專(zhuān)利名稱：苯甲酰胺類(lèi)似物，用作parp(adp-核糖基轉(zhuǎn)移酶，adrpt)dna修復(fù)酶抑制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及苯甲酰胺類(lèi)似物，特別是某些3-取代的苯甲酰胺化合物和相關(guān)的喹唑啉酮化合物，這些化合物令人感興趣的是由于其能夠抑制多聚ADP-核糖基轉(zhuǎn)移酶(EC2.4.2.30)的活力，因此至少是潛在的有用的化療藥，多聚ADP-核糖基轉(zhuǎn)移酶還被稱作多聚(ADP-核糖)聚合酶，通常稱之為ADPRT或PARP。一般來(lái)說(shuō)，后一縮寫(xiě)，PART，將用于本發(fā)明說(shuō)明書(shū)始終。
背景技術(shù)：
已知多聚ADP-核糖轉(zhuǎn)移酶至少在較高等有機(jī)體中催化ADP-核糖基團(tuán)從煙酰胺腺嘌呤二核苷酸的氧化型NAD+向核受體蛋白的轉(zhuǎn)移，從而形成同聚ADP-核糖多聚物，并且該過(guò)程存在于許多細(xì)胞現(xiàn)象中，例如，DNA缺損的修復(fù)、細(xì)胞分化的進(jìn)行、致癌基因引起的細(xì)胞轉(zhuǎn)化、以及基因表達(dá)。許多這些過(guò)程中的共同特征是DNA鏈缺口的形成和修復(fù)以及包括PARP酶似乎是DNA連接酶II-介導(dǎo)的鏈重新連接的酶的階段。在大部分情況下多聚ADP-核糖基化的作用與使用PARP酶的抑制劑相牽連，由此建議，這樣的抑制劑通過(guò)干擾細(xì)胞內(nèi)DNA修復(fù)機(jī)制可具有有用的化療作用，因?yàn)樗鼈儗⒛芨淖冎委熆剐蕴卣鞑⒓訌?qiáng)或促進(jìn)化學(xué)治療中的細(xì)胞毒藥物或放射治療中的放射的有效作用，而在化療和放療中治療的主要作用是引起靶細(xì)胞中DNA缺損，例如在多種抗腫瘤治療形式中。
與此相關(guān)，已知許多類(lèi)PARP抑制劑，包括苯甲酰胺本身和多種煙酰胺以及苯甲酰胺類(lèi)似物，特別是帶小取代基如3-氨基、3-羥基和3-甲氧基的3-取代苯甲酰胺。EP-A-0305008報(bào)道了某些N-取代苯甲酰胺的PARP抑制作用，其中還設(shè)想將這些化合物用于醫(yī)藥，促進(jìn)放射或化療藥的細(xì)胞毒作用。
就苯甲酰胺作為化療藥物的該項(xiàng)用途來(lái)說(shuō)，許多對(duì)已知表現(xiàn)出PARP抑制作用的這些化合物的研究已經(jīng)證實(shí)它們能強(qiáng)加某些抗腫瘤藥在體外的細(xì)胞毒作用，例如，博萊霉素和甲基化藥物。其它有限資料進(jìn)一步表明這些苯甲酰胺還能加強(qiáng)細(xì)胞毒藥物在體內(nèi)的作用，盡管劑量要求似乎太高(例如3-氨基苯甲酰胺的每次劑量在0.5g kg-1范圍內(nèi))并且可能存在制備令人滿意的藥物劑型以及避免毒性限制的相關(guān)問(wèn)題。此外，許多已知的苯甲酰胺也已明確顯示出具有作為放射敏化劑的潛力，促進(jìn)例如體內(nèi)和體外的離子化放射-誘導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞傷殺，并且確信在許多情況下該效果是與這些化合物作為PARP抑制劑并干擾DNA修復(fù)相關(guān)的。
但是，盡管體外和體內(nèi)研究的現(xiàn)有資料表明PARP抑制劑作為有用的化療藥物具有很大潛力，其具有進(jìn)一步臨床評(píng)估的價(jià)值，例如在癌癥治療方面，但是不能認(rèn)為目前已知的PARP抑制劑已經(jīng)完全適于作為候選藥物。因此，需要發(fā)現(xiàn)并開(kāi)發(fā)更大的范圍的具有潛在的有用的PARP抑制劑性質(zhì)的化合物。
本發(fā)明的公開(kāi)本發(fā)明確認(rèn)了新的一類(lèi)或幾類(lèi)具有PARP抑制劑價(jià)值的可用于醫(yī)藥的化合物，特別是當(dāng)與至少某些細(xì)胞毒藥物或放射治療結(jié)合給藥時(shí)來(lái)促進(jìn)其細(xì)胞毒作用效果。通常，如下面所定義的本發(fā)明化合物包括新的3-取代的苯甲酰胺化合物，特別是3-羥基苯甲酰胺化合物，或類(lèi)似物，其中很多含有相對(duì)大的或體積大的3-位取代基或含有與2-位中的取代基在環(huán)結(jié)構(gòu)中連接的3-位取代基。這些化合物還包括某些喹唑啉酮，通過(guò)相關(guān)苯甲酰胺化合物的分子重排可以形成至少某些喹唑啉酮。由于它們的結(jié)構(gòu)，通常這些化合物適于作為PARP酶的NAD+的另一底物。
更具體地說(shuō)，一方面，本發(fā)明提供了新的化合物，其選自(A)，具有通用結(jié)構(gòu)式I的3-取代苯甲酰胺化合物
或其藥學(xué)上接受的鹽，以及(B)，具有通用結(jié)構(gòu)式II的喹唑啉酮化合物 或其藥學(xué)上可接受的鹽。
其特征在于在結(jié)構(gòu)式I中(i)Y為氫，并且X為-CH2-Z其中Z代表烷基、可選擇性取代的芳烷基、-CH＝CHR(其中R為H、烷基或選擇性取代的苯基基團(tuán))、環(huán)己基、或具有結(jié)構(gòu)式III的基團(tuán) 其中R1為選自H、烷氧基、NO2、N3、NH2、NHCOR3(R3為烷基或芳基)、CO2R4(R4為H或烷基)、烷基、羥基烷基、CW3或W(W為鹵素)、以及CN，并且其中R2為H，或者其中R1和R2一起代表與相鄰環(huán)的C橋連的-O-CHR5-O-基團(tuán)，而R5為H、烷基或選擇性取代的芳烷基或芳基；(ii)Y為氫，并且X為-(CH2)n-Z其中n在5至12的范圍內(nèi)，并且Z為鹵素或嘌呤-9-基基團(tuán)；
(iii)Y和X一起形成橋-Y-X-，其代表基團(tuán) 或- 或- 其中R5如上所述，并且在結(jié)構(gòu)式II中，X′代表羥基、烷基、烷基基或選擇性取代的芳基(例如苯基)或芳烷基(例如苯甲基)基團(tuán)，并且Y′代表氫、烷基或選擇性取代的芳基(例如苯基)或芳烷基(例如苯甲基)基團(tuán)。
當(dāng)烷基基團(tuán)作為這里的基團(tuán)或其它基團(tuán)如烷氧基中的一部分時(shí)，不包括某些情況下上述的亞甲基鏈-(CH2)n-，將通常含有1-8碳原子，優(yōu)選1-6碳原子，而更通常是1-4碳原子。
從PARP-抑制活性的角度來(lái)看一組非常重要的特別有價(jià)值的化合物包括苯并噁唑-4-羧酰胺化合物，即用式IV代表的化合物 其中R5，如不是H，則優(yōu)選為烷基、苯基或其它芳基基團(tuán)如萘基或吡啶基。當(dāng)R5為烷基時(shí)則其通常為C1-6烷基，例如甲基、乙基、正-丙基、異丙基、正丁基、叔丁基或環(huán)己基。但在某些情況下它可以比較大，例如在金剛烷基的情況下。當(dāng)R5為苯基基團(tuán)時(shí)其可以被取代，特別是在4(對(duì))位但另一方面也可以在2-位或3-位，被取代基如烷氧基取代。在這組苯并噁唑化合物中特別令人感興趣的優(yōu)選化合物包括2-甲基苯并噁唑-4-羧酰胺
2-叔丁基苯并噁唑-4-羧酰胺2-苯基苯并噁唑-4-羧酰胺2-(4-甲苯基)苯并噁唑-4-羧酰胺在上面提到的式IV化合物中，其中有一個(gè)富含電子的芳香環(huán)，我們認(rèn)為通過(guò)環(huán)中的氮原子與羧酰胺基團(tuán)中的一個(gè)氫原子之間的分子內(nèi)氫鏈?zhǔn)刽弱０坊鶊F(tuán)被限制在固定構(gòu)型中，特別有利于使化合物作為PARP酶的NAD+的另一底物。同樣，雖然在其中X和Y取代基形成橋的式I的其它化合物中還可能出現(xiàn)某些微弱影響，如上面(iii)中所定義的橋，含有氧或硫原子，即或IV中苯并噁唑的環(huán)中N原子被O或S原子取代。
