專利名稱：：通過定量p的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及用定量P97來診斷和監(jiān)測阿爾茨海默氏病的方法。阿爾茨海默氏病(AD)是一種影響認知、行為和功能的神經(jīng)退化性疾病。最近的一個研究表明，AD可影響大約7％的75歲的人，85歲的則超過25％[加拿大健康與衰老研究工作組，Can.Med.Assoc.150.899-913(1994)]。其它的研究表明老年人中AD的發(fā)生率甚至更高[Evans，D.A.J.Am.Med.Assoc.262，2551-2559(1989)]。目前，對AD只有非常有限的治療選擇，僅有的定性診斷方法是大腦剖檢。AD的特征是大腦中有各種各樣的病理標記，這些標記包括主要含β淀粉樣蛋白(Aβ)的老年斑、帶有高磷酸化微管相關(guān)Tau蛋白的神經(jīng)原纖維結(jié)[Goedert，M.，Spillantini，etal.，Neuron8，156-160(1992)和Selkoe，D.J.Neuron6，487-498(1991)]、神經(jīng)元細胞死亡和突觸連接喪失[Terry，R.D.，etal.Ann.Neurology30，572-580(1991)]。據(jù)報道Aβ蛋白的異常沉淀導致大腦中認知記憶區(qū)域中的神經(jīng)元細胞死亡[Blass，J.P.Neurology，43，S25-38(1993)；和Price，D.L.Ann.Rev.Neurosci.9，489-512(1986)]。臨床上AD的診斷是通過神經(jīng)和神經(jīng)病理評價來完成的，遺憾的是在疾病的早期它不能檢測出來。一致的臨床診斷標準，如NINCDS-ADRDA已經(jīng)使臨床病理診斷的準確性提高到80％以上[McKhann，G.，etal.Neurology34，939-944(1984)]。一些試圖證明腦脊液(CSF)中某些蛋白質(zhì)的水平與AD有關(guān)的試驗只取得了有限的成功。例如，用于檢測CSF中Aβ的試驗表明，盡管早年發(fā)生AD的病人與晚年對照組相比，Aβ水平有輕微的升高[Nakamura，T.，etal.Ann.Neurol.36，903-911(1994)]，AD病人中總的Aβ水平與對照組相比沒有顯著差異[Shoji，M.etal.Science258，126-129(1992)]。但也有試驗顯示，在AD病人腦組織中蔓延到位置42的Aβ，Aβ1-42在擴散和老年淀粉樣斑塊中都占優(yōu)勢[Roher，A.，etal.J.Biol.Chem.268，3072-3083(1993)]，而AD病人CSF中的Aβ1-42比對照組顯著降低[Motter，R.，etal.Ann.Neurol.38，643-648(1995)]。在對可轉(zhuǎn)化為Aβ的淀粉樣前體蛋白(APP)的分泌型的研究中發(fā)現(xiàn)，AD病人CSF中可溶性的APP比對照組明顯降低[VanNostrand，W.E.etal.Proc.Natl.Acad.Sci.USA89，2551-2555(1992)]。而其它的研究僅顯示APP有輕微的降低[Palmeit，M.R.，etal.Neurol.40，1028-1034(1990)]甚至升高[Kitaguchi，N.，etal.Biochem.Biophys.Res.Comm.166，1453-1459(1990)]。用于監(jiān)測CSF中Tau蛋白的試驗顯示，盡管與對照組相比，AD病人的平均Tau水平升高，但與正常對照組[Motter，R.etal.Ann.Neurol.38，643-648(1995)Vigo-Pelfrey，C.etal.Neurology45，788-793(1995)]和患有其它神經(jīng)疾病對照組[Vandermeeren，M.，etal.J.Neurochem.61，1828-1834(1993)]也有相當程度的重疊。由于相互矛盾的結(jié)果和AD病人與對照組之間的結(jié)果重疊，其它的CSF診斷指標已被否認，例如與老年斑有關(guān)的αI-抗糜蛋白酶[Abraham，C.R.，Selkoe，D.J.&Potter，H.Cell.52，487-501(1988)]和遍在蛋白[Wang，G.P.，etal.ActaNeuropathol(Bert)82，6-12(1991)]。不但這些結(jié)果令人失望，而且通常用于病人診斷的樣品CSF也不能很好地得到。但是，商業(yè)性的診斷試驗已經(jīng)由AthenaNeuroscienceInc.開發(fā)，它用位于人染色體19上的阿樸脂蛋白E(ApoE)E4等位基因頻率來檢測CSF中Tau蛋白和Aβ1-42的水平?，F(xiàn)已有實驗證實，ApoE與老年斑有關(guān)，ApoEE4為純合子的人更有可能發(fā)展為AD病人[Sanders，A.M.，etal.Neurol.43，1467-1472(1993)]。據(jù)文獻報道，這種聯(lián)合分析能幫助醫(yī)生判定病人患有AD病的可能性[Motter，R.，etal.Ann.Neurol.38，643-648(1995)]。但是，這種試驗費時而且只是提供一個可能的答案。最近一個研究瞳孔反應的報告顯示，AD病人對乙酰膽堿阻滯劑托吡卡胺的稀溶液呈現(xiàn)高敏感性[Scinto，L.F.etal.Science266，1051-1054(1994)]。這種高敏感性首先在Down′s綜合征病人中發(fā)現(xiàn)，這種病人總是在中年發(fā)展為與AD病人非常相似的神經(jīng)病理[Olson，M.I.和Shaw.C.M.Brain92，147-156(1969)]。盡管該研究似乎給人以希望，但其結(jié)果不易被重復，并存在重疊和解釋上的一些困難，如眼疾病或眼顏色對試驗可能存在的影響[Loupe，D.N.etal.Opthalmology103，495-503(1996)]。