專利名稱：骨成型用移植體的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種含有骨誘導(dǎo)因子(蛋白質(zhì))的骨成形用移植體，及一種可用作骨誘導(dǎo)因子載體的復(fù)合多孔體。
更詳細(xì)地說(shuō)，本發(fā)明涉及一種其特征在于在復(fù)合多孔體上載有骨誘導(dǎo)因子的骨成形用移植體，及可用作骨誘導(dǎo)因子載體的復(fù)合多孔體。
背景技術(shù)：
骨誘導(dǎo)因子(bone morphogentic proteinBMP)為這樣一種活性蛋白質(zhì)它作用于皮下組織或肌肉組織內(nèi)的未分化的間葉系細(xì)胞，使其分化成為成軟骨細(xì)胞及成骨細(xì)胞，以形成軟骨或骨。BMP雖是作為牛脫鈣骨基質(zhì)中存在的異位性骨誘導(dǎo)活性的物質(zhì)而被發(fā)現(xiàn)的，但未分離出純樣品，因此，它的具體結(jié)構(gòu)仍不明了。不過(guò)，由于遺傳工程技術(shù)的發(fā)展，編碼人BMP的基因被無(wú)性繁殖(克隆)，其氨基酸序列也被明確。另外，也明確了人BMP構(gòu)成了由氨基酸序列相同的多數(shù)近緣蛋白質(zhì)組成的一組族系，創(chuàng)制了多種組換人骨誘導(dǎo)因子(rhBMP)(見Science Vol.242，pp.1528-1534(1988)；Proc.Natl.Acad.Sci.USA Vol.87，pp.2220-2224(1990)；Progress in Growth FactorResearch，Vol.1，pp.267-280(1989)；日本專利公告(特表平)平2-500241號(hào)，日本專利公告(特表平)平3-503649號(hào)，日本專利公告(特表平)平3-505098號(hào)，WO91/18098，WO92/05199，WO93/09229等公報(bào))。另外，也有人用性狀轉(zhuǎn)換體進(jìn)行人骨誘導(dǎo)因子的生產(chǎn)。
在BMP的結(jié)構(gòu)尚不明了的時(shí)候起，即已有人提出種種利用上述BMP治療骨或軟骨的損傷、缺損或成形不全等疾患的方法，隨著組換人BMP的生產(chǎn)，這種治療方法更加盛行起來(lái)。在利用BMP時(shí)，將BMP作單獨(dú)的局部埋植以成形骨的方法是極為困難的。因此，一般來(lái)說(shuō)，是將BMP載荷于載體后再作局部的埋植。這是因?yàn)?，由BMP作局部骨誘導(dǎo)需要數(shù)日乃至數(shù)星期的時(shí)間，至少在該期間內(nèi)不使BMP擴(kuò)散，保留于該局部區(qū)域是上述埋植的主要目的。這樣，BMP的載體和BMP一起埋植于機(jī)體內(nèi)，這就要求它不損傷BMP的活性，并具有低毒性、低的發(fā)癌率及低的抗原性等的特性，同時(shí)，人們也希望它容易購(gòu)得，并具有不同場(chǎng)合下的生物降解性能。
作為已提出的技術(shù)，有例如在atelo膠原(atelocollagen)組成的載體上載持BMP的移植體(日本專利公開特開昭62-89629號(hào)公報(bào))，將BMP和膠原載體浸滲于陶瓷材料載體上的移植體(日本專利公開特開昭60-253455號(hào)公報(bào))，及由rhBMP和多孔生物降解性的聚合物和自體血液組成的組合物(美國(guó)專利第5,171,579號(hào)說(shuō)明書)等。
然而，僅由BMP和膠原載體組成的移植體，其成型性不夠，強(qiáng)度差，而且在機(jī)體內(nèi)的分解也快，所以，其在機(jī)體內(nèi)的形狀維持不夠，骨成形也必定不充分。又，為提高骨的成形性及在機(jī)體內(nèi)的形狀維持性能，在使用陶瓷材料等的非分解性或分解緩慢的物質(zhì)作為支持物，或?qū)⑵浠烊胼d體中加以使用時(shí)有這樣的問(wèn)題這些物質(zhì)不被機(jī)體所吸收，并殘留下來(lái)，阻礙了均一骨組織的形成；或者，殘留的載體可能成為由于骨的重制(remodeling)等導(dǎo)致的骨吸收的原因。再有，由多孔生物降解性的聚合物和自體血液組成的組合物，其手術(shù)時(shí)的操作性及成型性等方面也有待進(jìn)一步改善。
此外，已有公知的移植體使用了膠原和生物降解聚合物。已知，在將該移植體移植于機(jī)體內(nèi)時(shí)，首先在移植體周圍形成新生骨，然后，隨著移植體的分解，慢慢地，在體內(nèi)部也形成骨。例如有報(bào)告說(shuō)，以不溶性骨基質(zhì)及膠原膜為載體的移植體中，可以觀察到，新生骨從移植體的周圍起始，慢慢地向內(nèi)形成(THE BONE 1993，12，Vol.7，No.4，pp 97-104)。
又，在特開平1-232967號(hào)公報(bào)上公開了一種移植骨片的代用組成物，該移植骨片的代用組成物是在具有相互連接的空隙部的聚乳酸的空隙部分填充有透明質(zhì)酸的絨狀物(velour)而成的，在該絨狀透明質(zhì)酸上載持有BMP的活性物質(zhì)。但是，該文獻(xiàn)上并無(wú)其具體的制造例及試驗(yàn)例的記載，所以，其骨成形效果是不明確的。在維持結(jié)構(gòu)的骨架是PLA及在其空隙部填充所述透明質(zhì)酸絨狀物這二點(diǎn)上，該技術(shù)不同于本發(fā)明。在該公報(bào)上記載的構(gòu)成組合物骨架的、“具有相互連接的空隙部的聚乳酸”在移植后至少90天內(nèi)，保持了其物理性質(zhì)。因此，其在機(jī)體內(nèi)可長(zhǎng)時(shí)期地存留這一點(diǎn)是清楚的。又，該公報(bào)所述的組合物使用了PLA海綿，這樣，其性堅(jiān)脆，可塑性及彈性低，埋植時(shí)的成型性和操作性差。
再有，特開平3-23864號(hào)公報(bào)上公開了一種將聚乳酸系化合物嵌埋在膠原海綿中的可用作機(jī)體組織的填充材料、在德國(guó)專利第3,841,397號(hào)公報(bào)上公開了一種以酯包覆膠原海綿的緩釋性藥物的載體。然而，關(guān)于這些載體在適用于BMP的骨成形用移植體方面的使用卻無(wú)任何報(bào)道。
因此，人們期望這樣的一種骨成形用移植體該骨成形用移植體具有優(yōu)異的成型性及機(jī)體內(nèi)的形狀維持能力，優(yōu)良的手術(shù)時(shí)的可操作性；且，該骨成形用移植體具有優(yōu)異的新生骨成形性，適用于BMP。
發(fā)明揭示本發(fā)明者們?yōu)橹圃斐龀尚托院?、在機(jī)體內(nèi)形狀維持性好、及手術(shù)時(shí)的操作性能優(yōu)異、且具有優(yōu)異的新生骨成形性、適用于BMP的骨成形用移植體，經(jīng)刻意研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在由機(jī)體吸收性親水性材料組成的多孔結(jié)構(gòu)體的表面形成一層由機(jī)體吸收性高分子材料組成的表面層，由此形成復(fù)合多孔體，將骨誘導(dǎo)因子載持于該復(fù)合多孔體上，由此形成的具有所述特征的骨成形用移植體可以達(dá)到前述目的，從而完成了本發(fā)明。
另外，本發(fā)明也涉及一種在由選自明膠、透明質(zhì)酸、透明質(zhì)酸衍生物的一種或二種以上的化合物組成的機(jī)體吸收性親水性材料的多孔結(jié)構(gòu)體的表面，覆以一種或二種以上的選自聚乳酸、聚乳酸聚乙醇酸共聚物及聚[雙(對(duì)羧基苯氧基)丙烷]無(wú)水物和癸二酸的共聚物的機(jī)體吸收性高分子材料而成的復(fù)合多孔體。
以下，詳細(xì)說(shuō)明本發(fā)明。
本發(fā)明的骨成形用移植體的有代表性的實(shí)施方式中的部分剖視圖示意于

圖1。即，本發(fā)明的骨成形用移植體1由下述部分組成(1)包括由機(jī)體吸收性親水性材料組成的多孔結(jié)構(gòu)體2、形成于該結(jié)構(gòu)物表面的、由機(jī)體吸收性高分子材料組成的表面層3的復(fù)合多孔體4，及(2)分散、載荷于上述復(fù)合多孔體4的表面及內(nèi)部(即，多孔結(jié)構(gòu)體2及/或表面層3的內(nèi)部、及/或孔的內(nèi)部)的骨誘導(dǎo)因子(BMP)5。另外，骨成形用移植體1上含有許多孔6。這些孔6具有連續(xù)性并開放于外部。又，圖1中所示的部分剖視圖僅是示意的，其各構(gòu)成部分的形狀及大小等并不限于圖中所示形態(tài)。
本發(fā)明的移植體主要使用于移植至機(jī)體內(nèi)應(yīng)形成骨(軟骨)的部位。當(dāng)將本發(fā)明的移植體移植于機(jī)體內(nèi)時(shí)，則BMP在所埋植的局部位置滯留，并發(fā)生作用，誘發(fā)骨的成形。復(fù)合多孔體將該BMP滯留于局部位置，起了形成所希望形態(tài)的骨的傳遞系統(tǒng)(derivery system)的作用，同時(shí)，其自身也在機(jī)體內(nèi)受到吸收，置換為新生骨。
