專利名稱：一種用于深部腫瘤局部治療的藥物組合物及其在制藥中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及治療腫瘤的藥物，特別是用于惡性腫瘤的局部治療的藥物。
腫瘤發(fā)病率越來越高，其中絕大多數(shù)為實(shí)體性腫瘤，目前對實(shí)體性腫瘤的治療是以手術(shù)為主，但手術(shù)切除率不高，如肝癌的手術(shù)切除率不足20％[湯釗猷 揚(yáng)秉輝主編《原發(fā)性肝癌的研究與進(jìn)展》，上海醫(yī)科大學(xué)出版社，19901＿9]。對于大量不能手術(shù)的深部腫瘤病人，主要是采用化療和放療，但毒副作用嚴(yán)重，且很多實(shí)體性腫瘤對化療和放療不敏感，療效很低。發(fā)展新的方法使藥物在腫瘤局部濃集或直接在腫瘤局部用藥是提高療效，降低毒副作用的根本途經(jīng)。目前這方面的技術(shù)包括有(1)動(dòng)脈給藥化療和栓塞；(2)單抗載藥導(dǎo)向治療；(3)脂質(zhì)體載藥。盡管這些方法的使用有一些報(bào)道，有一定的療效，但要達(dá)到使腫瘤完全壞死消退并降低復(fù)發(fā)率還十分困難。為此，發(fā)展新的更為有效的藥物，是提高醫(yī)治腫瘤療效的重要途經(jīng)。
本發(fā)明的目的是提供一種用于深部腫瘤治療的藥物組合物，它能直接引起腫瘤組織大塊壞死，迅速而有效地減輕腫瘤負(fù)荷，具有能有效消除腫瘤組織并不具毒副作用等特點(diǎn)。
本發(fā)明的實(shí)施方案是這種用于深部腫瘤治療的藥物組合物由二硝基氯苯(DNCB)和丙酮組成。
丙酮可以通過細(xì)胞脫水，蛋白凝固，血管閉塞等作用直接引起腫瘤壞死，減低腫瘤負(fù)荷；DNCB可以在瘤體局部產(chǎn)生劇烈的免疫反應(yīng)，從而產(chǎn)生繼發(fā)的持久的抗腫瘤作用.二者相輔相成，產(chǎn)生強(qiáng)大的抗腫瘤效果。它可較廣泛地用于多種實(shí)體瘤的局部免疫治療。將DNCB和丙酮這兩種不同作用機(jī)制的物質(zhì)按一定比例配制成復(fù)方制劑。DNCB作為半抗原與瘤組織中的細(xì)胞和蛋白質(zhì)結(jié)合形成完全抗原(事實(shí)上改變了瘤組織的抗原性。使其與荷瘤機(jī)體的免疫系統(tǒng)不相容)在瘤體局部誘發(fā)劇烈的免疫反應(yīng)，引起瘤細(xì)胞死亡。丙酮具有細(xì)胞脫水，蛋白質(zhì)凝固和血管栓塞作用，可在瘤體局部產(chǎn)生迅速而直接的大塊腫瘤壞死，降低瘤荷，更有利于免疫機(jī)制發(fā)揮作用。DNCB是難溶性物質(zhì)，而丙酮恰好是它的優(yōu)良溶劑。
下面是應(yīng)用本發(fā)明藥物組合物對小鼠腫瘤進(jìn)行的治療實(shí)驗(yàn)，即本發(fā)明的具體實(shí)施例及其實(shí)驗(yàn)應(yīng)用。
材料與方法一.動(dòng)物正常Balb/c小鼠，4—6周齡，雌性，體重18—25g，由同濟(jì)醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物中心提供。
二.腫瘤細(xì)胞株艾氏腹水癌細(xì)胞株由中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所引進(jìn)，同濟(jì)醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院腫瘤研究室傳代。
三.動(dòng)物腫瘤模型制作將含有5×10個(gè)艾氏腹水癌細(xì)胞的0.2ml細(xì)胞懸液注射液于小鼠右肩岬部皮下，7天時(shí)長出可觸及的實(shí)體瘤結(jié)，成功率100％。
四.試劑為本發(fā)明的DNCB丙銅溶液，臨用時(shí)用丙酮溶解DNCB配制成濃度分別為40mg/ml、0.04mg/ml、400mg/ml的溶液。