最新文獻[Parshad，R，etal.Proc.Natl，Acad.Sci.USA93，5246-5150(1996)]描述了一種方法，即通過檢測修復DNA損傷能力的缺陷來鑒定AD細胞。該試驗在支持或表示病人不是AD的診斷方面證明是有用的。但是，該試驗還遠未達到臨床應用的水平，因為它費力而且需要多個培養(yǎng)細胞的步驟。最后，有研究已經(jīng)顯示用正電子發(fā)射X線斷層照相技術(shù)有可能檢測AD病人腦中葡萄糖代謝的變化[Reiman，E.M.，N.Engl，J.Med.334，752-758(1996)]。該試驗不適用于常規(guī)應用。人們已經(jīng)對AD的遺傳病因有著相當?shù)呐d趣，現(xiàn)已證明，幾個基因的突變使人易患少數(shù)幾種家族性AD。染色體21上的APP基因突變[Murrell，J.，etal，Science254，97-99(1991)]和Karlinsky，H.Neurology，42，1445-1449(1992)]與常染色體顯性、早年(＜65歲)的AD有關(guān)，早老基因(Presenilins)，例如與染色體14相連的S182[Schellenberg，G.D.etal.Science258，668-671(1992)；VanBroeckhoven，C.etal.NatureGenet2335-339(1992)和Sherrington，r.etal.Nature375，754-760(1995)]和與染色體1相聯(lián)的STM2的突變[Levy-Lahad，E.，etal，Science269，973-977(1995)和Rogaev，E.I.，etal.Nature376，755-778(1995)]與少數(shù)家族性AD有關(guān)。另外，在染色體19上發(fā)現(xiàn)的ApoE的E4等位基因可改變發(fā)展為晚年發(fā)作型AD的危險性[Sanders，A.M.，etal.Neurol.43，1467-1472(1993)和Rogaev，E.I.，etal.Nature376，775-778(1995)]。這些基因的發(fā)現(xiàn)在判定少數(shù)病人發(fā)展為AD的素因方面將具有相當?shù)膬r值，但遺傳學評估不適用于檢測或者監(jiān)測AD。P97抗原，又稱為黑轉(zhuǎn)鐵蛋白，與AD有關(guān)(PCT/CA93/00272，1994年1月20日公開，公開號為W094/01463)。P97屬于鐵結(jié)合蛋白中非常重要的一組，這組鐵結(jié)合蛋白包括血清轉(zhuǎn)鐵蛋白(Tf)、乳鐵蛋白和來自鳥蛋白的卵轉(zhuǎn)鐵蛋白[Baker，E.N.，Rumball，etal，TrendsBiochem，Sci.12，350-353(1987)]。P97能與鐵結(jié)合，參與細胞鐵攝取過程[Kennard，M.L.，etal.EMBOJ.14，4178-4186(1995)]。P97有兩種類型一種是通過糖基-磷脂酰肌醇錨狀物吸附在細胞表面上，另一種是主動分泌型[Food，M.R.etal.J.Biol.Chem.269，3034-3040(1994)]。最近一個研究發(fā)現(xiàn)，P97和轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(TR)高度集中于人腦毛細管內(nèi)皮。而轉(zhuǎn)鐵蛋白(Tf)本身主要集中于神經(jīng)膠質(zhì)細胞中[Rothenbergers，S.etal.BrainRes.712，117-121(1996)]。還有實驗表明，在AD病人死后腦組織中，P97在與淀粉樣斑有關(guān)的反應性小神經(jīng)膠質(zhì)細胞上有特異性表達[Jefferies，W.A.etal.BrainRes.712，122-126(1996)]。其它與老年AD斑無關(guān)的小神經(jīng)膠質(zhì)細胞以及患其它神經(jīng)病理疾病(帕金森氏病，進行性核上麻痹、亨遷頓病和肌萎縮性側(cè)索硬化)的腦組織的小神經(jīng)膠質(zhì)細胞均不能表達可檢測水平的P97。本發(fā)明的發(fā)明人特別說明，跟健康的個體相比，可溶性鐵結(jié)合蛋白，P97在阿爾茨海默氏病人的血清和腦脊液(CSF)中顯著升高。來自阿爾茨海默氏病人樣品中的P97的量經(jīng)常比來自健康個體樣品中的高。本發(fā)明的發(fā)明人還特別說明，隨著病程的延長，血清中P97的水平升高。另外，在可觀察到AD癥狀的大概兩年前，P97的水平開始升高。這種特殊的P97定量能鑒別患有AD的病人，用于監(jiān)測疾病的發(fā)作和縱向進展。作為上述發(fā)現(xiàn)的結(jié)果，本發(fā)明的發(fā)明人設(shè)計了一個簡單和可靠的在體液中檢測AD的試驗，該試驗在AD病的評估和處理方面都很有價值。利用本發(fā)明進行AD的早期診斷可以給家庭更多的時間來計劃正確照顧阿爾茨海默氏病人，減少出現(xiàn)類似阿爾茨海默氏病病狀如抑郁或中風的可能性。本發(fā)明的方法能用于有效治療AD的新策略。盡管已開發(fā)許多用于治療AD的藥物，但沒有一種便宜而又快速的用于研究這些藥力效果的方法?，F(xiàn)在臨床上用于測定藥物效力的試驗是復雜、勞動量大的神經(jīng)行為評估。概括地說，本發(fā)明涉及一種通過定量病人體液樣品中的P97來診斷阿爾茨海默氏病的方法，它包括以下步驟a)從懷疑患有阿爾茨海默氏病的人體中獲取體液樣品，從而得到試驗樣品；b)測定試驗樣品中P97的量；c)比較試驗樣品和對照樣品中P97的量。其中，試驗樣品中P97的量比對照樣品中的高表示可能患有阿爾茨海默氏病。本發(fā)明還涉及一種通過定量患有阿爾茨海默氏病人體液樣品中的P97來監(jiān)測該病進展的方法，它包括以下步驟a)從阿爾茨海默氏病人中獲取體液樣品，從而得到試驗樣品；b)測定試驗樣品中P97的量；c)比較試驗樣品和以前獲得的第一個試驗樣品中P97的量。其中，試驗樣品中P97的量比第一個試驗樣品中的高表示病人的阿爾茨海默氏病情在進展。