但是，還發(fā)現(xiàn)，在嘗試制備式IV的苯并噁唑-4-羧酰胺化合物時(shí)，在一些預(yù)期能生成目的化合物的制備方法中，產(chǎn)物傾向于進(jìn)行分子重排(特別是當(dāng)使用氨水形成羧酰胺時(shí))并得到8-羥基喹唑啉酮衍生物而不是預(yù)期的苯并噁唑。意外地發(fā)現(xiàn)，至少某些這樣的喹唑啉酮衍生物，當(dāng)然其可通過(guò)各種方法制得，具有潛在的非常有用的作為高活性的PARP抑制劑的生物活性。因此，通常符合結(jié)構(gòu)式II的這些喹唑啉酮化合物代表了本發(fā)明的另一個(gè)非常重要的方面。具有特別重要性的這些化合物包括(a)8-羥基-2-甲基喹唑啉-4-〔3H〕酮；(b)8-羥基喹唑啉-4-〔3H〕酮；(c)8-羥基-2-(4-硝基苯基)-喹唑啉-4-酮；(d)8-甲氧基-2-甲基喹唑啉-4〔3H〕-酮；(e)8-甲氧基-2-苯基喹唑啉-4〔3H〕-酮；(f)8-羥基-2-苯基喹唑啉-4〔3H〕-酮；(g)2，8-二甲基喹唑啉-4〔3H〕-酮。
另一組特別重要的化合物包括3-芐氧基苯甲酰胺(BOB苯甲酰胺類(lèi)似物)，其中X為芐基或取代的芐基基團(tuán)。芐基取代基的例子包括2-硝基(或另-個(gè)2-取代基)、4-CH3、4-CO2H、4-CO2CH3、4-CONH2、4-CN、4-CH2OH、4-NHCOPh，并且在這組化合物中特別重要的化合物包括3-芐氧基苯甲酰胺，
3-(4-甲氧基芐氧基)苯甲酰胺，3-(4-硝基芐氧基)苯甲酰胺，3-(4-疊氮基芐氧基)苯甲酰胺，3-(4-溴代芐氧基)苯甲酰胺，3-(4-氟代芐氧基)苯甲酰胺，3-(4-氨基芐氧基)苯甲酰胺，3-(4-硝基芐氧基)苯甲酰胺，3-(3，4-亞甲基二氧代苯基甲氧基)苯甲酰胺或3-(胡椒基氧代)苯甲酰胺，3-(N-乙?；?4-氨基芐氧基)苯甲酰胺，3-(4-三氟甲基芐氧基)苯甲酰胺，3-(4-氰基芐氧基)苯甲酰胺，3-(4-羧基甲基芐氧基)苯甲酰胺，3-(2-硝基芐氧基)苯甲酰胺，3-(4-羧基芐氧基)苯甲酰胺。
在某些情況下，上組BOB類(lèi)似物的化合物中的芐基部分的芳香環(huán)可以被氫化并且仍然顯示出一些PARP抑制活性，這類(lèi)化合物的一個(gè)例子是3-(環(huán)己基甲基氧代)苯甲酰胺。
根據(jù)本發(fā)明的另一組重要的化合物包括3-氧代苯甲酰胺，其中有一個(gè)5或更多的亞甲基鏈，該鏈終止于鹵素原子，例如溴，或終止于嘌呤-9-基基團(tuán)，特別是腺嘌呤或6-氯嘌呤。在這組中特別重要的化合物包括3-(5-溴代戊氧基)苯甲酰胺，3-(8-腺苷-9-基辛氧基)苯甲酰胺，3-〔5-(6-氯嘌呤-9-基)戊氧基〕苯甲酰胺，3-(5-腺苷-9-基戊氧基)苯甲酰胺，3-〔8-(6-氯嘌呤-9-基)辛氧基〕苯甲酰胺，3-〔12-(6-氯嘌呤-9-基)十二烷氧基〕苯甲酰胺，3-(12-腺苷-9-基十二烷氧基)苯甲酰胺。
但是，另外還提供了特別重要的化合物，其中3-位的氧基-取代基包括一個(gè)鍵如烯丙基，例如3-烯丙基氧基苯甲酰胺，或肉桂基，例如3-肉桂基氧基苯甲酰胺。
在另一組優(yōu)選的化合物中3-位的氧基取代基含有一個(gè)具有至少4個(gè)碳原子的烷基。典型實(shí)例包括3-丁氧基苯甲酰胺，3-戊氧基苯甲酰胺，3-己氧基苯甲酰胺，3-庚氧基苯甲酰胺，3-辛氧基苯甲酰胺。
本發(fā)明還包括或延及制備上面定義的化合物(在某些情況下包括中間體)的方法以及這些合化物的治療用途。這包括用它們生產(chǎn)醫(yī)用或獸醫(yī)用制劑或者含有效PARP抑制量的活性化合物的藥物配方，這些制劑是用來(lái)與細(xì)胞毒藥物或放療相結(jié)合給予患者，從而提高后者的細(xì)胞毒功效?？梢园凑账帉W(xué)領(lǐng)域中任何已知的方法生產(chǎn)這些以任何適宜方式給藥的制劑或配方，例如口服、胃腸外給藥(包括皮下、肌內(nèi)或靜脈給藥)，或者典型地，給藥方式、制劑或配方類(lèi)型以及劑量一般決定于所促進(jìn)的相關(guān)細(xì)胞毒藥物化療或放療的詳細(xì)情況。
如所指出的，根據(jù)本發(fā)明的化合物至少具有作為PARP抑制劑的潛力，并且后面描述的體外實(shí)驗(yàn)已經(jīng)表明了陽(yáng)性藥學(xué)活性，我們相信這反映了臨床治療過(guò)程中所發(fā)現(xiàn)的體內(nèi)活性。
應(yīng)當(dāng)理解，本說(shuō)明書(shū)所指的式I或II(或式IV)化合物應(yīng)當(dāng)被認(rèn)為在適當(dāng)情況下延及到它們的藥學(xué)上可接受的鹽。并且，當(dāng)所指的任何化合物可存在一種以上的對(duì)映體形式時(shí)，所有這些形式、其混合物、以及它們的制劑和用途也在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
通常，本發(fā)明的許多化合物，至少包括芐氧基芳甲酰胺(BOB)和烯丙基3-氧代苯甲酰胺類(lèi)似物一般是通過(guò)堿催化的3-羥基-苯甲酰胺的烷基化反應(yīng)來(lái)制備的，例如使用適宜的烷基化劑(如烷基鹵化物R-Hal)在乙腈和碳酸鉀存在下反應(yīng)，如果烷基化劑不能市購(gòu)，則可以通過(guò)一般方法制備。開(kāi)始，由于3-羥基苯甲酰胺本身不能廣泛商購(gòu)，可首先通過(guò)將能市購(gòu)的3-羥基苯甲酸與三乙胺和氯甲酸乙酯的混合物在二氯甲烷中反應(yīng)生成混合酐并在氨水中，淬火來(lái)制備該化合物，或者通過(guò)新開(kāi)發(fā)的高效率高產(chǎn)量的方法來(lái)制備，制備路線包括3-羥基苯甲酸的3-位-OH的選擇性乙?；碗S后羧基向羧酰胺的轉(zhuǎn)化，如下面所述。
對(duì)優(yōu)選方案的實(shí)施例的說(shuō)明下面實(shí)施例和制備各種重要的優(yōu)選化合物的合成路線的步驟描述是用來(lái)進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明，但不應(yīng)對(duì)本發(fā)明有任何限制。
在第一個(gè)實(shí)施例(實(shí)施例1)中，將描述上述從3-羥基苯甲酸制備3-羥基苯甲酰胺的新方法，因?yàn)?-羥基苯甲酰胺是制備此后描述的其它苯甲酰胺類(lèi)似物的原料。
實(shí)施例13-羥基苯甲酰胺(a)第一步——3-乙基苯甲酸向氫氧化鈉冷溶液(0.61g；15.2mM溶于2ml水中)加入3-羥基苯甲酸(1g；7.29mM)。將冷乙酸酐(0.81g；7.9mM)與碎冰(2g)加入其中。攪拌混合物一小時(shí)，并且6M鹽酸(3ml)酸化，生成白色沉淀。將有機(jī)物萃取到二氯甲烷(3×30ml)中，并在硫酸鎂上方干燥。過(guò)濾之后真空除去溶劑，生成白色固體，將其從沸水中重結(jié)晶。
薄層層析(T，L，C)的溶劑10％甲醇/90％二氯甲烷NMR200MHzd6DMSOδ＝ 2.4(s；3H；CH3)；7.45(m；1H；Hδ)7.6(t；1H；Hβ)；7.78(m；1H；H)；7.9(t；1H；Hα)；13.1(s；1H；OH)產(chǎn)率86％(b)第二步——3-羥基苯甲酰胺的制備將來(lái)自第一步的3-乙酸基苯甲酸(0.5g)溶于亞硫酰氯(1.74ml)中并回流3.5小時(shí)。
蒸餾除去多余的亞硫酰氯，生成黃色油狀物，將其逐滴加入冷氨溶液(35％水溶液)中，并攪拌30分鐘。將混合物煮沸以減少體積(50％)并放冷。收集從溶液結(jié)晶出來(lái)的3-羥基苯甲酰胺，然后從沸水中重結(jié)晶T.L.C10％甲醇/90％二氯甲烷NMR200MHz；d6DMSO；δ7.0(1H；dt；H4)；7.25(m；4H；NH；H2；H5；H6)；8.0(s；1H；NH)；9.77(s；1H；OH).