在本發(fā)明中可使用的骨誘導(dǎo)因子(BMP)并無(wú)特別的限制，只要是具有作用于未分化的間葉系細(xì)胞，使其分化成為成軟骨細(xì)胞和成骨細(xì)胞，并形成軟骨或骨的活性蛋白質(zhì)即可。其配制方法也無(wú)限定。但是，從免疫性等臨床上的安全性及是否可大量購(gòu)得品質(zhì)穩(wěn)定的材料這二點(diǎn)來(lái)說(shuō)，則最好是由基因組換技術(shù)制造的人BMP為宜。即，最好使用培養(yǎng)形質(zhì)轉(zhuǎn)換體(細(xì)胞或微生物)，該形質(zhì)轉(zhuǎn)換體含有編碼人骨誘導(dǎo)因子的堿基序列的組換DNA，分離、提純、配制由這些形質(zhì)轉(zhuǎn)換體產(chǎn)生的組換人骨誘導(dǎo)因子而產(chǎn)生的人骨誘導(dǎo)因子(rhBMP)。例如，這些人骨誘導(dǎo)因子(rhBMP)有rhBMP-2，rhBMP-3，rhBMP-4(也稱rhBMP-2B)，rhBMP-5，rhBMP-6，rhBMP-7，rhBMP-8，rhBMP-9，rhBMP的雜二聚體或其改性體或部分缺損體。這些蛋白質(zhì)可以單獨(dú)或混合二種以上使用。其中，優(yōu)選rhBMP-2。
這些rhBMP可以是用哺乳動(dòng)物細(xì)胞(例如，CHO細(xì)胞)，微生物(例如，大腸菌)或酵母細(xì)胞等得到的rhBMP。作為已經(jīng)確立了大批量生產(chǎn)方法及精制方法的rhBMP有rhBMP-2，但是，也可以同樣制造和精制其它的rhBMP并加以使用(見Progress in Growth Fractor Research，Vol.1，pp.267-280(1989))。已知的精制rhBMP-2為分子量約30000的蛋白質(zhì)二聚物。其各自的單體是在Asn56的殘基上具有高甘露糖型的糖鏈[Abstract SixthInternation Symposium of the Protein Society，San Diego，CA(1992)]。
構(gòu)成本發(fā)明的骨成形用移植體支持物的復(fù)合多孔體如前所述，由多孔結(jié)構(gòu)體和表面層構(gòu)成。該多孔結(jié)構(gòu)體具有形成本發(fā)明移植體多孔結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)的骨架。該多孔結(jié)構(gòu)體的具體結(jié)構(gòu)并無(wú)特別的限制，利用該多孔結(jié)構(gòu)體制造的移植體只要是具有可構(gòu)成如海綿狀、網(wǎng)眼狀或纖維狀等任意的多孔結(jié)構(gòu)的基礎(chǔ)結(jié)構(gòu)即可。另外，所述的表面層為形成于上述多孔結(jié)構(gòu)體至少一部分表面上的表面層，它與多孔結(jié)構(gòu)體成為一體形成復(fù)合多孔體。較好的表面層是，沿該多孔結(jié)構(gòu)體的多孔結(jié)構(gòu)所有的結(jié)構(gòu)表面，均勻地形成表面層。更好的表面層是，該表面層自身具有更微細(xì)的多孔結(jié)構(gòu)。
本發(fā)明的骨成形用移植體因具有上述多孔結(jié)構(gòu)，所以在移植后，血液及機(jī)體內(nèi)的細(xì)胞可迅速地進(jìn)入多孔體孔內(nèi)，在整個(gè)移植體上(即，不僅是在移植體的外部表面，且也在移植體內(nèi)部孔內(nèi))形成適于骨成形的微小環(huán)境；同時(shí)，載于移植體表面及/或孔內(nèi)的BMP迅速放出，其后，載于多孔結(jié)構(gòu)體及/或表面層內(nèi)的BMP緩慢放出。因此，不光是在移植體的表面，且也在移植體內(nèi)部孔內(nèi)，及在吸收了移植體的部分形成骨。
本發(fā)明的機(jī)體吸收性親水性材料為這樣一種材料，即該材料具有機(jī)體親和性(即，低毒性、機(jī)體內(nèi)的異物反應(yīng)性低，但與機(jī)體組織親和性良好)，機(jī)體吸收性(即，具有生物降解性)，及親水性，但其水溶性較低，或是不水溶性的。再有，本發(fā)明的機(jī)體吸收性親水性材料在常溫下為固體狀，具有成型性。本發(fā)明的機(jī)體吸收性親水性材料只要具有這些特征即可，并無(wú)特別的限制。具體的上述材料有明膠、透明質(zhì)酸、透明質(zhì)酸衍生物[例如，透明質(zhì)酸與殼聚糖、聚氨基半乳糖胺、藻酸三乙醇胺、明膠、酪蛋白、角蛋白、膠原、肌球蛋白及/或絲蛋白等的聚離子復(fù)合物(參照如特開平6-73103號(hào)公報(bào))]，膠原、膠原衍生物(例如，琥珀酰化膠原、甲基化膠原)，殼聚糖、殼聚糖衍生物(例如，甲基吡咯烷酮?dú)ぞ厶?，聚氨基半乳糖胺、藻酸三乙醇胺、酪蛋白、明膠、角蛋白、肌球蛋白或絲蛋白等。優(yōu)選使用來(lái)自機(jī)體的物質(zhì)，例如，明膠、透明質(zhì)酸、透明質(zhì)酸衍生物(特別是明膠/透明質(zhì)酸聚離子復(fù)合物)、膠原、膠原衍生物，殼聚糖、殼聚糖衍生物、及藻酸三乙醇胺，特別優(yōu)選的是，使用明膠、明膠/透明質(zhì)酸聚離子復(fù)合物或膠原。上述機(jī)體吸收性親水性材料可以單獨(dú)使用，也可組合二種以上使用。
作為由機(jī)體吸收性親水性材料組成的多孔結(jié)構(gòu)體，可以使用以往公知的任一種多孔體。例如，作為明膠多孔體，理想的是使用，將明膠溶于水，起泡后凍干而制成的海綿狀多孔體。特別理想的是，孔徑為約50-500μm、密度10-100mg/毫升、及氣孔率90％以上的明膠多孔體(例如，Spongel(商品名山之內(nèi)制藥株式會(huì)社制))，因其可吸收約為其自身重量的30倍以上的水分，所以，實(shí)際上用作止血?jiǎng)?；因其容易被組織內(nèi)吸收，也可埋于體內(nèi)。該多孔體因是已知的不具有抗原性的安全材料，最為理想。
用作多孔結(jié)構(gòu)體的膠原多孔體最好是取自以已知方法成形為海綿狀的低抗原性atelo(アテロ)膠原多孔體[例如，Helistat(商品名MarionLabratories，Inc.制)]。另外，作為透明質(zhì)酸衍生物的多孔體，可以使用例如明膠/透明質(zhì)酸聚離子復(fù)合物組成的海綿(特開平6-73103號(hào)公報(bào))；作為透明質(zhì)酸多孔體及作為殼聚糖衍生物多孔體，分別可使用例如以公知方法將透明質(zhì)酸固化成型的透明質(zhì)酸多孔體，和由記載于CarbohydratePolymers，20，99-106(1993)的殼聚糖衍生物組成的多孔體。
多孔結(jié)構(gòu)體可以是任意的形狀(例如，海綿狀、網(wǎng)眼狀、或纖維狀)，其平均孔徑較好的是10-1000μm，更好的是50-500μm；其氣孔率較好的是50％以上，更好的是氣孔率在70％以上，最好的是在90％以上。
本發(fā)明的機(jī)體吸收性高分子材料為這樣一種高分子材料該材料具有機(jī)體親和性(即，低毒性、機(jī)體內(nèi)的異物反應(yīng)性低，但與機(jī)體組織親和性良好)，機(jī)體吸收性(即，具有生物降解性)，且在常溫下為固體狀，具有成型性及一定的強(qiáng)度。只要是具有這些特征的聚合物即可，并無(wú)特別的限制。具體地，可以使用人工制造、具有機(jī)體親和性及生物降解性、還具有機(jī)體吸收性的疏水性聚合物。例如，聚乳酸、聚乳酸聚乙醇酸共聚物、聚[雙(對(duì)羧基苯氧基)丙烷]無(wú)水物(PCPP)和癸二酸的共聚物(J.Neurosurg.，80283-290(1944))、或聚羥基丁酸(PHB)、聚羥基丙酸(PHP)、聚蘋果酸或它們的共聚物等。優(yōu)選的是，使用聚乳酸、聚乳酸聚乙醇酸共聚物、聚[雙(對(duì)羧基苯氧基)丙烷]無(wú)水物(PCPP)和癸二酸的共聚物。特別優(yōu)選的是，使用平均分子量為5000-1500000的聚乳酸、或平均分子量為5000-1500000的聚乳酸/聚乙醇酸的含有比例在40％以上的聚乳酸聚乙醇酸共聚物。上述機(jī)體吸收性高分子材料可以單獨(dú)使用或組合二種以上使用。
在形成由機(jī)體吸收性高分子材料組成的表面層時(shí)，將機(jī)體吸收性高分子材料溶于適當(dāng)?shù)娜軇┲?，并以任意的方法將該溶解的材料涂施于上述多孔結(jié)構(gòu)體的表面及內(nèi)部，然后干燥。例如，以任意的方法(噴霧或涂敷，較好的是浸滲)，將上述的溶液涂施于多孔結(jié)構(gòu)體上，再進(jìn)行干燥(例如，通風(fēng)干燥，優(yōu)選的是凍結(jié)干燥)。上述方法，例如，可以將聚乳酸(PLA)、聚乳酸聚乙醇酸共聚物(PLGA)、特別是將平均分子量為5000-1500000的聚乳酸、或平均分子量為5000-1500000、聚乳酸的含有比例(摩爾比)在40％以上的聚乳酸聚乙醇酸共聚物以0.2-20％(w/w)、優(yōu)選的是以1-16％(w/w)的濃度溶于有機(jī)溶劑中，使由前述的機(jī)體吸收性高分子材料組成的層形成于多孔結(jié)構(gòu)體表面及其內(nèi)部各個(gè)孔的表面。作為配制機(jī)體吸收性高分子材料溶液的有機(jī)溶劑，可以使用二噁烷、丙酮、乙酸乙酯、二甲胺或冰醋酸。
按前述方法，為了使從多孔結(jié)構(gòu)體和表面得到的復(fù)合多孔體可良好地載持BMP，根據(jù)需要，也可適當(dāng)?shù)靥砑邮褂闷渌奶砑觿?，例如，膠凝劑、表面活性劑、穩(wěn)定劑、及/或pH調(diào)節(jié)劑。膠凝劑可以舉出例如透明質(zhì)酸、羧甲基纖維素(鈉)、明膠、膠原、凝膠狀聚乳酸/聚乙二醇共聚物，或自體血液等?？梢栽谔砑覤MP之時(shí)，或在添加BMP之前添加上述添加劑的一種或二種以上。
又，表面活性劑也可添加于多孔結(jié)構(gòu)體及/或表面層中，較好的是，表面活性劑添加于機(jī)體吸收性高分子材料組成的表面層中。在添加于表面層中時(shí)，可以在涂施(施用)機(jī)體吸收性高分子材料之時(shí)添加，也可以在涂施機(jī)體吸收性高分子材料之后添加(或作洗凈處理)。添加于多孔結(jié)構(gòu)體時(shí)，可以是在配制結(jié)構(gòu)體時(shí)添加，也可以是在施以表面層之前添加。作為表面活性劑較好的是非離子型表面活性劑，更好的是聚氧乙烯脫水山梨糖醇烷基酯類，例如，吐溫-80及吐溫-20等。
