專利名稱：持續(xù)釋放離子結(jié)合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及持續(xù)釋放藥物傳遞系統(tǒng)，特別涉及制備持續(xù)釋放離子結(jié)合物的微粒。
背景技術(shù)：
人們已研制出了可生物降解聚合藥物傳遞制劑并將其應(yīng)用于控制藥物的體內(nèi)釋放，參見(jiàn)美國(guó)專利3,773,919和4,767,628。這類可生物降解聚合制劑被設(shè)計(jì)成包含在藥物中，當(dāng)可生物降解聚合物解聚時(shí)，通過(guò)聚合物基質(zhì)或涂層慢慢地?cái)U(kuò)散。
國(guó)際申請(qǐng)WO 94/15587描述了聚酯和藥物的持續(xù)釋放離子分子結(jié)合物。由于聚酯降解是釋放過(guò)程中的重要步驟，所以結(jié)合物顆粒的表面積可控制結(jié)合物中藥物的釋放外形。由此可見(jiàn)，為了保證最小和可重復(fù)的表面積，結(jié)合物顆粒應(yīng)當(dāng)具有小的尺寸和形狀，如微球。
發(fā)明公開(kāi)一方面，本發(fā)明涉及制備持續(xù)釋放離子結(jié)合物微粒的方法，所述離子結(jié)合物含有含游離羧基的可生物降解聚合物(由單體制得的聚酯或其共聚物，單體如乳酸、ε-己酸、乙醇酸、三亞甲基碳酸酯或?qū)Χf烷酮；單體可為旋光異構(gòu)體或外消旋物)和含游離氨基的藥物(例如肽藥物，如抑生長(zhǎng)素或LHRH)，它們彼此離子結(jié)合。該方法包括步驟(1)得到溶解有結(jié)合物的第一溶液；(2)混合第一溶液(以小液滴加入，如通過(guò)霧化噴嘴加入，該噴嘴包括超聲波噴嘴、氣動(dòng)噴嘴、旋轉(zhuǎn)噴霧器或壓力噴嘴)和第一液體，形成第一分散液，其中第一液體與第一溶液相混溶，結(jié)合物在第一液體中不溶解，從第一分散液中沉淀出來(lái)；以及(3)從第一分散液中分離出結(jié)合物。
在一個(gè)實(shí)施方案中，藥物溶于第一液體，所述第一液體可為醇(如乙醇或異丙醇)、己烷或水或其混合物。當(dāng)使用醇作為第一液體時(shí)，使用時(shí)的溫度可維持在大約0℃至-30℃。當(dāng)使用異丙醇時(shí)，溫度可維持在大約0℃至-70℃，例如通過(guò)加入干冰冷卻。
可含有丙酮、二氯甲烷、乙腈、乙酸乙酯、四氫呋喃或甘醇二甲醚或其混合物的第一溶液可通過(guò)下述方法獲得(1)將可生物降解聚合物溶解在第二液體(如丙酮、四氫呋喃、甘油栓、乙酸乙酯、乙酸甲酯、乙腈、甲酸乙酯或甘醇二甲醚或其混合物)中，得到第二溶液；(2)將藥物溶解在第三液體(如水或丙酮或其混合物)中，得到第三溶液，其中第三液體與第一液體和第二液體混溶；以及(3)將第二溶液與第三溶液混合，得到第一溶液，其中混合可使得藥物與可生物降解聚合物離子結(jié)合，在第一溶液中得到結(jié)合物。第一溶液可含有高達(dá)40％重量的結(jié)合物(如25至35％重量的結(jié)合物)。在一個(gè)實(shí)施例中，可在將第二溶液與第三溶液混合之前加入堿，如NaOH或KOH。利用堿中和可生物降解聚合物的羧基，可生成離子結(jié)合物。
另外，第一溶液也可通過(guò)下述方法獲得將可生物降解聚合物和藥物溶解在第二液體(如丙酮或丙酮和水的混合物)，得到第一溶液，由此在第一溶液中得到結(jié)合物。根據(jù)這種方法，可生物降解聚合物可首先溶解在第二液體中，然后向第二溶液中加入堿，接著將藥物溶解在第二液體中。再者，如果需要的話，可在分離結(jié)合物之前，將第一溶液從第一分散液中部分或全部蒸發(fā)出去。處理過(guò)的結(jié)合物可方便地通過(guò)離心或過(guò)濾第一分散液而分離，分離的結(jié)合物可在真空干燥(如冷凍干燥)之前與甘露糖醇水溶液混合。分離的結(jié)合物可進(jìn)一步地成形成膜狀或條狀。分離的結(jié)合物也可球化成如這里所描述的平均直徑為5至200μm的微球?！扒蚧笔侵笇⑽⒘＜庸こ山咏驙?。
