專利名稱：多糖配合物，其大顆粒和制備藥盒，制備方法，及應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種放射性脫乙酰殼多糖配合物，其大顆粒和制備放射性脫乙酰殼多糖配合物的藥盒，其制備方法，及其放射治療的應(yīng)用。
尤其是，本發(fā)明涉及由放射性核素標(biāo)記的脫乙酰殼多糖產(chǎn)生的放射性脫乙酰殼多糖和由脫乙酰殼多糖配合物制成顆粒產(chǎn)生的放射性脫乙酰殼多糖大顆粒，以及供制備放射性脫乙酰殼多糖配合物用的藥盒。
本發(fā)明涉及通過放射性核素溶液與脫乙酰殼多糖溶液反應(yīng)制備放射性脫乙酰殼多糖配合物的方法，和通過將堿溶液加到放射性脫乙酰殼多糖配合物中制備放射性脫乙酰殼多糖大顆粒的方法。
另外，本發(fā)明涉及放射性脫乙酰殼多糖配合物及其大顆粒用于內(nèi)部放射治療，該法是由直接向該損害處施藥的放射性物質(zhì)發(fā)出的放射線治療損害的。
有兩種放射性治療法，一種是外部放射治療法，該法是用從體外發(fā)射的放射線治療損害，而另一種是內(nèi)部放射治療法損害，該法是用從體內(nèi)施用的放射性物質(zhì)放出的放射線治療損害。
至今外部放射治療法已被廣泛使用，但該法能引起政黨組織和器官受照射而傷害的難題，因?yàn)闉榱诉_(dá)到損害處必須使用強(qiáng)的放射線。
因此，研究了內(nèi)部放射治療法，直接向損害處施用放射性物質(zhì)使損害得到照射。
在內(nèi)部療法中，因放射線是在損害處發(fā)出的，所以可以使用效能弱的放射性物質(zhì)，因此只有損害處被照時(shí)而保護(hù)其它器官免于照射。
近來，內(nèi)部放射療法由于其優(yōu)良的效果已被廣泛使用。
通過內(nèi)部放射療法治療的有代表性疾病是癌和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。
治療癌或類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的方法基本上可分可藥物治療、手術(shù)治療和放射性治療。但是藥物和放射性治療已廣泛流行。據(jù)報(bào)道僅有5％的肝癌可經(jīng)手術(shù)治療法處理，所以可以認(rèn)為手術(shù)治療并非經(jīng)常被使用。
在口服或靜脈注射抗癌藥物的情況下，必須施用大量的藥物，因?yàn)槊幬锏秸麄€(gè)體內(nèi)是通過血液流動(dòng)，所以僅有很小一部分積聚在損害處，結(jié)果產(chǎn)生副作用。
近來放性性療法，尤其是內(nèi)部放射性療法治療癌和關(guān)節(jié)炎，已被廣泛采用。
例如，基于肝細(xì)胞癌細(xì)胞經(jīng)肝動(dòng)脈攝取營養(yǎng)物和正常肝細(xì)胞通過肝靜脈攝取營養(yǎng)物的事實(shí)的肝動(dòng)脈法，是把標(biāo)記放射性核素的放射性物質(zhì)直接注射到肝動(dòng)脈代替靜脈注射以抑制肝細(xì)胞癌細(xì)胞攝取營養(yǎng)物并在肝細(xì)胞癌細(xì)胞中積累更多的放射性物質(zhì)。
內(nèi)部放射療法也可用于類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎以及囊狀癌如肝細(xì)胞瘤、腦腫瘤、乳腺瘤、孵巢瘤等。
在治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎中，手術(shù)滑膜切除術(shù)或放射滑膜切除術(shù)都可使用。放射滑膜切除術(shù)是一種似乎可替代手術(shù)滑膜切除術(shù)的技術(shù)，而且它是一種易于消除滑膜炎癥區(qū)的方法，該方法通過直接注射標(biāo)記有發(fā)射β的放射性核素的放射性物質(zhì)進(jìn)行β-輻射。放射滑膜切除術(shù)具有操作簡單且無手術(shù)后并發(fā)癥的優(yōu)點(diǎn)。
在通過由損害處放射性物質(zhì)發(fā)射的放射線治療癌或關(guān)節(jié)炎中，向損害給藥的放射性物質(zhì)應(yīng)僅保留于損害處而不會(huì)從該損害處滲流。
假若給藥于損害的放射性物質(zhì)從損害處滲流，那么放射性物質(zhì)將通過血液流動(dòng)擴(kuò)散至全身，積累在其它組織尤其是骨髓中，以致產(chǎn)生致命的傷害。
在內(nèi)部放射療法中，施用的放射性物質(zhì)應(yīng)保留在損害處，為達(dá)此目的，使放射性核素與載體一起使用。