將表面活性劑(特別是吐溫-80)添加于由機(jī)體吸收性高分子材料組成的表面層，則可改善親水性，更能提高血液及細(xì)胞對(duì)于移植體的吸收性和滲入性，因此是理想的。此時(shí)，可以將表面活性劑以0.01-10％(重量)、優(yōu)選的是以0.05-2％(重量)添加于表面層的表面，或是用含有表面活性劑的溶液作洗凈處理。
另外，作為穩(wěn)定劑，可以使用例如甘氨酸等的氨基酸類及糖類，作為pH調(diào)節(jié)劑，可以使用例如檸檬酸等的藥劑學(xué)上許可的有機(jī)酸及無(wú)機(jī)酸，它們都可以與前述膠凝劑及表面活性劑同樣的方法添加。
作為在由機(jī)體吸收性親水性材料組成的多孔結(jié)構(gòu)體表面上具有機(jī)體吸收性高分子材料組成的表面層的復(fù)合多孔體，其平均孔徑較好的是10-1000μm，更好的是40-600μm；其氣孔率較好的是40％以上，更好的是氣孔率在60％以上，最好的是在80％以上。該復(fù)合多孔體在機(jī)體內(nèi)的一定期間，維持了多孔結(jié)構(gòu)，并許可細(xì)胞進(jìn)入，提供了骨成形的場(chǎng)所，且，慢慢地被分解、吸收，直至完全消失。
本發(fā)明的復(fù)合多孔體也可在載持BMP之前根據(jù)需要施以滅菌處理。該滅菌方法只要是醫(yī)療上許可的方法即可。例如，可使用放射性滅菌、環(huán)氧乙烷氣體滅菌及干燥滅菌等。
在本發(fā)明的骨成形用移植體中，如前所述，BMP載持于復(fù)合多孔體的至少一部分，即，載持于復(fù)合多孔體的表面、復(fù)合多孔體內(nèi)部(換言之，多孔結(jié)構(gòu)體的內(nèi)部及/或表面層的內(nèi)部)及/或復(fù)合多孔體的孔的空隙內(nèi)。特別是，由于機(jī)體吸收性親水性材料的BMP水溶液的吸收性較好，其BMP的吸附性能也較好，所以，具有優(yōu)異的BMP載持性能。機(jī)體吸收性高分子材料為疏水性，但是在特別含有表面活性劑時(shí)，或者是在以表面活性劑作表面處理時(shí)，可提高其BMP的吸收性及吸附性。為了提高復(fù)合多孔體表面上的BMP載持性，在與BMP的添加之前或同時(shí)，施以膠凝劑等基本添加劑。
在發(fā)明的復(fù)合多孔體上載持BMP的方法并無(wú)什么限制，只要是能將BMP載持于復(fù)合多孔體，最好是載持于整個(gè)復(fù)合多孔體上的方法即可。又，可以在復(fù)合多孔體的制造過(guò)程中的任一階段中添加BMP。例如，可以在多孔結(jié)構(gòu)體的制造過(guò)程中添加BMP，也可以在多孔結(jié)構(gòu)體完成時(shí)將BMP添加于其表面，或者，也可以在施以表面層的同時(shí)一起添加BMP。另外，也可在用膠凝劑及表面活性劑等處理復(fù)合多孔體時(shí)添加BMP。
BMP的添加，可以直接使結(jié)構(gòu)體浸滲BMP溶液作為移植體使用，或者，將浸滲了BMP的結(jié)構(gòu)體以凍干方法等于燥后使用。在使用干燥移植體的場(chǎng)合，使用時(shí)(移植時(shí))，用注射用水及生理鹽水濕潤(rùn)后使用，或者，直接以干燥體形式移植，也可快速地由血液濕潤(rùn)，沒有什么妨礙。
本發(fā)明的骨成形用移植體中，相對(duì)于每一毫升移植體的各結(jié)構(gòu)成分的含量并沒有什么特別限制，但是，作為形成多孔結(jié)構(gòu)體的機(jī)體吸收性親水性材料，其相對(duì)于每一毫升移植體的含量通常是在500mg以下，較好的是在300mg以下，更好的是在5-100mg；作為形成表面層的機(jī)體吸收性高分子材料，其相對(duì)于每一毫升移植體的含量通常是在500mg以下，較好的是在300mg以下，更好的是在5-200mg之間。BMP只要是在可以發(fā)揮骨誘導(dǎo)作用的濃度皆可。它可以是任意濃度，但是，在使用rhBMP-2的場(chǎng)合，通常是在0.01mg以上，較好的是在0.01-20mg，更好的是在0.1-5.0mg之間。
作為本發(fā)明的骨成形用移植體的優(yōu)選形態(tài)之一可舉例如下。即，使BMP水溶液浸滲至由明膠多孔體的復(fù)合多孔體和聚乳酸聚乙醇酸共聚物(PLGA)的表面層組成的復(fù)合多孔體上，則BMP溶液的一部分通過(guò)PLGA表面層的微孔吸附于PLGA內(nèi)部，再為其內(nèi)部的明膠多孔體基質(zhì)所吸附。根據(jù)需要，再經(jīng)凍干法干燥。這樣，可以得到在整個(gè)復(fù)合多孔體上載持有BMP的本發(fā)明的骨成形用移植體。
將如上所得的本發(fā)明的骨成形用移植體移植于機(jī)體內(nèi)時(shí)，則BMP由移植體表面放出至機(jī)體內(nèi)，再隨著PLGA的吸收及明膠多孔體的吸收，其內(nèi)部的BMP也緩慢釋出。
本發(fā)明的移植體，可即在使用時(shí)將BMP進(jìn)行配制使其載于載體上，或者也可在載持BMP之后，保存于適當(dāng)?shù)臈l件下，直至使用之時(shí)。
為了修復(fù)各種骨或軟骨的缺損，本發(fā)明的移植體可按本領(lǐng)域已知的方法移植于骨缺損患部上。即，與以往已知的移植體一樣，可適用于機(jī)體。根據(jù)使用的目的、用途、適應(yīng)的部位、患者的狀態(tài)等的不同，可由操作者根據(jù)通常的方法作適當(dāng)?shù)膽?yīng)用。
本發(fā)明的移植體基本上限定了所成形的新生骨形狀。即，對(duì)應(yīng)于該移植體的形狀成形骨。因此，理想的是，按所期望的骨成形形狀，形成本發(fā)明的移植體形狀。另外，本發(fā)明的移植體不必在移植手術(shù)后再作移植體的取出手術(shù)。
本發(fā)明的各種骨成形用移植體不僅可單獨(dú)使用，也可多個(gè)、或任意地以多種組合使用。另外，也可以將本發(fā)明的骨成形用移植體和其它的已知移植體組合使用。作為局部固定本發(fā)明的移植體并維持其形狀的目的，或者，在強(qiáng)度不夠的情況下，可以并合使用其它已知的增強(qiáng)材料。這樣的增強(qiáng)材料有膠原膜，用于GTR法的Goretex膜或聚乳酸膜等用于固定移植體的具生物相容性的膜；或者還有如金屬板、骨結(jié)合用的銷子或固定釘?shù)裙潭ū景l(fā)明移植體和機(jī)體內(nèi)組織(特別是骨)的固定器具。如有必要，在骨成形后，所述的固定器具也可通過(guò)外科手術(shù)去除。另外，也可并用其它已知的移植體。
此外，本發(fā)明也涉及一種在機(jī)體吸收性親水性材料組成的多孔結(jié)構(gòu)體表面施涂(施用)一種或二種以上的選自聚乳酸、聚乳酸聚乙醇酸共聚物、聚[雙(對(duì)羧基苯氧基)丙烷]無(wú)水物(PCPP)和癸二酸的共聚物等的機(jī)體吸收性高分子材料而形成的復(fù)合多孔體，所述機(jī)體吸收性親水性材料為選自明膠、透明質(zhì)酸、透明質(zhì)酸衍生物的一種或二種以上的復(fù)合物。
復(fù)合多孔體最好是由選自以明膠、及明膠/透明質(zhì)酸聚離子復(fù)合物作為機(jī)體吸收性親水性材料，以平均分子量為5000-1500000的聚乳酸、及平均分子量為5000-1500000的聚乳酸的含有比例在40％(摩爾)以上的聚乳酸聚乙醇酸共聚物作為機(jī)體吸收性高分子材料的一種或二種以上的化合物組成的復(fù)合多孔體。又，在復(fù)合多孔體的表面層上再添加表面活性劑則更好。特別好的是，所述多孔結(jié)構(gòu)體為由平均孔徑50-500μm、氣孔率為90％以上的明膠海綿組成的復(fù)合多孔體。
本發(fā)明的骨成形用移植體的多孔體基質(zhì)及表面層分別由機(jī)體吸收性親水性材料及機(jī)體吸收性高分子材料構(gòu)成。已知這些材料皆各種可單獨(dú)作為BMP的載體。但是，如明膠及膠原等的機(jī)體吸收性親水性材料柔軟，易變形，且，其在機(jī)體內(nèi)的分解速度較快，在1、2周內(nèi)即可被分解吸收。因此，無(wú)法得到在機(jī)體內(nèi)一定期間維持形狀的移植體。有時(shí)，往往很難得到具有所希望形狀的骨。另一方面，由于機(jī)體吸收性高分子材料為疏水性，其載持BMP的性能較差。又，雖然該材料具有機(jī)體親和性，但其親和力的程度較膠原等的機(jī)體親和性為弱。再有，該材料雖具有一定程度的堅(jiān)硬度，但其可塑性低，性脆，成形性不夠，同時(shí)還有這樣的缺點(diǎn)在埋植后的濕潤(rùn)狀態(tài)下，其性脆，容易崩壞。
從上所述，可以認(rèn)為，用具有優(yōu)異的機(jī)體親和性的膠原等包覆成型為多孔狀機(jī)體吸收性高分子材料，可以籍此得到其機(jī)體親和性和強(qiáng)度俱佳的載體。不過(guò)，實(shí)際上，這種載體可塑性差，性脆，其成型性、操作性不夠，仍不是令人滿意的材料。
本發(fā)明者們意外地發(fā)現(xiàn)將機(jī)體親和性較差的機(jī)體吸收性高分子材料被覆于明膠海綿等表面，形成復(fù)合多孔體，在該多孔體上載持BMP，即可得到本發(fā)明的骨成形用移植體。所得骨成形用移植體其機(jī)體親和性及親水性良好，且具有優(yōu)異的BMP載持性。另外，與用膠原等被覆高分子材料的情況不同，本發(fā)明的移植體富有彈性，具有手術(shù)操作性和適應(yīng)性。
另外，本發(fā)明的移植體不僅在移植體的周邊部位，且也在其中心部位，獲得良好的早期骨成形，具有優(yōu)異的骨成形效果。
即，本發(fā)明的骨成形用移植體顯示了如下所述的、以往載有BMP的移植體所沒有的優(yōu)異特征。