另一方面，本發(fā)明涉及球化上文描述的持續(xù)釋放離子結(jié)合物的方法。該方法包括步驟(1)將結(jié)合物與第一液體(例如油，如硅油、礦物油、芝麻油或植物油)混合，得到第一分散液，其中結(jié)合物具有微粒形狀且不溶于第一液體；(2)將第一分散液加熱至大于結(jié)合物Tg或Tm的溫度；(3)將第一分散液冷卻至結(jié)合物的Tg或Tm溫度之下；(4)將第一分散液與第二液體(如己烷、庚烷、肉桂酸異丙酯或醇類，如乙醇或異丙醇)混合，得到第二分散液，其中第二液體與第一液體混溶，結(jié)合物不溶于第二液體；以及(5)將結(jié)合物從第二分散液中分離出來(lái)。在與第一液體混合之前，結(jié)合物可具有平均直徑為5μm至200μm的微膠囊形狀，在加熱幫助顆粒分離的同時(shí)，劇烈攪拌所形成的第一分散液。結(jié)合物一旦已被分離，可將其浸漬在第二液體中，然后進(jìn)行真空干燥。結(jié)合物可在真空干燥之前任意地與甘露糖醇水溶液混合。
本發(fā)明第三方面涉及球化上述持續(xù)釋放離子結(jié)合物(例如具有平均直徑為5μm至200μm的微膠囊)的方法。該方法包括步驟(1)將結(jié)合物在第一液體(如水)中混合，得到第一分散液，其中結(jié)合物為微粒形狀且結(jié)合物不溶于第一液體；(2)攪拌第一分散液；(3)將攪拌過(guò)的分散液與第二液體(如二氯甲烷或氯仿)混合，第二液體的量能夠被結(jié)合物吸收，卻不能溶解結(jié)合物，其中第二液體與第一液體混溶；(4)從第一分散液中蒸發(fā)第二液體；以及(5)從第一分散液中分離沉淀的結(jié)合物。如果需要的話，該方法可進(jìn)一步包括下述步驟為有助于第一分散液的溶解，可向第一分散液中加入表面活性劑(如卵磷脂、吐溫20、聚山梨酸酯或磺酸月桂酯)，分離的結(jié)合物可在第一液體中浸漬并真空干燥。再者，分離的結(jié)合物可在進(jìn)行真空干燥之前與甘露糖醇水溶液混合。
本發(fā)明進(jìn)一步的方面，本發(fā)明涉及球化上述持續(xù)釋放離子結(jié)合物的方法。該方法包括步驟(1)將結(jié)合物溶解在第一液體(如乙腈)中，得到第一溶液；(2)攪拌第一溶液和第二液體(如油)，得到第一分散液，其中第二液體與第一溶液不混溶；(3)從第一分散液中蒸發(fā)第一液體，從第一分散液中沉淀出結(jié)合物；以及(4)從第一分散液中分離沉淀的結(jié)合物。在攪拌步驟中，第一溶液可以小液滴加入到第二液體中去。
上述方法可進(jìn)一步包括如下步驟利用第三溶液(如己烷、庚烷或辛烷)浸漬分離的結(jié)合物，所述第三液體與第二液體混溶且不是分離結(jié)合物的溶劑。如果需要的話，分離結(jié)合物可在真空干燥之前與甘露糖醇水溶液混合。
上述結(jié)合物中可生物降解聚合物含有至少一個(gè)游離羧基(如每個(gè)聚合物鏈含有2至10個(gè)游離羧基)。含羧酸的可生物降解聚合物實(shí)例包括以旋光活性形式或外消旋物存在的含下述單元的聚酯乳酸、ε-己酸、對(duì)二噁烷酮、ε-caprionic酸、取代和未取代三亞甲基碳酸酯、1,5-二氧雜庚環(huán)-2-酮、1,4-二氧雜庚環(huán)-2-酮、乙醇酸、烯化氧、環(huán)烯、環(huán)烯化氧、亞烷基琥珀酸酯或3-羥基丁酸；或任何上述單元共聚物。另外的游離羧酸基團(tuán)也可通過(guò)與多元羧酸(如蘋(píng)果酸、酒石酸、棕櫚酸、檸檬酸、琥珀酸酐和戊二酸酐)反應(yīng)摻進(jìn)可生物降解聚酯中，例如通過(guò)開(kāi)環(huán)聚合或縮聚。由此，可生物降解聚合物可以是水溶性聚酯，該聚酯包括乳酸單元且含有或不含有乙醇酸單元。也可使用其它可生物降解聚合物(如聚原酯、聚原碳酸酯和polyantals)。可生物降解聚合物具有10至300的平均聚合度(如每個(gè)聚合物鏈的數(shù)均單體)。