理想載體的條件是載體在體內(nèi)和體外與放射性核素均具有高親合力，這種載體能均勻地分布于損害中，在損害處能被吸收而不會(huì)引起炎癥，其半衰期長于放射性核素，并且放射性核素衰變后，該載體能被分解和排泄。
為了開發(fā)理想的放射性物質(zhì)，也提出了一些技術(shù)。
首先，有報(bào)道涉及由懸浮135I于高粘度碘油中所獲得的延遲釋放放射性物質(zhì)。
然而，懸浮于碘油中的135I沒有得到廣泛地使用，因?yàn)榕cβ-射線一起還發(fā)射較高能量的γ-放射線，因而引起對(duì)其它器官或組織的損傷，并且侵入肝動(dòng)脈的碘油中的135I積累，尤其大量積集于肺部中。
其次，開發(fā)出了膠體Y90(釔90)或Au-198(金198)。
在這種情況下，存在一個(gè)問題是正常的組織受傷害，因?yàn)楫?dāng)粒經(jīng)太小而不能保留在損害處時(shí)，使放射性物質(zhì)滲流出損害處。另外，它們發(fā)射半衰期較長的高能γ-射線[Fellinger et al.，Weinz Inn.Med，33，351(1952)]。
據(jù)報(bào)道樹脂[Turner et al.，Nucl.Mod，Comm.15，B45(1994)]、陶瓷、和玻璃珠可作載體使用[Andrews et al，J.Nu-cl.Med，35，1637(1994)]。
由于它們是降解的，它們不滲流，但他們存在一個(gè)問題是它們?cè)诜派湫院怂厮プ兒蟛荒鼙慌判钩鲶w外。
已開發(fā)出165Dy-FHMA(165鏑鐵氫氧化物大顆粒)，含于氫氧化鐵大顆粒中的165鏑粒子(Harling et al，Nucl.Sci andEng，110，344(1992))，但存在制備工序復(fù)雜且鐵在體內(nèi)累積的問題。
近來，還開發(fā)出165Dy-HMA(氫氧化鏑大顆粒)，不含鐵的165鏑粒子(Mclaren et al.，Eur.J.Nucl.Med.，16，62)(1990))。
但在使用165Dy-HMA時(shí)有限制，因?yàn)?65Dy-HMA是由中子在核反應(yīng)器中照射穩(wěn)定的164Dy產(chǎn)生的。也就是說，對(duì)于遠(yuǎn)離核反應(yīng)器的醫(yī)院使用它來說，其半衰期太短。
還開發(fā)出在具有堿金屬的硅酸鹽珠中含153Sm、165Dy、166Ho、90Y的粒子(USP 5011797)。在由聚-L-乳酸、聚乙烯醇、乙?；鶅?nèi)酯和氯仿的混合物獲取的大小為1-15μm的165Ho微粒粒子后，在核反應(yīng)器中用中子照射生產(chǎn)166Ho[J.Nu-cl.Med，33，398(1992)]。但存在著一個(gè)問題，即聚合物在核反應(yīng)器內(nèi)中子照射過程中會(huì)分解，因而使制備方法復(fù)雜化。
另外，研制出了可生物降解和生物相溶的153Sm-羥磷灰石的粒子。
然而存在的問題是當(dāng)它們用于病人時(shí)不能均勻地分布到損害處而是保留在注射器內(nèi)，因?yàn)樗鼈兪且灶w粒態(tài)存在的，不是以溶液態(tài)存在的。
正如由上述情況所了解的，就內(nèi)部放射療法而言給藥于損害的放射性物質(zhì)不會(huì)從損害處滲流。
為了把給藥的放射性物質(zhì)從損害處的滲流降至最低，首先研制膠體物質(zhì)如198Au，然后是大顆粒；從來都沒有使用過溶液。
但就損害中的均勻分布而言，分布的次序是溶液＞膠體＞粒子，且溶液是最好的。
換言之，在使用粒子時(shí)，粒子不能均勻地分布；所以療效不好；假若在某個(gè)區(qū)域內(nèi)使更多的粒子分布，照射過的將會(huì)過剩，若在另一區(qū)域由分布較少的粒子，輻射量將低于有效的放射量。
作為照射的需要量根據(jù)疾病是有差別的，所以為了達(dá)到需要量應(yīng)控制粒子的大小。
例如，治療肝細(xì)胞瘤的最佳尺寸是15-40μm，而治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎為1-5μm。但困難在于生產(chǎn)具有最佳尺寸的粒子時(shí)，工作人員有可能被照射的危險(xiǎn)，所以復(fù)雜化的方法不能使用。
而且在把粒子注入病人后，仍有些粒子保留下來。
盡管如上所述在使用粒子時(shí)我們看到了許多難題，但是還是使用粒子，從來不用溶液，因?yàn)樵趦?nèi)部放射療法中最重要的一點(diǎn)是施用的放射性物質(zhì)不能從損害處滲流。