本發(fā)明的骨成形用移植體是一種具有適當(dāng)彈性的柔軟載體，其成型容易，不會(huì)脆裂，不光可成型為任意的形狀，且也可成型為薄片卷繞狀，或是裝于特定形狀的孔穴中，容易與骨缺損部位的形狀相貼合，具有優(yōu)異的操作性和適應(yīng)性。
又，本發(fā)明的移植體具有適當(dāng)?shù)膹?qiáng)度和彈性，在機(jī)體外的儲(chǔ)存期間，及在機(jī)體內(nèi)移植后的一定期間，皆可作長(zhǎng)時(shí)期的形狀保持?？梢源_保骨成形空間，并可形成所希望形狀的骨。再有，由于本發(fā)明的移植體具有優(yōu)異的親水性，體液(細(xì)胞及血液等)對(duì)整個(gè)移植體的滲透良好，且由于在埋植后的一定期間之內(nèi)可以穩(wěn)定地保持多孔形狀，所以，可以提供骨細(xì)胞生長(zhǎng)所必要的穩(wěn)定的微小環(huán)境。這樣，因本發(fā)明的移植體的BMP的吸附性良好、載持性能優(yōu)異，可以在機(jī)體內(nèi)緩釋BMP；另外，BMP不會(huì)從載體漏出，所以，以本發(fā)明的移植體所成形的骨可形成為如同移植體形狀的形狀。再有，伴隨著骨成形進(jìn)行一定期間后，移植體緩慢地為機(jī)體所吸收，并置換為良好的骨組織。從而，移植體本身不會(huì)長(zhǎng)期殘留于機(jī)體內(nèi)，而是形成良好的骨組織。又，本發(fā)明的移植體，其對(duì)移植部位的刺激性弱，不會(huì)形成如在PLGA載體上通常可見的血囊腫形成。
本發(fā)明的移植體在機(jī)體內(nèi)的吸收情況根據(jù)其大小、形狀、適應(yīng)的部位、聚合物的種類、濃度等而有不同，但是，大致在3-12周的時(shí)間內(nèi)幾乎可被機(jī)體完全吸收?；谌缟纤龅男再|(zhì)，使用本發(fā)明的移植體可成形良好的新生骨。即，如下述試驗(yàn)例中所示地，可以確認(rèn)使用本發(fā)明移植體的新生骨的早期成形不僅發(fā)生在移植體的周邊部分，且也發(fā)生在移植體的中心部位。這就說(shuō)明，本發(fā)明的移植體在其內(nèi)部也具有適應(yīng)骨成形的良好環(huán)境。
另外，如前所述，本發(fā)明的復(fù)合多孔體，其機(jī)體親和性及親水性良好，具有優(yōu)異的載持BMP等的活性物質(zhì)的能力，且是一種具有適當(dāng)彈性的柔軟性載體。本發(fā)明的復(fù)合多孔體不僅其成型容易、不會(huì)脆裂，可成型為各種形狀，且可成型為薄片狀卷繞，或可裝入特定形狀的孔穴中，容易與骨缺損部位的形狀貼合，具有優(yōu)異的操作性和適應(yīng)性。
本發(fā)明的復(fù)合多孔體在機(jī)體外的長(zhǎng)時(shí)間的存儲(chǔ)期間，及在埋植于機(jī)體內(nèi)后的必要期間之內(nèi)，皆可穩(wěn)定地保持一定的形狀和強(qiáng)度。另外，在上述儲(chǔ)存及埋植后的一定期間后，該復(fù)合多孔體緩慢地為機(jī)體所吸收，其自身不會(huì)長(zhǎng)期殘留于機(jī)體內(nèi)。再有，其對(duì)移植部位的刺激性也弱，可有效地用作機(jī)體材料。
由此，本發(fā)明的骨成形用移植體可有效地用于例如多肽等活性物質(zhì)的緩釋載體和骨、軟骨等機(jī)體組織的臨時(shí)性代用物，另外，也可有效地用于骨、軟骨等機(jī)體組織成形用的移植體的載體。特別是，本發(fā)明的骨成形用移植體可有效地用于載持了BMP的如前所述的骨成形用移植體的載體。
為證明本發(fā)明的骨形成用移植體的優(yōu)良效果，下面給出試驗(yàn)和結(jié)果。
移植實(shí)施例1(1)試驗(yàn)方法于乙醚麻醉下，在雄性大鼠(5周齡，Long Evans)的左右胸部皮下植入本發(fā)明的移植體，研究異位性骨誘導(dǎo)活性(n＝6-8)。
本發(fā)明的移植體采用如下移植體(A)實(shí)施例1中，用吸收了含有2重量％ D，L-乳酸/乙醇酸共聚物的溶液的明膠海綿制成的移植體(以下稱作移植體(A))；(B)實(shí)施例1中，用吸收了含有4重量％D，L-乳酸/乙醇酸共聚物的溶液的明膠海綿制成的移植體(以下稱作移植體(B))；及(C)實(shí)施例2中，用吸收了含有4重量％D，L-乳酸/乙醇酸共聚物的溶液的明膠海綿制成的移植體(以下稱作移植體(C))，它們分別含有rhBMP-2約20μg/100μl或約80μg/100μ1。作為對(duì)照，制成上述(A)、(B)和(C)，不含rhBMP-2的移植體，同樣地進(jìn)行移植。在移植后1周、2周、3周及4周進(jìn)行組織摘取。對(duì)于摘出的組織，進(jìn)行鈣含量測(cè)定(原子吸收光譜法)、軟X線攝影、pQCT(末梢骨用定量電腦連動(dòng)斷層攝影)以及組織學(xué)觀察，評(píng)價(jià)骨形成的程度。
(2)鈣含量測(cè)定(原子吸收光譜法)結(jié)果將摘出組織在2當(dāng)量鹽酸中浸漬2天以上，提取鈣，用原子吸收光譜法測(cè)定鈣含量。
圖2所示為移植體的鈣含量的經(jīng)時(shí)變化。不含有rhBMP-2的對(duì)照組，無(wú)論移植體(A)、(B)和(C)幾乎均未檢出鈣，而含有rhBMP-220μg/100μl組(圖2中以20μg表示)及80μg/100μ1組(圖2中以80μg表示)，無(wú)論(A)、(B)和(C)，從移植起經(jīng)1周后，鈣含量隨時(shí)間延長(zhǎng)而增加，大部分組經(jīng)3周或4周后顯示最大值。而且，該值隨rhBMP的用量增大而增大。圖2中，wk為移植后的經(jīng)過(guò)時(shí)間(周)。
(3)軟X線所見摘出組織的軟X線所見，不含rhBMP-2的對(duì)照組在觀察全周內(nèi)僅可見軟組織樣的微弱X線吸收，未觀察到骨組織的形成。這樣微弱的X線吸收被認(rèn)為系移植體所引起，從其經(jīng)時(shí)性的縮小提示移植體慢慢地被吸收，以及從經(jīng)4周后該X線吸收觀察所見，提示即便經(jīng)4周后移植體的一部分仍殘存。
另一方面，含有rhBMP-2 80μg/100μl組，從移植1周后，可觀察到誘導(dǎo)的骨組織引起的X線吸收影像，在移植2周后，變得更為明顯。移植3周后的軟X線照片見圖3(含有rhBMP-2 20μg/100μl的移植體(A))、圖4(含有rhBMP-2 20μg/100μl的移植體(B))及圖5(含有rhBMP-220μg/100μl的移植體(C))。
從這些軟X線影像提示骨組織大致沿移植體的形狀而形成。
(4)用pQCT(末梢骨用定量CT)得到的鈣分布檢索結(jié)果用pQCT進(jìn)行摘出組織的鈣分布的檢索。摘出組織垂直方向斷面的鈣分布的檢索結(jié)果，不僅在移植體的表層、而且在移植體的內(nèi)部，觀察到斑點(diǎn)狀鈣分布，提示骨形成沿著移植體的孔部分進(jìn)行。
(5)組織學(xué)觀察結(jié)果將摘出組織用甲酸-檸檬酸進(jìn)行脫鈣操作后，用石蠟包埋，制成薄切片，進(jìn)行蘇木精曙紅(HE)染色，在光學(xué)顯微鏡下觀察。圖6-8所示為移植3周后的移植體(C)(含有rhBMP-220μg/100μl組)的組織影像。圖6為將摘出組織中央部沿垂直方向切斷的斷片的組織影像(80倍)，圖7為沿水平方向切斷的斷片的組織影像(66倍)。這些圖中均觀察到在整個(gè)移植體上被HE染紅的骨組織(圖6和圖7的黑暗部分)。沿移植體的孔至移植體內(nèi)部有骨組織形成。圖8為將圖7再放大的圖(330倍)。在此放大的圖中也觀察到在骨基質(zhì)間隙由毛細(xì)血管、骨髓細(xì)胞、脂肪組織組成的骨髓組織。對(duì)移植體殘存的經(jīng)時(shí)性觀察結(jié)果，移植1周后，多孔質(zhì)體大部分殘存，但可見一部分明膠開始被吸收的影影像。移植2周后，見到明膠部分吸收進(jìn)一步進(jìn)行的影像。移植3周后，明膠部分大部分被吸收。
另一方面，PLGA作為薄層殘存于移植體內(nèi)部，即便4周后也觀察到顯示殘存的將大小孔內(nèi)部張開的無(wú)色透明的薄層的影像。
在本發(fā)明移植體的周圍組織，未見出血、壞死、浮腫等變化，表明本移植體局部刺激性弱。
(6)討論從以上結(jié)果證實(shí)，本發(fā)明移植體在大鼠異位性骨誘導(dǎo)模型上，由rhBMP-2所致的骨誘導(dǎo)在移植3周后或其后為最大，在移植體內(nèi)部也可誘導(dǎo)骨組織，是具有優(yōu)良骨誘導(dǎo)效果的物質(zhì)。本發(fā)明移植體在機(jī)體內(nèi)慢慢吸收、縮小，其局部刺激性也低。
移植試驗(yàn)例2(1)試驗(yàn)方法與上述試驗(yàn)例1同樣地，用實(shí)施例23中制備的多孔性移植體、含有rhBMP-2 0.1mg/ml或0.4mg/ml的移植體作為本發(fā)明移植體進(jìn)行試驗(yàn)。制備同樣含有rhBMP-2 0.1mg/ml或0.4mg/ml的以下移植體作為對(duì)照，進(jìn)行移植。
比較移植體A用美國(guó)專利No.5,171,579說(shuō)明書中記載的方法加以制備，將PLGA多孔性微球體(平均粒徑250μm，平均細(xì)孔徑約30μm)添加到rhBMP-2和血液以1∶9混合而成的溶液中，固化，形成糊狀而制成的移植體。
比較移植體B在含有16重量％PLGA(摩爾比＝50∶50，分子量＝40,000，Boehringer-Ingelheim公司制)的二噁烷中加入氯化鈉顆粒，冷凍干燥后，用水洗滌，溶解除去氯化鈉，干燥，制得PLGA海綿(孔徑100-500μm，氣孔率90％)，在該海綿中滴入rhBMP-2溶液和血液以1；9混合而成的溶液，使其吸收而制成的移植體。