藥物可具有一個(gè)或多個(gè)(如1至10個(gè))游離胺基團(tuán)。在一個(gè)實(shí)施方案中，藥物為酸穩(wěn)定肽。適當(dāng)?shù)乃岱€(wěn)定肽實(shí)例包括生長(zhǎng)激素釋放肽(GHRP)、促黃體素釋放激素(LHRH)、腎上腺素髓質(zhì)素、生長(zhǎng)激素、抑生長(zhǎng)素、鈴蟾肽、胃泌素釋放肽(GRP)、降鈣素、緩激肽、galanin、促黑激素(MSH)、生長(zhǎng)激素釋放因子(GRF)、糊精、速激肽、腸泌素、甲狀旁激素(PTH)、腦啡肽、內(nèi)皮素、降鈣素基因釋放肽(CGRP)、神經(jīng)調(diào)節(jié)肽、甲狀旁激素相關(guān)蛋白(PTHrP)、胰高血糖素、神經(jīng)降壓肽、促腎上腺皮質(zhì)素(ACTH)、肽YY(PYY)、胰高血糖素釋放肽(GLP)、血管活性腸肽(VIP)、垂體腺苷酸環(huán)化酶激活肽(PACAP)、促胃動(dòng)素、物質(zhì)P、神經(jīng)肽Y(NPY)、TSH及其類似物和片段。藥物可溶于第一液體(例如大于0.1mg/ml，優(yōu)選大于1.0mg/ml)。
通過(guò)詳細(xì)說(shuō)明書(shū)和權(quán)利要求書(shū)，本發(fā)明的其它特征和優(yōu)點(diǎn)將變得非常明顯。
基于本發(fā)明描述，本領(lǐng)域技術(shù)人員可將本發(fā)明利用至最大的限度。因此，下文給出的特別實(shí)施方案僅僅是用來(lái)說(shuō)明本發(fā)明，而不是以任何方式來(lái)限度本發(fā)明公開(kāi)的范圍。
除非特別指出，這里所使用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語(yǔ)均與本領(lǐng)域普通技術(shù)人員的常規(guī)理解具有相同的含義。再者，上述所有出版物、專利申請(qǐng)、專利及其它參考資料在此一并引作參考。
完成本發(fā)明的最佳方式實(shí)施例1將18g 6,000g/mol 66/32/2聚-L-乳酸-乙醇酸-D,L-蘋(píng)果酸聚合物(L-乳酸66％，乙醇酸32％，蘋(píng)果酸2％；酸值0.373毫當(dāng)量/g)溶解在180g丙酮(10％(重量)共聚物溶液)。加入14.4ml 0.5N NaOH水溶液，形成聚合物羧酸鈉，將4.28g肽LanreotideTM乙酸鹽(Kinerton,Dublin,Ireland；D-Nal-c[Cys-Tyr-D-Trp-Val-Cys]-Thr-NH2；乙酸鹽含量=9.60％(重量))分別溶解在10g丙酮和10g去離子水混合物中。溶解的肽量對(duì)應(yīng)于聚合物酸基(如1)與肽游離氨基(如2)的化學(xué)計(jì)量比。然后將肽溶液滴入到聚合物溶液中，攪拌所得溶液2小時(shí)，從而產(chǎn)生鹽交換，得到所形成的聚合物/肽離子結(jié)合物(PPIC)。
實(shí)施例2在控制溫度的夾套式反應(yīng)器(Schott Glass AGB,Dublin,Ireland)中，將2升去離子水浴預(yù)冷至0℃并劇烈攪拌。通過(guò)利用Masterflex泵(Bioblock Scientific,Illkvch,France)，將上述實(shí)施例1的PPIC溶液慢慢加入到反應(yīng)器中，所述泵能夠通過(guò)在頂部安裝有19計(jì)量探針的硅酮管產(chǎn)生10-15ml/min的流速。在0℃下，經(jīng)過(guò)固定在水面以上的探針?biāo)腿隤PIC溶液，在水浴中生成了小的固體顆粒，然后通過(guò)離心(在0-5℃下以5000rpm速度離心30分鐘)，將所述固體顆粒從上清液中分離出來(lái)，利用新鮮去離子水浸漬，將其再懸浮在水中，再離心，然后凍干。通過(guò)100μm篩過(guò)濾分離的結(jié)合物而分離大量能夠通過(guò)21計(jì)量探針注射的顆粒。所得顆粒的尺寸分析描述在表Ⅰ中。
實(shí)施例3根據(jù)實(shí)施例2描述的方法沉淀實(shí)施例1的PPIC溶液，只是使用-20℃溫度的酒精浴代替0℃水浴。所得顆粒的尺寸分析描述在表Ⅰ中。
