所述哺乳動物的細(xì)胞，如包括但不限制于單核細(xì)胞和／或巨噬細(xì)胞產(chǎn)生的IL-8細(xì)胞因子(cytokine)，或其它結(jié)合到IL-8α或β受體，也稱I型或II型受體上的趨化因子過量或失調(diào)加劇或引起的。
因此，本發(fā)明提供一種治療趨化因子介導(dǎo)的疾病的方法，其中所述趨化因子是結(jié)合到IL-8α或β受體上的，并且該方法包括給予有效量式(Ⅰ)化合物或其可藥用鹽。尤其，趨化因子是IL-8、GROα、GROβ、GROγ、NAP-2或ENA-78。
以足夠抑制細(xì)胞因子特別是IL-8、GROα、GROβ、GROγ、NAP-2或ENA-78的量給予式(Ⅰ)化合物，使得通過生物學(xué)方法將所述細(xì)胞因子下調(diào)到正常的生理水平，或者在某些情況下調(diào)整到正常水平下，以便改善疾病狀況。例如，本發(fā)明異常水平的IL-8、GROα、GROβ、GROγ、NAP-2或ENA-78的構(gòu)成為(ⅰ)、每毫升游離IL-8的水平大于或等于1微微克；(ⅱ)、任何與IL-8、GROα、GROβ、GROγ、NAP-2或ENA-78有關(guān)的細(xì)胞都高于正常生理水平；或(ⅲ)、IL-8、GROα、GROβ、GROγ、NAP-2或ENA-78都高于分別產(chǎn)生IL-8、GROα、GROβ、GROγ、NAP-2或ENA-78的細(xì)胞或組織中的基礎(chǔ)水平。
有很多疾病，其中，產(chǎn)生過量或失調(diào)的IL-8可加劇和／或引起該疾病。趨化因子介導(dǎo)的疾病包括牛皮癬、特應(yīng)性皮炎、關(guān)節(jié)炎、哮喘、慢性阻塞性肺炎、成人呼吸窘迫癥、炎性腸炎、節(jié)段性回腸炎、潰瘍性結(jié)腸炎、休克、膿毒性休克、內(nèi)毒素休克、革蘭氏陰性膿毒病、中毒型休克、心臟和腎臟再灌注損傷、腎小球性腎炎、血栓形成、移植物-宿主反應(yīng)、早老性癡呆、異體移植物排斥、瘧疾、restinosis、血管生成或不需要的造血干細(xì)胞釋放、鼻病毒感染和各種骨吸收適應(yīng)征如骨質(zhì)疏松癥或骨關(guān)節(jié)炎。
白介素-8和鼻病毒的關(guān)系可在下列文章中見到，所述文章如Turner等人，Clin．Infect．Dis．(1998)，26(4)，840-846；Sanders等人，J．Virol．(1998)，72(2)，934-942；Sethi等人，Clin．Exp．Immunol．(1997)，110(3)，362-369；Zhu等人，Am．J．Physiol．(1997)，273(4，Pt，1)，L814-L824；Terajima等人，Am．J．Physiol．(1997)，273(4 Pt，1)，L749-L759；Grunberg等人，Clin．Exp．Allergy(1997)，27(1)，36-45；和Johnston等人，J．Infect．Dis．(1997)，175(2)，323-329。
白介素-8和骨質(zhì)疏松癥的關(guān)系可在下列文章中見到，所述文章如Streckfus等人，J．Gerontol．Ser，A(1997)，52A(6)，M343-M351；Hermann，T．WO 95／31722；和Chaudhary等人，Endocrinology(Baltimore)(1992)，130(5)，2528-34。
這些疾病的主要特征是大量嗜中性白細(xì)胞的滲入、T-細(xì)胞的滲入或新血管的生長，并且與負(fù)責(zé)趨化嗜中性白細(xì)胞進(jìn)入炎癥部位和內(nèi)皮細(xì)胞定向生長的IL-8、GROα、GROβ、GROγ、NAP-2或ENA-78的產(chǎn)生有關(guān)。相對于其它炎癥細(xì)胞因子(IL-8、GROα、GROβ、GROγ或NAP-2)具有獨(dú)特的促嗜中性白細(xì)胞趨化、酶釋放包括但不限制于彈性蛋白酶的釋放以及過氧化物產(chǎn)生和激活的特性。通過I型或II型IL-8受體發(fā)揮作用的α-趨化因子，特別是GROα、GROβ、GROγ或NAP-2可通過促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞定向生長來促進(jìn)腫瘤新血管形成。因此，抑制IL-8介導(dǎo)的趨化和激活可直接減少嗜中性白細(xì)胞的滲入。
最新的跡象也顯示了趨化因子在治療HIV感染中的作用，Littleman等人，Nature 381，pp．66l(1996)和Koup等人，Nature381，pp．667(1996)。
本發(fā)明也提供一種急救或預(yù)防性治療那些被認(rèn)為對趨化因子受體拮抗劑式(Ⅰ)化合物引起的CNS損傷敏感的個(gè)體疾病的方法。
本文所定義的CNS損傷包括開放性或穿透性頭損傷，如由外科手術(shù)引起的，或者封閉性頭損傷，如由頭部區(qū)域損傷所引起的。本定義范圍內(nèi)也包括局部缺血，特別是腦區(qū)域缺血。