圖9所示為未添加BMP的本發(fā)明移植體、即復(fù)合多孔質(zhì)體的電子顯微鏡照片，圖10、圖11為同樣未添加BMP的比較移植體A和B中所用的載體的電子顯微鏡照片。在移植1周、2周、3周和4周后進(jìn)行組織摘出。對(duì)摘出組織測(cè)定濕重量后，進(jìn)行鈣含量測(cè)定(原子吸收光譜法)和組織學(xué)觀察，評(píng)價(jià)骨形成的程度。
(2)結(jié)果從電子顯微鏡的載體比較，得知用于本發(fā)明移植體的多孔質(zhì)體與比較載體不同，是具有很多有連續(xù)性的氣孔、容易接受體液和細(xì)胞進(jìn)入的結(jié)構(gòu)。
移植試驗(yàn)的結(jié)果，比較移植體A雖然骨形成良好，但可觀察到中央部血液囊腫的形成和膨化，又比較移植體B埋入時(shí)強(qiáng)度不夠、脆、操作性差，埋植后也因強(qiáng)度不足而見載體分裂，血液性囊腫形成具有膨化。與此相反，本發(fā)明移植體具有柔軟性，埋入時(shí)的操作性也好。而且，埋植后能誘導(dǎo)出與移植體的形狀大體相同的形狀和大小的骨組織，也完全未見膨化和血囊腫的形成。另外，摘出組織的鈣含量/濕重量比與其它載體相比是最高的。
移植試驗(yàn)例3(1)試驗(yàn)方法為了評(píng)價(jià)骨缺損部分的骨形成能力，在麻醉下的日本白色種家兔(16-20周齡，雄性)的右尺骨上制成1.5cm長(zhǎng)的全層缺損，在缺損部埋入本發(fā)明移植體，即實(shí)施例3中在明膠海綿中吸收了含有4重量％D，L-乳酸/乙醇酸共聚物溶液的復(fù)合多孔質(zhì)體移植體，其中含有rhBMP-2約0.1mg/ml或0.4mg/ml。術(shù)后，用單純X線攝影和pQCT經(jīng)時(shí)性地進(jìn)行缺損部的CT攝影，觀察鈣的分布。經(jīng)12周后處死，用甲醛固定及脫鈣后，制成石蠟切片，進(jìn)行組織學(xué)研究。
(2)結(jié)果本發(fā)明移植體對(duì)變形的復(fù)原性好，可容易地埋入骨缺損部，操作性佳。又，術(shù)后2周可見X線不透過(guò)影像，到了3-4周，可見斷層間的愈合。在pQCT觀察中，可見直至術(shù)后3-6周，骨形成向載體的內(nèi)部方向進(jìn)行，其后再見到中央部的骨吸收影像。這被認(rèn)為提示重制所伴有的皮質(zhì)骨及骨髓腔的形成。組織檢查中也確認(rèn)具有這樣結(jié)構(gòu)的骨的形成。又，可見愈合速度及骨形成量的用量依賴性。
4.移植體每單位體積的BMP吸附量及吸附率(1)試驗(yàn)方法在成型為10×10×5mm的各種載體(實(shí)施例3中在明膠海綿中吸收了含有4重量％D，L-乳酸/乙醇酸共聚物溶液的復(fù)合多孔質(zhì)體、PLA海綿(商品名DRILAC CUBE，THM BIOMEDICAL INC制)、及明膠海綿(商品名SPONGEL，山之內(nèi)制藥株式會(huì)社制))中滴入濃度為0.4mg/ml的125I-rhBMP-2溶液直至不能被吸收，使其濕潤(rùn)，室溫放置60分鐘。接著將含有rhBMP-2的各種載體裝入底部裝有150μm不銹鋼篩的5ml注射器中，將此注射器插入14ml聚丙烯離心管后，于2500rpm下室溫離心20分鐘(若為明膠海綿，則2000rpm，10分鐘)，測(cè)定載體的放射活性，求出與當(dāng)初添加的放射活性比。
(2)結(jié)果就同樣單位體積的BMP吸附量而言，本發(fā)明移植體最多，為PLA海綿和明膠海綿的約1.5倍。而且，相對(duì)于總添加量的吸附量約為70％，比PLA海綿的50％、明膠海綿的60％為好。
如上所述，本發(fā)明移植體在機(jī)體內(nèi)快速誘導(dǎo)骨形成，而且，移植體本身慢慢地被新生骨取代，完全無(wú)移植體的殘存，能形成良好的骨組織，同時(shí)裝入時(shí)的操作性和成形性也好。因此，為了修復(fù)疾病或先天性缺陷等引起的各種骨或軟骨的缺損，可用該領(lǐng)域公知的方法將其施用于患部。本發(fā)明移植體被移植到機(jī)體中時(shí)，致炎性低，機(jī)體適配性好，可在接近自然狀態(tài)修復(fù)骨或軟骨。
本發(fā)明移植體可適用于各種領(lǐng)域，如骨折等外傷、腫瘤或炎癥性、變性甚至壞死性骨疾患等疾病、腦外科或整形外科手術(shù)等手術(shù)中所伴有的采骨等所致的骨或軟骨缺損部位的修復(fù)、各種骨折的促進(jìn)痊愈、人工關(guān)節(jié)、人工骨或人工牙根等植入物周圍骨的形成、軟骨植入物使用時(shí)的促進(jìn)固定、促進(jìn)脊椎固定、腳延長(zhǎng)等整形外科領(lǐng)域中骨的補(bǔ)填、人工的再生、關(guān)節(jié)的再建、成形外科領(lǐng)域的骨或軟骨的補(bǔ)填、或齒科領(lǐng)域的骨、軟骨或牙骨質(zhì)的修復(fù)及為使用植入物而增大骨等。
附圖的簡(jiǎn)單說(shuō)明圖1所示為本發(fā)明移植體的有代表性的實(shí)施方式的部分剖面結(jié)構(gòu)示意圖。
圖中，1為移植體，2為多孔結(jié)構(gòu)體，3為表面層，4為復(fù)合多孔體，5為BMP，6為孔。
圖2所示為移植了本發(fā)明的移植體時(shí)，該移植體的鈣含量的經(jīng)時(shí)變化表。
圖3所示為含有rhBMP-2(20μg/100μl)的本發(fā)明的移植體(A)移植3周后的軟X線攝影圖。
圖4所示為含有rhBMP-2(20μg/100μl)的本發(fā)明的移植體(B)移植3周后的軟X線攝影圖。
圖5所示為含有rhBMP-2(20μg/100μl)的本發(fā)明的移植體(C)移植3周后的軟X線攝影圖。
圖6所示為含有rhBMP-2(20μg/100μl)的本發(fā)明的移植體(C)移植3周后，在其垂直方向切出的摘出組織(80倍)的組織剖視圖。
圖7所示為含有rhBMP-2(20μg/100μl)的本發(fā)明的移植體(C)移植3周后，在其水平方向切出的摘出組織的組織剖視圖(66倍)。
圖8所示為圖7的部分放大圖(330倍)。
圖9所示為本發(fā)明的復(fù)合多孔體的電子顯微攝影圖(35倍)。
圖10所示為用于比較移植體A的載體的電子顯微攝影圖(50倍)。
圖11所示為用于比較移植體B的載體的電子顯微攝影圖(35倍)。
實(shí)施本發(fā)明的最佳方式以下，根據(jù)實(shí)施例具體地說(shuō)明本發(fā)明，但是，本發(fā)明的范圍并不限于這些實(shí)施例。
實(shí)施例1預(yù)先在1，4-二噁烷(關(guān)東化學(xué)株式會(huì)社制試劑)中添加吐溫80(關(guān)東化學(xué)株式會(huì)社制試劑)，使其含量達(dá)0.1％(重量)，然后，向該二噁烷中加入D，L-乳酸和乙醇酸的共聚物(摩爾比＝50∶50，分子量＝40,000，Boehringer-Ingelheim公司制)2.0g或4.0g，加熱溶解，使其容量達(dá)100毫升。將該聚合物溶液冷卻至室溫后，滴于7cm×10cm×1cm的止血用明膠海綿(商品名“Spongel”；山之內(nèi)制藥株式會(huì)社制)(約70毫升)，使其濕潤(rùn)至該聚合物溶液不再被吸收。接著，將該吸收了聚合物溶液的明膠海綿在-30℃下冷凍后，在0.1毫巴的壓力下干燥，得到復(fù)合多孔體。然后，將其切斷成7mm×7mm×4mm，按1∶9的比例混合rhBMP-2[GeneticsInstitute制(以下的實(shí)施例皆用此)](2mg/毫升-8mg/毫升；2.5％的甘氨酸，0.5％的白糖，5mM氯化鈉，5mM的谷氨酸，0.01％的吐溫80；pH4.5)的溶液和血液，滴下該混合溶液，使其吸收，得到本發(fā)明的含有rhBMP-2(20μg/100μl-80μg/100μl)的多孔骨移植體。
實(shí)施例2預(yù)先在1，4-二噁烷(關(guān)東化學(xué)株式會(huì)社制試劑)中添加吐溫80(關(guān)東化學(xué)株式會(huì)社制試劑)，使其含量達(dá)0.1％(重量)，然后，向該二噁烷中加入D，L-乳酸和乙醇酸的共聚物(摩爾比＝50∶50，分子量＝40,000，Boehringer-Ingelheim公司制)2.0g或4.0g，加熱溶解，使其容量達(dá)100毫升。將該聚合物溶液冷卻至室溫后，滴于7cm×10cm×1cm的明膠海綿(商品名“Spongel”；山之內(nèi)制藥株式會(huì)社制)(約70毫升)，使其濕潤(rùn)至該聚合物溶液不再被吸收。接著，將該吸收了聚合物溶液的明膠海綿在-30℃下冷凍后，在0.1毫巴的壓力下干燥，得到復(fù)合多孔體。然后，將取自雞冠的透明質(zhì)酸鈉(和光純藥株式會(huì)社制)作成0.25％(重量)的溶液后，滴下，濕潤(rùn)，以公知的方法凍干。再將其切斷成7mm×7mm×4mm，按1∶9的比例混合rhBMP-2(2mg/毫升-8mg/毫升；2.5％的甘氨酸，0.5％的白糖，5mM氯化鈉，5mM的谷氨酸，0.01％的吐溫80；pH4.5)的溶液和血液，滴下該混合溶液約200μl，使其吸收，得到本發(fā)明的含有rhBMP-2(20μg/100μl-80μg/100μl)的多孔骨移植體。