實(shí)施例4在控制溫度的夾套式反應(yīng)器中，于-10℃下，通過(guò)含空心頭的霧化噴嘴(Bioblock；50 Watts,20 kHz)，以4ml/min控制流速將實(shí)施例1的PPIC溶液分散在乙醇浴中。在該霧化方法中，聚合物溶液以很細(xì)的霧化小液滴從探針處釋放出來(lái)。小液滴落入乙醇浴中，使得去離子水和丙酮從液滴中萃取出來(lái)，最后聚合物液滴硬化成小的固體顆粒。然后通過(guò)離心回收顆粒并凍干。所得顆粒的尺寸分析羅列在表Ⅰ中。直徑-10(即D0.1)、直徑-50(即D0.5)或直徑-90(即D0.9)含義是指分別大于10％、50％或90％總顆粒的最小直徑。比面積的含義是指所得顆粒的平均比面積。
表Ⅰ實(shí)施例直徑-10直徑-50直徑-90比面積(μm) (μm) (μm) (m2/g)210 30 6218.6439 37 896.42413 46 9522.61實(shí)施例5將5.0g實(shí)施例4描述的PPIC溶解在20g丙酮中(PPIC濃度為20％(重量))。根據(jù)實(shí)施例4描述的方法，在-10℃下將該溶液以4.0ml/min流速在500ml醇浴中霧化。在浴中制備PPIC顆粒之后，向浴中加入500ml去離子水，然后將浴溫升至0℃，攪拌該浴30分鐘，溫度升至20℃，再攪拌30分鐘。然后通過(guò)過(guò)濾回收PPIC顆粒，在室溫下真空干燥。所得顆粒的分析結(jié)果列在表Ⅱ中。
表Ⅱ?qū)嵤├鼶0.1D0.5D0.9比面積(μm) (μm) (μm)(m2/g)#4 13 46 95 22.61#5 50 99 180 0.11正如表Ⅱ所示，得到了不同形態(tài)的顆粒。實(shí)施例4的顆粒較大些，比面積較低。正如電子掃描顯微鏡所表明，實(shí)施例4得到的顆粒也更疏松，可能是由于顆粒在沉淀時(shí)于其中保留冷凍水，水被溶化，流入乙醇浴中，在顆粒中留下了開(kāi)口的通道。因此這些顆粒脆性更大，能夠產(chǎn)生小尺寸碎片。
實(shí)施例6在0℃下，于1.5升去離子水中以2.5ml/min速度，將上述實(shí)施例5所描述的PPIC溶液霧化。所得顆粒的分析結(jié)果列在表Ⅲ中。
實(shí)施例7在-10℃下，于1.5升乙醇中以2.5ml/min速度，將上述實(shí)施例5所描述的PPIC溶液霧化。所得顆粒的分析結(jié)果列在表Ⅲ中。
表Ⅲ實(shí)施例D0.1D0.5D0.9比面積(μm) (μm) (μm) (m2/g)6 53.4154.3 329.1 n/a7 42.487.2170.1 0.20實(shí)施例8根據(jù)實(shí)施例5描述的方法，在丙酮中制備兩種PPIC溶液。第一種溶液的PPIC濃度為15％，第二種溶液的PPIC濃度為20％。根據(jù)實(shí)施例5描述的方法，在-10℃下，分別以2.5、3.5和5.0ml/min速度，將溶液霧化。所得顆粒的分析結(jié)果列在表Ⅳ中。
表Ⅳ濃度 進(jìn)料速率 D0.1 D0.5D0.9比面積(ml/min) (μm) (μm)(μm)(m2/g)15％2.535.981.6191.14.45515％3.534.480.2188.38.33615％5.049.4163.6 397.8n/a20％2.533.373.8145.60.19920％3.550.8112.7 241.90.57920％5.0108.3 219.1 395.9n/a利用電子掃描顯微鏡進(jìn)行的顆粒分析表明顆粒尺寸和比面積均隨著進(jìn)料速率的增加而增加。
實(shí)施例9將5.0g實(shí)施例4的PPIC微粒溶解在45ml丙酮中(濃度為10％(重量))。在室溫下，將該溶液滴加到劇烈攪拌的500ml正己烷中。當(dāng)產(chǎn)生PPIC沉淀時(shí)，正己烷溶液變得混濁。通過(guò)過(guò)濾分離PPIC并在室溫下真空干燥。