局部缺血性休克可定義為病灶神經(jīng)病學(xué)疾病，它是由特定腦區(qū)域供血不足引起的，通常結(jié)果是產(chǎn)生栓子、血栓或血管局部動脈粥樣化樣關(guān)閉。在該區(qū)域的炎癥細(xì)胞因子的作用已經(jīng)出現(xiàn)并且本發(fā)明提供一種可有效地治療這些損傷的方法。對于所述這些急性損傷來說，相對短時(shí)間的傷害治療是有效的。
TNF-α是具有前炎性作用，包括內(nèi)皮性白細(xì)胞附著分子表達(dá)的細(xì)胞因子。白細(xì)胞可滲入局部缺血的腦損傷部位，因此抑制或降低TNF水平的化合物可用于治療局部缺血性腦損傷。見Liu等人，Stoke，Vol．25．，No．7，pp．1481-88(1994)，將該公開文獻(xiàn)的內(nèi)容引入本文供參考。
Shohami等人在J．of Vaisc ＆ Clinical Physiology andPharmacology，第3卷，第二期，99-107頁(1992)中討論了閉合性顱腦損傷模型和用混合的5-LO／CO治療，所公開的內(nèi)容引入本文供參考。發(fā)現(xiàn)減少水腫形成的治療改善被治療動物的功能發(fā)揮(outcome)。
現(xiàn)有的證據(jù)也表明用IL-8抑制劑治療粥樣硬化。第一篇參考文獻(xiàn)Boisvert等人，J．Clin．Invest．，1998，101353-363顯示在骨髓移植時(shí)，干細(xì)胞缺乏IL-8受體(并且因此單環(huán)細(xì)胞／巨噬細(xì)胞也缺乏)導(dǎo)致LDL受體不足的小鼠中粥樣硬化斑形成減少。其它支持性參考文獻(xiàn)是Apostolopoulos等人．Arterioscler Thromb Vasc Biol．1996，161007-1012；Liu等人，Arterioscler Thromb Vasc Biol．1997，17317-323；Rus等人，Atherosclerosis．1996，127263-271；Wang等人，J Biol Chem．1996，2718837-8842；Yue等人，EurJ Pharmacol．1993，24081-84；Koch等人，Am J Pathol，1993，1421423-1431；Lee等人，Immunol Lett，1996，53，109-113；和Terkeltaub等人，Arterioscler Thromb，1994，1447-53。
以足夠抑制結(jié)合到IL-8α或β受體上的IL-8的量給予式(Ⅰ)化合物，其中，所述抑制作用是通過與這些受體結(jié)合發(fā)揮的，如可通過降低嗜中性白細(xì)胞的趨化性和激活作用來證明。式(Ⅰ)化合物是IL-8結(jié)合抑制劑的發(fā)現(xiàn)基于本文所描述的式(Ⅰ)化合物在體外受體結(jié)合試驗(yàn)中的作用。已表明，式(Ⅰ)化合物是II型IL-8受體抑制劑。
本文所使用的術(shù)語“IL-8介導(dǎo)的疾病或疾病狀態(tài)”是指IL-8、GROα、GROβ、GROγ、NAP-2或ENA-78發(fā)揮作用的任何疾病或疾病狀態(tài)，其中，IL-8、GROα、GROβ、GROγ、NAP-2或ENA-78是通過產(chǎn)生IL-8、GROα、GROβ、GROγ、NAP-2或ENA-78本身，或者通過IL-8、GROα、GROβ、GROγ、NAP-2或ENA-78引起其它趨化因子(monokine)釋放來發(fā)揮作用的，所述趨化因子如包括但不限制于IL-1、IL-6或TNF。因此，例如，可認(rèn)為IL-1是主要成分并且其產(chǎn)生或作用被IL-8加劇或隱匿的疾病狀態(tài)是由IL-8介導(dǎo)的疾病狀態(tài)。
本文所使用的術(shù)語“趨化因子介導(dǎo)的疾病或疾病狀態(tài)”是指結(jié)合到IL-8α或β受體上的趨化因子發(fā)揮作用的任何疾病或疾病狀態(tài)，所述趨化因子如包括但不限制于IL-8、GROα、GROβ、GROγ、NAP-2或ENA-78。這包括IL-8發(fā)揮作用的疾病狀態(tài)，其中，IL-8是通過產(chǎn)生IL-8本身，或者通過IL-8引起其它單核因子(monokine)釋放來發(fā)揮作用的，所述但因子包括但不限制于IL-1、IL-6或TNF。因此，例如，可認(rèn)為IL-1是主要成分并且其產(chǎn)生或作用被IL-8加劇或隱匿的疾病狀態(tài)是由IL-8介導(dǎo)的疾病狀態(tài)。