五.治療作用觀察取50只小鼠先進(jìn)行DNCB致敏。接種艾氏實(shí)體瘤7天后隨機(jī)分組，每組10只。
1.400mg/mlDNCB丙酮溶液組2.0.4mg.mlDNCB丙酮溶液組3.40mg/mlDNCB丙酮溶液組分別給予瘤體內(nèi)注射相應(yīng)濃度的DNCB丙銅溶液，每只0.25ml，每周2次，共4次。
4.丙酮組，給予瘤體內(nèi)注射丙酮，方法同上。
5.空白對照組，不作任何處理。
每周用卡尺測量瘤體大小一次，測相互垂直的兩個(gè)直徑，記錄平均直徑。并記錄每只動(dòng)物瘤體表面及質(zhì)地變化和存活時(shí)間。至70天時(shí)仍存活的動(dòng)物在其左肩岬部皮下再次接種5×10個(gè)艾氏腹水癌細(xì)胞，并取10只正常小鼠同樣接種作為對照，繼續(xù)觀察。所有動(dòng)物均做系統(tǒng)剖檢，取心肺肝腎脾組織做病理檢查。
六.瘤體病理檢查取小鼠90只，先行DNCB致敏。接種腫瘤7天后隨機(jī)分為三組。<1>組瘤體內(nèi)注射DNCB溶液0.25ml/只，<2>組瘤體內(nèi)注射丙酮0.25ml，<3>組為空白對照。于瘤體內(nèi)注射后的5小時(shí)，1天，2天，7天，14天和21天，每組各取5只小鼠處死，取瘤體標(biāo)本作石蠟切片，HE染色組織學(xué)觀察。結(jié)果如下一.瘤體變化及生存情況 治療組和對照組小鼠瘤體大小的變化見表1，生存情況見表2。1組小鼠接受400mg/mlDNCB丙酮溶液瘤內(nèi)注射后于3周左右全部死亡。2組小鼠接受0.4mg/mlDNCB丙酮溶液瘤內(nèi)注射后，短期瘤體生長減緩，3/10的小鼠排斥了腫瘤、長期存活。7/10的小鼠腫瘤進(jìn)行性生長而死亡。3組小鼠接受40mg/mlDNCB丙酮溶液瘤體內(nèi)注射后，瘤體及其周圍呈現(xiàn)紅腫，3周左右時(shí)瘤體生長停止，并出現(xiàn)壞死及表面結(jié)痂，7周左右瘤體完全脫落，留下創(chuàng)面很快愈合。本組小鼠在第一，二周各有一只死亡，70天時(shí)仍有8只存活，瘤體均已完全脫落。再次接種艾氏腹水癌細(xì)胞，均無腫瘤生長，而同時(shí)對照接種的10只正常小鼠均在7天時(shí)長出可觸及的腫瘤結(jié)節(jié)。丙酮對照組在注射后短期內(nèi)瘤體生長減緩，注射處出現(xiàn)壞死灶，但其周圍的瘤組織仍繼續(xù)生長。并于4周左右瘤體中心出現(xiàn)液化性壞死腔，第二周開始有動(dòng)物死亡，至70天時(shí)僅存活2只荷巨大瘤結(jié)節(jié)的小鼠，再次接種腫瘤細(xì)胞，7天時(shí)長出皮下瘤結(jié)節(jié)?？瞻讓φ战M的小鼠腫瘤進(jìn)行性生長，第一周開始有動(dòng)物死亡，至5周左右全部小鼠死亡?？瞻讓φ战M的小鼠瘤體切片在早期顯示為生長活躍的腫瘤組織，瘤周有少量淋巴細(xì)胞。從第8天開始，由于腫瘤生長過快，血供相對不足，出現(xiàn)中心性壞死。此后的標(biāo)本中，壞死區(qū)逐步擴(kuò)大并形成液化腔，瘤體周圍部分的瘤組織則繼續(xù)生長。瘤周組織中的淋巴細(xì)胞消失。NCB溶液組在瘤體內(nèi)注射后5小時(shí)的瘤體標(biāo)本中即可見大片腫瘤組織壞死，瘤周組織中出現(xiàn)較多淋巴細(xì)胞浸潤。此后的標(biāo)本中，壞死區(qū)逐漸擴(kuò)大，瘤體內(nèi)和瘤周浸潤的淋巴細(xì)胞密集，并見淋巴細(xì)胞和纖維細(xì)胞組成的反應(yīng)帶分隔包圍腫瘤細(xì)胞團(tuán)塊。丙酮對照組標(biāo)本表現(xiàn)為與DNCB組相似的壞死，但程度較輕，壞死區(qū)周圍的組織中無明顯的淋巴細(xì)胞浸潤。瘤體中心壞死，而瘤周的腫瘤組織則繼續(xù)生長。