產(chǎn)率60％實(shí)施例23-(4-疊氮基芐氧基)苯甲酰胺(化合物NU1013)(a)第一步——對(duì)疊氮基甲苯的制備將對(duì)甲苯胺(9.3mM)溶于鹽酸(5M；10ml)中，并將混合物冷卻到＜0℃。將亞硝酸鈉(10.28mM)溶于極少量水中，并將該溶液在30分鐘內(nèi)逐滴加到反應(yīng)液中。攪拌該溶液20分鐘，然后用淀粉/碘化物試紙檢測(cè)氧化劑的存在。然后在1小時(shí)內(nèi)向反應(yīng)混合物中緩慢加入疊氮化鈉(37.38mM)(因?yàn)閯×遗蒡v)。當(dāng)加入所有疊氮化鈉后，將反應(yīng)在水(50ml)中淬火，并與水(50ml)定量轉(zhuǎn)入錐形瓶中。用碳酸鈉中和混合物至PH＝6。將有機(jī)物萃取到二氯甲烷中(3×30ml)，用水洗滌(2×20ml)，在硫酸鎂上方干燥，并在真空下除去多余的溶劑。這樣得到的對(duì)疊氮基甲苯是油狀物并通過(guò)層析進(jìn)行分離(100％石油醚/乙醚40-60)。
1H NMRd6DMSOδ2.37(s；3H；CH3)；7.0(d；2H；H3；H5)；7.3(d；2H；H2；H6)(b)第二步——對(duì)疊氮基甲苯的溴化向上面制備的對(duì)疊氮基甲苯中加入N-溴丁二酰亞胺(2.48mM)和于無(wú)水苯(5ml)中的偶氮-異丁腈(0.214mM)。將其回流5小時(shí)，同時(shí)用TLC監(jiān)控反應(yīng)。將有機(jī)物萃取到乙醚中(3×15ml)，并在硫酸鎂上方干燥水分，真空除去多余溶劑。用層析技術(shù)分離形成的對(duì)疊氮基芐基溴。
(c)最后的步驟——對(duì)疊氮基芐基-3-氧代苯甲酰胺的制備在氮?dú)夥障孪?-羥基苯甲酰胺(2.0mM)中加入無(wú)水乙腈(20ml)、碳酸鉀(2.0mM)、和對(duì)疊氮基芐基溴(2.0mM)。將混合物回流3小時(shí)，并用TLC監(jiān)控反應(yīng)過(guò)程。真空除去多余溶劑直至干燥，并從熱二氯甲烷中重結(jié)晶標(biāo)題化合物(極少量)。分離淡黃色結(jié)晶固體并干燥。
熔點(diǎn)167-168℃紅外數(shù)據(jù)CM-13341；3155；2121；2094；1631；1583。
質(zhì)譜M/Z269(M+1)252；223；167；104(100％)；93；77。
1H NMRd6-DMSOδ＝5.5(s；2H；CH2)；7.27(m；3H；H2′；H6′；H4)；7.41-7.6(m6H；H3′；H5′；H2；H6；H5；NH)；8.0(s；1H；NH)13C NMRδ＝69.098；114.049；118.164；119.528；120.359；129.735；129.886；134.188；136.096；139.332158.480；167.889元素分析預(yù)計(jì)值C62.68％；H4.47％；N20.89％實(shí)測(cè)值C62.18％；H4.30％；N20.70％實(shí)施例33-(4-溴代芐氧基)苯甲酰胺(化合物NU1014)在氮?dú)夥障孪?-羥基苯甲酰胺(2.0mM)中加入無(wú)水乙腈(20ml)、碳酸鉀(2.0mM)、和對(duì)溴代苯甲基溴(2.0mM)。將混合物回流3小時(shí)，并用TLC監(jiān)控反應(yīng)過(guò)程。真空除去多余溶劑直至干燥，并從熱二氯甲烷中重結(jié)晶標(biāo)題化合物(極少量)。分離淡黃色結(jié)晶固體并干燥。
熔點(diǎn)160-161℃紅外數(shù)據(jù)CM-1KB2基質(zhì)3323；3146；1670；1622。
1H NMRd6DMSOδ＝5.26(s；2H；CH2)；7.3(dd；1H；H4)；7.49-7.75(m，9H；PhBr；NH2；PhO)13C NMRd6DMSOδ＝114.031；118.123；120.402；121.295；129.704；130.107；131.690；136.094；136.723；158.371；167.843.
質(zhì)譜m/2EI307(M＋1)；262；212；169(100％)；101；90。
元素分析預(yù)計(jì)值C55.26％；H3.29％；N4.61％實(shí)測(cè)值C54.61％；H3.66％；N4.47％。
實(shí)施例43-(4-氟代芐氧基)苯甲酰胺(化合物NU1015)在氮?dú)夥障孪?-羥基苯甲酰胺(2.0mM)中加入無(wú)水乙腈(20ml)、碳酸鉀(2.0mM)、和對(duì)氟代苯甲基溴(2.0mM)。將混合物回流14小時(shí)，并且TLC監(jiān)控反應(yīng)過(guò)程。真空除去多余溶劑直至干燥，并從熱二氯甲烷中重結(jié)晶標(biāo)題化合物(極少量)。分離白色結(jié)晶固體并干燥。
熔點(diǎn)161-162℃紅外數(shù)據(jù)KBg基質(zhì)Cm-13366；3171；1H NMRd6DMSOδ＝5.23(s；2H；CH2)；7.26-7.68(m；9H；NH；aromatics)；8.11(s；1H；H4)13C NMRd6DMSOδ＝68.914；113.951；115.405；115.821；118.124；120.329；129，329；130.25 5；130.421；133.487；136.056；158.464；159.692；164.546；167.853.
元素分析預(yù)計(jì)值C67.2；H4.8N5.6實(shí)測(cè)值C67.79；H4.81；N5.65實(shí)施例5
3-(3-硝基芐氧基)苯甲酰胺(化合物NU1017)在氮?dú)夥障孪?-羥基苯甲酰胺(2.0mM)中加入無(wú)水乙腈(20ml)、碳酸鉀(2.0mM)、和間硝基苯甲基溴(2.0mM)。將混合物回流3小時(shí)，并用TLC監(jiān)控反應(yīng)過(guò)程。真空除去多余溶劑直至干燥，并從熱二氯甲烷中重結(jié)晶標(biāo)題化合物(極少量)。分離白色結(jié)晶固體并干燥。
熔點(diǎn)162-163℃紅外數(shù)據(jù)Kbr基質(zhì)3362；3171；1655；1622。
質(zhì)譜EIm/z272(M+)；136(100％)；105；90；77。
1H NMRd6DMSOδ＝5.42(s；2H；CH2)7.28-7.33(m；1H；Hα)；7.45-7.66(m；4H；NH；H2；H5；H6)；7.8(t；1H；H5′)；8.0(m2H；NH；H6′)；8.3(m1H；H4′)8.4(m；1H；H2′)13C NMRd6DMSOδ＝68.354；114.041；118.124；120.589；122.317；123.120；129.812；130.435；134.406；136.132；139.661；148.185；158.185；167.774.
元素分析預(yù)計(jì)值C61.76；H4.41；N10.11實(shí)測(cè)值C61.53；H4.32；N10.01實(shí)施例63-(N-乙?；?4-氨基芐氧基)苯甲酰胺(化合物NU1030)向來(lái)自實(shí)施例2的化合物NU1013中(100mg；0.375mM)加入硫代乙酸(2ml)，將其于室溫下攪拌直至反應(yīng)完全。反應(yīng)后進(jìn)行T.L.C.10％甲醇90％CH2Cl2。然后層析分離產(chǎn)物，從乙酸乙酯和乙醚重結(jié)晶，生成白色固體(30％)熔點(diǎn)198-199℃1H NMRδ2.19(s；3H；CH3)；5.2(s；2H；CH2)；7.3(m；1H；H4)；7.4-7.8(m；8H；NH；H2；H5；H6；H2′；H3′；H4′；H6′)8.1(s；1H；NH)；10.1(s；1H；HNCO)
13C NMRδ29.223，74.412，118.899，123.013，124.087，125.108，133.699，134.557，136.463，140.921，144.296，163.685，172.781.
實(shí)施例73-(胡椒基氧代)苯甲酰胺(化合物NU1020)第1步——胡椒基氯化物的制備將胡椒基醇(1g；6.57mM)溶于乙醚中(10ml)，向其中緩緩加入濃鹽酸(3.81ml)。將其攪拌30分鐘。除去多余溶劑得到無(wú)色油狀物，在4℃結(jié)晶(99％)。
1H NMRd4.8(S，2H，CH2)6.2(S，2H，OCH20)；7.0(m，3H，芳香族化合物)。
第2步——胡椒基BOB的制備向3-羥基苯甲酰胺(137mg；1mM)中加入碳酸鉀(138mg；1mM)并將其在氮?dú)夥障氯苡跓o(wú)水乙腈中。向其中加入胡椒基氯化物(270mg；1mM)，使混合物回流15小時(shí)。將有機(jī)物萃取到二氯甲烷(3×20ml)中，在硫酸鎂上方干燥，并真空除去溶劑。用層析技術(shù)分離產(chǎn)物，以20％汽油80％乙酸乙酯作洗脫劑。分離白色固體，將其從熱水中重結(jié)晶(97％)的。
熔點(diǎn)141-142℃1H NMRd6DMSOδ5.1(s；2H；CH2)；6.1(s，2H；OCH2O)；7.1(m；3H；H2′；H5′；H6′)；7.25(dd；1H；H4)；7.5(m；4H；NH；N2；H5；H6)；8.05(s；1H；NH)13C NMRd6DMSOδ69.02；101.36；108.40；108.80；114.01；118.12；120.20；121.89；129.65；136.00；147.20；146.62；158.53；167.84.