作為深入研究的結(jié)果，本發(fā)明的發(fā)明人通過發(fā)明放射性脫乙酰殼多糖配合物解決了粒子的難題和溶液的難題。
放射性乙酰殼多糖配合物是一種新型的內(nèi)部放射治療劑；它在酸性PH下以溶液狀態(tài)存在，在人體的PH中以凝膠態(tài)存在。
也就是說，它在酸中是以溶液的狀態(tài)存在著，抵消了粒子問題，施用于損害后，以凝膠態(tài)存在而不會(huì)滲流出損害處。
放射性脫乙酰殼多糖配合物是一種天然的生物相溶和生物降解的產(chǎn)物，衰變后能被排泄。
另外，可以證明本發(fā)明的放射性脫乙酰殼多糖配合物可以像至今使用的粒子狀使用。
另外，本發(fā)明的放射性脫乙酰殼多糖配合物可以藥盒形式使用，其中預(yù)先分別制備的放射性核素溶液和凍干的脫乙酰殼多糖在用于病人前進(jìn)行混合。
本發(fā)明的目的是提供一種新型的放射性脫乙酰殼多糖配合物，放射性脫乙酰殼多糖配合物大顆粒以及一種用于制備放射性脫乙酰殼多糖配合物的藥盒，制備其方法以及用于內(nèi)部放射治療。
下文將詳細(xì)地對(duì)本發(fā)明進(jìn)行說明。
I.放射性脫乙酰殼多糖配合物供內(nèi)部放射療法使用的放射性物質(zhì)被保留在損害處，且衰變后被排泄。
為達(dá)此目的，放射性核素與載體一起使用。在這種情況下，放射性核素與載體的親合力及其尺寸是重要的。
在本發(fā)明中，具有優(yōu)良生物相溶性和生物可溶解性的脫乙酰殼多糖可作為放射性核素的載體使用。
通過水解龍蝦、蟹、蝦和蠔等殼體富有的殼多糖，β(1-4)鍵N-乙?；咸前返木厶强梢院苋菀椎孬@得脫乙酰殼多糖。
脫乙酰殼多糖，一種通過殼多糖的乙酰胺脫乙酰獲得的2-脫氧-2-氨基-D-葡萄糖的聚合物，與重金屬形成螯合物，因此據(jù)報(bào)道脫乙酰殼多糖能作為去除重金屬的試劑(USP5,336,415)和延遲釋放藥物的試劑使用。
如此的特性歸結(jié)于脫乙酰殼多糖的游離胺，它可與金屬離子形成螯合物而且脫乙酰殼多糖的鍵合親合力高于殼多糖的鍵合親合力。
稱為食用無毒產(chǎn)品的脫乙酰殼多糖可作為生物降解的縫合絲使用，因?yàn)樗缮锝到猓⑶宜茏鳛槿嗽炷I膜和灼燒皮膚保護(hù)膜使用，因?yàn)樗哂锌節(jié)兓钚院涂鼓[瘤活性[Kubota et al.，Chem.Sac.Jpn，66，1807(1993)]。
脫乙酰殼多糖最重要的特性是在酸性PH下以溶液形式存在，而在較高PH下變成凝膠和粒子。
在本發(fā)明中，依靠利用上面提到的特性研制放射性脫乙酰殼多糖配合物溶液和放射性脫乙酰殼多糖配合物大顆粒。
脫乙酰殼多糖的分子量，可以用于本發(fā)明的是100,000-1,000,000。
優(yōu)選脫乙酰殼多糖的分子量是200,000-800,000。
脫乙酰殼多糖最好的分子量是300,000-500,000。
按通過水解殼多糖所獲得的2-脫氧-2-氨基葡萄糖單位和2-脫氧-2-乙酰氨基葡萄糖單位的比值，脫乙酰殼多糖的分子量可在數(shù)千到數(shù)百萬間變化。
分子量越高，粘度越大。
能用于本發(fā)明的脫乙酰殼多糖包括脫乙酰殼多糖的衍生物，如S衍生物和P衍生物。
能用于本發(fā)明的放射性核素可包含任何能用于治療人疾病的放射性核素，包括β-射線輻射源。本發(fā)明的放射性核素可含有β射線源、γ-射線源，或能輻射β-射線以及γ-射線的放射性核素。
優(yōu)選放射性核素是β-射線源，如198Au、90Y、186Re、32P、169Er、166Ho、153Sm、165Dy，這些可按治療的目的進(jìn)行選擇。198Au還輻射高能γ-射線以及β-射線，并具有2.7天較長的半衰期。32P和90Y輻射β-射線，沒有γ-射線并只有較長的半衰期。
165Dy、166Ho、153Sm和169Er最適于內(nèi)部放射療法，因?yàn)樗鼈兂l(fā)射低能的γ-射線外還發(fā)射高能β-射線，借此施用于體內(nèi)的放射性核素很容易被檢測(cè)。
II.放射性脫乙酰殼多糖配合物的制備在本發(fā)明中，放射性脫乙酰殼多糖配合物，一種新型的內(nèi)部放射治療劑，可通過脫乙酰殼多糖標(biāo)記以放射性核素來制備。
下文中將詳細(xì)地描述放射性脫乙酰殼多糖配合物的制備。
通過把放射性核素溶液加到脫乙酰殼多糖溶液中制備放射性脫乙酰殼多糖配合物。
通過把脫乙酰殼多糖溶于酸性溶液中很容易地制備出脫乙酰殼多糖溶液，因?yàn)槊撘阴ざ嗵窃谒嵝原h(huán)境中是可溶的而在堿性環(huán)境中不溶。