本發(fā)明進一步涉及一種通過定量阿爾茨海默氏病人體液樣品中的P97來監(jiān)測阿爾茨海默氏病治療的方法，包括以下步驟a)從已接受治療的阿爾茨海默氏病人獲取體液樣品，從而得到試驗樣品；b)測定試驗樣品中的P97的量；c)比較試驗樣品和治療前從病人中獲得的體液樣品中P97的量。其中，試驗樣品中與治療前樣品中P97量的差異表示治療的效果。本發(fā)明還進一步涉及用于完成本發(fā)明方法的試劑盒，它包括檢測試驗樣品中P97存在的試劑、檢測P97存在的所有試劑和用于完成本發(fā)明方法的合適的支持用品。參照下面的詳細描述和附圖，本發(fā)明的上述各特征及其它特征將很清楚。另外，本發(fā)明中引用的專利文獻及出版物全部合并于此作為參考。圖1為P97標準品的標準曲線；圖2是基于年齡的阿爾茨海默氏病人與對照組的血清P97水平的比較；圖3是基于病程的阿爾茨海默氏病人與對照組的血清P97水平的比較；圖4是基于年齡的阿爾茨海默氏病人與對照組的血清中轉(zhuǎn)鐵蛋白水平的比較；圖5是不同年齡的阿爾茨海默氏病人與對照組之間血清P97濃度的比較；圖6表示從病人首次被觀察到AD癥狀起，AD病人血清P97濃度隨時間的變化；圖7表示不同年齡阿爾茨海默氏病人與對照之間血清轉(zhuǎn)鐵蛋白的比較；圖8表示AD病人與其配偶之間血清P97濃度的比率。本發(fā)明提供了通過定量病人體液樣品中的P97來監(jiān)測和診斷阿爾茨海默氏病人的方法。該方法涉及從病人獲得體液樣品?！安∪恕币辉~指患有阿爾茨海默氏病或者被懷疑患阿爾茨海默氏病的溫血動物如哺乳動物，優(yōu)選人。病人可以存在或不存在認知損害，病人也可以正在接受AD的治療?？傊?，本發(fā)明的診斷方法用于判定一個沒有表現(xiàn)出任何AD癥狀的個體是否具有發(fā)展為AD的因素或者是否有可能發(fā)展為AD。試驗樣品可以從多種體液中獲得，例如血清、淋巴液、膽汁、唾液或腦脊液。細胞樣品也可以被用作試驗樣品，如血細胞，優(yōu)選單核細胞。特別地，表達P97的激活巨噬細胞可被測定。優(yōu)選的是，試驗樣品從血清或CSF中獲得，最優(yōu)選為血清。試驗樣品可以用已知技術(shù)獲得。在一個特別優(yōu)選的實施例中，血清樣品來自病人。樣品在使用前可凍藏(例如在-80℃)，經(jīng)純化和(或)經(jīng)稀釋后使用，例如在Pandex緩沖液DMEM(含有0.1％NaN3和1.0％BSA)稀釋的50％v/v胎牛血清(FCA)。試驗樣品中的P97用允許在試驗樣品中定量P97的試劑進行定量。優(yōu)選的是能辨認和結(jié)合試驗樣品中P97的試劑。在本發(fā)明的一實施例中，該試劑為一種抗體。這里使用的“抗體”一詞包括多克隆抗體和單克隆抗體、與P97能反應的多種抗體的混合物(例如，與P97能反應的不同類型單克隆抗體的混合物)、整個抗體、足以與P97結(jié)合的抗體生物學功能片段、包括來自不同種屬的抗體的融合抗體、雙功能抗體以及四聚抗體。這些抗體可以用常規(guī)方法制備。例如，用標準方法通過用P97肽可以制備多克隆抗血清或單克隆抗體。用能激發(fā)哺乳動物抗體反應的具有免疫原性的肽使哺乳動物(例如小鼠、倉鼠和兔)產(chǎn)生免疫。使肽具有免疫原性的技術(shù)包括載體結(jié)合或其它本
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熟知的技術(shù)。例如，肽可以與佐劑一起給予。免疫反應過程可以通過測定血漿或血清中抗體的效價進行監(jiān)測。以免疫原為抗原，標準的ELISA或其它的免疫分析方法可用于測定抗體水平。免疫之后，可獲得抗血清，需要時，可從血清中分離出多克隆抗體。單克隆抗體的制備，從經(jīng)免疫的動物中富集抗體產(chǎn)生細胞(淋巴細胞)，然后用標準體細胞融合方法使之與骨髓瘤細胞融合，不斷增殖這些細胞，可產(chǎn)生雜交瘤細胞。這些技術(shù)都是本
技術(shù)領(lǐng)域：
中熟知的技術(shù)(例如雜交瘤技術(shù)最初由Kohler和Milstein建立(Nature256，495-497(1975))以及其它技術(shù)例如人B淋巴細胞雜交瘤技術(shù)(Kozbor等，Immunol.Today4，72(1983))、制備人單克隆抗體的EBV雜交瘤技術(shù)(Cole等，MonoclonalAntibodiesinCancerTherapy(1985)AllenR.Bliss，Inc，77-96)和組合抗體庫的篩選(Huse等，Science246，1275(1989))。雜交瘤細胞可以用免疫化學方法篩選，用于制備與P97特異反應的抗體，從而分離出單克隆抗體。另外，由Genpharm建立的模型即SCID-hu小鼠，可用于制備抗體，或與p97反應的抗體片段?？贵w還可以從各種來源得到，包括實驗室和保藏機構(gòu)，如美國典型培養(yǎng)物保藏中心。例如，抗P97小鼠單克隆抗體，HybC(33B6E4)可以從Shuen-KueiLiao博士(McMasterUniversity，Hamilton，ON)得到；抗P97單克隆抗體9B6可以從加拿大，BC，UBC生物技術(shù)實驗室得到；抗P97小鼠單克隆抗體L-235可以從美國典型培養(yǎng)物保藏中心得到[ATCC-HB8446L235(H-19)]。能識別和結(jié)合試驗樣品中的P97并且定量時可以在樣品中存在的各種其它試劑可用于本發(fā)明的方法中。例如，轉(zhuǎn)鐵蛋白受體能與P97結(jié)合，可用于定量試驗樣品中的P97。另外，P97可與鐵及其它金屬結(jié)合，用標準方法可用于定量試驗樣品中的P97(參見PCT/CA93/00272，1994年1月20日公開，公開號為W094/01463，該文獻描述了鐵結(jié)合的測定)。本發(fā)明的方法中使用的試劑可用能檢測的物質(zhì)進行顯示性標記，或者隨后作顯示性的標記。能檢測的物質(zhì)包括各種酶、熒光物質(zhì)、發(fā)光物質(zhì)和放射性物質(zhì)。