質(zhì)譜EI271(M+)；135(100％)元素分析預(yù)計(jì)值C66.42；H4.79；N5.16實(shí)測(cè)值C66.18；H4.47；N4.94
實(shí)施例83-(4-三氟甲基芐氧基)苯甲酰胺(化合物NU1036)在氮?dú)夥障聦?-羥基苯甲酰胺(0.137g；1mmol)溶于無(wú)水乙腈中(20ml)。向其中加入碳酸鉀(0.138g；1mmol)和4-(三氟甲基)芐基溴(0.155ml；1mmol)。將該混合物回流17小時(shí)。
反應(yīng)后進(jìn)行TLC。反應(yīng)完全后減壓除去乙腈，得到白色固體，將其溶于水中。將有機(jī)物萃取到二氯甲烷中(3×30ml)，在硫酸鎂上方干燥，過(guò)濾并減壓除去溶劑，得到白色結(jié)晶固體，將其從沸騰的乙酸乙酯和汽油(60-80)中重結(jié)晶。M/Z(EI)295(35％；M+)159(100％)1H200MHzd6DMSOδ5.4(2H；s；CH3)；7.3(1H；m；H4)；7.6(4H；m；NH；H2；H5；H6)7.8(ZH；d；H2′；H6′)；7.9(2H；d；H3′；H5′)；8.1(1H；s；NH)13C68.726；114.011；118.125；120.513；125.627；125.693；128.305；129.007；129.774；136.133；142.136；158.296；167.852元素分析預(yù)計(jì)值C61.02；H4.06；N4.75實(shí)測(cè)值C61.05/60.91；H3.94/3.96；N5.06/4.86。
實(shí)施例93-(4-氰基芐氧基)苯甲酰胺(化合物NU1037)在氮?dú)夥障聦?-羥基苯甲酰胺(0.137g；1mmol)溶于無(wú)水乙腈中(20ml)。向其中加入碳酸鉀(0.138g；1mmol)和4-(氰基)芐基溴(0.155ml；1mmol)。將該混合物回流5小時(shí)。
反應(yīng)后進(jìn)行TLC。反應(yīng)完全后減壓除去乙腈，得到白色固體，將其溶于水中。將有機(jī)物萃取到二氯甲烷中(3×30ml)，在硫酸鎂上方干燥，過(guò)濾并減壓除去溶劑，得到白色結(jié)晶固體，將其從沸騰的乙酸乙酯和汽油(68％)中重結(jié)晶。
M/Z(EI)252(18％M+)；153；116(75％)；IR cm-13362，3179(amide NH2)；2228(C≡N)1H 200MHzd6DMSOδ5.4(2H；s；CH2)；7.3(1H；m；H4)；7.65(6H；m；H2；H5；H6；NH；H2′；H6′；)；8.0(2H；d；H3′；H5′).
13C68.685；110.848；113.999；118.153；119.089；120.555；128.385；1293792；132.775；136.133；143.080；158.222；167.815.
元素分析預(yù)計(jì)值C71.43；H4.76；N11.11實(shí)測(cè)值C71.27；H4.96；N10.67。
實(shí)施例103-(4-羧甲基芐氧基)苯甲酰胺(化合物NU1041)向3-羥基苯甲酰胺(1.37g；10mmol)中加入碳酸鉀(1.38g10mmol)和4-氯甲基苯甲酸甲酯(1.84g；10mmol)于無(wú)水乙腈(50ml)。將該混合物回流加熱5小時(shí)。
減壓除去乙腈將將固體溶于水中。將有機(jī)物萃取到二氯甲烷中(3×50ml)并匯集在一起。將溶劑在硫酸鎂上方干燥并減壓除去。
將固體從沸騰的乙酸乙酯和汽油中重結(jié)晶，收集并干燥(65％)。IRcm-1，3331；3154，2959.M/Z；285(48％；M+)，254(38％)；149(100％)121(75％).1Hd6DMSOδ＝3.9；(3H；s；CH3)，5.25(2H；OCH2Ph)，7.25(1H；d，H4)，7.4(5H；m；NH2；H2；H5；H6)，7.6(2H；d；H2′；H6′)，709(2H；d；H3′；H5′).13CS2.418；68.948. 114.016；118.093；120.459；127.792；129.299；129.669；136.097；142.786；158.33；166.312；167.822.
元素分析預(yù)計(jì)值C67.37％；H5.26％；N4.91％。
實(shí)測(cè)值C67.19％；H5.16％；N4.78％。
實(shí)施例113-(2-硝基芐氧基)苯甲酰胺(化合物NU1042)向3-羥基苯甲酰胺(0.137g；1mmol)中加入碳酸鉀(0.138g；1mmol)和2-硝基苯甲基溴(0.216g；1mmol)于無(wú)水乙腈中(10ml)。將混合物回流加熱5小時(shí)。
減壓除去乙腈并將固體溶于水中。將有機(jī)物萃取到二氯甲烷中(3×20ml)并匯集在一起。將溶劑在硫酸鎂上方干燥并減壓除去。
將固體從沸騰的乙酸乙酯和汽油中重結(jié)晶，收集并干燥。IR cm-13368；3196，M/Z272(3.8％；M+)；248；217；196；181；136(100％)，1Hd6DMSO；δ＝5.5(2H；OCH2Ph)，7.14(1H；d，H4)，7.4(4H；m；NH；H2′；H5′；H6)，7.26(2H；m；H5′；H4′)，8.0(1H；br；NH)；8.02(1H；d；H3′)，13C66.783；113.854；118.172；120.753；125.183；129.490；129.549；132.679；132.339；136.136.；147.786；158.112；167.778.
元素分析要求值C61.76％；H4.41％；N10.29％實(shí)測(cè)值C61.49％；H4.42％；N10.11％。
實(shí)施例123-(4-羧基芐氧基)苯甲酰胺(化合物NU1052)向3-(4-羧甲基芐氧基)苯甲酰胺(化合物NU1041)(0.03g；0.1mmol)中加入甲醇(3ml)和氫氧化鈉水溶液(1M；3ml)。將其加熱到40℃，監(jiān)測(cè)該反應(yīng)。當(dāng)初始物質(zhì)消失后酸化該溶液(逐滴加入HCl水溶液)，并萃取到乙酸乙酯中(3×30ml)。匯集有機(jī)物，在硫酸鎂上方干燥，并減壓除去溶劑。得到白色結(jié)晶固體。
實(shí)施例133-(苯乙基)氧代苯甲酰胺(化合物NU1048)將3-羥基苯甲酰胺(500mg；3.6mM)溶于無(wú)水乙腈中(36ml)，向其中加入碳酸鉀(0.503g；3.6mmol)和2-(溴乙基)苯(0.498ml；3.6mmol)。將混合物回流加熱兩天。減壓除去乙腈得到白色固體。將其溶于水中并萃取到二氯甲烷中(3×30ml)。將有機(jī)物匯集在一起，在硫酸鎂上方干燥，過(guò)濾并減壓除去溶劑，得到白色固體。從沸騰的乙酸乙酯和汽油中重結(jié)晶(0.459g；12.51％)。MPt132-136℃.1H200MHz CDC133.05(2H，t，H8)；4.2(2H，t，H7)；6.00(1H，br s，NH)；7.04(1H，m，H4)；7.27(9H，m，NH；aromatic).IR cm-13300(NH2)；1666(CO)；2930(C＝C).M/Z(EI)；241(M+；18％)；105(-COHN2；100％).
元素分析預(yù)計(jì)值％C15H15O2N C74.4，H6.20，N5.79；實(shí)測(cè)值％C74.7，H6.2，N5.8。
實(shí)施例143-烯丙基氧化苯甲酰胺(化合物NU1031)在氮?dú)夥障孪?-羥基苯甲酰胺(274mg；2.0mM)中加入碳酸鉀(276mg；21.0mM)。將其溶于含烯丙基溴(169μl；2.0mM)的乙腈(20ml)中。將混合物回流5小時(shí)，反應(yīng)后進(jìn)行T.L.C.10％甲醇90％CH2Cl2。真空除去多余溶劑，將有機(jī)物萃取到二氯甲烷中，干燥，除去溶劑，生成白色固體。將其從熱水中重結(jié)晶，生成白色“長(zhǎng)條”固體(63％)，為最終產(chǎn)物。
熔點(diǎn)116-117℃1H NMRδ＝4.7(m；2HHe，Hf)；5.5(m；2H；Hh，Hi)；6.2(m；1H；Hg)；7.2(m；1H；Hd)；7.6m；4H； Ha，Hb，Hc，NH)；8.1(s；1H；NH).
13C NMRδ＝68.580，113.821，117.978，129.661，133.893，136.025，158.371，167.892.