從本技術(shù)領(lǐng)域的一般技術(shù)人員熟知的酸中選擇優(yōu)選的酸，包括羧酸，如乙酸或甲酸。
因?yàn)榭捎糜诒景l(fā)明的放射性核素在水中是可溶的，所以可使用可溶性放射性核素硝酸鹽或氯化物如165Dy(No3)3、166Ho(No3)3、165DyCl3或166HoCl3。
如上所述，放射性核素溶液可通過溶解放射性核素制成，該放射性核素是通過在核反應(yīng)器中用中子照射穩(wěn)定核素如164Dy和165Ho的氧化物或硝酸鹽制備出來的。把HCl加到放射性氧化物中以轉(zhuǎn)變成放射性氯化物，然后將所得到的放射性氯化物溶于水中。
放射性脫乙酰殼多糖溶液是通過所述放射性核素和通過脫乙酰殼多糖溶于酸中制成的脫乙酰殼多糖溶液相互混合制備的。
與由放射性同位素制成的大顆粒的已知方法相比，這種新方法具有保護(hù)工作人員免受輻射作用和防止由于中子輻射使載體分解的優(yōu)點(diǎn)。
在下面，將說明影響制備脫乙酰殼多糖配合物的因素，如反應(yīng)混合物的PH、反應(yīng)時(shí)間、脫乙酰殼多糖的濃度、放射性核素的濃度，以及脫乙酸殼多糖的粘度。
在實(shí)驗(yàn)中，166Ho用作放射性核素并采用硅酸進(jìn)行快速(Instant)薄層色譜法(ITLC)(ITLC-SA)。當(dāng)展開溶液是MeOH∶H2O∶乙酸(49∶49∶2)時(shí)，對(duì)鐵的Rf值為0.8-1.0，而對(duì)Ho-脫乙酰殼多糖配合物的Rf值為0.2-0.4。
<實(shí)驗(yàn)1>166Ho-脫乙酰殼多糖配合物形成的反應(yīng)混合物的PH進(jìn)行本次實(shí)驗(yàn)是為了尋找脫乙酰殼多糖與放射性核素螯合時(shí)的優(yōu)化PH。
脫乙酰殼多糖溶液是通過在4ml 1％的乙酸中溶解30mg的脫乙酰殼多糖制成的。為了把脫乙酰殼多糖溶液的PH分別調(diào)至1.47、2.00、2.78、3.53、4.03、5.00和6.00，加入0.5N HCl或0.5N NaOH。往脫乙酰殼多糖的溶液中加0.1ml 10％的166Ho(NO3)3·5H2O，攪拌并維持30分鐘。
表1
如表1所示，放射性核素的標(biāo)記率取決于標(biāo)記脫乙酰殼多糖溶液的pH。
在pH2.5-3.5時(shí)，標(biāo)記率超過99％，pH2.5以下或pH3.5以上時(shí)為20-30％，此時(shí)鈥幾乎保持原態(tài)而不形成螯合物。
pH大于6.0時(shí)可使脫乙酰殼多糖溶液變成凝膠。
因此，形成螯合物的優(yōu)選pH是2.0-4.0。更好的pH是2.5-3.5。
<實(shí)驗(yàn)2>166Ho-脫乙酰殼多糖配合物形成的反應(yīng)時(shí)間把0.1ml(3.74mg)的10％166Ho(NO3)·5H2O加到pH已調(diào)節(jié)至3.0的脫乙酰殼多糖溶液中(30mg/4ml)再攪拌。在5、10、20、30、60分鐘時(shí)取樣，重測(cè)定標(biāo)記率。
表2
如表2所示，在10分鐘時(shí)標(biāo)記率大于95％，這一點(diǎn)意味著脫乙酰殼多糖配合物的形成在10分鐘后幾乎已經(jīng)完成。
已說明脫乙酰殼多糖—螯合物的形成常數(shù)是很高的，因此可以通過使放射性核素溶液與脫乙酰殼多糖溶液反應(yīng)10分鐘形成脫乙酰殼多糖配合物。
<實(shí)驗(yàn)3>對(duì)于166Ho-脫乙酰殼多糖配合物形成脫乙酰殼多糖的濃度分別制備已調(diào)節(jié)至pH3的濃度的4mg/4ml、10mg/4ml、20mg/4ml、25mg/4ml、25mg/4ml和35mg/4ml的脫乙酰殼多糖溶液。
脫乙酰殼多糖溶液中加0.1ml的10％166Ho(NO3)3·5H2O，攪拌并維持30分鐘。
表3
如表3所示，當(dāng)4ml 1％乙酸中含有35％mg脫乙酰殼多糖時(shí)，標(biāo)記率大于99％。
當(dāng)所含脫乙酰殼多糖少于25mg時(shí)，標(biāo)記率是很低的。
因此，為了能形成具有3.74mg鈥的Ho-脫乙酰殼多糖配合物，必須制備濃度在0.75％以上的脫乙酰殼多糖溶液。
<實(shí)驗(yàn)4>對(duì)于Ho-脫乙酰殼多糖配合物形成鈥的量。
往脫乙酰殼多糖溶液(35mg/4mg)加各種濃度的166Ho(NO3)3·5H2O(所含鈥量3.74mg、7.48mg、11.22mg、14.96mg、22.44mg、29.92mg)，攪拌且保持30分鐘。
表4