以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明，一定濃度的DNCB丙酮溶液瘤體內(nèi)注射可有效地消除動(dòng)物已經(jīng)長大的瘤結(jié)節(jié)，并使動(dòng)物產(chǎn)生抵抗再次接種同種腫瘤的特異免疫力，以40mg/ml左右濃度療效較好，當(dāng)濃度低于0.4mg/ml時(shí)，因無法激發(fā)免疫反應(yīng)，療效降低。當(dāng)濃度高于400mg/ml時(shí)，因過量使毒性增加，致動(dòng)物死亡。
本發(fā)明適合于對體內(nèi)的實(shí)體性腫瘤作瘤內(nèi)注射局部治療，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明應(yīng)用該制劑進(jìn)行治療可使腫瘤生長受到抑制，使已經(jīng)形成結(jié)節(jié)的腫瘤逐步消退，直至完全消失，起效迅速，療效確切。本發(fā)明還可用于生產(chǎn)制備用于深部腫瘤局部治療的藥物。
表1各組小鼠瘤體平均瘤徑大小(CM)的變化時(shí)間(周) 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10①40％DNCB丙酮溶液組 0.65 1.08 1.51 - - - - - - -②0.04％DNCB丙酮溶液組 0.63 1.01 1.14 1.55 1.88 2.09 2.25 2.51 2.54 2.55③4％DNCB丙酮溶液組0.64 1.04 1.05 1.03 1.03 1.03 0.79 0.38 0 0④丙酮組 0.63 0.99 1.15 1.60 1.99 2.20 2.24 2.50 2.53 2.53⑤空白對照組 0.63 1.06 1.85 2.46 2.67 - - - - -t檢驗(yàn)①⑤P＞0.05②⑤從第三周開始P＜0.05①④P＞0.05③⑤從第三周開始P＜0.01②④P＞0.05④⑤從第三周開始P＜0.01③④從第四周開始P＜0.0權(quán)利要求
1.一種用于深部腫瘤局部治療的藥物組合物，其特征在于它由二硝基氯苯和丙酮組成。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于深部腫瘤局部治療的藥物組和物，其特征在于每毫升丙酮中含二硝基氯苯0.04至400毫克。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于深部腫瘤局部治療的藥物組和物，其特征在于每毫升丙酮中含二硝基氯苯40毫克。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于深部腫瘤局部治療的藥物組和物，其特征是該組合物在制備用于深部腫瘤局部制療藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
一種用于深部腫瘤局部治療的藥物組合物及其在制備用于深部腫瘤局部制療藥物中的應(yīng)用，它由二硝基氯苯和丙酮組成。每毫升丙酮中含二硝基氯苯0.04至400毫克。本發(fā)明適合于對體內(nèi)的實(shí)體性腫瘤作瘤內(nèi)注射局部治療，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明應(yīng)用該制劑進(jìn)行治療可使腫瘤生長受到抑制，使已經(jīng)形成結(jié)節(jié)的腫瘤逐步消退，直至完全消失，起效迅速，療效確切。
文檔編號A61P35/00GK1154239SQ9611801
公開日1997年7月16日 申請日期1996年1月12日 優(yōu)先權(quán)日1996年1月12日
發(fā)明者杜廣輝, 章詠裳 申請人:同濟(jì)醫(yī)科大學(xué)