質(zhì)譜EI177(M+)；41(100％)實(shí)施例153-(肉桂基氧基)苯甲酰胺(化合物NU1050)將3-羥基苯甲酰胺(0.5g 3.6mmol)溶于無(wú)水乙腈中(50ml)。向其中加入碳酸鉀(0.503g；3.6mmol)和肉桂基氯化物(0.5ml；3.6mmol)。將其回流3.5小時(shí)。減壓除去乙腈生成白色固體，將其溶于水(80ml)。將有機(jī)物萃取到二氯甲烷中(3×30ml)，在硫酸鎂上干燥，過(guò)濾并減壓除去溶劑，剩下白色固體。從乙酸乙酯和汽油中使固體重結(jié)晶(45％)。MPt131-138℃.M/Z137(36％)；165(100％，cinnamyl+)，94(48％)；77(24％).IR cm-13400&3200(NH2)，1600(C＝O).1H200MHz d6DMSO 4.88(2H，d，H7)；6.65(1H，m，H8)；6.94(1H，m，H4)；7.24(1H，m，H4)；7.5(9H，m，aromatic&NH)；8.1(1H，s，NH).
元素分析預(yù)計(jì)值C75.9％；H5.9％；N5.5％；實(shí)測(cè)值C76.07％；H5.85％；N5.56％。
實(shí)施例162-甲基苯并噁唑-4-羧酰胺(化合物NU1056)第1步——制備(3-羥基-2-硝基)苯甲酸甲酯將3-羥基-2-硝基苯甲酸(5g；27.32mM)溶于無(wú)水甲醇中(200ml)。將無(wú)水氯化氫氣體鼓入溶液直至飽和。然后將混合物回流20小時(shí)(反應(yīng)后進(jìn)行T.L.C10％甲醇/90％二氮甲烷)。然后，真空除去溶劑，生成棕色固體。將固體溶于水中(100ml)并加入碳酸氫鈉直至泡騰停止。將氯化鈉加入水溶液中，將產(chǎn)品萃取到乙酸乙酯中(3×50ml)。將匯集的等分試樣在酸硫鈉上方干燥并真空除去溶劑，生成棕黃色固體。
T.L.C.(同前)r.f.(比移值)0.53NMR200MHzd6DMSOδ＝3.9(s；3H；OCH3)；7.1(m；1H；H4)；7.35(m；1H；H6)；7.8(t；1H；H5)產(chǎn)率92％。
第2步——(2-氨基-3-羥基)-苯甲酸甲酯的制備在氮?dú)夥障聦⑩Z/碳催化劑懸浮在無(wú)水甲醇(150ml)中。向該懸浮液中加入來(lái)自步驟1的(3-羥基-2-硝基)苯甲酸甲酯(4g；20.3mM)。將混合物在氫氣氛下放置4.5小時(shí)。通過(guò)硅藻土餅過(guò)濾除去催化劑，并從濾液中除去溶劑，生成橙/棕色產(chǎn)物。T.L.C.40％乙酸乙酯/60％石油醚60/80。
比移值0.33NMR 200mHzd6DMSOδ3.81(s；3H；OCH3)；6.2(broad；2H；NH2)；6.5(t；1H；H5)；6.9(m；1H；H6)7.3(m；1H；H4)9.8(s；1H；OH)產(chǎn)率83％。
第3步——2-甲基苯并噁唑-4-羧酸甲酯的制備向(2-氨基-3-羥基)-苯甲酸甲酯(3g；18.01mM)于間二甲苯(150ml)的溶液中加入乙酰氯(1.518ml；21.6mM)。形成沉淀，將其攪拌30分鐘。加入三乙胺(2.97ml；21.6mM)，則溶液變透明。加入吡啶鎓-對(duì)-甲苯磺酸(1.2g；21.6mM)，并將混合物回流34小時(shí)。蒸餾(真空)除去溶劑生成棕色固體，將其進(jìn)行柱層析(50％乙酸乙酯/50％汽油60/80)得到目的產(chǎn)物，為黃色固體。
T.L.C.同上。1HNMR200MHz；CDCl3；δ2.69(3H；s；2-CH3)3.99(3H；s；OMe)；7.33(3H；t；H6)；7.63(1H；dd；H7)7.94(1H；dd；H5)第4步——2-甲基苯并噁唑-4-羧酸的制備將2-甲基苯并噁唑-4-羧酸甲酯(0.1g；0.523mmol)溶于甲醇(3ml)中，向其中加入氫氧化鈉水溶液(0.2M，3ml)。將混合物在40℃攪拌4小時(shí)并用鹽酸(6M)酸化直至PH＝1.0。將混合物用乙酸乙酯(3×20ml)萃取，將合并的有機(jī)層用水洗滌(2×20ml)，干燥(MgSO4)并減壓去溶劑得到羧酸(0.068g，73％)。
第5步——2-甲基苯并噁唑-4-羧酰胺的制備在氮?dú)夥障聰嚢?-甲基苯并噁唑-4-羧酸(0.1g，0.28mmol)于無(wú)水THF(10ml)中的溶液，加入亞硫酰氯(0.022ml，0.31mmol)和DMF(0.1m)，將混合物于室溫再攪拌5小時(shí)。加入氨水(0.5ml)，再攪拌混合物30分鐘。減壓除去溶劑，將殘余固體溶于水(20ml)中，用乙酸乙酯(3×20ml)萃取溶液。合并有機(jī)層，用水洗滌(2×20ml)干燥(MgSO4)。減壓除去溶劑得到羧酰胺(0.083g，84％)。
1H(200HHz)CDCl3δ＝6.0(brs，1H，NH)，7.4(t，1H，H6)，7.6(dd，1H，H7)，8.15(dd，1H，H5)，8.8(brs，1H.NH).
實(shí)施例16a2-甲基苯并噁唑-4-羧酰胺(化合物NU1056)對(duì)上述實(shí)施例16中描述的方法加以修改，按下述方法直接從第1步中的產(chǎn)物制備2-甲基苯并噁唑-4-羧酸甲酯。
將來(lái)自第1步中的3-羥基-2-硝基苯甲酸甲酯(0.1g；0.59mmol)溶于無(wú)水乙醇中(20ml)，向其中加入乙酰亞胺乙酯鹽酸化物(0.067；059mmol)。將反應(yīng)混合物回流加熱24小時(shí)。減壓除去乙醇生成棕色結(jié)晶固體。將其溶于乙酸乙酯中(3×20ml)，生成過(guò)剩的乙酰亞胺乙酯鹽酸化物沉淀。濾出過(guò)剩的亞胺酯并用氫氧化鈉溶液洗滌該溶液(0.1N；3×20ml)，再用水洗滌(3×50ml)。將溶劑在硫酸鎂上方干燥并減壓除去，余下橙色結(jié)晶固體(0.1265g；85％)。
實(shí)施例172-叔丁基苯并噁唑-4-羧酰胺(化合物NU1040)將2-氨基-3-羥基苯甲酸酯(0.1g；0.598mmol)溶于間-二甲苯中并加熱至70℃。向其中加入新戊酰氯(0.117ml；0.958mmol)，于是發(fā)現(xiàn)有棕色沉淀生成。在加入三乙胺(0.099ml；0.958mmol)和吡啶鎓-4-甲苯磺酸酯(0.04g；0.958mmol)之前將混合物攪拌30分鐘。然后將混合物回流加熱26小時(shí)。減壓除去間二甲苯生成粘稠的棕色固體。將固體溶于水中(50ml)并將有機(jī)物萃取到乙酸乙酯中(3×30ml)，合并，在硫酸鎂上方干燥，過(guò)濾并減壓除去溶劑。
通過(guò)硅膠柱層析純化標(biāo)題化合物，用1∶1乙酸乙酯∶汽油作洗脫劑，生成黃色固體(69％)。IR cm-13040(3×CH3)，1709(C＝O).M/z；233(63％；M+)；218(50％；-CH3)202(42％；-OCH3)；186(100％)；173(12％；-CH3)；160(33％)；146(62％)；117(43％).1Hd6DMSOδ＝1.17(9H；s；(CCH3)3)；3.99(3H；s，OCH3)；7.31(1H；t；H6J＝8HZ)，7.66(1H；ddH7；J＝7.8，1Hz)，7.95(1H；dd；H5J＝7，1Hz).
(b)第2步——2-叔丁基苯并噁唑-4-羧酰胺的制備將2-叔丁基-4-苯并噁唑羧酸甲酯(0.1g；0.46mmol)溶于甲醇中(5ml)，向其中加入氨水(5ml)。將混合物加熱到40℃并在室溫下攪拌6小時(shí)。反應(yīng)完全后減壓除去溶劑，并從沸騰的乙酸乙酯和汽油中使產(chǎn)物重結(jié)晶(73％)。
IR cm-13395；3304(amide NH)；3163(3×CH3)，M/Z；218(96％；M+)；202(43％；-NH2)186(85％；-CONH2)；175(77％)；160(35％)146(79％)；133(23％)；41(100％).
1HCDCl3δ＝1.44(9H；s；(CCH3)3)；5.95(1H；brs；NH)；7.34(1H；t；H6J＝8Hz)，7.6(1H；ddH7；J＝7，&2Hz)8.07(1H；dd；H5J＝6.7，2Hz)；8.88(1H；brs；NH)13C 28.416(3×CH3)，34.372(CCH3)，113.905(Ar)，123.277(Ar)，124.338(Ar)，124.338(Ar)，125.440(Ar)，139.371(O-Ar).150.804(N-Ar)，166.457(Ar)，174.471(C＝O amide).
CHNFoundC65.915％；H6.39％；N12.48％，RequiredC66.038％；H6.465％；N12.835％.