實(shí)施例10在夾套式反應(yīng)器中，將3.0g實(shí)施例2描述的PPIC微粒溶解在劇烈攪拌的250ml 12,500cs醫(yī)藥級(jí)硅油(Dow Coming,Midland,MI)(1％PPIC(重量))中。在攪拌之后將混合物加熱至120℃，該溫度高于PPIC的Tg 55℃；將混合物維持在該溫度下30分鐘。在加熱過(guò)程中，分離的各種微粒熔化，形成球形液滴。然后將分散液冷卻至20℃，利用1250ml己烷稀釋。接著通過(guò)過(guò)濾回收硬化的微球，將其浸漬在新鮮己烷中，最后真空干燥。所得微球的特征報(bào)道在表Ⅴ中。由于微粒在熔化過(guò)程中的壓縮，最終微粒的直徑小于實(shí)施例2的微粒直徑。
表Ⅴ實(shí)施例D0.1D0.5D0.9比面積(μm) (μm) (μm) (m2/g)#2 10 30 62 18.64#7 2 10 47 ＜0.33
實(shí)施例11將0.2g實(shí)施例2描述的PPIC微粒分散在5ml去離子水中，利用旋渦搖動(dòng)器劇烈攪拌。然后將100ml二氯甲烷(DCM)加入到攪拌著的分散液中。加入少量的DCM可使得PPIC顆粒的表面膨脹。在室溫下持續(xù)攪拌4小時(shí)，蒸發(fā)DCM，硬化膨脹的顆粒表面。掃描電鏡表明所得顆粒為球形，其表面比原始材料的表面光滑。兩種顆粒的尺寸分布很窄，最大顆粒尺寸隨著密度的增加而降低。
實(shí)施例12將1升芝麻油(Vitamins,Inc.,Chicago,IL)置于浸漬在水浴中的2升三頸燒瓶中。利用與高架攪拌馬達(dá)相連的特氟隆攪拌棒以600rpm速度攪拌芝麻油。將500mg表面活性劑(大豆蛋白卵磷脂，Sigma Chemicals,St.Louis,MO)加入到芝麻油中，攪拌混合物10分鐘。然后將10g PPIC制劑溶解在100ml乙腈中，得到清亮溶液。利用含有下列三種聚合物中一種的LanreotideTM制備PPIC組合物64/34/2聚-DL-乳酸-乙醇酸-D,L-蘋(píng)果酸共聚物(重均分子量6,000)(組合物1)；74/24/2聚-DL-乳酸-乙醇酸-D,L-蘋(píng)果酸共聚物(重均分子量6,000)(組合物2)和98/2聚-DL-乳酸-D,L-蘋(píng)果酸共聚物(組合物3)。
通過(guò)滴液漏斗滴加清亮PPIC溶液。當(dāng)加入完成時(shí)，內(nèi)部水浴的溫度升至40℃，攪拌油20小時(shí)。然后加入1升己烷，稀釋芝麻油，通過(guò)多孔介質(zhì)漏斗過(guò)濾油。利用總體積為500ml的己烷洗滌收集在過(guò)濾漏斗中的微粒數(shù)次。在36℃下真空干燥顆粒兩天。所得微粒的特征表示在表Ⅵ中。
表Ⅵ組合物D0.1D0.5D0.9比面積(μm) (μm) (μm) (m2/g)1 13 28 57 0.14262 13 25 59 0.13953 14 25 51 0.1480實(shí)施例13向反應(yīng)器中放入單體乙交酯(Purac Biochem,Netherlands,84.83g)、丙交酯(Purac Bioehem,Netherlands,210.67g)和L(+)-酒石酸(Ridel-deHaen,Seelze,Germany,貨號(hào)為33,801,4.50g)及2-乙基己酸亞錫(Sigma,St.Louis,Missouri,USA,貨號(hào)S-3252)的甲苯(Ridel-de Haen,Seelze,Germany)溶液(0.1025M,4.34ml)。L(+)-酒石酸預(yù)先在Abderhalden干燥設(shè)備上于五氧化磷(Ridel-de Haen,Seelze,Germany)中干燥10小時(shí)。將反應(yīng)器(通過(guò)液氮閥與泵相連)置于真空(0.04mbar)下攪拌50分鐘，以分離甲苯。在不含氧氣的氮?dú)?BOC氣體，Dublin,Ireland,水分為8 VPM)氣氛下，將反應(yīng)器浸漬在油浴(溫度=200℃)中，攪拌速度升至125rpm。在浸漬之前，將加熱帶(Thermolyne 45500型，輸入控制裝置=4)置于反應(yīng)器蓋上。對(duì)于300g的裝料量，在200℃下完全熔化反應(yīng)器內(nèi)容物所花費(fèi)的時(shí)間典型地為10分鐘。在合成過(guò)程中每隔一小時(shí)取出樣品進(jìn)行GPC分析，測(cè)定殘留單體的百分?jǐn)?shù)，從而得到數(shù)均(Mn)和重均(Mw)分子量的數(shù)值。典型的反應(yīng)時(shí)間為6小時(shí)左右。