本文所使用的術(shù)語“細(xì)胞因子”是指所分泌的任何影響細(xì)胞功能的多肽并且是在免疫、炎癥或造血反應(yīng)中調(diào)節(jié)細(xì)胞之間相互作用的分子。細(xì)胞因子包括但不限制于單核因子、淋巴因子，不論是何種細(xì)胞產(chǎn)生的它們。例如，單核因子通常是指那些由單核細(xì)胞如巨噬細(xì)胞和／或單核細(xì)胞產(chǎn)生或分泌的因子。然而，其它很多細(xì)胞也產(chǎn)生單核因子，如自然殺傷細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、嗜堿細(xì)胞、嗜中性白細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、腦星形細(xì)胞、骨髓基質(zhì)細(xì)胞、表皮角化細(xì)胞(keratinocytes)和B-淋巴細(xì)胞。淋巴因子通常是指那些由淋巴細(xì)胞產(chǎn)生的因子。細(xì)胞因子的實(shí)例包括但不限制于白介素-1(IL-1)、白介素-6(IL-6)、白介素-8(IL-8)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)和腫瘤壞死因子-β(TNF-β)。
類似于上述術(shù)語“細(xì)胞因子”，本文所使用的術(shù)語“趨化因子”是指所分泌的任何影響細(xì)胞功能的多肽并且是在免疫、炎癥或造血反應(yīng)中調(diào)節(jié)細(xì)胞之間相互作用的分子。趨化因子主要通過跨膜細(xì)胞分泌并且引起特定白細(xì)胞和淋巴細(xì)胞、嗜中性白細(xì)胞、單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、T-細(xì)胞、B-細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞的趨化性和激活作用。趨化因子的實(shí)例包括但不限制于IL-8、GROα、GROβ、GROγ、NAP-2、ENA-78、IP-10、MIP-1α、MIP-β、PF4和MCP 1、2和3。
為了在治療中使用式(Ⅰ)化合物或其可藥用鹽，通常依照標(biāo)準(zhǔn)制藥慣例，將其配制成藥物組合物。因此，本發(fā)明也涉及藥物組合物，它包含有效、無毒量式(Ⅰ)化合物和可藥用載體或稀釋劑。
可通過方便的給藥途徑，例如通過口服、局部、非腸道給藥或通過吸入給藥來給予式(Ⅰ)化合物或其可藥用鹽及其包含它們的藥物組合物?？梢詫⑹?Ⅰ)化合物用一種按照常規(guī)方法，通過將式(Ⅰ)化合物與標(biāo)準(zhǔn)藥物載體混合制備成的常規(guī)劑型給予。也可以將式(Ⅰ)化合物用一種與已知的第二種具有治療活性的化合物混合制備成的常規(guī)劑量形式給予。這些方法可涉及混合、制粒和壓片或者將所述組分溶解，所選擇的方法根據(jù)所需要的制劑而定。已知，可藥用載體或稀釋劑的形式和性質(zhì)是由與之混合的活性組分的量、給藥途徑和其它公知的變量確定的。在與制劑中其它組分相容性方面，所述載體必須是“適宜的”并且是對使用者無害的。
例如，所使用的載體可以是固體的或液體的。固體載體的實(shí)例是乳糖、白土、蔗糖、滑石粉、明膠、瓊脂、果膠、阿拉伯膠、硬脂酸鎂、硬脂酸等。液體載體的實(shí)例是糖漿、花生油、橄欖油、水等。類似地，載體或稀釋劑可包括本領(lǐng)域公知的時(shí)間延遲材料如甘油單硬脂酸酯或甘油二硬脂酸酯本身或與蠟的混合物。
可使用各種藥物形式。因此，如果使用固體載體，那么，可將所述制劑壓片、以粉劑或小糖丸形式裝在硬明膠膠囊中或者制成糖錠劑或錠劑。固體載體的量可廣泛地變化，但優(yōu)選在大約25mg至大約1g之間。當(dāng)使用液體載體時(shí)，可將所述制劑制成糖漿劑、乳劑、軟明膠膠囊劑、滅菌可注射液體如安瓿或非水液體混懸液。
式(Ⅰ)化合物可通過局部給藥方法給予，即通過非系統(tǒng)給藥方法給予。這包括將式(Ⅰ)化合物通過外用方法應(yīng)用到表皮或口腔前庭和將該化合物滴注到耳、眼和鼻中，使得該化合物不能有效地進(jìn)入血流中。相反，系統(tǒng)給藥是指口服、靜脈內(nèi)、腹膜內(nèi)和肌肉內(nèi)給藥。
適用于局部給藥的制劑包括適用于穿透皮膚到達(dá)炎癥部位的液體或半液體制劑如搽劑、洗液、霜?jiǎng)④浉嗷蚝齽┖瓦m用于眼、耳和鼻給藥的滴劑。對于局部給藥來說，活性組分可占制劑重量的0．001％-10％w／w，例如1％-2％。然而，也可以占到10％，但優(yōu)選占5％w／w以下，更優(yōu)選制劑的0．1％-1％w／w。
本發(fā)明洗液包括那些適用于皮膚或眼的洗液。眼洗液可包括含或不含殺菌劑的滅菌水溶液并且可通過類似于制備滴眼劑的方法制備。用于皮膚的洗液或搽劑也可以包含加快干燥和冷卻皮膚的試劑，如乙醇或丙酮，和／或保濕劑如甘油或油如蓖麻油和花生油。