實(shí)施例3預(yù)先在1，4-二噁烷(關(guān)東化學(xué)株式會(huì)社制試劑)中添加吐溫80(關(guān)東化學(xué)株式會(huì)社制試劑)，使其含量達(dá)0.1％(重量)，然后，向該二噁烷中加入D，L-乳酸和乙醇酸的共聚物(摩爾比＝50∶50，分子量＝40,000，Boehringer-Ingelheim公司制)2.0g或4.0g，加熱溶解，使其容量達(dá)100毫升。將該聚合物溶液冷卻至室溫后，滴下于7cm×10cm×1cm的明膠海綿(商品名“Spongel”；山之內(nèi)制藥株式會(huì)社制)(約70毫升)，使其濕潤(rùn)至該聚合物溶液不再被吸收。接著，將該吸收了聚合物溶液的明膠海綿在-30℃下冷凍后，在0.1毫巴的壓力下干燥，得到復(fù)合多孔體。然后，滴下rhBMP-2(0.1mg/毫升-0.8mg/毫升；2.5％的甘氨酸，0.5％的白糖，5mM氯化鈉，5mM的谷氨酸，0.01％的吐溫80；pH4.5)溶液約70毫升，使其吸收，得到本發(fā)明的多孔骨移植體。
實(shí)施例4預(yù)先在1，4-二噁烷(關(guān)東化學(xué)株式會(huì)社制試劑)中添加吐溫80(關(guān)東化學(xué)株式會(huì)社制試劑)，使其含量達(dá)0.1％(重量)，然后，向該二噁烷中加入D，L-乳酸和乙醇酸的共聚物(摩爾比＝50∶50，分子量＝40,000，Boehringer-Ingelheim公司制)2.0g或4.0g，加熱溶解，使其容量達(dá)100毫升。將該聚合物溶液冷卻至室溫后，滴下于7cm×10cm×1cm的明膠海綿(商品名“Spongel”；山之內(nèi)制藥株式會(huì)社制)(約70毫升)，使其濕潤(rùn)至該聚合物溶液不再被吸收。接著，將該吸收了聚合物溶液的明膠海綿在-30℃下冷凍后，在0.1毫巴的壓力下干燥，得到復(fù)合多孔體。接著，滴下rhBMP-2(0.1mg/毫升-0.8mg/毫升；2.5％的甘氨酸，0.5％的白糖，5mM氯化鈉，5mM的谷氨酸，0.01％的吐溫80；pH4.5)溶液約70毫升，使其吸收，以公知的方法凍干，得到本發(fā)明的多孔骨移植體。
實(shí)施例5預(yù)先在1，4-二噁烷(關(guān)東化學(xué)株式會(huì)社制試劑)中添加吐溫80(關(guān)東化學(xué)株式會(huì)社制試劑)，使其含量達(dá)0.1％(重量)，然后，向該二噁烷中加入D，L-乳酸和乙醇酸的共聚物(摩爾比＝50∶50，分子量＝40,000，Boehringer-Ingelheim公司制)2.0g或4.0g，加熱溶解，使其容量達(dá)100毫升。將該聚合物溶液冷卻至室溫后，滴下于7cm×10cm×1cm的止血用明膠海綿(Spongel)(約70毫升)，使其濕潤(rùn)至該聚合物溶液不再被吸收。接著，將該吸收了聚合物溶液的明膠海綿在-30℃下冷凍后，在0.1毫巴的壓力下干燥，得到復(fù)合多孔體。然后，向此滴下將明膠(Biorad公司制試劑)作成0.2％(重量)的水溶液，使其濕潤(rùn)，以公知低的方法凍干，滴下rhBMP-2(0.1mg/毫升-0.8mg/毫升；2.5％的甘氨酸，0.5％的白糖，5mM氯化鈉，5mM的谷氨酸，0.01％的吐溫80；pH4.5)的溶液約70毫升，使其吸收，得到本發(fā)明的多孔骨移植體。
實(shí)施例6預(yù)先在1，4-二噁烷(關(guān)東化學(xué)株式會(huì)社制試劑)中添加吐溫80(關(guān)東化學(xué)株式會(huì)社制試劑)，使其含量達(dá)0.1％(重量)，然后，向該二噁烷中加入D，L-乳酸和乙醇酸的共聚物(摩爾比＝50∶50，分子量＝40,000，Boehringer-Ingelheim公司制)2.0g或4.0g，加熱溶解，使其容量達(dá)100毫升。將該聚合物溶液冷卻至室溫后，滴下于7cm×10cm×1cm的明膠海綿(Spongel)(約70毫升)，使其濕潤(rùn)至該聚合物溶液不再被吸收。接著，將該吸收了聚合物溶液的明膠海綿在-30℃下冷凍后，在0.1毫巴的壓力下干燥，得到復(fù)合多孔體。然后，向此滴下含明膠(Biorad公司制試劑)0.2％(重量)的rhBMP-2(0.1mg/毫升-0.8mg/毫升；2.5％的甘氨酸，0.5％的白糖，5mM氯化鈉，5mM的谷氨酸，0.01％的吐溫80；pH4.5)的溶液約70毫升，使其吸收，以公知的方法凍干，得到本發(fā)明的多孔骨移植體。
實(shí)施例7預(yù)先在1，4-二噁烷(關(guān)東化學(xué)株式會(huì)社制試劑)中添加吐溫80(關(guān)東化學(xué)株式會(huì)社制試劑)，使其含量達(dá)0.1％(重量)，然后，向該二噁烷中加入D，L-乳酸和乙醇酸的共聚物(摩爾比＝50∶50，分子量＝40,000，Boehringer-Ingelheim公司制)2.0g或4.0g，加熱溶解，使其容量達(dá)100毫升。將該聚合物溶液冷卻至室溫后，滴下于7cm×10cm×1cm的明膠海綿(Spongel)(約70毫升)，使其濕潤(rùn)至該聚合物溶液不再被吸收。接著，將該吸收了聚合物溶液的明膠海綿在-30℃下冷凍后，在0.1毫巴的壓力下干燥，得到復(fù)合多孔體。然后，向此滴下含有取自雞冠的透明質(zhì)酸鈉(和光純藥株式會(huì)社制)0.2％(重量)的rhBMP-2(0.1mg/毫升-0.8mg/毫升；2.5％的甘氨酸，0.5％的白糖，5mM氯化鈉，5mM的谷氨酸，0.01％的吐溫80；pH4.5)的溶液約70毫升，使其吸收，以公知的方法凍干，得到本發(fā)明的多孔骨移植體。
實(shí)施例8預(yù)先在1，4-二噁烷(關(guān)東化學(xué)株式會(huì)社制試劑)中添加吐溫80(關(guān)東化學(xué)株式會(huì)社制試劑)，使其含量達(dá)0.1％(重量)，然后，向該二噁烷中加入D，L-乳酸和乙醇酸的共聚物(摩爾比＝50∶50，分子量＝40,000，Boehringer-Ingelheim公司制)2.0g或4.0g，加熱溶解，使其容量達(dá)100毫升。將該聚合物溶液冷卻至室溫后，滴下于7cm×10cm×1cm的明膠海綿(Spongel)(約70毫升)，使其濕潤(rùn)至該聚合物溶液不再被吸收。然后，將該吸收了聚合物溶液的明膠海綿在-30℃下冷凍后，在0.1毫巴的壓力下干燥，得到復(fù)合多孔體。接著，向此滴下含取自雞冠的透明質(zhì)酸鈉(和光純藥株式會(huì)社制)0.2％(重量)的水溶液，使其濕潤(rùn)后，以公知的方法凍干，滴下rhBMP-2(0.1mg/毫升-0.8mg/毫升；2.5％的甘氨酸，0.5％的白糖，5mM氯化鈉，5mM的谷氨酸，0.01％的吐溫80；pH4.5)的溶液約70毫升，使其吸收，得到本發(fā)明的多孔骨移植體。
實(shí)施例9預(yù)先在冰醋酸(關(guān)東化學(xué)株式會(huì)社制試劑)中添加吐溫80(關(guān)東化學(xué)株式會(huì)社制試劑)，使其含量達(dá)0.1％(重量)，然后，向該冰醋酸中加入D，L-乳酸和乙醇酸的共聚物(摩爾比＝50∶50，分子量＝40,000，Boehringer-Ingelheim公司制)2.0g或4.0g，溶解后，使其容量達(dá)100毫升。將該聚合物溶液冷卻至室溫后，滴下于7cm×10cm×1cm的明膠海綿(Spongel)(約70毫升)，使其濕潤(rùn)至該聚合物溶液不再被吸收。然后，將該吸收了聚合物溶液的明膠海綿在-30℃下冷凍后，在0.1毫巴的壓力下干燥。將該凍干體二次浸漬于冷卻的200毫升水中，提取出冰醋酸，凍干，切斷成7mm×7mm×4mm，滴下rhBMP-2(0.1mg/毫升-0.8mg/毫升；2.5％的甘氨酸，0.5％的白糖，5mM氯化鈉，5mM的谷氨酸，0.01％的吐溫80；pH4.5)的溶液約200μl，使其吸收，得到本發(fā)明的多孔骨移植體。
實(shí)施例10將rhBMP-2(0.1mg/毫升-0.8mg/毫升；2.5％的甘氨酸，0.5％的白糖，5mM氯化鈉，5mM的谷氨酸，0.01％的吐溫80；pH4.5)的溶液約70毫升滴下于7cm×10cm×1cm的明膠海綿(Spongel)上，使其吸收，由公知的方法凍干，得到rhBMP-2/明膠海綿，然后，將D，L-乳酸和乙醇酸的共聚物(摩爾比＝75∶25，分子量＝50,000，Boehringer-Ingelheim公司制)2.0g加入預(yù)先添加過(guò)吐溫80(關(guān)東化學(xué)株式會(huì)社制試劑)使其含量達(dá)0.1％(重量)的1，4-二噁烷(關(guān)東化學(xué)株式會(huì)社制試劑)中，加熱溶解，使其容量達(dá)100毫升。將該聚合物溶液冷卻至室溫后，滴下于上述rhBMP-2/明膠海綿(約70毫升)，使其濕潤(rùn)至該聚合物溶液不再被吸收。然后，將該吸收了聚合物溶液的明膠海綿在-30℃下冷凍后，在0.1毫巴的壓力下干燥，得到本發(fā)明的多孔骨移植體。
實(shí)施例11預(yù)先在1，4-二噁烷(關(guān)東化學(xué)株式會(huì)社制試劑)中添加吐溫80(關(guān)東化學(xué)株式會(huì)社制試劑)，使其含量達(dá)0.1％(重量)，然后，向該二噁烷中加入D，L-乳酸和乙醇酸的共聚物(摩爾比＝50∶50，分子量＝40,000，Boehringer-Ingelheim公司制)2.0g或4.0g，加熱溶解后，使其容量達(dá)100毫升。將該聚合物溶液冷卻至室溫。另外，按公知的方法配制rhBMP-2(0.1mg/毫升-0.8mg/毫升；2.5％的甘氨酸，0.5％的白糖，5mM氯化鈉，5mM的谷氨酸，0.01％的吐溫80；pH4.5)的溶液，將該溶液的凍干粉末按rhBMP-2的含量計(jì)為20mg-80mg的量添加于聚合物溶液中，攪拌，制得rhBMP-2的懸浮液。將該rhBMP-2懸浮液滴下于7cm×10cm×1cm的明膠海綿(Spongel)(約70毫升)，使其濕潤(rùn)至懸浮溶液不再被吸收。然后，將該吸收了聚合物溶液的明膠海綿在-30℃下冷凍后，在0.1毫巴的壓力下干燥，得到本發(fā)明的多孔骨移植體。