如表4所示，當(dāng)鈥的加入量為7.48mg時(shí)，標(biāo)記率大于99％。當(dāng)鈥的加入量為11.22mg時(shí)，存在大量未反應(yīng)的鈥。當(dāng)脫乙酰殼多糖對(duì)鈥的比值低于3.6∶1時(shí)，按脫乙酰殼多糖體，形成放射性脫乙酰殼多糖配合物的能力大于98％。
因此，應(yīng)形成Ho-脫乙酰殼多糖配合物而言，脫乙酰殼多糖對(duì)鈥的優(yōu)選比值為1-4∶1，更好的是3.4∶1。
<實(shí)驗(yàn)5>脫乙酰殼多糖形成166Ho脫乙酰殼多糖配合物的粘度制備各種粘度4cps、50ps、100cps、150cps和170cps的pH乙調(diào)節(jié)到3.0的脫乙酰殼多糖溶液，往脫乙酰殼多糖溶液加0.1ml10％166Ho(NO3)3·5H2O，攪拌和維持30分鐘。
表5<
>如表5所示，當(dāng)脫乙酰殼多糖的粘度低于100cps時(shí)，鈥幾乎保持接近未標(biāo)記狀態(tài)。優(yōu)選脫乙酰殼多糖的粘度為100-200cps，更好的是130-170cps。
由于粘度越高，分子量越大，所以可以說配合物的形成取決于分子量。
<實(shí)驗(yàn)6>166Ho-脫乙酰殼多糖配合形成的穩(wěn)定劑當(dāng)把166Ho(NO3)3·5H2O(50mCi)在沒有穩(wěn)定劑的情況下加至脫乙酰殼多糖溶液時(shí)，該溶液變稀，并且有70％以上的所含鈥被分離呈游離鈥。
當(dāng)明膠用作穩(wěn)定劑時(shí)，溶液顏色變成黃色且大部分的鈥被分離。
當(dāng)用40mg的抗壞血酸時(shí)，配合物可穩(wěn)定8小時(shí)以上。(放射化學(xué)純度在99％以上)測(cè)量使用抗壞血酸量分別是10mg，15mg，20mg，25mg，30mg，35mg和40mg的溶液穩(wěn)定性，并且當(dāng)加入30mg抗壞血酸時(shí)放射化學(xué)純度大于99％。
2，5-二羥苯甲酸，明膠和抗壞血酸，可用作脫乙酰殼多糖的穩(wěn)定劑。
抗壞血酸優(yōu)選量對(duì)于166Ho(NO3)3·5H2O為10-30mg，更好的使用量加15mg。
制備放射性脫乙酰殼多糖配合物溶液可通過下列步驟1)通過在核反應(yīng)器中用中子照射穩(wěn)定核素如164Dy和165Ho制備活性放射性核素；2)通過把放射性核素溶解在水中制備放射性核素溶液；3)制備脫乙酰殼多糖溶液；和4)混合放射性核素溶液和脫乙酰殼多糖溶液。
如果把放射性脫乙酰殼多糖溶液注入人體，它就會(huì)變成凝膠的形式，這種形式不會(huì)從損害處滲流，而且淀積的放射性脫乙酰殼多糖可通過照射的輻射作用治療損害。
III.制備供制備放射性脫乙酰殼多糖配合物藥盒用的藥盒把放射性脫乙酰殼多糖配合物制成藥盒，該藥盒含有放射性核素，溶液和脫乙酰殼多糖溶液。
制備出脫乙酰殼多糖溶液和放射性核素溶液后可任意用于患者。只是在引入身體前才將它們混合，而且放射性脫乙酰殼多糖配合物在10分鐘內(nèi)可以形成。
脫乙酰殼多糖溶液經(jīng)凍干，它可含有任何常規(guī)添加劑如pH調(diào)節(jié)劑，等滲劑(例如氯化鈉)和防腐劑(例如芐醇)。
抗壞血酸可用作穩(wěn)定劑。
供制備放射性脫乙酰殼多糖配合物用的藥盒按如下步驟制備1)制備脫乙酰殼多糖溶液然后凍干；2)制備放射性核素溶液然后把1)和2)用于病人，3)把凍干過的脫乙酰殼多糖溶解于蒸餾水中再加入放射性核素溶液，4分鐘后，可用于人體。
<實(shí)驗(yàn)7>制備166Ho-脫乙酰殼多糖配合物用的藥盒穩(wěn)定性。
每隔一個(gè)月測(cè)量一次按本說明制備的藥盒中的放射性脫乙酰殼多糖配合物的標(biāo)記率，持續(xù)一年，均在99％以上。
IV.制備放射性脫乙酰殼多糖配合物的大顆粒放射性脫乙酰殼多糖配合物可以大顆粒的形式和溶液的形式使用。大顆?？赏ㄟ^用蒸餾水稀釋脫乙酰殼多糖配合物溶液然后加堿，溶液來制備。大顆粒在pH9-10時(shí)沉淀。
在這種方法中，如果脫乙酰殼多糖配合物溶液被堿性化而不用蒸餾水稀釋，則該溶液形成大塊，以而使獲取細(xì)粒子困難。
用堿使鑭系(lanthane series)化合物形成氫氧化物，但由于脫乙酰殼多糖溶液與鑭系放射性核素的形成常數(shù)大于鑭系氫氧化物，所以脫乙酰殼多糖配合物在堿的溶液中是非常穩(wěn)定的。
因此，當(dāng)把脫乙酰殼多糖配合物溶液堿化時(shí)，形成大顆粒而且它們很穩(wěn)定。優(yōu)選堿是NaOH。
大顆粒的優(yōu)選尺寸是1-50μm.