適用的酶包括辣根過氧化物酶、生物素、堿性磷酸酶、β-半乳糖苷酶或乙酰膽堿酯酶；適用的熒光物質(zhì)包括7-羥基香豆素、熒光素、異硫氰酸熒光素、硫氰酸、二氯三嗪胺熒光素、丹磺酰氯或藻紅素；發(fā)光物質(zhì)有氨基苯二酰一肼；適用的放射性物質(zhì)包括放射性I125、I131或氚。本發(fā)明的方法中使用的試劑也可隨后作顯示性標記，例如用能識別和結(jié)合該試劑的物質(zhì)進行標記。舉例來說，如果試劑為一抗體(如小鼠IgG抗體)，用本發(fā)明中描述的顯示性物質(zhì)標記的與該試劑反應的第二抗體(例如羊抗鼠γ球蛋白)可用于檢測該試劑，從而可用于P97的定量。在已知的免疫測定方法中，抗體試劑可用于檢測和定量P97，這些免疫測定方法是依靠P97抗原決定簇和抗體之間相互結(jié)合作用進行的。例如放射免疫測定法、酶免疫測定法(如ELISA)、免疫熒光法、免疫沉淀反應、乳汁凝聚試驗、血細胞凝聚、逆流免疫電泳(CIEP)、放射免疫沉淀、DotBlot測定、抑制或竟爭測定和夾層測定。在一優(yōu)選實施例中，基于快速免疫熒光技術(shù)的一種測定方法[如Solley等在1984“粒子濃度熒光免疫測定”(PCFIA)，J.Immunol，Meth.，67，21-35中描述的]可用于定量或測定樣品中P97的水平。該方法使用了與亞微粒聚苯乙烯珠結(jié)合的捕獲抗體(Ab)。這種“被激活的”固定相用作目的蛋白質(zhì)的特異吸附劑。對該蛋白質(zhì)也有特異性的熒光標記的第二抗體與固定捕獲相結(jié)合形成混合物，該混合物的熒光信號與蛋白質(zhì)的濃度成比例。反應可在特別設(shè)計的96孔板(分類22-400-1；IdexxLaboratoriesInc.，Wesbrook，ME)上進行。每個孔裝有一張0.22μm的醋酸纖維素膜，它允許孔中的液體在真空下被吸出，從而濃縮孔底的熒光混合物。沖洗板后，用Pandex熒光濃度分析儀(FCA；Idexx)對每個孔進行熒光讀數(shù)。測定中使用的活化珠可為用抗P97抗體包被的羧酸聚苯乙烯粒子(0.77μm，0.25％V/V；Idexx)。適用的抗P97抗體包括抗P97小鼠單克隆抗體，HybC(33B6E4；Dr.Shuen-KueiLiao，McMasterUniversity，Hamilton，ON)，9B6(Dr.WilfJefferies，BiotechnologyLaboratory，UBC，BC)，或者抗P97兔抗血清(Dr.WilfJefferies，BiotechnologyLaboratory，UBC，BC)。熒光標記的第二抗體可為抗P97小鼠單克隆抗體，L235(AT′CC-HB8446L235(II-19)或抗P97兔抗血清(Dr.WilfJefferies，BiotechnologyLaboratory，UBC，BC)，然后用異硫氰酸熒光素(FITC)使其熒光化。P97標準品可用P97來制備，例如，用免疫親和層析法從磷脂酰肌醇磷脂酶C(PI-PLC)處理的轉(zhuǎn)染過人P97的中國倉鼠卵巢(CHO)細胞的上清液中純化制備。在一特別優(yōu)選的實施例中，血清P97測定可在一特制的96孔板上(22-401-1；Idexx)進行，然后用FCA(Idexx)進行熒光讀數(shù)。血清樣品用50％FCA溶液適當釋釋后，96孔板上每孔加60μl血清樣品。P97標準品用于制備標準曲線。樣品標準曲線的制備表示在表1中，其標準曲線顯示在圖1中。本發(fā)明的發(fā)明人已發(fā)現(xiàn)，在可觀察到阿爾茨海默氏病癥狀的大約前2年，P97水平開始升高。因此，本發(fā)明的方法可用于診斷沒有明顯的阿爾茨海默氏病臨床癥狀的病人是否患有阿爾茨海默氏病，或者是否有可能發(fā)展為阿爾茨海默氏病，從而為該病提供早期預后。診斷阿爾茨海默氏病時，可把病人樣品中P97的濃度與來自健康人樣品中P97的濃度范圍作比較，這個濃度范圍可通過前瞻性和(或)回顧性的統(tǒng)計研究建立。健康人可基于NINCDS-ADRDA標準和(或)MMS試驗結(jié)果加以選擇。優(yōu)選的是，健康病人沒有明顯的臨床意義上的認識障礙或者其它臨床或病理疾病。也可以通過發(fā)現(xiàn)同一病人P97水平比以前定量的水平高作出診斷。與對照組相比，試驗樣品中P97水平升高表示病人患有阿爾茨海默氏病，或有可能發(fā)展為阿爾茨海默氏病。舉例說明，測定有代表性數(shù)量的對照人血清中P97水平，計算其平均值，或者用P97水平對年齡如圖5所示作圖，建立對照人的回歸直線基線(……圖5)。試驗樣品中含有的P97水平高于平均值或基線的表示有阿爾茨海默氏病或有阿爾茨海默氏病的可能?？傊∪藰悠分械腜97的水平比對照人血清中P97的水平高1.5倍或者更高，特別是2倍或者更高，優(yōu)選2到9倍時，表示有可能患有阿爾茨海默氏病?，F(xiàn)已發(fā)現(xiàn)，血清中P97的水平隨著疾病的進展而升高(參見圖3和圖6)。因此，可把病人樣品中的P97水平與同一病人以前樣品中的P97水平作比較來監(jiān)測阿爾茨海默氏病的進展。阿爾茨海默氏病的進展及評價也可通過比較試驗樣品中的P97水平和對照樣品中或其它患阿爾茨海默氏病人樣品中P97的水平來進行。這里的后一種比較是基于體液樣品中P97的水平與病程進展之間的線性關(guān)系。舉例說明，病人的病程可以通過定量病人樣品中P97的水平并從標準曲線(例如，如圖6所示的圖)上外推進行判定。本發(fā)明的方法還可以用于監(jiān)測或評價阿爾茨海默氏病的治療效果。在治療前、治療期間和/或治療后提取樣品，然后根據(jù)該治療對樣品中P97濃度的影響來判定治療的效果。一種有效的治療將使病人樣品中P97的水平比對照樣品中的低。我們已注意到，本發(fā)明的方法可用于監(jiān)測對阿爾茨海默氏病的任何治療方法的效果，特別是監(jiān)測那些被推測對阿爾茨海默氏病有治療效果的藥物組合物的效果。這些對阿爾茨海默氏病有一定治療效果的藥物組合物包括那些可恢復膽堿能功能的物質(zhì)，例如，他克林、卵磷脂、石杉堿A和B、加蘭他敏、甲基磺酰氟、麥扁豆堿和地波尼(deprenyl)。