本發(fā)明霜?jiǎng)④浉鄤┗蚝齽┦枪┩庥玫幕钚越M分的半固體制劑。它們可通過在適宜的機(jī)械輔助下，將細(xì)碎或粉末形式的、單獨(dú)存在或在含水或不含水液體中以溶液或混懸液形式存在的活性組分，與含脂或不含脂基質(zhì)混合來制備。所述基質(zhì)可包括烴如硬的、軟的或液體石蠟、甘油、蜂蠟、金屬皂；膠漿；天然油如杏仁油、玉米油、花生油、蓖麻油或橄欖油；羊毛脂或其衍生物或脂肪酸如硬脂酸或油酸與醇如丙二醇或大粒凝膠。該制劑中可混合各種表面活性劑如陰離子、陽離子或非離子表面活性劑如脫水山梨糖醇酯或其聚氧乙烯衍生物。也可以包含混懸劑如天然樹膠、纖維素衍生物或無機(jī)物質(zhì)如silicaceous硅酸鹽，和其它組分如羊毛脂。
本發(fā)明滴眼劑可包括滅菌水溶液或油溶液或混懸液并且可以通過將活性組分溶解在適宜的、并且優(yōu)選包含表面活性劑的殺菌劑和／或殺真菌劑和／或其它適宜的防腐劑的水溶液中來制備。然后，可通過過濾使所得到的溶液澄清，轉(zhuǎn)移到適宜的容器中，然后將其密封并通過高壓滅菌法或在98-100℃下保持半小時(shí)滅菌。或者，可將溶液通過過濾并通過無菌技術(shù)轉(zhuǎn)移到容器中來滅菌。適用于滴眼劑中使用的殺菌劑和殺真菌劑的實(shí)例是硝酸或醋酸苯汞(0．002％)、苯扎氯銨(0．01％)和醋酸氯己定(0．01％)。制備油溶液適宜的溶劑包括甘油、稀乙醇和丙二醇。
式(Ⅰ)化合物可通過非腸道方法給予，即通過靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)、皮下、鼻內(nèi)、直腸內(nèi)、陰道內(nèi)或腹膜內(nèi)的給予。通常優(yōu)選非腸道給藥中的皮下或肌肉內(nèi)給藥形式?？赏ㄟ^常規(guī)技術(shù)制備該給藥方法適宜的劑型。式(Ⅰ)化合物也可以通過吸入法給予，即通過鼻內(nèi)或口腔吸入給予?？赏ㄟ^常規(guī)的技術(shù)制備該給藥方法適宜的劑型如氣霧劑或可計(jì)量劑量的吸入器。
就本文所公開的使用式(Ⅰ)化合物的所有方法來說，日口服劑量優(yōu)選為約0．01到約80mg／kg總體重。日非胃腸道給藥劑量優(yōu)選為約0．001到約80mg／kg總體重。日局部給藥劑量優(yōu)選0．1mg到150mg，每天給藥1到4次，優(yōu)選2到3次。日吸入劑量優(yōu)選約從0．01mg／kg到約1mg／kg／天。本領(lǐng)域技術(shù)人員也會意識到，式(Ⅰ)化合物或其可藥用鹽個(gè)體劑量的最佳量和間隔將依據(jù)所治療疾病的性質(zhì)和程度，給藥的形式、途徑和部位以及所治療的特定病人來決定，并且這樣的最佳方案可通過常規(guī)技術(shù)來確定。本領(lǐng)域技術(shù)人員也會認(rèn)為最佳療程，即，在特定數(shù)目的日子中每天給予式(Ⅰ)化合物或其可藥用鹽的劑量數(shù)可由本領(lǐng)域技術(shù)人員使用治療測定試驗(yàn)的常規(guī)方法來確定。
現(xiàn)參考下列生物試驗(yàn)實(shí)施例來描述本發(fā)明，這些實(shí)施例僅僅是說明性的并不對本發(fā)明的范圍構(gòu)成限定。生物試驗(yàn)實(shí)施例通過下列體外測定試驗(yàn)來確定本發(fā)明化合物的IL-8和GRO-α趨化因子抑制作用。受體結(jié)合測定從Amersham Corp．，Arlington Heights獲得特定活性為2000Ci／mmol的[125I]IL-8(人重組)。從NEW-New England Nuclear獲得GRO-α。所有其它化學(xué)試劑都是分析級的。高水平的重組IL-8α型和β型受體分別按上文所述的方法表達(dá)在中國倉鼠卵巢細(xì)胞中(Holmes等人，Science，1991，253，1278)。將中國倉鼠卵巢膜按上文描述試驗(yàn)方法勻化(Haour等人，J．Biol．Chem．，249，2195-2205頁(1974))。除此之外，勻化緩沖液變?yōu)?0mM Tris-HCl、1mMMgSO4、0．5mM EDTA(乙二胺四乙酸)、1mM PMSF(α-甲苯磺酰氟)、0．5mg／L亮肽素(leupeptin)，pH7．5。用牛血清白蛋白作為標(biāo)準(zhǔn)，采用PierceCo．微測定試劑盒確定膜蛋白質(zhì)濃度。所有測定都在96-孔微滴定板格中進(jìn)行。各個(gè)反應(yīng)混合物均含有在20mM Bis-Trispropane和0．4mMTri HCl緩沖液中的125I IL-8(0．25nM)或125I GRO-α和0．5μg／mLIL-8Rα或1．0μg／mL IL-8Rβ膜，pH 8．0，其中含有1．2mM MgSO4、0．1mMEDTA、25mM NaCl和0．03％CHAPS。另外，加入的感興趣的藥物或化合物預(yù)先被溶解在DMSO中以便使最終濃度在0．01nM和100uM之間。通過加入125I IL-8開始測定。室溫下1小時(shí)后，使用Tomtec 96-孔收獲器將板上產(chǎn)物收獲在用1％聚乙烯亞胺／0．5％BSA阻滯的玻璃纖維過濾器上并用25mM NaCl、10mM Tris HCl、1mM MgSO4、0．5mM EDTA、0．03％CHAPS，pH 7．4洗滌3次。然后干燥濾器并在Betaplate液體閃爍計(jì)數(shù)器上計(jì)數(shù)。重組IL-8 Rα或I型受體在本文中也被稱作非許可性受體而重組IL-8Rβ或II型受體被稱作許可受體。