放射性大顆粒優(yōu)選尺寸可依疾病變化，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎為1-5μm肝癌為10-40μm。
用下列實(shí)施例舉例說明本發(fā)明有實(shí)效的和目前最佳的實(shí)施方案。
然而，可以理解到本技術(shù)領(lǐng)域的熟練人員，在考慮本發(fā)明的公開內(nèi)容時(shí)，可在本發(fā)明的精神和范圍內(nèi)作出變更和改進(jìn)。
<實(shí)施例1>制備166Ho-脫乙酰殼多糖配合物1).制備166Ho(NO3)3·5H2O溶液。
把200mg166Ho(NO3)3·5H2O置于聚乙烯皿中。在核反應(yīng)器中用10×1013n/cm2·sec的熱中子照射10分鐘，然后溶于2噸水中。
2).制備脫乙酰殼多糖溶液把300mg的乙酰殼多糖(分子量約500000；水解約85％)溶解在40ml％的乙酸中。
通過把0.1ml所述166Ho(NO3)3·5H2O加到所述脫乙酰殼多糖溶液中，充分混合再于室溫下攪拌，制成166Ho-脫乙酰殼多糖配合物溶液，30分鐘后，通ITLC-SA[MeOH(49)H2O(49)HAc(2)]測(cè)標(biāo)記率。標(biāo)記率超過99％。
<實(shí)施例2>制備153Sm、165Dy、169Er-脫乙酰殼多糖配合物測(cè)定該混合物的放射化學(xué)純度且純度在99％以上。
<實(shí)施例3>制備供制備166Ho-脫乙酰殼多糖配合物用的藥盒把40mg的脫乙酰殼多糖和30mg抗壞血酸溶解在中4rnl的1％乙酸中。
用0.5N HCl把溶液的pH調(diào)節(jié)至pH為3.0，以消毒態(tài)過濾并凍干。
使凍干的脫乙酰殼多糖溶液保持在4℃。
為了用于患者，放射性脫乙酰殼多糖配合物通過溶解、凍干脫乙酸殼多糖于蒸餾水中再加入放射性核素溶液來制備。
<實(shí)施例4>制備脫乙酰殼多糖配合物大顆粒把通過按實(shí)施例1所述使3.74mg166Ho和35mg脫乙酰殼多糖反應(yīng)制備的166Ho-脫乙酰殼多糖配合物溶液用5體積的水稀釋。
劇烈地?cái)嚢?，滴?N NaOH以使沉淀完全(pH9-10)。
使所得到的懸浮液以聲波處理5分鐘。
通過在240×g下離心3分鐘使沉淀與上清液分離，再把得到脫乙酰殼多糖大顆粒懸浮于4ml的鹽水溶液中。
將懸浮物分送到10ml的小瓶內(nèi)，密封后用高壓消毒蒸鍋消毒，在121℃下持續(xù)30分鐘。
大顆粒的粒子通過在起波處理洗滌器中的再處理可均勻地被分散。
測(cè)量粒子的尺寸，平均粒徑約25μm。
測(cè)定放射性脫乙酰殼多糖配合物及其大顆粒的體外穩(wěn)定性和體內(nèi)穩(wěn)定性并描述于下文中。
<實(shí)施例5>檢驗(yàn)166Ho-脫乙酰殼多糖配合物和大顆粒的體外穩(wěn)定性使含2mCi166Ho的166Ho-脫乙酰殼多糖配合物和大顆粒在室溫和37℃下保存在各小瓶內(nèi)25天。
按每次的時(shí)間間隔IILC-SA[MeOH(49)H2O(49)乙酸(2)]測(cè)定放射化學(xué)活性(參見表6，7)。
按實(shí)施例4的描述制備的大顆粒按每次的時(shí)間間隔用0.9％NaCl(5ml)洗滌。
測(cè)量剩于大顆粒中和濾液中的放射活性(參照表8)。
表6室溫下穩(wěn)定性的檢驗(yàn)
表7在37℃下穩(wěn)定性的檢驗(yàn)
正如表6和7所示，在Rf為0.2-0.4時(shí)，166Ho脫乙酰殼多糖配合物幾近100％的放射性被保留，而在Rf＝0.9-1.0時(shí)，游離166Ho的放射性是很小的，可持續(xù)25天。
結(jié)果表明脫乙酰殼多糖大顆粒的體外穩(wěn)定性在室溫或37℃下是極佳的。
表8.通過洗滌檢驗(yàn)穩(wěn)定性