實(shí)施例182-苯基苯并噁唑-4-羧酰胺(化合物NU1051)(a)第1步-—苯基亞胺乙酯鹽酸化物的制備將芐腈(0.514ml；5mmol)加入無(wú)水乙醇中(0.69g)。將無(wú)水氯化氫氣體鼓入溶液中直至飽和。攪拌混合物20小時(shí)。收集白色結(jié)晶固體并干燥。mpt125-130℃IRcm-1，2856，1631.M/Z；148(M+，30％)，105(100％)；1Hd6DMSO；δ＝1.5(3H；t，J＝7Hz；CH2CH3)，4.75(2H；q，J＝6.9Hz；CH2CH3)，8.0(5H；m；aromatics).
元素分析預(yù)計(jì)值C58.25；H6.51；N7.54；實(shí)測(cè)值C58.13；H6.43；N7.36。
(b)第2步——2-苯基苯并噁唑-4-羧酸甲酯的制備向2-氨基-3-羥基苯甲酸甲酯中(0.10g；0.59mmol)加入于無(wú)水乙醇中(20ml)的苯基亞胺乙酯鹽酸化物(0.167g；0.998mmol)。將其回流20小時(shí)，反應(yīng)后進(jìn)行TLC(1∶4乙酸乙酯∶汽油)。
減壓下除去乙醇并將固體溶于水中(20ml)，將有機(jī)物萃取到乙酸乙酯中(3×20ml)，合并，用氫氧化鈉溶液(2×10ml；0.2M)和水(2×10ml)洗滌，然后在硫酸鎂上方干燥。減壓除去溶劑生成黃色固體。用快速色譜法分離標(biāo)題化合物(洗脫液進(jìn)行TLC)，生成灰白色結(jié)晶固體(85％)。
5IRcm-1，1714.1Hd6DMSOδ＝4.1(3H；s；OCH3)，7.39(1H；t；J＝6Hz；H6)，7.5(3H；m；H3′；H4′；H5′)，7.78(1H；dd J＝7.0，1.0Hz；H7；)，8.0(1H；dd；J＝6.67&1.14Hz；H5′)，8.3(2H；m；H2′；H6′).
(c)第3步—-2-苯基苯并噁唑-4-羧酰胺的制備向2-苯基苯并噁唑-4-羧基甲酯(0.02g；0.0905mmol)于甲醇(3ml)的溶液中加入氨水(3ml)。將其加熱到40℃并攪拌，同時(shí)用TLC(1∶4乙酸乙酯∶汽油)監(jiān)測(cè)反應(yīng)。當(dāng)所有原料進(jìn)行反應(yīng)以后，形成了白色沉淀。除去溶劑生成白色固體，從乙酸乙酯和汽油中使之重結(jié)晶(70％)。
熔點(diǎn)199-201℃1HCDCl3δ＝6.02(1H；brsNH)；7.43(1H；t；H6；J＝8Hz)，7.57(3H；mH3′；H4′；H5′)，7.74(1H；dd；H7；J＝1Hz，&7Hz)；8.23(1H；dd；H5；J＝1Hz&7.3Hz)；8.27(2H；m；H2′；H6′)，8.97(1Hbrs；NH).13C；M/z；(EI)；238(m+；100％)；222(-NH268％)；195(-CONH2；98％).IR cm-13383；3165.
元素分析預(yù)計(jì)值C70.58，H4.23，N11.76。
實(shí)測(cè)值C70.41，H4.24，N11.77。
實(shí)施例192-(4-硝基苯基)苯并噁唑-4-羧酰胺(化合物NU1053)(a)第1步--3-羥基-2-(N-4-硝基苯甲?；?氨基苯甲酰甲酯的制備將2-氨基-3-羥基苯甲酸甲酯(0.5g；2.99mmol)溶于間-二甲苯(40ml)中并加熱至60℃逐滴加入4-硝基苯甲酰氨(0.556ml；2.99lmmol)，將其攪拌4小時(shí)。將溶液冷卻至室溫并減壓除去間二甲苯。將固體溶于水中(100ml)，并將有機(jī)物萃取到乙酸乙酯中(3×50ml)。合并有機(jī)部分，在硫酸鎂上方干燥，過(guò)濾并減壓除去溶劑。
通過(guò)柱層析(1∶4乙酸乙酯∶汽油為洗脫劑)純化標(biāo)題化合物，生成橙色固體(49％)。IRcm-13443(OH)，2953，1697，1649，1404，M/Z；316(15％M+).1HCDCl3δ＝3.95(3H；s；OCH3)，7.25(1H；t；H5J＝8Hz)，7.31(1H；dd；H4，J＝6，&2Hz)，7.67(1H；dd；H6，)；8.26(2H；dd；H2′；H6′J＝2.3Hz)；8.30(2H；dd；H3′；H5′J＝2.2Hz)；9.81(1H；s；OH)；12.30(1H；s；NH).
(b)第2步——2-(4-硝基苯基)苯并噁唑-4-羧基甲酯的制備將3-羥基-2-(N-4-硝基苯甲?；?氨基苯甲酸甲酯(0.1g；0.34mmol)溶于間二甲苯(20ml)中，向其中加入三乙胺(0.033ml；0.45mmol)和吡啶鎓-4-甲苯磺酸酯(0.070g；0.28mmol)。將其回流32小時(shí)。減壓除去間二甲苯并將殘余固體溶于水中。將有機(jī)物萃取到乙酸乙酯中(3×30ml)，干燥，過(guò)濾并減壓除去溶劑，生成磚紅色固體(74％)。IRcm-1，1726；1522；1556，M/Z；298(84％，M+)267(100％，-OCH3)，240(-CO)1HCDCl3δ＝4.01(3H；s；OCH3)，7.44(1H；t；H6J＝8.1Hz)，7.76(1H；dd；H7，；J＝7.2，&1Hz)，8.04(1H；dd；H5，)，8.35(2H；dd；H2′；H6′J＝2.2Hz)；8.46(2H；d；H3′；H5′J＝2.2Hz).
(c)第3步——2-(4-硝基苯基)苯并噁唑-4-羧酸的制備將2-(4-硝基苯基)苯噁唑-4-羧基甲酯(0.1g，0.335mmol)溶于甲醇中(3ml)，向其中加入氫氧化鈉水溶液(0.2M，3ml)。將混合物于40℃攪拌4小時(shí)并用鹽酸(6M)酸化至PH＝1.0。用乙酸乙酯(3×20ml)萃取混合物，用水(2×20ml)洗滌合并的有機(jī)層，干燥(MgSO4)并減壓除去溶劑，得到羧酸(0.084g，89％)。
(d)第4步——2-(4-硝基苯基)苯并噁唑-4-羧酰胺的制備在氮?dú)庀聰嚢?-(4-硝基苯基)和苯并噁唑-4-羧酸(0.084g，0.29mmol)于無(wú)水THF(10ml)中的溶液，并加入亞硫酰氯(0.022ml，0.31mmol)和DMF(0.1ml)，將混合物于室溫再攪拌5小時(shí)。加入氨水(0.5ml)并將混合物再攪抖30分鐘。減壓除去溶劑，將殘余固體溶于水中(20ml)，并用乙酸乙酯萃取溶液(3×20ml)。合并有機(jī)層，用水洗滌(2×20ml)并干燥(MgSO4)。減壓下除去溶劑得到羧酰胺(0.07g，85％)。
實(shí)施例202-(4-甲氧苯基)苯并噁唑-4-羧酰胺(化合物NU1054)(a)第1步——3-羥基-2-(N-4-甲氧基苯甲?；?氨基苯甲酰甲酯的制備將2-氨基-3-羥基苯甲酸甲酯(0.5g；2.99mmol)溶于間-二甲苯(40ml)中并加熱至60℃逐滴加入4-甲氧基苯甲酰氯(0.509g；2.99mmol)，將其攪拌3小時(shí)。將溶液冷卻至室溫并減壓除去間二甲苯。將固體溶于水中(100ml)，并將有機(jī)物萃取到乙酸乙酯中(3×50ml)。合并有機(jī)部分，在硫酸鎂上方干燥，過(guò)濾并減壓除去溶劑。
通過(guò)柱層析(1∶4乙酸乙酯∶汽油為洗脫劑)純化標(biāo)題產(chǎn)物并從沸騰的乙酸乙酯/汽油中重結(jié)晶，生成磚紅色固體(33％)。IRcm-13100(OH)2571，1691，1643，1606，M/Z；301(23％，M+)，270(-OCH3)，135(100％，COPHOCH3)1HCHCl3δ＝3.87((3H；s；OCH3)；3.93(3H；s；COOCH3)，7.02(2H；dd；H5′；H3′)； 7.14(1H；t；H5J＝8Hz)，7.29(1H； dd；H4，；J＝6.3，&1.7Hz)，7.63(1H；dd；H6)；8.03(2H；dd；H2′； H6′)；10.38(1H；s；OH)；11.98(1H；s；(b)第2步——2-(4-甲氧基苯基)苯并噁唑-4-羧基甲酯的制備將3-羥基-2-(N-4-甲氧基苯甲?；?氨基苯甲酸甲酯(0.05g，0.166mmol)溶于間二甲苯(20ml)中，向其中加入三乙胺(0.016ml；0.215mmol)和吡啶鎓-4-甲苯磺酸酯(0.034g；0.13mmol)。將其回流58小時(shí)。減壓除去間二甲苯并將殘余固體溶于水中。將有機(jī)物萃取到乙酸乙酯中(3×30ml)，干燥，過(guò)濾并減壓除去溶劑，生成固體(74％)。IR cm-11718，1614，1502.M/Z；283(45％，M+)252(31％，-OCH3)，225，63(100％).1HCDCl3δ＝3.88(3H；s；COOCH3)；6.9(2H；d；H3′；H5′)；7.35(1H；t；H6)，7.74(1H；dd；H7；)，7.96(1H；dd；H5)；8.2(2H；d；H2′；H6′).