由此得到了一種非晶態(tài)聚合物，該聚合物含有66.21％乙交酯單元、33.11％丙交酯單元和0.68％酒石酸單元(66/33/1 PLGTA)。滴定酸值測(cè)定為0.303毫當(dāng)量/g(meq/g；NaOH當(dāng)量濃度乘以中和1g聚酯所需的NaOH溶液體積)。共聚物數(shù)均分子量的平均值為10,250，重均分子量平均值為11,910,Mw/Mn值為1.16。
通過(guò)在Branson聲處理浴(Branson,Danbury,Connecticut,USA)使用聲處理方法，將41.32g上述10,000g/mol 66/32/2聚-L-乳酸-乙醇酸-L(+)-酒石酸共聚物(酸值=0.303meq/g)溶解在165.52g丙酮(Ridel-de Haen,Seelze,Germany)中，得到PLGTA重量濃度為19.98％的溶液。
向該溶液中加入37.6ml 0.2N碳酸鈉(Aldrich,Gillingham,Dorset,UK)，在聚合物羧基中得到過(guò)量1.2倍的鈉。然后攪拌溶液30分鐘，促使鈉鹽形成。然后利用Masterflex泵(Cole Parmer,Barrington,Illinois,USA),以8.0ml/min速率將溶液送入霧化器噴嘴。利用循環(huán)浴(Huber,Offenburg,Germany),將溶液霧化入含有冷卻至2.5℃的2升去離子水的夾套式反應(yīng)器中。利用與攪拌馬達(dá)連接的4-葉片攪拌器攪拌水至350rpm。
霧化一旦完成，將分散液置于6只離心瓶中，在Sorvall離心機(jī)(DuPont Sorvall Products,Wilmington,Delaware,USA)中以5000rpm速度旋轉(zhuǎn)30分鐘。將所得離心藥餅再懸浮于去離子水中，再離心旋轉(zhuǎn)。除去上清液，將藥餅在冰箱中冷凍過(guò)夜，第二天在小型冷凍器(Edwards,Crawley,West Sussex,UK)中干燥，回收收率為80.24％的33.16g洗滌過(guò)的共聚物。
通過(guò)在Branson聲處理浴(Branson,Danbury,CT,USA)使用聲處理方法，將4.92g上述10,000g/mol 66/33/1聚-L-乳酸-乙醇酸-L(+)-酒石酸共聚物(L-乳酸為66％，乙醇酸為32％，酒石酸為1％)溶解在11.58g乙腈(Ridel-de Haen,Seelze,Germany)中，得到PLGTA重量濃度為29.82％的溶液。
利用FMI旋轉(zhuǎn)活塞泵(FMI,Oyster Bay,NY,USA)，以2.0ml/min的速度，從一玻璃貯器中通過(guò)霧化器噴嘴送入上述共聚物/乙腈溶液。霧化器輸出能量置于50W檔，振幅為80％。將溶液霧化入6升夾套式反應(yīng)器中，該反應(yīng)器含有1.5升常用異丙醇試劑(Labscan,Dublin,Ireland)，利用CO2固體小丸(AIG,Dublin,Ireland)冷卻至-70℃，利用與攪拌馬達(dá)連接的4-葉片攪拌器在300rpm速度下攪拌。在整個(gè)持續(xù)大約8分鐘的霧化時(shí)間內(nèi)，異丙醇的溫度維持在-70℃或接近于-70℃。
霧化一旦完成，允許分散液在5.5小時(shí)內(nèi)自動(dòng)地溫?zé)嶂?0℃，然后在Whatman No.1濾紙(直徑為9cm)真空過(guò)濾。將濾紙和濾餅放置在含有硅膠干燥劑的干燥器中，在-110℃下通過(guò)自動(dòng)冷凍器收回真空裝置。24小時(shí)后回收到4.24g材料。所得顆粒的分析結(jié)果列在表Ⅶ中。