正如表8所示，當(dāng)166Ho-脫乙酰殼多糖大顆粒用鹽水溶液洗滌時(shí)，大顆粒不溶或不變成膠體狀。幾乎100％的放射化學(xué)活性保留在沉淀中，如上考慮，脫乙酰殼多糖的游離胺與166Ho結(jié)合的是如此牢固以形成很穩(wěn)定的螯合物。
<實(shí)施例6>檢驗(yàn)166Ho-脫乙酰殼多糖配合物和大顆的體內(nèi)穩(wěn)定性把按實(shí)施例1制備的166Ho-脫乙酰殼多糖配合物溶液的pH調(diào)節(jié)到5.5，然后經(jīng)0.2μm膜式濾器過濾再消毒。把0.5ml(400μCi)的166Ho-脫乙酰殼多糖配合物溶液通過關(guān)節(jié)內(nèi)注射引入正常兔子膝關(guān)關(guān)節(jié)中。
在合適的時(shí)間間隔后，使用γ-射線至在注射后立即將留在膝關(guān)節(jié)內(nèi)的放射性與總放射性作一對(duì)比。
將按實(shí)施例4制備的大顆粒懸浮于鹽水溶液中，再于121℃下在高壓消毒蒸鍋內(nèi)消毒30分鐘。
將這種懸浮液的0.1ml等份試樣注射到所述膝關(guān)節(jié)中。
表9.正常兔子的膝關(guān)節(jié)中留有的放射性脫乙酰殼多糖配合物及其大顆粒的％
正如表9所示，在注射后(排除166Ho的物理降低)分別在2小時(shí)(99.9％)、6小時(shí)(99.9％)、24小時(shí)(99.8％)和48小時(shí)(99.7％)時(shí)，放射性差不多都保留在關(guān)節(jié)孔中。
可以證實(shí)放射性脫乙酰殼多糖配合物和大顆粒沒有滲流出損害處。
按上述考慮，166Ho-脫乙酰殼多糖配合物和大顆于體內(nèi)和體外都是很穩(wěn)定的。與鈥形成螯合物的脫乙酰殼多糖是一種可生物降解和生物相溶的物質(zhì)，在合適期限內(nèi)吸收保留于關(guān)節(jié)聯(lián)接處(articulate)，之后降解并在衰變后緩慢排泄。
也就是說，脫乙酰殼多糖的游離胺與放射性核素形成螯合物的脫乙酰殼多糖是一種理想的內(nèi)部放射治療劑，該治療劑能治療體內(nèi)的損害并能排泄出體外。
放射性脫乙酰殼多糖配合物作為內(nèi)部放射治療劑的效果在下文將要描述。
<實(shí)施例7>放射性脫乙酰殼多糖配合物的臨床實(shí)驗(yàn)1)放射滑膜切除術(shù)對(duì)按ACR(American College of Rheumatology)標(biāo)準(zhǔn)選擇36名患者進(jìn)行內(nèi)部放射治療。
將放射性脫乙酰殼多糖配合物注射到膝關(guān)節(jié)。
放射性脫乙酰殼多糖物的注射量取決于個(gè)人，但平均為15-20mCi。
平均觀察時(shí)間與50.4周。
有44％的患者結(jié)果是極好的，32％是良好的，不好的有24％，因而有76％的患者得到了治愈。
2)治療肝癌患有1-3cm大小肝癌的45名患者，按癌的大小用10-20mCi的放射性脫乙酰殼多糖配合物治療。有90-95％的患者顯示良好的結(jié)果，在超聲誘導(dǎo)下對(duì)癌組織直接注射。
按上述考慮，放射性脫乙酰殼多糖配合物和大顆粒對(duì)治療各種癌癥和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎均有良好的效果。
在166Ho、放射性脫乙酰殼多糖配合物和大顆粒的情況下，按照疾病的種類和損害的大小，一次可引入5-150mCi的藥量。用注射器可把脫乙酰殼多糖配合物的溶液直接給藥于損害。脫乙酰殼多糖配合物大顆粒溶解于水、鹽水溶液或乙醇后即可給藥。
放射性脫乙酰殼多糖配合物及其大顆?？赏ㄟ^向損害處直按給藥，內(nèi)部放射治療，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、肝癌、腦癌、乳腺癌、卵巢癌等疾病。
權(quán)利要求
1.放射性脫乙酰殼多糖配合物，其特征在于所述脫乙酰殼多糖用放射性核素標(biāo)記。