實(shí)施例12將rhBMP-2(0.1mg/毫升-0.8mg/毫升；2.5％的甘氨酸，0.5％的白糖，5mM氯化鈉，5mM的谷氨酸，0.01％的吐溫80；pH4.5)的溶液約70毫升滴下于7cm×10cm×1cm的明膠海綿(Spongel)上，使其吸收，由公知的方法凍干，得到rhBMP-2/明膠海綿，然后，將D，L-乳酸和乙醇酸的共聚物(摩爾比＝75∶25，分子量＝50,000，Boehringer-Ingelheim公司制)2.0g加入預(yù)先添加過(guò)吐溫80(關(guān)東化學(xué)株式會(huì)社制試劑)，使其含量達(dá)0.1％(重量)的1，4-二噁烷(關(guān)東化學(xué)株式會(huì)社制試劑)中，加熱溶解，使其容量達(dá)100毫升。將該聚合物溶液冷卻至室溫后，滴下于上述rhBMP-2/明膠海綿(約70毫升)，使其濕潤(rùn)至該溶液不再被吸收。然后，將該吸收了聚合物溶液的rhBMP-2/明膠海綿在-30℃下冷凍后，在0.1毫巴的壓力下干燥。滴下rhBMP-2(0.1mg/毫升-0.8mg/毫升；2.5％的甘氨酸，0.5％的白糖，5mM氯化鈉，5mM的谷氨酸，0.01％的吐溫80；pH4.5)的溶液約70毫升，使其吸收，由公知的方法凍干，得到本發(fā)明含有rhBMP-2(0.2mg/毫升-1.6mg/毫升)的多孔骨移植體。
實(shí)施例13預(yù)先在1，4-二噁烷(關(guān)東化學(xué)株式會(huì)社制試劑)中添加吐溫80(關(guān)東化學(xué)株式會(huì)社制試劑)，使其含量達(dá)0.1％(重量)，然后，向該二噁烷中加入D，L-乳酸(分子量＝50,000，三井東壓化學(xué)株式會(huì)社制)1.0g，使其溶解，使其容量達(dá)100毫升。將該聚合物溶液冷卻至室溫后，滴下于7cm×10cm×1cm的明膠海綿(Spongel)(約70毫升)，使其濕潤(rùn)至該聚合物溶液不再被吸收。接著，將該吸收了聚合物溶液的明膠海綿在-30℃下冷凍后，在0.1毫巴的壓力下干燥，得到復(fù)合多孔體。然后，滴下rhBMP-2(0.1mg/毫升-0.8mg/毫升；2.5％的甘氨酸，0.5％的白糖，5mM氯化鈉，5mM的谷氨酸，0.01％的吐溫80；pH4.5)的溶液約70毫升，使其吸收，以公知的方法凍干，得到本發(fā)明的多孔骨移植體。
實(shí)施例14預(yù)先在1，4-二噁烷(關(guān)東化學(xué)株式會(huì)社制試劑)中添加吐溫80(關(guān)東化學(xué)株式會(huì)社制試劑)，使其含量達(dá)0.1％(重量)，然后，向該二噁烷中加入聚D，L-乳酸(分子量＝50,000，三井東壓化學(xué)株式會(huì)社制)1.0g，使其溶解，使其容量達(dá)100毫升。將該聚合物溶液冷卻至室溫后，滴下于7cm×10cm×1cm的明膠海綿(Spongel)(約70毫升)，使其濕潤(rùn)至該聚合物溶液不再被吸收。接著，將該吸收了聚合物溶液的明膠海綿在-30℃下冷凍后，在0.1毫巴的壓力下干燥，得到復(fù)合多孔體。然后，滴下rhBMP-2(0.1mg/毫升-0.8mg/毫升；2.5％的甘氨酸，0.5％的白糖，5mM氯化鈉，5mM的谷氨酸，0.01％的吐溫80；pH4.5)的溶液約70毫升，使其吸收，以公知的方法凍干，得到本發(fā)明的多孔骨移植體。
實(shí)施例15預(yù)先在1，4-二噁烷(關(guān)東化學(xué)株式會(huì)社制試劑)中添加吐溫80(關(guān)東化學(xué)株式會(huì)社制試劑)，使其含量達(dá)1.0％(重量)，然后，向該二噁烷中加入聚D，L-乳酸(分子量＝60,000，Boehringer-Ingelheim公司制)1.0g，使其溶解，使其容量達(dá)100毫升。將該聚合物溶液冷卻至室溫后，滴下于7cm×10cm×1cm的明膠海綿(Spongel)(約70毫升)，使其濕潤(rùn)至該聚合物溶液不再被吸收。接著，將該吸收了聚合物溶液的明膠海綿在-30℃下冷凍后，在0.1毫巴的壓力下干燥，得到復(fù)合多孔體。然后，滴下rhBMP-2(0.1mg/毫升-0.8mg/毫升；2.5％的甘氨酸，0.5％的白糖，5mM氯化鈉，5mM的谷氨酸，0.01％的吐溫80；pH4.5)的溶液約70毫升，使其吸收，以公知的方法凍干，得到本發(fā)明的多孔骨移植體。
實(shí)施例16預(yù)先在1，4-二噁烷(關(guān)東化學(xué)株式會(huì)社制試劑)中添加吐溫80(關(guān)東化學(xué)株式會(huì)社制試劑)，使其含量達(dá)0.1％(重量)，然后，向該二噁烷中加入D，L-乳酸與乙醇酸的共聚物(摩爾比＝75∶25，分子量＝50,000，Boehringer-Ingelheim公司制)2.0g，溶解后，使其容量達(dá)100毫升。將該聚合物溶液冷卻至室溫后，滴下于7.5cm×10cm×0.3cm的膠原海綿(Helistat)(MarionLaboratories，Inc.制)，使其濕潤(rùn)至該聚合物溶液不再被吸收。然后，將該吸收了聚合物溶液的膠原海綿在-30℃下冷凍后，在0.1毫巴的壓力下干燥，得到復(fù)合多孔體。然后，再滴下rhBMP-2(0.1mg/毫升-0.8mg/毫升；2.5％的甘氨酸，0.5％的白糖，5mM氯化鈉，5mM的谷氨酸，0.01％的吐溫80；pH4.5)的溶液約22.5毫升，使其吸收，以公知的方法凍干，得到本發(fā)明的多孔骨移植體。
實(shí)施例17用300毫升注射用蒸餾水溶解透明質(zhì)酸鈉(分子量＝800,000；紀(jì)文食品化學(xué)制)2.1g。另外，將明膠(G-785P及G-786P；新田明膠制)9g溶于1當(dāng)量的醋酸水溶液300ml中。將上述明膠溶液加入前述透明質(zhì)酸溶液中，用T.K.混合器以9000rpm攪拌5分鐘。收集此時(shí)產(chǎn)生的氣泡，以-80℃的冷凍器凍結(jié)。凍干機(jī)上得到干燥的海綿。
其次，將聚D，L-乳酸(分子量＝50,000，三井東壓化學(xué)株式會(huì)社制)1.0g加于含吐溫80為0.1重量％的1，4-二噁烷(關(guān)東化學(xué)株式會(huì)社制試劑)中，溶解，使其容量達(dá)100毫升。將該聚合物溶液冷卻至室溫后，滴入3cm×3cm×1cm的前述之海綿中，使其濕潤(rùn)至該聚合物溶液不再被吸收。接著，將該吸收了聚合物溶液的明膠海綿在-30℃下冷凍后，在0.1毫巴的壓力下干燥，得到復(fù)合多孔體。然后，再滴下rhBMP-2(0.1mg/毫升-0.8mg/毫升；2.5％的甘氨酸，0.5％的白糖，5mM氯化鈉，5mM的谷氨酸，0.01％的吐溫80；pH4.5)的溶液約9毫升，使其吸收，以公知的方法凍干，得到本發(fā)明的多孔骨移植體。
實(shí)施例18將D，L-乳酸和乙醇酸的共聚物(摩爾比＝75∶25，分子量＝50,000，Boehringer-Ingelheim公司制)2.0g加于醋酸乙酯(關(guān)東化學(xué)株式會(huì)社制試劑)，溶解，使其容量達(dá)100毫升。用該聚合物溶液浸漬7cm×10cm×1cm的明膠海綿(Spongel)，室溫下通風(fēng)干燥后得到復(fù)合多孔體。然后，滴下rhBMP-2(0.1mg/毫升-0.8mg/毫升；2.5％的甘氨酸，0.5％的白糖，5mM氯化鈉，5mM的谷氨酸，0.01％的吐溫80；pH4.5)的溶液約70毫升，使其吸收，以公知的方法凍干，得到本發(fā)明的多孔骨移植體。
實(shí)施例19將D，L-乳酸和乙醇酸的共聚物(摩爾比＝75∶25，分子量＝50,000，Boehringer-Ingelheim公司制)2.0g加于醋酸乙酯(關(guān)東化學(xué)株式會(huì)社制試劑)，溶解，使其容量達(dá)100毫升。用該聚合物溶液浸漬于7.5cm×10cm×0.3cm的膠原海綿(Helistat)(Marion Laboratories，Inc.制)，室溫下減壓干燥后得到復(fù)合多孔體。然后次，滴下rhBMP-2(0.1mg/毫升-0.8mg/毫升；2.5％的甘氨酸，0.5％的白糖，5mM氯化鈉，5mM的谷氨酸，0.01％的吐溫80；pH4.5)的溶液約22.5毫升，使其吸收，以公知的方法凍干，得到本發(fā)明的多孔骨移植體。
實(shí)施例20將D，L-乳酸和乙醇酸的共聚物(摩爾比＝75∶25，分子量＝50,000，Boehringer-Ingelheim公司制)2.0g加于醋酸乙酯(關(guān)東化學(xué)株式會(huì)社制試劑)，溶解，使其容量達(dá)100毫升。浸漬7.5cm×10cm×0.3cm的膠原海綿(Helistat)(Marion Laboratories，Inc.制)后，室溫下通風(fēng)干燥后得到復(fù)合多孔體。然后，滴下rhBMP-2(0.1mg/毫升-0.8mg/毫升；2.5％的甘氨酸，0.5％的白糖，5mM氯化鈉，5mM的谷氨酸，0.01％的吐溫80；pH4.5)的溶液約22.5毫升，使其吸收，以公知的方法凍干，得到本發(fā)明的多孔骨移植體。
實(shí)施例21將聚L-乳酸(分子量＝60,000，Boehringer-Ingelheim公司制)1.0g加入于預(yù)先含有吐溫80(關(guān)東化學(xué)株式會(huì)社制試劑)0.1％(重量)的1，4-二噁烷(關(guān)東化學(xué)株式會(huì)社制試劑)中，溶解，使其容量達(dá)100毫升。將該聚合物溶液冷卻至室溫后，滴下于7cm×10cm×1cm的明膠海綿(Spongel)(約70毫升)，使其濕潤(rùn)至該聚合物溶液不再被吸收。然后，將該吸收了聚合物溶液的明膠海綿在-30℃下冷凍后，在0.1毫巴的壓力下干燥，得到復(fù)合多孔體。然后，再滴下rhBMP-2(0.1mg/毫升-0.8mg/毫升；2.5％的甘氨酸，0.5％的白糖，5mM氯化鈉，5mM的谷氨酸，0.01％的吐溫80；pH4.5)的溶液約70毫升，使其吸收，以公知的方法凍干，得到本發(fā)明的多孔骨移植體。