適用于本發(fā)明定量P97方法的試劑可包裝成使用方便的試劑盒，盒中提供用合適容器裝好的必備物質(zhì)。例如，這種試劑盒可包括與P97反應的抗體、和用本發(fā)明中描述的方法來定量與樣品中P97結(jié)合的抗體的必備試劑。該試劑盒還包括用于實施本發(fā)明方法的合適支持物。下面的實施例描述了本發(fā)明的發(fā)明人定量患阿爾該默氏病病人的樣品和對照組樣品中P97的方法及其意義。所提供的實施例是用來說明而不是限制本發(fā)明。實施例1阿爾茨海默氏病人血清中P97水平研究人血清中P97水平的測定方法是基于1984年介紹的一種快速免疫熒光技術(shù)，“粒子濃度熒光免疫測定”(PCFIA)而建立起來的(Jolley等，1984，J.Immunol.Meth.，67，21-35)。該方法使用了與亞微粒聚苯乙烯珠結(jié)合的捕獲抗體。這種“激活的”固定相用作目的蛋白質(zhì)的特異吸附劑。然后，對蛋白質(zhì)也具有特異性的熒光標記的第二抗體與固定捕獲相結(jié)合，形成一個混合物，該混合物的熒光信號與蛋白質(zhì)的濃度成比例。反應在特殊設(shè)計的96孔板(分類22-400-1；IdexxLaboratorlesInc.Wesbrook，ME)上進行。每個孔含有一張0.22μm的醋酸纖維膜，它允許孔里的液體在真空下被吸出，從而濃縮孔底的熒光混合物。沖洗反應板，然后用Pandex熒光濃度分析儀(FCA；Idexx)在不同的波長對每個孔進行熒光讀數(shù)。測定方法中使用的活化珠是用下面的抗體包被羧酸聚苯乙烯粒子(0.77μm，0.25％V/V；Idexx)制成的，這些抗體是抗P97小鼠單克隆抗體，HybC(33B6E4；Dr.Shuen-KueiLiao，McMasterUniversity，Hamilton，ON)或者9B6(Dr.WilfJefferies，BiotechnologyLaboratory，UBC，BC)或者抗P97兔抗血清(Dr.WilfJefferies，BiotechnologyLaboratory，UBC，BC)。1mL粒子(經(jīng)混旋和聲處理后)進行離心，然后用8毫升0.1M，PH4.5的MES[2(4-嗎啉代)乙磺酸]緩沖液重新懸浮。加入5.0毫克EDC[1-乙基-3-(3-二甲基氨丙基)碳化二亞胺]后，再加入1毫升抗體(1mg/mL)?；旌衔锒ㄆ诨煨?，室溫下孵育過夜，然后6000rpm離心10分鐘(SorvalHB4)，用20mL含0.2％疊氮鈉(NaN3)和2％W/V牛血清白蛋白(BSA)的磷酸鹽緩沖液(PBS)重新懸浮微珠。6000rpm離心10分鐘，被包被的微珠4℃保存于32毫升含0.2％NaN3和2％BSA的PBS中(抗體的濃度為25μg/mL)。熒光標記的第二抗體是用抗P97小鼠單克隆抗體、L235(ATTC-HB8446L235(H-19))或抗P97兔抗血清(Dr.WilfJefferies，BiotechnologyLaboratory，UBC，BC)通過下述異硫氰酸熒光素(FITC)熒光化后制成的。往PH9.5磷酸鹽緩沖液(0.15MNa2HPO4)加入FITC使?jié)舛冗_到1mg/mL。無疊氮化物存在時，往FITC溶液(0.15mL濃度為1mg/mL的FITC溶液)中加入0.5mL濃度為4mg/mL的抗體。在室溫下避光孵育過夜。熒光化的Ab在4℃貯存?zhèn)溆?。P97標準品是用免疫親和層析法從磷脂酰肌醇磷酸脂酶C(PI-PLC)處理的轉(zhuǎn)染過人P97的中國倉鼠卵巢(CHO)細胞的上清液中純化制備的。用1mL內(nèi)含PI-PLC(300mU/mL)的PBS處理109轉(zhuǎn)染過的CHO細胞，離心、回收細胞上清液，然后用0.2μm的膜過濾。上清液上樣于抗體(Hybc)免疫的Affi-Gel10(Bio-Red，MississaugaONT)抗體柱(1×10)中。柱預先經(jīng)過用PH7.2的PBS沖洗和再生。結(jié)合的P97先用0.1M、PH3.0的枸櫞酸洗脫，然后再用PH9.0的1MTris-HCI緩沖液中和。純化的P97用30,000MW超濾膜濃縮，用PBS透析，然后無菌過濾。標準品P97的濃度用在280nm1％＝12.0cm-1下的P97消光系數(shù)測定(Baker等，1992)。血清樣品制備如下。對每個病人需要以下樣品(a)在-20℃保存的血清和(b)在4℃保存的新鮮血。在測試樣品之前，離心新鮮血，回收血清。兩種類型的樣品經(jīng)純凈和(或)用在Pandex緩沖液(含0.1％W/VNaN3和1.0％w/vBSA的DMEM)稀釋50％V/V胎牛血清(FCA)后進行測試。血清P97的測定是按下面方法在特制的96孔板(22-401-1；Idexx)上進行，用FCA(Idexx)進行熒光讀數(shù)。血清樣品用50％FCA溶液作適當稀釋后，96孔板上每孔加入60μl血清樣品。每份樣品測試二或三次。每塊板的P97標準品也測二次(300，150，120，90，60，30，15，9，6ng/mL)。這些標準品用50％FCA溶液稀釋，用于制備標準曲線。表1表示樣品標準曲線的制備，圖1為所制的標準曲線。每份樣品中加入20μl包被的抗P97微珠(大約25μgAb/mL)，然后室溫孵育40分鐘。輕拍96孔板的邊緣，以便輕微混勻板上每孔中的物質(zhì)。孵育后，取20μl熒光化的第二抗P97抗體(用Pandex緩沖液1/75稀釋(約25～40μg/mL))加入樣品和微珠的混合物中，室溫孵育5～10分鐘。把板置于FCA中，抽干液體，用含0.1％NaN3和1％w/vBSA的PBS洗3～5次。然后用485/535nm濾光片25×對已抽干的反應板讀數(shù)。血清樣品從阿爾茨海默氏病(AD)人、作對照用的配偶和無關(guān)的對照人中獲取。表2表示阿爾茨海默氏病人的P97血清濃度。疾病持續(xù)時間表示從診斷為阿爾茨海默氏病以來的年數(shù)。但是，很有可能病人在診斷之前的某一時間就患有此病。表3表示AD病人和對照樣品中的P97血清濃度。