2.按權(quán)利標(biāo)要求1的放射性脫乙酰殼多糖配位物，其中放射性核素放射高能β射線和低能γ-射線的治療射線。
3.按權(quán)利要求2的放射性脫乙酰殼多糖配合物，其中放射性核素選自包含153Sm、165Dy，166Ho、和169Er的組中。
4.按權(quán)利要求1的放射性脫乙酰殼多糖配合物，其中脫乙酰殼多糖的分子量為100000-1000000。
5.按權(quán)利要求1的放射性脫乙酰殼多糖配合物，其中放射性脫乙酰殼多糖配合物在酸情況下是可溶的，而在生理pH是凝膠。
6.制備放射性脫乙酰殼多糖配合物的方法，其特征在于1)把穩(wěn)定核素通過在核反應(yīng)器中用中子照射轉(zhuǎn)化成放射性核素，2)把所得到的放射性核素溶解在蒸餾水中形成放射性核素溶液，3)把脫乙酰殼多粒解在蒸餾水中形成脫乙酰殼多糖溶液，4)把放射性核素溶液加到脫乙酰殼多糖溶液中形成放射性脫乙酰殼多糖配合物。
7.按權(quán)利要求6制備放射性脫乙酰殼多糖配合物的方法，其中穩(wěn)定核素可選自164Dy(NO3)3、164Dy2O3、165Ho(NO3)3和165Ho2O3。
8.按權(quán)利要求6制備放射性脫乙酰殼多糖配合物的方法，其中脫乙酰殼多糖溶液的pH為2-4。
9.按權(quán)利要求8制備放射性脫乙酰殼多糖配合物的方法，其中脫乙酰殼多糖溶液是乙酸溶液。
10.按權(quán)利要求6制備放射性脫乙酰殼多糖配合物的方法，其中放射性核素和脫乙酰殼多糖的分子量比值為1∶1-4。
11.按權(quán)利要求6制備放射性脫乙酰殼多糖配合物的方法，其中脫乙酰殼多糖溶液的粘度是100-200cps。
12.放射性大顆粒，其特征在于把權(quán)利要求1的放射性脫乙酰殼多糖配合物制成粒子。
13.按權(quán)利要求12的放射性大顆粒，其中粒子的尺寸是1-5μm。
14.制備放射性大顆粒的方法，其特征在于1)穩(wěn)定核素通過在核反應(yīng)器內(nèi)用中子照射轉(zhuǎn)化成放射性核素，2)把所得到的放射性核素溶解在蒸餾水中形成放射性核素溶液，3)把脫乙酰殼多糖溶解于蒸餾水中形成脫乙酰殼多糖溶液，4)把放射性核素溶液加到脫乙酰殼多糖溶液中形成放射性脫乙酰殼多糖配合物溶液，5)把堿溶液加到放射性脫乙酰殼多糖配合物溶液中形成放射性脫乙酰殼多糖大顆粒。
15.制備放射性脫乙酰殼多糖配合物用的藥盒，其特征在于該藥盒含放射性核素溶液和凍干的脫乙酰殼多糖。
16.按權(quán)利要求15用于的制備放射性脫乙酰殼多糖配合物的藥盒，其中凍干的脫乙酰殼多糖是通過凍干含抗壞血酸的脫乙酰殼多糖溶液制備的。
17.使用放射性脫乙酰殼多糖配合物及其大顆粒作內(nèi)部放射治療劑。
18.按權(quán)利要求17用作內(nèi)部放射治療劑，其中疾病是類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎或囊狀癌，如肝癌、腦癌、乳腺癌或卵巢癌。
全文摘要
本發(fā)明涉及由放射性核素標(biāo)記的脫乙酰殼多糖，一種生物相溶和生物降解的天然聚合物，形成的放射性脫乙酰殼多糖配合物，由脫乙酰殼多糖配合物制成顆粒形成的放射性脫乙酰殼多糖大顆粒，和供制備放射性脫乙酰殼多糖配合物用的藥盒，其制備方法，及其用于內(nèi)部放射治療劑。放射性脫乙酰殼多糖配合物及其大顆?？捎糜趦?nèi)部放射療法，通過直接給藥于損害處治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎或囊狀癌如肝癌、腦癌、腺乳癌、卵巢癌等。
文檔編號(hào)A61K51/02GK1139116SQ96103508
公開日1997年1月1日 申請(qǐng)日期1996年3月11日 優(yōu)先權(quán)日1995年3月10日
發(fā)明者樸敬培, 金榮美, 金載祿 申請(qǐng)人:韓國原子力研究所