在此測定中，發(fā)現(xiàn)式(Ⅰ)代表性化合物實(shí)施例1到8具有＜30μmg的陽性抑制活性。趨化性測定在嗜中性白細(xì)胞趨化性測定中按Current Protocols inImmunology，I卷，增補(bǔ)1，6．12．3節(jié)中描述的方法來測定這些化合物的體外抑制特性，所述文獻(xiàn)的全部內(nèi)容均引入本文供參考。嗜中性白細(xì)胞按Current Protocops in Immunology，I卷，增補(bǔ)1，7．23．1中所描述的方法從人血中分離得到，所述文獻(xiàn)的全部內(nèi)容均引入本文供參考?；瘜W(xué)吸引劑IL-8、GRO-α、GRO-β、GRO-γ和NAP-2以0．1到100nM的濃度置于48多孔室(Neuro Probe，Cabin John，MD)的底部室中。兩個(gè)室通過5um聚碳酸酯濾器分開。試驗(yàn)本發(fā)明化合物時(shí)，將化合物與細(xì)胞(0．001-1000nM)混合，然后立即將細(xì)胞加入上部室中。約37℃下在有5％CO2的濕潤培養(yǎng)器中培養(yǎng)約45到90分鐘。培養(yǎng)期結(jié)束時(shí)，取出聚碳酸酯膜并洗滌上側(cè)，然后使用Diff Quick染色法(Baxter Products，McGaw Park，IL，USA)將膜染色。使用顯微鏡肉眼記錄趨化于趨化因子的細(xì)胞數(shù)。通常，每個(gè)樣品記錄四個(gè)視野，將這些數(shù)平均獲得遷移細(xì)胞的平均數(shù)。每個(gè)樣品測定三次并且每個(gè)化合物重復(fù)至少四次。對于某些細(xì)胞(陽性對照細(xì)胞)來說，不加化合物，這些細(xì)胞代表細(xì)胞的最大趨化反應(yīng)。在想要陰性對照(沒有刺激)時(shí)，底部室不加趨化因子。陽性對照和陰性對照之間的不同表示細(xì)胞的趨化活性。彈性蛋白酶釋放測定通過防止人嗜中性白細(xì)胞釋放彈性蛋白酶的能力來試驗(yàn)本發(fā)明化合物。按Current Protocols in Immunology，I卷，增補(bǔ)1，7．23．1節(jié)中描述的方法從人血中分離嗜中性白細(xì)胞。將嗜中性白細(xì)胞以0．88×106細(xì)胞濃度懸浮在林格溶液(NaCl 118、KCl 4．56、NaHCO325、KH2PO41．03、葡萄糖11．1、HEPES 5mM，pH 7．4)中，再以50ul體積置于96孔板的各孔中。將50ul體積的試驗(yàn)化合物(0．001-1000nM)、50ul體積的細(xì)胞松弛素B(20ug／ml)和50ul體積的林格緩沖液加到板中。溫?zé)徇@些細(xì)胞(37℃，5％CO2，95％RH)5分鐘，然后以0．01-1000nM濃度加入IL-8、GRO-α、GRO-β、GRO-γ和NAP-2。允許反應(yīng)進(jìn)行45分鐘，然后將96孔板離心(800×g 5分鐘)并取出100ul上清液。此上清液加到第二個(gè)96孔板中然后以6ug／ml最終濃度加入溶于磷酸鹽緩沖生理鹽水的人造彈性蛋白酶底物(MeOSuc-Ala-Ala-Pro-Val-AMC，Nova Biochem，La Jolla，CA)。立即將該板置于熒光96孔板讀數(shù)器(Cytofluor 2350，Millipore，Bedford，MA)并按照Nakajima等人在J．Biol Chem 254 4027(1979)中所述的方法以3分鐘間隔收集數(shù)據(jù)。通過測量MeOSuc-Ala-Ala-Pro-Val-AMC降解速度計(jì)算由嗜中性白細(xì)胞釋放彈性蛋白酶的量。測定腦外傷中的TNF-α該測定用來檢測大鼠特定腦區(qū)中腫瘤壞死因子mRNA的表達(dá)，所述腦區(qū)是經(jīng)實(shí)驗(yàn)誘導(dǎo)外側(cè)流體叩診大鼠腦外傷(TBI)的。因?yàn)門NF-α能夠誘導(dǎo)神經(jīng)生長因子(NGF)并刺激活化的星形細(xì)胞釋放其它細(xì)胞因子，TNF-α基因表達(dá)上的這種外傷后的改變在CNS受傷的急性和再生反應(yīng)中都起重要作用。在WO97／35856或WO97／49286中可發(fā)現(xiàn)合適的測定方法，這些文獻(xiàn)的內(nèi)容引入本文供參考。CNS損傷模型中的IL-βmRNA此測定方法的特點(diǎn)是檢測大鼠特定腦區(qū)中白細(xì)胞介素-1β(IL-1β)mRNA的區(qū)域表達(dá)，所述腦區(qū)是經(jīng)實(shí)驗(yàn)誘導(dǎo)外側(cè)流體體叩診大鼠腦外傷(TBI)的。