無關(guān)對照的血清中P97的水平在2.4至12ng/mL的范圍之間，而且P97水平并不隨年齡增長而增長(見圖2)。如圖2所示，AD病人血清中P97的水平與對照相比顯著升高，而且P97水平隨著病人年齡的增加而升高。AD病人血清P97的水平至少有20ng/mL。觀察到的最大濃度為300ng/mL。重要的是，如圖3所示，我們發(fā)現(xiàn)AD病人血清中P97水平與其病程有關(guān)。隨著病程的延長，病人血清中的P97水平升高。對AD病人和對照人樣品中的血清轉(zhuǎn)鐵蛋白的水平也進行了測定。結(jié)果在AD病人和對照人之間血清中轉(zhuǎn)鐵蛋白的水平?jīng)]有顯著差異，年齡和血清轉(zhuǎn)鐵蛋白水平也沒有相關(guān)性(圖4)對一組以前獲得的日本AD病人及對照人CSF和血清樣品中的轉(zhuǎn)鐵蛋白和P97水平也進行了測定。這些樣品已冷凍保存了2年，其間還經(jīng)過了凍融，因此，現(xiàn)在實測的蛋白質(zhì)水平可能不能反映最初樣品中存在的蛋白質(zhì)的絕對水平。但是，表4中表示的結(jié)果證實了上面的發(fā)現(xiàn)，AD病人血清中P97的水平比對照人中的水平高。該結(jié)果也顯示AD病CSF中P97水平比對照人的高。AD病人血清和CSF中的轉(zhuǎn)鐵蛋白水平不比對照人的高。實施例2本實施例2提供了對實施1中舉例說明的研究更完整的說明和討論。下面的材料和方法用于實施例2描述的研究。加拿大人。AD病人(N＝27)選自那些參加Vancouver醫(yī)院對阿爾茨海默氏病及相關(guān)疾病的UBC臨床試驗計劃的人。按照NINCDS-ADRDA標準，所有AD病人均被診斷為“臨床上可疑”。對所有的AD病人都確定了其認知癥狀的估計持續(xù)時間。病人在進行該研究時沒有服用實驗藥物。作為對照的人，或者隨機選自健康志愿者(N＝15)或者其配偶，都被證實沒有臨床上意義的明顯認知障礙。本實施例進行了兩個研究a)靜脈穿刺后立即在4℃保存血清樣品，24小時內(nèi)測定其中的P97和Tf。年齡從51到82.5歲(平均年齡為66.4±16.5歲)的17名AD病人(10女，7男)與年齡在28歲到76歲(平均年齡為52.33±16.5歲)的15名對照人(6女，3男)進行比較。b)來自配偶對(N＝10對)的血清樣品在靜脈穿刺后立即在-20℃凍存。樣品從配偶對中抽取的同時冷凍，并對其進行分析。AD病人(7女，3男)，年齡從54到86歲(平均年齡為70.6±10.47歲)與他們沒患AD的配偶(3女，7男)年齡從53到84歲(平均年齡為69.9±10.21歲)進行比較。日本人。年齡從61到80歲(平均年齡為71.5±6.52歲)的8名AD病人(6女，2男)與年齡從57到72歲(平均年齡為66.5±6.4歲)的7名對照人(4女，3男)進行比較。AD病人和對照人的血清樣品和CSF樣品從chiba大學醫(yī)學院神經(jīng)學系獲得。所有AD病人按NINCDS-ADRDA標準都被診斷為“臨床可疑”。對照來自患有以下神經(jīng)病理疾病的老年人1帕金森氏病、2脊髓小腦退化、1肌萎縮性側(cè)索硬化、2頸椎關(guān)節(jié)強硬和1外周神經(jīng)病。血清樣品和CSF樣品在抽取后立即在-20℃凍存，分析前一起解凍。P97的測定。樣品經(jīng)純凈和用含50％V/V胎牛血清、0.1％疊氮鈉、1.0％W/V牛血清白蛋白的DMEM緩沖液釋釋后進行測定?？筆97小鼠抗體，HybC用于包被羧酸聚苯乙烯(0.77μm)捕獲微粒，抗P97小鼠單克隆抗體，L235(ATCC-HB8446L235(H-19))被熒光化(Kennard，M.L，EMBOJ，14，4178-4186(1995))。P97標準品用含300至1ng/mL的胎牛血清的DMEM緩沖液新鮮配制。測定方法包括在一特制的96孔板上分別混合60μl樣品和20μl捕獲微粒(約25μg抗體/mL)、60μl標準品和20μl捕獲微粒(約25μg抗體/mL)，室溫孵育40分鐘。接著，加入20μl熒光化的第二抗體(大約25到40μg/mL)，混合物室溫再孵育5到10分鐘。把反應板置入“Pandex熒光濃度分析儀”(Jolley，M.J.Immunol.Methods67，21-35(1984))，抽干液體，用含0.1％疊氮鈉和1.0％牛血清白蛋白的PBS沖洗4次。抽干的反應板用485/535濾光片25×進行讀數(shù)。P97的濃度用由P97標準品制備的標準曲線確定，該標準曲線中熒光與P97的濃度相關(guān)。所有樣品在各種稀釋度下進行三次測定，濃度為全部結(jié)果的平均值。轉(zhuǎn)鐵蛋白的測定。該測定方法是基于前面描述的“微粒濃度熒光免疫測定?！庇每谷宿D(zhuǎn)鐵蛋白山羊抗血清包被捕獲微粒，將抗人轉(zhuǎn)鐵蛋白綿羊抗血清熒光化。轉(zhuǎn)鐵蛋白標準品新鮮配制成濃度范圍3至5.0μg/mL。所有樣品在各種稀釋度下進行三次測定，濃度為全部結(jié)果的平均值。本發(fā)明建立了一個能監(jiān)測人體液中P97濃度的定量方法。該方法基于快速免疫熒光技術(shù)“微粒濃度熒光免疫分析”，這種分析方法使用結(jié)合亞微粒聚苯乙烯微珠的捕獲抗體和熒光標記的第二抗體(Kennard，M.L.等，Biotech，Bioeng，42，480-486，1993)。修改的夾心方法是在每孔含有0.22μm醋酸纖維膜的特殊設(shè)計96孔板上進行的?？字械囊后w，能夠在真空下被抽出，使每孔底的熒光混合物濃縮。板被沖洗后，對每孔進行熒光讀數(shù)，熒光與P97的濃度成比例。我們發(fā)現(xiàn)P97在人血清中部分不穩(wěn)定，隨著保存時間的延長，它將失去抗原性。表5表示保存溫度和時間對P97可檢測濃度的影響，最初的血清最高濃度為100ng/mL。在60℃下熱休克30分鐘，樣品中的P97不能檢測到(驚奇的是Tf好象不受這種處理的影響)。樣品室溫下保存超過48小時即失去20％抗原性。然而，盡管進一步地凍融將減少P97的檢測濃度，但是在4℃和-20℃保存超過48小時，樣品是相對穩(wěn)定的。