表Ⅵ實(shí)施例D0.1D0.5D0.9比面積(μm) (μm) (μm) (μ2/g)13 31 68 139 0.16人們應(yīng)當(dāng)理解，當(dāng)本發(fā)明與其詳細(xì)說(shuō)明書(shū)一起描述時(shí)，所述說(shuō)明書(shū)只是用來(lái)說(shuō)明本發(fā)明，而不是用來(lái)限度本發(fā)明的范圍，本發(fā)明包括所附的權(quán)利要求書(shū)范圍。本發(fā)明的其它方面、優(yōu)點(diǎn)以及改進(jìn)均屬于權(quán)利要求書(shū)要求保護(hù)的范圍。
權(quán)利要求
1．一種制備持續(xù)釋放離子結(jié)合物微粒的方法，所述離子結(jié)合物含有含游離羧基的可生物降解聚合物和含游離氨基的藥物，它們可彼此離子結(jié)合，所述方法包括步驟得到溶解有結(jié)合物的第一溶液，所述溶液包含丙酮、乙腈、乙酸乙酯、四氫呋喃或甘醇二甲醚；混合所述第一溶液和第一液體，形成第一分散液，其中所述第一液體與所述第一溶液相混溶，所述結(jié)合物在所述第一液體中不溶解，從第一分散液沉淀出來(lái)；以及從所述第一分散液中分離出所述結(jié)合物。
2．根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所述第一溶液以小液滴形式加入到所述第一液體中。
3．根據(jù)權(quán)利要求2的方法，其中所述第一溶液通過(guò)霧化噴嘴加入到所述第一液體中。
4．根據(jù)權(quán)利要求1至3任一的方法，其中所述藥物為肽。
5．根據(jù)上述任一權(quán)利要求的方法，其中可生物降解聚合物為聚酯或其共聚物，該聚酯由乳酸、ε-己酸、乙醇酸、三亞甲基碳酸酯或?qū)Χf烷酮制成。
6．根據(jù)上述任一權(quán)利要求的方法，其中所述藥物溶于上述第一液體。
7．根據(jù)上述任一權(quán)利要求的方法，其中所述可生物降解聚合物為含有乳酸或乙醇酸的聚酯或其共聚物。
8．根據(jù)權(quán)利要求7的方法，其中所述聚酯進(jìn)一步含有蘋(píng)果酸、酒石酸、檸檬酸、琥珀酸或戊二酸。
9．根據(jù)權(quán)利要求4-8任一的方法，其中所述肽為抑生長(zhǎng)素或LHRH。
10．根據(jù)上述任一權(quán)利要求的方法，其中所述第一液體為醇或水或其混合物。
11．根據(jù)權(quán)利要求10的方法，其中所述第一液體為維持在大約0℃至-30℃的乙醇或維持在大約0℃至-70℃的異丙醇。
12．根據(jù)上述任一權(quán)利要求的方法，其中所述第一溶液包含丙酮或乙腈。
13．根據(jù)上述任一權(quán)利要求的方法，其中所述第一溶液通過(guò)下述方法獲得將所述可生物降解聚合物溶解在第二液體中，得到第二溶液；將所述藥物溶解在第三液體中，得到第三溶液，其中所述第三液體與所述第一液體和所述第二液體混溶；以及將所述第二溶液與所述第三溶液混合，得到所述第一溶液，其中所述混合使得所述藥物與所述可生物降解聚合物離子結(jié)合，在所述第一溶液中得到所述結(jié)合物。
14．根據(jù)權(quán)利要求13的方法，其中在混合所述第二溶液和所述第三溶液之前，將NaOH或KOH加入到第二溶液中。
15．根據(jù)權(quán)利要求13或14的方法，其中所述第二液體為丙酮；所述第三液體為水或丙酮或其混合物。
16．根據(jù)權(quán)利要求1-12任一的方法，其中所述第一溶液通過(guò)下述方法獲得在第二液體中溶解所述可生物降解聚合物和所述藥物，得到所述第一溶液，在所述第一溶液中形成所述結(jié)合物。
17．根據(jù)權(quán)利要求16的方法，其中所述第二液體為丙酮或丙酮和水的混合物。
18．根據(jù)權(quán)利要求17的方法，其中所述可生物降解聚合物首先溶解在所述第二液體中，然后向所述第二溶液中加入堿，接著將所述藥物溶解在所述第二液體中。
19．根據(jù)上述任一權(quán)利要求的方法，其中所述結(jié)合物通過(guò)離心或過(guò)濾所述第一分散液而分離。
20．根據(jù)權(quán)利要求19的方法，其中所述第一溶液在分離所述結(jié)合物之前部分或全部地從所述第一分散液中蒸發(fā)出來(lái)。
21．根據(jù)權(quán)利要求20的方法，其中所述分離結(jié)合物在真空干燥之前與甘露糖醇水溶液混合。