因?yàn)檫@些測定適于TBI之后，IL-1βmRNA的暫時(shí)表達(dá)在特定腦區(qū)受到局部刺激。這些區(qū)域在細(xì)胞因子，如IL-1β的改變在腦受傷的外傷后疾病和再生后遺癥上起作用。在WO97／35856或WO97／49286中可發(fā)現(xiàn)合適的測定方法，這些文獻(xiàn)的內(nèi)容引入本文供參考。體內(nèi)粥樣硬化測定在小鼠中測量粥樣硬化的體內(nèi)模型基于如下文所述的進(jìn)行了小改進(jìn)的Paigen等人的測定方法。參見，Paigen B，Morrow A，HolmesPA，Mitchell D，Williams RA．小鼠粥樣硬化損傷的定量評價(jià)，Atherosclerosis 68231-240(1987)；和Groot PHE，van VlijmenBJM，Benson GM，Hofker MH，Schiffelers R，Vidgeon-Hart M，Havekes LM．APOE*3 Leiden轉(zhuǎn)基因小鼠中主動脈粥樣硬化的定量評價(jià)及其與血清膽固醇暴露的關(guān)系(Quantitative assessment ofaortic atherosclerosis in APOE*3 Leiden transgenic mice andits relationship to serum cholesterol exposure)，ArteriosclerThromb Vasc Biol．16926-933(1996)。主動脈竇的切片和染色按上文(1，2)所述方法制備主動脈根部的橫切片。簡而言之，沿心房水平底部對切心臟并分析帶有主動脈根部的心臟。將組織在OCT化合物中平衡過夜后，OCT化合物中的心臟被浸入低溫恒溫器卡盤(Bright Instrument Company Ltd．，UK)上并使主動脈面向卡盤。通過用干冰包圍卡盤來冷凍組織。然后垂直于主動脈的軸將心臟切片，從心臟內(nèi)開始并沿主動脈方向進(jìn)行。通過三瓣小葉的外觀確認(rèn)主動脈根部后，立即改為10mm切片并置于涂膠的載玻片上。將切片空氣干燥1小時(shí)，然后在60％異丙醇中簡單地漂洗。用Oil Red O將切片染色，用Mayer蘇木精復(fù)染色，使用甘油明膠覆蓋蓋玻片并用指甲油密封。確定主動脈根部的粥樣硬化量使用裝配有4×物鏡和照相機(jī)(Hitachi，Hv-C10)的OlympusBH-2顯微鏡對十個(gè)相互間隔的主動脈根部切片照像。獲得24張彩色相片并用裝有框架攝取(framegrabbing)板(Snapper，ActiveImaging Ltd，Berks，U．K．)和運(yùn)行Optimas軟件(5．1版，OptimasCorp．，WA，U．S．A)的PC(Datacell Pentium P5-133，Datacell，Berks，U．K．)分析。在相同的照明設(shè)備、顯微鏡、照相機(jī)和PC條件下拍攝。通過使用Optimas軟件用手在受損傷區(qū)域周圍繪圖來確定動脈粥樣硬化損傷區(qū)域量。劃出顏色界限以確定損傷部分中染成紅色的區(qū)域的量。使用在血細(xì)胞計(jì)數(shù)玻片上分格成象通過校準(zhǔn)軟件獲得損傷橫切片區(qū)域和染成紅色區(qū)域的絕對值。
在本說明書中引證的所有公開文獻(xiàn)，包括但不限于專利和專利申請都引入本文供參考，就好象將各個(gè)公開的文獻(xiàn)進(jìn)行具體的和分別的表述以便作為充分描述的內(nèi)容引入本文供參考。
上述說明書充分公開了包括其優(yōu)選實(shí)施方案在內(nèi)的發(fā)明。對本文具體公開的實(shí)施方案的修飾和改進(jìn)都在下列權(quán)利要求的范圍之內(nèi)。沒有進(jìn)一步的詳細(xì)說明，但相信本領(lǐng)域技術(shù)人員可根據(jù)上文所述內(nèi)容以最充分的程度利用本發(fā)明。所以，本文的實(shí)施例僅僅是說明性的，不以任何方式對本發(fā)明的范圍構(gòu)成限定。要求作為獨(dú)占權(quán)或特權(quán)保護(hù)的本發(fā)明的實(shí)施方案按權(quán)利要求書的內(nèi)容來定義。
權(quán)利要求
1．式(Ⅰ)化合物或其可藥用鹽