(c)第3步——2-(4-甲氧基苯基)苯并噁唑-4-羧酰胺的制備將2-(4-甲氧基苯基)苯并噁唑-4-羧基甲酯溶于氨水中(30ml)并封閉在高壓釜中。將反應(yīng)混合物置于55℃、20巴，＞20小時(shí)，反應(yīng)結(jié)束后除去氨，從沸騰的乙酸乙酯和汽油中使所得固體重結(jié)晶。
實(shí)施例213-(5-溴代戊氧基)苯甲酰胺(化合物NU1019)將3-羥基苯甲酰胺(0.5g，3.65mmol)、1，5-二溴戊烷(1.82，1.1ml，7.3mmol)和碳酸鉀(500mg，3.65mmol)的混合物在乙腈中(18ml)回流(2小時(shí))直至TLC監(jiān)測(cè)反應(yīng)結(jié)束。旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去溶劑，生成白色粘稠固體，將其層析(在硅膠上，10％甲醇于二氯甲烷中的溶液)得到白色固體。將其從汽油與乙酸乙酯的混合物中重結(jié)晶，生成白色片狀結(jié)晶(0.744g，2.6mmol，70％產(chǎn)率)。mp.98-99℃。δH(200MHz，d6-DMSO)8.09(1H，s，NH)，7.49(4H，m，H2，5，6 andNH)，7.1(1H，d，J 7.99，H4)，4.11(2H，t，J 6.2，CH2O)，3.67(2H，t，J 6.6，2H)，1.90(4H，m，CH2CH2CH2)，1.62(2H，m，CH2)；δC(200MHz，d6-DMSO)168(CO)，158.85(C3)，129.63(C2)，120(C4)，117.79(C6)，113.53(C5)，67.73(OCH2)，35.36(CH2Br)，32.30(CH2CH2O)，28.12(CH2CH2Br)，24.63(OCH2CH2CH2)；M/Z(EI)285(M+).
元素分析實(shí)測(cè)值C50.71％，H5.36％，N4.95％，C15H22NO2Br要求值C50.366％，H5.636％，N4.895％
實(shí)施例223-(8-N9-腺嘌呤-辛基氧基)苯甲酰胺(化合物NU1022)在高壓反應(yīng)器中裝入3-〔8-N7-(6-氯嘌呤)辛基氧基〕-苯甲酰胺、3-(8-N7(6-氯嘌呤)辛基氧基)苯甲酰胺和氨水的混合物(110mg，0.27mmol)，高壓加熱(64℃，30巴，16小時(shí))。蒸出氨，剩下黃色固體，將其進(jìn)行層析(硅膠，15％甲醇/二氯甲烷)得到淡黃色固體，將其從甲醇中重結(jié)晶(56mg，0.17mmol，62％產(chǎn)率)。mp 199-199.5℃.ν cm-1；δH(200MHz，d6-DMSO)8.24(1H，s，purine H8)，8.23(1H，s，purine H2)，8.06(1H，s，CONH).7.55-7.39(4H，m，CONHand aromatic H2，5，6)，7.30(2H，s，NH2)，7.17-7.13(1H，m，aromatic H4)，4.23(2H，t，J7，OCH2)，4.07(2H，t，J6.3，CH2N)，1.94-1.76(4H，m，OCH2CH2and CH2CH2N)，1.40(8H.m，alkyl env)；δC(200MHz，d6-DMSO)167.998(CO)，158.847(C3)，152.711(pC8)，141.206(pC2)，136.047(C1)，129.667(C5)，119.967(C6)，117.8 66(C4)，113.592(C2)，67.900(OCH2)，43.221(NCH2)，29，698(OCH2CH2)，28.961(OCH2CH2CH2and NCH2CH2)，26.313(OCH2CH2CH2CH2)，25.762(NCH2CH2CH2CH2)；m/z 338(M+).
元素分析
實(shí)測(cè)值C62.42，H6.48，N21.89，C20H26N6O2要求值C62.81，H6.85，N21.97％。
實(shí)施例233-〔5-(6氯嘌呤-9-基)戊基氧基〕苯甲酰胺(化合物NU1023)將3-(溴代戊基氧基)苯甲酰胺(500mg，1.7mmol)、6-氯嘌呤(270mg，1.7mmol)和碳酸鉀(240mg，1.7mmol)于DMF(7.5ml)中的溶液在室溫?cái)嚢?天。然后真空(0.001mmHg)除去溶劑，將白色固體(N7與N9異構(gòu)體的混合物)層析(硅膠，10％甲醇/CH2Cl2)，得到透明的單一產(chǎn)物(N9異構(gòu)體)。用乙醚(＝5ml)進(jìn)行研制，得到白色固體，使其從乙酸乙酯中重結(jié)晶，得到產(chǎn)物(120mg，0.33mmol，20％產(chǎn)率)mp.132-133℃νcm-1；δH(200MHz，d6-DMSO)8.88(1H，s，purine H8)，8.85(1H，s，purine H2)8.05(1H，s，CONH).7.56(4H，m，NH andaromatic H2，5，6)，7.15-7.10(1H，m，H4)，4.44(2H，t，J7，OCH2)，4.08(2H，t，J6.3，CH2N)，2.12-1.98(2H，m，OCH2CH2)，1.94-1.80(2H，m，NCH2CH2)，1.59-1.43(2H，m，CH2CH2CH2)；δC(200MHz，d6-DMSO)167.925(C0)，158.774(C3)，152.306(pC4)，151.760(pC8)，149.293(pC2)，136.019(C1)，131.175(pC6)，129.596(C5)，119.961(C6)，117.801(C4)，113.458(C2)，67.591(OCH2)，44.033(NCH2)，29.071(OCH2CH2)，28.337(CH2CH2N)，22.890(CH2CH2CH2)；m/z 360(M+).
元素分析實(shí)測(cè)值C56.73，H5.28，N19.4，C17H18N5O2Cl要求值C56.57％，H5.04％，H19.4％。
實(shí)施例243-(5-腺苷-9-基戊基氧基)苯甲酰胺(化合物NU1024)在高壓反應(yīng)器中裝入3-〔5-N7-(6-氯嘌呤)戊基氧基〕-苯甲酰胺、3-(5-N9(6-氯嘌呤)戊基氧基)苯甲酰胺和氨水的混合物(392.1mg，1.1mmol)，高壓加熱(66℃，30巴，16小時(shí))。蒸出氨，剩下黃色固體，將其進(jìn)行層析(硅膠，甲醇/二氯甲烷)得到淡黃色固體，將其重結(jié)晶(203.5mg，0.6mmol，54％產(chǎn)率)。mp 148-149℃νcm-1；δH(200MHz，d6-DMSO)8.25(2H，m，purine H8，2)，8.06(1H，s，CONH)，7.61-7.38(4H，m，CONH and aromatic H2，5，6)，7.31(2H，s，NH2)，7.15-7.11(1H，m，H4)，4.27(2H，t，J＝7Hz，OCH2)，4.07(2H，t，J＝6.3Hz，CH2N)，2.05-1.78(4H，m，OCH2(CH2)3CH2H)，1.56-1.41(2H，m，NCH2CH2)，1.59-1.43(2H，m，CH2CH2CH2)；δC；m/z
實(shí)施例253-〔8-N9(6-氯嘌呤)-辛基氧基〕苯甲酰胺(化合物NU1027)將3-(溴代辛基氧基)苯甲酰胺(500mg，1.5mmol)、6-氯嘌呤(236mg，1.5mmol)和碳酸鉀(210mg，1.5mmol)于DMF(7.5ml)中的溶液在室溫?cái)嚢?天。然后真空(0.001mmHg)除去溶劑，將余下的白色固體(N7與N9異構(gòu)體的混合物)層析(硅膠，5％汽油/THF)，得到白色固態(tài)的單一產(chǎn)物(N9異構(gòu)體)(74mg)，將其從乙醇中重結(jié)晶生成58.7mg(10％產(chǎn)率)。
mp 116-117℃
在遞交國(guó)際申請(qǐng)時(shí)未提供此頁(yè)干燥(0.001mmHg)生成喹唑啉酮標(biāo)題化合物(如X-射線結(jié)晶學(xué)分析所示)1H NMRd6DMSOδ2.14(s；3H；CH3)；6.87(dd；1H；H7)；6.94(t；1H；H6)；7.29(dd；1H；H5)產(chǎn)率52％實(shí)施例278-羥基-2-(4-硝基苯基)喹唑啉-4-酮(化合物NU1057)將如實(shí)施例19(第2步)中所述獲得的2-(4-硝基苯基)苯并噁唑-4-羥基甲酯(0.20g)溶于氨水(30ml)并封閉在高壓釜中。將反應(yīng)混合物于55℃、20巴放置20小時(shí)。在此狀態(tài)下，預(yù)期的2-(4-硝基苯基)苯并噁唑衍生物似乎重排生成相應(yīng)的喹唑啉酮衍生物，反應(yīng)結(jié)束后除去氨，將所得固體從沸騰的乙酸乙酯和汽油中重結(jié)晶(84％)。IR cm-1，M/Z；283(38％，M+)267(100％，-NH2)，240(-CO)1HCDCl3δ＝7.35(1H；dd；H5)，7.5(1H；t；H6；)，7.7(1H；dd；H7)；8.45(2H；d；H2.；H6′)；8.79(2H；d；H3′；H5′)，9.98(1H；brs；NH)，12.8(1H；brs；NH).