因為這些原因，在把AD病人血清中P97濃度與認知正常的對照人進行比較時，血清樣品在抽取后立即在4℃保存，并在24小時以內(nèi)進行測定。圖5表示所有的AD病人血清中P97的水平比對照人高，它們之間沒有重疊。基于配對t檢驗(t0.05＝12.96，P＝6.6×10-10)，AD病人組的P97濃度平均值(N＝17，43.8±11.6ng/mL)與對照組的平均值(N＝15，7.04±3.28ng/mL)相比有顯著差異。至今尚只有另外一個對人血中P97的研究(Brown，J.P.等，Proc，Natl，Acad，Sci，USA78，539-543，1981)，檢測出的P97在1.3至2.7ng/mL之間。盡管對照組的平均年齡(52.3±16.5歲)比AD病人組的平均年齡(66.4±17.52歲)小，但線性回歸顯示在P97血清濃度和實驗對象年齡之間不存在顯著相關(guān)(AD病人N＝17，回歸直線斜率＝0.359，R＝0.30，P＝0.249；對照N＝15，回歸直線斜率＝-0.07，R＝-0.35，P＝0.197)。而且，用AD病人的數(shù)據(jù)對病人被首次觀察到AD癥狀時起的時間作圖(圖6)，其線性回歸顯示升高的血清P97濃度和病程的進展之間存在顯著相關(guān)(N＝17，回歸直線斜率＝3.3，R＝0.82，P＝0.0003)。最后，由回歸直線推斷出的對照的P97最大濃度顯示P97的濃度可能在病人被觀察到AD癥狀前約2年開始升高。為了消除AD病人中P97非特異性升高的可能性，我們分析了AD病人和對照人血清中的另一個血鐵結(jié)合蛋白，轉(zhuǎn)鐵蛋白。圖7表示在兩種人群之間Tf濃度沒有什么差異。用配對t檢驗統(tǒng)計分析(t0.05＝0.41，P＝0.69)，AD病人組的平均Tf濃度(N＝17，1.81±0.71mg/mL)與對照組的平均Tf濃度(N＝15，1.93±0.78mg/mL)之間沒有顯著差異。在另一個研究中，將AD病人血清中P97的水平與其認知正常的配偶相比，以判定是否可能存在飲食、生活模式或其它普通的因素對血清中P97濃度的影響。在這個研究中，血清樣品在抽取后立即在-20℃凍存。圖8比較了10對AD病人(70.6±10.47歲)及其配偶(69.9±10.21歲)血清中P97水平的比值。在全部實驗中，AD病人血清中P97的水平比其配偶的高，比值在1.6至32.5之間(平均值為10.17±9.08)。該發(fā)現(xiàn)說明環(huán)境因素可能不是AD病人血清中P97水平升高的原因。血清和CSF中P97和轉(zhuǎn)鐵蛋白的水平在第三個研究中，我們分析了日本的AD病人和對照人血清和CSF凍存樣品中的Tf和P97。本研究中使用的對照人為患各種其它神經(jīng)病理疾病的人，對他們進行測試是為了確定患其它神經(jīng)病理疾病的人血清中P97水平是否升高。然而，在分析之前，這些血清樣品被一起凍融過，這樣很遺憾地降低了P97檢測濃度。因此，在表6中有幾個數(shù)據(jù)值得注意。AD病人CSF中P97的平均濃度(N＝5，22.4±9.21ng/mL；平均年齡為72.4±5.99歲)比對照的高(N＝5，8.48±4.02ng/mL；平均年齡67.2±6.82歲)。基于配對的t檢驗(t0.05＝2.90，P＝0.044)，它們之間有顯著差異。血清中的P97也是如此，基于配對的t檢驗(t0.05＝4.52，P＝0.02)，AD病人P97平均濃度(N＝4，11.3±2.76ng/mL；平均年齡為74.3±5.63歲)與對照組的P97平均濃度(N＝6，2.01±1.75ng/mL；平均年齡為65.6±6.52歲)之間存在著顯著差異。盡管總體濃度降低很大，但這與圖5的數(shù)據(jù)是一致的。增加其它的觀察，P97的濃度與病人的年齡和性別不相關(guān)。這些數(shù)據(jù)還說明監(jiān)測CSF，其中P97水平比血清的升高2至4倍時，即可提供有價值的AD病的發(fā)作及進展的信息。比血清中P97穩(wěn)定得多的CSF和血清中的Tf濃度的平均值，對AD病人和對照人來說實質(zhì)上相同的?；谂鋵Φ膖檢驗(t0.05＝2.05，P＝0.18)，AD組CSF中Tf濃度的平均值(N＝8，20.35±4.78μg/mL；平均年齡為71.5±6.52歲)與對照組(N＝7，16.0±μg/mL；平均年齡67.7±6.32歲)之間沒有顯著差異?；谂鋵Φ膖檢驗(t0.05＝0.38，P＝0.72)，AD組血清的平均Tf濃度(N＝4，2.24±3.6mg/mL；平均年齡為74.3±5.63歲)與對照組(N＝5，2.26±7.0mg/mL；平均年齡為63.4±4.5歲)之間也沒有顯著差異。我們還注意到，血清中Tf的水平比CSF中的高得多(約100倍)這個有趣的現(xiàn)象，這與P97相反，血清中P97的水平比CSF中的低。這些數(shù)據(jù)暗示腦中的P97具獨特的功能，因為好象Tf是主動從腦排出而P97則不是。在本研究中，一種生物化學標記分子被鑒定，它在AD病人血清中的水平始終比有關(guān)或無關(guān)的對照人中的高。本發(fā)明的發(fā)現(xiàn)人已發(fā)現(xiàn)在AD病人與對照人之間沒有重疊。從前面的敘述中可以看出，雖然為了舉例說明，在此描述了本發(fā)明的一些特殊實施例，但在不偏離本發(fā)明的精神和范圍的情況下，還可以作各種修改。因此，除附加的以外，本發(fā)明不受限制。