22．一種球化持續(xù)釋放離子結(jié)合物的方法，所述離子結(jié)合物含有含游離羧基的可生物降解聚合物和含游離氨基的藥物，它們可彼此離子結(jié)合，所述方法包括步驟將所述結(jié)合物與第一液體混合，得到第一分散液，其中所述結(jié)合物為微粒形狀且不溶于所述第一液體；將所述第一分散液加熱至大于所述結(jié)合物Tg或Tm的溫度；將所述第一分散液冷卻至所述結(jié)合物的Tg或Tm溫度之下；將所述第一分散液與所述第二液體混合，得到第二分散液，其中所述第二液體與所述第一液體混溶，所述結(jié)合物不溶于第二液體；以及將所述結(jié)合物從所述第二分散液中分離出來(lái)。
23．根據(jù)權(quán)利要求22的方法，其中所述結(jié)合物在與所述第一液體混合之前具有平均直徑為5μm至200μn的微膠囊形狀，所述第一分散液在所述加熱或冷卻之前攪拌。
24．根據(jù)權(quán)利要求22或23的方法，其中所述可生物降解聚合物為由乳酸或乙醇酸制得的聚酯或其共聚物。
25．根據(jù)權(quán)利要求22-24任一的方法，其中所述藥物為肽。
26．根據(jù)權(quán)利要求22-25任一的方法，其中所述第一液體為油，所述第二液體為己烷。
27．根據(jù)權(quán)利要求22-26任一的方法，該方法進(jìn)一步包括步驟利用所述第二液體浸漬所述分離結(jié)合物；以及真空干燥所述浸漬結(jié)合物。
28．根據(jù)權(quán)利要求27的方法，其中所述分離結(jié)合物在真空干燥之前與甘露糖醇水溶液混合。
29．一種球化持續(xù)釋放離子結(jié)合物的方法，所述離子結(jié)合物含有含游離羧基的可生物降解聚合物和含游離氨基的藥物，它們可彼此離子結(jié)合，所述方法包括步驟將所述結(jié)合物溶解在第一液體中，得到第一溶液；攪拌所述第一溶液和第二液體，得到第一分散液，其中所述第二液體與所述第一溶液不混溶；從所述第一分散液中蒸發(fā)所述第一液體，從所述第一分散液中沉淀出所述結(jié)合物；以及從所述第一分散液中分離所述沉淀結(jié)合物。
30．根據(jù)權(quán)利要求29的方法，其中所述第一溶液以小液滴形式加入到所述第二液體中。
31．根據(jù)權(quán)利要求29或30的方法，其中所述第一液體為乙腈，第二液體為油。
32．根據(jù)權(quán)利要求31的方法，其中所述油為硅油、礦物油、芝麻油或植物油。
33．根據(jù)權(quán)利要求29-32任一的方法，其中所述可生物降解聚合物為由乳酸或乙醇酸制得的聚酯或其共聚物。
34．根據(jù)權(quán)利要求29-33任一的方法，其中所述藥物為肽。
35．根據(jù)權(quán)利要求29-34任一的方法，該方法進(jìn)一步包括利用第三液體浸漬所述分離結(jié)合物，其中所述第三液體與所述第二液體混溶且不是分離所述結(jié)合物的溶劑。
36．根據(jù)權(quán)利要求35的方法，其中所述第三液體為己烷、庚烷或辛烷。
37．根據(jù)權(quán)利要求29-36的方法，其中所述分離結(jié)合物在真空干燥之前與甘露糖醇水溶液混合。
38．一種制備持續(xù)釋放離子結(jié)合物微粒的方法，該方法基本上如上文描述和例證的方法一樣。
39．一種球化持續(xù)釋放離子結(jié)合物的方法，該方法基本上如上文描述和例證的方法一樣。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種球化持續(xù)釋放離子結(jié)合物的方法,該離子結(jié)合物包含含游離羧基的可生物降解聚合物和含游離氨基的藥物,它們彼此離子結(jié)合。
文檔編號(hào)A61K9/26GK1216465SQ97194067
公開(kāi)日1999年5月12日 申請(qǐng)日期1997年4月22日 優(yōu)先權(quán)日1996年4月23日
發(fā)明者弗朗西斯·伊格內(nèi)修斯, 托馬斯·恰拉里·洛曼, 沙拉拜·W·沙拉拜, 弗蘭克·讓-克洛德·圖羅 申請(qǐng)人:基納頓有限公司