其中R是-NH-C(X)-NH-(CR13R14)v-Z；Z是W、未取代的或取代的雜芳基、未取代的或取代的C5-8環(huán)烷基、未取代的或取代的C1-10烷基、未取代的或取代的C2-10烯基、或未取代的或取代的C2-10炔基；X=O或者=S；A是CR20R21；R1獨(dú)立地選自氫；鹵素；硝基；氰基；鹵代C1-10烷基；C1-10烷基；C2-10烯基；C1-10烷氧基；鹵代C1-10烷氧基；疊氮化物；(CR8R8)qS(O)tR4；羥基；羥基C1-4烷基；芳基；芳基C1-4烷基；芳氧基；芳基C1-4烷氧基；雜芳基；雜芳基烷基；雜環(huán)基；雜環(huán)基C1-4烷基；雜環(huán)基C1-4烷氧基；芳基C2-10烯基；雜芳基C2-10烯基；雜環(huán)基C2-10烯基；(CR8R8)qNR4R5；C2-10烯基C(O)NR4R5；(CR8R8)qC(O)NR4R5；(CR8R8)qC(O)NR4R10；S(O)3H；S(O)3R8；(CR8R8)qC(O)R11；C2-10烯基C(O)R11；C2-10烯基C(O)OR11；(CR8R8)qC(O)OR11；(CR8R8)qC(O)OR12；(CR8R8)qOC(O)R11；(CR8R8)qNR4C(O)R11；(CR8R8)qC(NR4)NR4R5；(CR8R8)qNR4C(NR5)R11；(CR8R8)qNHS(O)2R17；(CR8R8)qS(O)2NR4R5；或者兩個(gè)R1部分一起形成O-(CH2)sO或5-6元飽和或不飽和環(huán)，并且其中含芳基、雜芳基和雜環(huán)基的環(huán)可以是未取代的或取代的；n是1-3的整數(shù)；m是1或3的整數(shù)；q是0或1-10的整數(shù)；t是0、1或2；s是1-3的整數(shù)；v是0或1-4的整數(shù)；R4和R5獨(dú)立地為氫、未取代的或取代的C1-4烷基、未取代的或取代的芳基、未取代的或取代的芳基C1-4烷基、未取代的或取代的雜芳基、未取代的或取代的雜芳基C1-4烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基C1-4烷基、或者R4和R5與它們所連接的氮原子一起形成5-7元包含或不包含其它選自O(shè)／N／S雜原子的環(huán)；Y獨(dú)立地選自氫；鹵素；硝基；氰基；鹵代C1-10烷基；C1-10烷基；C2-10烯基；C1-10烷氧基；鹵代C1-10烷氧基；疊氮化物；(CR8R8)qS(O)tR4；羥基；羥基C1-4烷基；芳基；芳基C1-4烷基；芳氧基；芳基C1-4烷氧基；雜芳基；雜芳基烷基；雜芳基C1-4烷氧基；雜環(huán)基；雜環(huán)基C1-4烷基；芳基C2-10烯基；雜芳基C2-10烯基；雜環(huán)基C2-10烯基；(CR8R8)qNR4R5；C2-10烯基C(O)NR4R5；(CR8R8)qC(O)NR4R5；(CR8R8)qC(O)NR4R10；S(O)3H；S(O)3R8；(CR8R8)qC(O)R11；C2-10烯基C(O)R11；C2-10烯基C(O)OR11；(CR8R8)qC(O)OR11；(CR8R8)qC(O)OR12；(CR8R8)qOC(O)R11；(CR8R8)qNR4C(O)R11；(CR8R8)qC(NR4)NR4R5；(CR8R8)qNR4C(NR5)R11；(CR8R8)qNHS(O)2R18；(CR8R8)qS(O)2)NR4R5；或者兩個(gè)Y部分一起形成O-(CH2)sO或5-6元飽和或不飽和環(huán)，并且其中含芳基、雜芳基和雜環(huán)基的環(huán)可以是未取代的或取代的；R6和R7獨(dú)立地為氫或C1-4烷基，或者R6和R7與它們所連接的氮原子一起形成5-7元包含或不包含其它選自氧、氮或硫雜原子的環(huán)；R8獨(dú)立地為氫或C1-4烷基；R10為C1-10烷基C(O)2R8；R11為氫、C1-4烷基、未取代的或取代的芳基、未取代的或取代的芳基C1-4烷基、未取代的或取代的雜芳基、未取代的或取代的雜芳基C1-4烷基、未取代的或取代的雜環(huán)基、未取代的或取代的雜環(huán)基C1-4烷基；R12為氫、C1-10烷基、未取代的或取代的芳基或未取代的或取代的芳基烷基；R13和R14獨(dú)立地為氫、未取代的或取代的C1-4烷基，或者R13和R14中的一個(gè)可以是未取代的或取代的芳基；R15和R16獨(dú)立地為氫或者未取代的或取代的C1-4烷基；R17為C1-4烷基、芳基、芳基烷基、雜芳基、雜芳基C1-4烷基、雜環(huán)基或雜環(huán)基C1-4烷基，其中芳基、雜芳基和雜環(huán)都可以是未取代的或取代的；R18為NR6R7、烷基、芳基C1-4烷基、芳基C2-4烯基、雜芳基、雜芳基C1-4烷基、雜芳基C2-4烯基、雜環(huán)基、雜環(huán)基C1-4烷基，其中芳基、雜芳基和雜環(huán)都可以是未取代的或取代的；R20和R21獨(dú)立地為氫、鹵素、氰基、鹵代C1-10烷基；C1-10烷基、芳基、芳基C1-4烷基、雜芳基、雜芳基烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基C1-4烷基、(CR8R8)qOR4、(CR8R8)qC(O)R11、(CR8R8)qC(O)OR11、(CR8R8)qC(O)OR12、(CR8R8)qOC(O)R11、(CR8R8)qNR4R5、(CR8R8)qNR4C(O)R11、(CR8R8)qC(O)NR4R5，或者R20和R21一起形成=R22；并且其中含芳基、雜芳基和雜環(huán)基的環(huán)可以是未取代的或取代的；此外前題條件是R20和R21都不是氫；R22為C1-4烷基、芳基、芳基C1-4烷基、雜芳基、雜芳基烷基、雜環(huán)基或雜環(huán)基C1-4烷基，并且其中所有這些部分都可以是未取代的或取代的；