表1</tables>表2AD病人和正常對照血清p97濃度的測試AD病人病人性別日期年齡病程(年)p97濃度(ng/mL)1女4/11/9451242.71女7/11/9451240.661女10/11/9451238.52女10/11/9468241.253女30/11/9475538.72女30/11/9468234.74女30/11/94821160.45女30/11/9482.54.538.26男30/11/94641.5317女30/11/9473.55.537.78女30/11/94817.0525女15/4/9482487.16男20/4/9463.5147.29男27/4/947434110男18/3/9459950.811男8/6/9477769.68女15/7/9480.56.556.412女29/7/9455445.613男4/5/9459540.613男21/9/9459.55.542表395年7月21日和24日測試的樣品--病人及其配偶對照測試對象性別日期年齡(歲)病程(年)p97濃度(ng/mL)血液血清1男21/775228241-配偶女21/775-322男21/78613211452-配偶女21/776-343女21/772425223-配偶男21/773-114男21/780943504-配偶女21/768-731男24/775226201-配偶女24/775-392男24/78613653742-配偶女24/776-9.5123女24/772428.3273-配偶男24/773-234男24/780952.3764-配偶女24/768-9.412無關(guān)的對照測試對象年齡(歲)p97濃度(ng/mL)1319.22281033610.543811.85407.36415.37421.2851129532.410638.911707.8表4日本人腦脊液(CSF)和血清樣品中轉(zhuǎn)鐵蛋白(Tf)和p97的測試CSF阿爾茨海默氏病人Tf濃度(μg/mL)p97濃度(ng/mL)113.63-223.34-328.2114.22715.8-3025.640.43821.320.56716.918.6791818.5對照418.011512.41169.9-712.210823.40.5913.99.9血清阿爾茨海默氏病人Tf濃度(mg/mL)p97濃度(ng/mL)12.198.832.628.2271.68-302.4814.0對照43.40.152.060.861.252.072.122.1101.955.6表5表5在人血清中p97的穩(wěn)定性*試驗(初始濃度為100ngp97/mL血清)溫度(℃)保存時間(小時)0.52448600未測未測室溫95.988.281.2499.599.097.5-2094.092.491.2*穩(wěn)定性用保存一定時間后可檢測p97的百分數(shù)表示；nd--表示未檢測。表6表6AD病人和患其它神經(jīng)病理病的病人腦脊液和血清中p97及轉(zhuǎn)鐵蛋白的濃度AD病人*CSF血清病人年齡性別p97(ng/mL)Tf(μg/mL)p97(ng/mL)Tf(μg/mL)180女未測13.68.82190265女未測23.3未測未測377男14.228.28.226202765女未測15.87.816803075女40.425.614.024803872女20.521.3未測未測6761男18.616.9未測未測7977女18.518.0未測未測22.4±9.2120.35±4.7811.3±2.762240±360患其它神經(jīng)病理病的對照CSF血清病人及所患疾病年齡性別p97(ng/mL)Tf(μg/mL)p97(ng/mL)Tf(μg/mL)4-帕金森氏病65女11.718.00.134005-脊髓小腦退化57男11.212.40.820606-脊髓小腦退化70女未測9.92.012507-肌萎縮性側(cè)索硬化65女10.012.22.121208-頸椎關(guān)節(jié)強硬77男0.523.41.5未測9-頸椎關(guān)節(jié)強硬72女9.913.9未測未測10-外周神經(jīng)病60男未測未測5.619508.48±4.0216.0±4.52.01±1.752260±700*按NINCDS-ADRDA標準診斷為臨床上可疑的AD病人；nd--表示未檢測。權(quán)利要求1.一種通過定量病人體液樣品中的P97來診斷阿爾茨海默氏病的方法，它包括以下步驟a)從懷疑患有阿爾茨海默氏病的病人中獲取體液樣品，從而得到試驗樣品；b)測定試驗樣品中P97的量；c)比較試驗樣品和對照樣品中P97的量，其中，試驗樣品中存在的P97的量比對照樣品中的高表示可能患有阿爾茨海默氏病。2.按照權(quán)利要求1所述的方法，其中試驗樣品中P97的量與對照樣品中的P97的量相比升高1.5倍或者更高表示可能患有阿爾茨海默氏病。3.按照權(quán)利要求1所述的方法，其中試驗樣品中P97的量與對照樣品中P97的量升高2至9倍表示可能患有阿爾茨海默氏病。4.按照權(quán)利要求1所述的方法，其中在步驟(c)中把試驗樣品中P97的量與對照樣品中測定的P97的平均值或基線值作比較。5.按照權(quán)利要求1所述的方法，其中步驟(c)中的對照樣品為來自同一病人或另一個體的正常樣品。6.一種通過定量患有阿爾茨海默氏病的病人體液樣品中的P97來監(jiān)測阿爾茨海默氏病的進展的方法，它包括以下步驟a)從病人中獲取體液樣品，從而得到試驗樣品；b)測定試驗樣品中P97的量；c)比較試驗樣品和更早時間從該病人獲得的第一個試驗樣品中P97的量，其中，試驗樣品中P97的量比第一個試驗樣品中的高表示該病人的阿爾茨海默氏病情有進展。7.一種通過定量患有阿爾茨海默氏病人體液樣品中的P97來監(jiān)測阿爾茨海默氏病的治療的方法，它包括以下步驟a)從已接受治療的病人中獲取體液樣品，從而得到試驗樣品；b)測定試驗樣品中P97的量；c)比較試驗樣品和在治療前從該病人中獲得的治療前樣品中的P97的量，其中，試驗樣品與治療前樣品中P97量的差異表示該治療的效果。8.按照權(quán)利要求1至7中的任何一個所述的方法，其中的體液為血清或者CSF。9.按照權(quán)利要求1至7中的任何一個所述的方法，其中步驟(b)中P97的量是用P97的抗體測定的。10.一種用于實施按照權(quán)利要求1，6或7所述方法的試劑盒，它包括檢測試驗樣品中P97存在的試劑和用于檢測P97存在的試劑。全文摘要一種通過定量人體液樣本中的P文檔編號A61K38/00GK1198214SQ96197251公開日1998年11月4日申請日期1996年8月30日優(yōu)先權(quán)日1995年8月31日發(fā)明者W·A·杰福里斯,M·肯納德申請人:不列顛哥倫比亞大學