實(shí)施例22將D，L-乳酸與乙醇酸的共聚物(摩爾比＝50∶50，分子量＝40,000，Boehringer-Ingelheim公司制)8.0g加入預(yù)先含有吐溫80(關(guān)東化學(xué)株式會(huì)社制試劑)0.1％(重量)的1，4-二噁烷(關(guān)東化學(xué)株式會(huì)社制試劑)中，加熱溶解，使其容量達(dá)100毫升。將該聚合物溶液冷卻至室溫后，滴下于7cm×10cm×1cm的明膠海綿(Spongel)(約70毫升)，使其濕潤(rùn)至該聚合物溶液不再被吸收。然后，將該吸收了聚合物溶液的明膠海綿在-30℃下冷凍后，在0.1毫巴的壓力下干燥，得到復(fù)合多孔體。再滴下rhBMP-2(0.1mg/毫升-0.8mg/毫升；2.5％的甘氨酸，0.5％的白糖，5mM氯化鈉，5mM的谷氨酸，0.01％的吐溫80；pH4.5)的溶液約60毫升，使其吸收后，以公知的方法凍干，得到含有rhBMP-2(0.1mg/毫升-5.0mg/毫升)的本發(fā)明的多孔骨移植體。
實(shí)施例23將D，L-乳酸與乙醇酸的共聚物(摩爾比＝50∶50，分子量＝40,000，Boehringer-Ingelheim公司制)8.0g加入預(yù)先含有吐溫80(關(guān)東化學(xué)株式會(huì)社制試劑)0.1％(重量)的1，4-二噁烷(關(guān)東化學(xué)株式會(huì)社制試劑)中，加熱溶解，使其容量達(dá)100毫升。將該聚合物溶液冷卻至室溫后，滴下于7cm×10cm×1cm的明膠海綿(Spongel)(約70毫升)，使其濕潤(rùn)至該聚合物溶液不再被吸收。然后，將該吸收了聚合物溶液的明膠海綿在-30℃下冷凍后，在0.1毫巴的壓力下干燥，得到復(fù)合多孔體。將該復(fù)合多孔體切成7mm×7mm×4mm后，滴下按1∶9的比例混合rhBMP-2(1.2mg/毫升-59mg/毫升；2.5％的甘氨酸，0.5％的白糖，5mM氯化鈉，5mM的谷氨酸，0.01％的吐溫80；pH4.5)和血液的混合溶液約170μl，得到含有rhBMP-2(0.1mg/毫升-5.0mg/毫升)的本發(fā)明的多孔骨移植體。
實(shí)施例24將D，L-乳酸與乙醇酸的共聚物(摩爾比＝50∶50，分子量＝40,000，Boehringer-Ingelheim公司制)12.0g加入預(yù)先含有吐溫80(關(guān)東化學(xué)株式會(huì)社制試劑)0.5％(重量)的1，4-二噁烷(關(guān)東化學(xué)株式會(huì)社制試劑)中，加熱溶解，使其容量達(dá)150毫升。將該聚合物溶液冷卻至室溫后，浸漬7cm×10cm×1cm的明膠海綿(Spongel)。qdrg，在使明膠海綿保持浸漬于該聚合物溶液的狀態(tài)下，在-45℃冷凍，在0.1毫巴的壓力下冷凍干燥。在用剃刀切除附著在其周圍的聚合物后，在135℃下作36分鐘的干熱滅菌。向如此所得到的復(fù)合多孔體滴下rhBMP-2(0.12mg/毫升-5.9mg/毫升；2.5％的甘氨酸，0.5％的白糖，5mM氯化鈉，5mM的谷氨酸，0.01％的吐溫80；pH4.5)的溶液約60毫升，使其吸收，得到含有rhBMP-2(0.1mg/毫升-5.0mg/毫升)的本發(fā)明的多孔骨移植體。
實(shí)施例25將D，L-乳酸與乙醇酸的共聚物(摩爾比＝50∶50，分子量＝40,000，Boehringer-Ingelheim公司制)12.0g加入預(yù)先含有吐溫80(關(guān)東化學(xué)株式會(huì)社制試劑)0.5％(重量)的1，4-二噁烷(關(guān)東化學(xué)株式會(huì)社制試劑)中，加熱溶解，使其容量達(dá)150毫升。將該聚合物溶液冷卻至室溫后，浸漬7cm×10cm×1cm的明膠海綿(Spongel)。然后，在使明膠海綿保持浸漬于該聚合物溶液的狀態(tài)下，在-45℃冷凍，在0.1毫巴的壓力下冷凍干燥。在用剃刀切除附著在其周圍的聚合物后，得到復(fù)合多孔體。接著，滴下rhBMP-2(0.12mg/毫升-5.9mg/毫升；2.5％的甘氨酸，0.5％的白糖，5mM氯化鈉，5mM的谷氨酸，0.01％的吐溫80；pH4.5)的溶液約60毫升，使其吸收，以公知的方法凍干，得到含有rhBMP-2(0.1mg/毫升-5.0mg/毫升)的本發(fā)明的多孔骨移植體。
實(shí)施例26將D，L-乳酸與乙醇酸的共聚物(摩爾比＝50∶50，分子量＝40,000，Boehringer-Ingelheim公司制)10.0g加入預(yù)先含有吐溫80(關(guān)東化學(xué)株式會(huì)社制試劑)0.5％(重量)的1，4-二噁烷(關(guān)東化學(xué)株式會(huì)社制試劑)中，加熱溶解，使其容量達(dá)100毫升。將該聚合物溶液冷卻至室溫后，滴下于7cm×10cm×1cm的明膠海綿(Spongel)(約70毫升)，使其濕潤(rùn)至該聚合物溶液不再被吸收。然后，將該吸收了聚合物溶液的明膠海綿在-30℃下冷凍后，在0.1毫巴的壓力下凍干，得到復(fù)合多孔體。接著，滴下rhBMP-2(0.12mg/毫升-5.9mg/毫升；2.5％的甘氨酸，0.5％的白糖，5mM氯化鈉，5mM的谷氨酸，0.01％的吐溫80；pH4.5)的溶液約60毫升，使其吸收，以公知的方法凍干，得到含有rhBMP-2(0.1mg/毫升-5.0mg/毫升)的本發(fā)明的多孔骨移植體。
權(quán)利要求
1.一種骨成形用移植體，其特征在于，在由機(jī)體吸收性親水性材料組成的多孔結(jié)構(gòu)體的表面形成一層由機(jī)體吸收性高分子材料組成的表面層，由此形成復(fù)合多孔體，將骨誘導(dǎo)因子載持于該復(fù)合多孔體上。
2.如權(quán)利要求1所述的骨成形用移植體，其特征在于，所述的機(jī)體吸收性親水性材料為選自明膠、透明質(zhì)酸、透明質(zhì)酸衍生物及藻酸三乙醇胺的一種或二種以上的化合物；所述的機(jī)體吸收性高分子材料為選自聚乳酸、聚乳酸聚乙醇酸共聚物及聚[雙(對(duì)羧基苯氧基)丙烷]無(wú)水物和癸二酸的共聚物的化合物。
3.如權(quán)利要求2所述的骨成形用移植體，其特征在于，所述的機(jī)體吸收性親水性材料為選自明膠、明膠/透明質(zhì)酸聚離子復(fù)合物、及膠原的一種或二種以上的化合物。
4.如權(quán)利要求2或3所述的骨成形用移植體，其特征在于，所述的機(jī)體吸收性親水高分子性材料為選自平均分子量為5,000-1,500,000的聚乳酸、及平均分子量為5,000-1,500,000的聚乳酸的含有比例(摩爾比)在40％以上的聚乳酸聚乙醇酸共聚物的一種或二種以上的化合物。
5.如權(quán)利要求1所述的骨成形用移植體，其特征在于，在復(fù)合多孔體的表面層上再添加表面活性劑。
6.如權(quán)利要求1所述的骨成形用移植體，其特征在于，所述復(fù)合多孔體的平均孔徑為10-1,000μm，氣孔率在60％以上。
7.如權(quán)利要求6所述的骨成形用移植體，其特征在于，所述復(fù)合多孔體的平均孔徑為40-600μm，氣孔率在80％以上。
8.如權(quán)利要求3或7所述的骨成形用移植體，其特征在于，所述多孔結(jié)構(gòu)體為平均孔徑為50-500μm，氣孔率在90％以上的明膠海綿。
9.一種復(fù)合多孔體，其特征在于，該復(fù)合多孔體是在由選自明膠、透明質(zhì)酸及透明質(zhì)酸衍生物的一種或二種以上的機(jī)體吸收性親水性材料組成的多孔結(jié)構(gòu)體的表面涂施以選自聚乳酸、聚乳酸聚乙醇酸共聚物及聚[雙(對(duì)羧基苯氧基)丙烷]無(wú)水物和癸二酸的共聚物的一種或二種以上的機(jī)體吸收性高分子材料而形成的。
10.如權(quán)利要求9所述的復(fù)合多孔體，其特征在于，所述的機(jī)體吸收性親水性材料為選自明膠及明膠/透明質(zhì)酸聚離子復(fù)合物的一種或二種以上的化合物。
11.如權(quán)利要求9或10所述的復(fù)合多孔體，其特征在于，所述的機(jī)體吸收性高分子材料為選自平均分子量為5,000-1,500,000的聚乳酸、及平均分子量為5,000-1,500,000的聚乳酸的含有比例(摩爾比)在40％以上的聚乳酸聚乙醇酸共聚物的一種或二種以上的化合物。
12.如權(quán)利要求11所述的復(fù)合多孔體，其特征在于，所述多孔結(jié)構(gòu)體為平均孔徑為50-500μm，氣孔率在90％以上的明膠海綿。
13.如權(quán)利要求9所述的復(fù)合多孔體，其特征在于，在所述復(fù)合多孔體的表面層中再添加有表面活性劑。
全文摘要
一種骨成型用移植體，在由機(jī)體吸收性親水性材料組成的多孔結(jié)構(gòu)體表面形成一層機(jī)體吸收性高分子材料的表面層，由此形成復(fù)合多孔體，將骨誘導(dǎo)因子載于該復(fù)合多孔體上。所述機(jī)體吸收性親水性材料為選自明膠、透明質(zhì)酸及其衍生物、膠原及其衍生物、殼聚糖及其衍生物等的至少一種化合物；機(jī)體吸收性高分子材料為選自聚乳酸、聚乳酸聚乙醇酸共聚物等的化合物。本發(fā)明的骨成型用移植體具優(yōu)異的成型性和操作性，其內(nèi)部結(jié)構(gòu)適于機(jī)體內(nèi)新生骨的成型。
文檔編號(hào)A61L27/18GK1158573SQ9519531
公開日1997年9月3日 申請(qǐng)日期1995年9月28日 優(yōu)先權(quán)日1994年9月30日
發(fā)明者橫田祥士, 下川誠(chéng)太郎, 園原律, 岡田昭, 高橋浩一郎 申請(qǐng)人:山之內(nèi)制藥株式會(huì)社