含E的環(huán)可選擇地選自
星點(diǎn)*表示環(huán)的連接點(diǎn)。
2．權(quán)利要求1化合物，其中R20和R21中至少一個(gè)是未取代的或取代的烷基、鹵素、(CR8R8)qC(O)NR4R5、未取代的或取代的雜芳基或未取代的或取代的雜環(huán)基，或者R20和R21一起為亞甲基。
3．權(quán)利要求1化合物，其中X為氧。
4．權(quán)利要求1或3化合物，其中R1是鹵素、氰基、硝基、CF3、C(O)NR4R5、烯基C(O)NR4R5、C(O)NR4R10、烯基C(O)OR11、雜芳基、雜芳基烷基、雜芳基烯基或(CR8R8)qS(O)2NR4R5。
5．權(quán)利要求1化合物，其中Z為W。
6．權(quán)利要求5化合物，其中Y是鹵素、C1-4烷氧基、未取代的或取代的芳基、未取代的或取代的芳基烷氧基、亞甲基二氧基、NR4R5、硫代C1-4烷基、硫代芳基、鹵代烷氧基、未取代的或取代的C1-4烷基或羥基取代的烷基。
7．權(quán)利要求4化合物，其中Z是未取代的或取代的雜芳基。
8．權(quán)利要求1化合物是N-[(1，3)-二氫-2，2-二氧-3-甲基-4-氯-2，1-苯并異噻唑)-7-基]-N’-[2-溴苯基]脲N-[(1，3)-二氫-2，2-二氧-3-丙基-4-氯-2，1-苯并異噻唑)-7-基]-N’-[2-溴苯基]脲N-[1-氫-2，2-二氧-3，3-二甲基-4-氯-2，1-苯并異噻唑)-7-基]-N’-[2-溴苯基]脲N-[(1，3)-二氫-2，2-二氧-3-氟-4-氯-2，1-苯并異噻唑)-7-基]-N’-[2-溴苯基]脲N-[(1，3)-二氫-2，2-二氧-3-甲酰胺-4-氯-2，1-苯并異噻唑)-7-基]-N’-[2-溴苯基]脲N-[(1，3)-二氫-2，2-二氧-3-甲基-3-甲酰胺-4-氯-2，1-苯并異噻唑)-7-基]-N’-[2-溴苯基]脲N-[(1，3)-二氫-2，2-二氧-3-亞甲基-4-氯-2，1-苯并異噻唑)-7-基]-N’-[2-溴苯基]脲N-[(1，3)-二氫-2，2-二氧-3-(苯并噻唑-2-基)-4-氯-2，1-苯并異噻唑)-7-基]-N’-[2-溴苯基]脲或其可藥用鹽。
9．包含有效量權(quán)利要求1-8任一化合物和可藥用載體或稀釋劑的藥物組合物。
10．治療哺乳動物中趨化因子介導(dǎo)的疾病的方法，其中所述趨化因子連接到IL-8α或β受體上，該方法包括給予所述哺乳動物有效量權(quán)利要求1-8任一化合物。
11．權(quán)利要求10的方法，其中趨化因子介導(dǎo)的疾病選自牛皮癬、特應(yīng)性皮炎、哮喘、慢性阻塞性肺炎、成人呼吸窘迫癥、關(guān)節(jié)炎、炎性腸炎、節(jié)段性回腸炎、潰瘍性結(jié)腸炎、膿毒性休克、內(nèi)毒素休克、革蘭氏陰性膿毒病、中毒型休克、中風(fēng)、心臟和腎臟再灌注損傷、腎小球性腎炎、血栓形成、動脈粥樣硬化、骨吸收疾病、早老性癡呆、移植物-宿主反應(yīng)或同種移植物排斥。
12．一種制備權(quán)利要求1所定義的式(Ⅰ)化合物的方法，該方法包括a)、將式(Ⅱ)化合物
與下式化合物反應(yīng)C(X)-N-(CR13R14)v-Z；其中A、R1、m、X、R13、R14、v和Z如式(Ⅰ)的定義；得到式(Ⅰ)化合物，并且在此之后，如果必要，脫保護(hù)，或?qū)1、A或Z的前體轉(zhuǎn)化為R1、A或Z基。
13．一種制備式(Ⅱ)化合物的方法
其中A、R1和m如式(Ⅰ)的定義；該方法包括在適宜的還原條件下，將式(Ⅲ)化合物還原
其中A、R1和m如式(Ⅰ)的定義；得到式(Ⅱ)化合物。
14．式(Ⅲ)化合物
其中A、R1和m如式(Ⅰ)的定義。
15．式(Ⅱ)化合物
其中A、R1和m如式(Ⅰ)的定義。
16．一種制備權(quán)利要求1所定義的式(Ⅰ)化合物的方法，該方法包括將式(Ⅳ)化合物
其中A、R1和m如式(Ⅰ)的定義；與下式化合物反應(yīng)NH2-C(X)-N-(CR13R14)v-Z；其中X、R13R14、v和Z如式(Ⅰ)的定義，得到式(Ⅰ)化合物，并且在此之后，如果必要，脫保護(hù)，或?qū)1、A或Z的前體轉(zhuǎn)化為R1、A或Z基。
全文摘要
本發(fā)明涉及新的式(Ⅰ)化合物或其可藥用鹽、它們的藥物組合物及其在治療趨化因子,白介素－8(IL－8)介導(dǎo)的疾病中的應(yīng)用。特別是,式(Ⅰ)化合物由結(jié)構(gòu)式(Ⅰ)表示,其中R是－NH－C(X)－NH－(CR
文檔編號A61P11/00GK1278726SQ98810909
公開日2001年1月3日 申請日期1998年9月4日 優(yōu)先權(quán)日1997年9月5日
發(fā)明者K·L·威多森, H·聶 申請人:史密絲克萊恩比徹姆公司