與此類(lèi)似，當(dāng)試圖制備苯噁唑-4-羧酰胺時(shí)，產(chǎn)物進(jìn)行分子重排生成8-羥基-喹唑啉-4-〔3H〕酮(化合物NU1026)，其有很強(qiáng)的PARP抑制活性。
下面制備其它喹唑啉酮化合物的進(jìn)一步的實(shí)施例具有特別重要意義。
實(shí)施例288-甲氧基-2-甲基喹唑啉-4-〔3H〕-酮(化合物NU1063)方法A(a)第一步——3-甲氧基-2-硝基苯甲酰胺的制備將3-甲氧基-2-硝基苯甲酸(0.1g，5.1mmol)、亞硫酰氯(0.55ml，7.6mmol)和二甲基甲(0.2ml)于THF(10ml)中的溶液在氮?dú)庀掠?5℃攪拌12小時(shí)。小心加入氨水(6ml)并將混合物再攪拌15分鐘，減壓除去溶劑并用冰冷的水洗滌所剩固體，收集固體(0.74g，75％)m.p.219-222℃.δH(200MHz，d6-DMSO)4.01(s，3H，OCH3)；7.41-7.46(dd，1H，Ar-4H)；7.55-7.60(dd，1H，Ar-6H)；7.69 7.77(m，1H，Ar-5H)；7.84(brs，1H，-NH)；8.31(brs，1H，-NH)；m/z196(34.3％，M+)νmax/cm-13350(br)，3180(br)，3000，2970，2920，2820，1675，元素分析實(shí)測(cè)值C49.03，H3.93，N13.97，C8H8N2O4要求值C48.98，H4.11，N14.28％。
(b)第2步——2-氨基-3-甲氧基苯甲酰胺的制備將3-甲氧基-2-硝基苯甲酰胺(0.5g，2.5mmol)溶于無(wú)水甲醇(40ml)中并用鈀-碳催化劑(80mg)氫化。通過(guò)硅藻土過(guò)濾除去催化劑，收集殘留產(chǎn)物(0.35g)并干燥。m.p.145-147℃δH(200MHz，d6-DMSO)3.88(s，3H，-OCH3)；6.40(brs，2H，-NH2)；6.54-6.62(t，1H，Ar-5H)；6.96-6.99(dd，1H，Ar-4H)；7.23(brs，1H，-NH)；7.29-7.33(dd，1H，Ar-6H)；7.85(brs，1H，-NH)；m/z166(43.8％.M+)νmax/cm-13480，3370，3330，3150，2970，2850，1680，1620.
元素分析實(shí)測(cè)值C57.54，H5.99，N16.61，C8H10N2O2要求值C57.82，H6.07，N16.86％。
(c)第3步——2-N-乙酰基氨基-3-甲氧基苯甲酰胺的制備向含吡啶(0.3ml，3.9mmol)的2-氨基-3-甲氧基苯甲酰胺(0.5，3mmol)于無(wú)水THF的溶液中逐滴加入于THF(2ml)中的乙酰氯，并將反應(yīng)混合物在氮?dú)夥障聰嚢柽^(guò)夜。真空除去溶劑并用碳酸氫鈉水溶液洗滌剩下的白色稀漿，過(guò)濾并用水洗滌。收集白色產(chǎn)物(0.19g，31％)并干燥。
m.p.243-246℃δH(200MHz，d6-DMSO)2.05(s，3H，-CH3)；3.88(s，3H，-OCH3)；7.14-7.18(dd，1H，Ar-4H)；7.21-7.25(dd，1H，Ar-6H)；7.33-7.41(m，2H，-NH and Ar-5H；7.53(brs，1H，-NH)；9.27(brs，1H，-NH)；m/z 208(16.6，M+)νmax/cm-13420，3240(br)，3160，3020，2980，2870，1660.
元素分析實(shí)測(cè)值C56.98，H5.38，N12.78，
C10H12N2O3，要求值C57.68，H5.81，N13.45％。
(d)最后步驟——8-甲氧基-2-甲基喹唑啉-4-〔3H〕-酮的制備將來(lái)自第3步的2-N-乙?；被?3-甲氧基苯甲酰胺(0.07g，0.34mmol)溶于氫氧化鈉水溶液中(2％w/v，2ml)并將溶液于25℃攪拌12小時(shí)。用稀鹽酸溶液中和反應(yīng)混合物，過(guò)濾收集生成的淤積沉淀并用水充分洗滌。從乙酸乙酯中重結(jié)晶標(biāo)題化合物(0.043g，67％)m.p.202-204℃(升華)。
實(shí)施例28a8-甲氧基-2-甲基喹唑啉-4-〔3H〕-酮(化合物NU1063)另一種方法B在來(lái)自實(shí)施例28第2步的2-氨基-3-甲氧基苯甲酰胺(1.0g，6mmol)與在無(wú)水THF(25ml)中的吡啶(0.6ml，7.8mmol)的混合物中逐滴加入乙酰氯(0.9ml，13mmol)于THF(2ml)中的溶液，在氮?dú)庀聦⒒旌衔飻嚢柽^(guò)夜。真空除去溶劑，將殘留的白色稀漿重新懸浮在2％氫氧化鈉水溶液中并用鹽酸水溶液中和，同時(shí)形成白色沉淀。過(guò)濾收集產(chǎn)物并從甲醇-水中重結(jié)晶(0.915g，80％)m.p.202-204℃(升華)。δH(200MHz，d6-DMSO)2.43(s，3H，-CH3)；3.97(s，3H，-OCH3)；7.37-7.50(m，2H，Ar-6/7H)；7.68-7.73(dd，1H，Ar-5H)；δC(d6-DMSO)；21.83(-CH3)；56.05(-OCH3)；114.96，116.99(Ar-67C)；121.95(C-CH3)；126.5(Ar-5C)；140.0(Ar-8AC)；153.26(Ar-8C)；154.33(Ar-4aC)；162.04(C＝O)；m/z190(96.6％，M+)νmax/cm-13171，3034，2903，1676，1620，1574，1483.Elemental analysisfound C62.14，62.36，H5.18，5.29，N14.23，14.36；C10H10N2O2requires C63.15，H5.30，N14.73％.
元素分析實(shí)測(cè)值C62.14，62，36，H5.18，5.29，N14.23，14，36；C10H10N2O2要求值C63.15，H5.30，N14.73％。
實(shí)施例298-羥基-2-甲基喹唑啉-4-〔3H〕-酮(化合物NU1025)(實(shí)施例26的另一種方法)在氮?dú)庀聦⒂贐Br3(1.0M，于CH3Cl2中)中的來(lái)自實(shí)施例28的8-甲氧基-2-甲基喹唑啉-4-〔3H〕-酮(0.7g，3.7mmol)的溶液回流加熱24小時(shí)。真空蒸餾除去溶劑，用氫氧化鈉溶液(10％w/v)水解所留殘余物。用鹽酸水溶液酸化生成白色沉淀，將其除去。用乙酸乙酯(3×30ml)萃取濾液，干燥(MgSO4)并真空除去溶劑。從丙-2-醇-水中重結(jié)晶，得到目標(biāo)化合物(65％)m.p.253-258℃。δH(200MHz，d6-DMSO)2.48(s，3H，-CH3)； 7.22-7.41(m，2H，Ar＝6/7H)；7.57-7.62(dd，1H，Ar-5H)；9.57(s，1H，-OH)；12.26(s，1H，-NH)；δC(d6-DMSO)；21.72(-CH3)；115.78，118.42(Ar-6/7C)；121.76(C-CH3)；126.54(Ar-5C)；138.27(Ar-8aC)152.58(Ar-8C)；152.87(Ar-4aC)；162.05(C＝O)；m/z176(100％，M+)；νmax/cm-13320，3175，3030，2900，2800，1670.
元素分析實(shí)測(cè)值C61.39，H4.54，N15.88，C9H8N2O2要求值C61.36，H4.58，N15.94％。
實(shí)施例308-甲氧基-2-苯基喹唑啉-4-〔3H〕-酮(化合物NU1065)方法A(a)第1步——2-N-苯甲酰基氨基-3-甲氧基苯甲酰胺的制備向含有吡啶(0.3ml，3.0mmol)的來(lái)自實(shí)施例28第2步的2-氨基-3-甲氧基苯甲酰胺(0.5g，3mmol)于無(wú)水THF(15ml)的攪拌下的溶液中逐滴加入于THF(2ml)中的苯甲酰氯(0.4ml，3.3mmol)。將反應(yīng)混合物在氮?dú)庀掠?5℃攪拌。真空下除去溶劑，得到白色稀漿，用碳酸氫鈉溶液洗滌之，過(guò)濾并用水洗滌。從甲醇-水中重結(jié)晶，生成標(biāo)題化合物(0.2g，41％)。
m.p.176-180℃。δH(200MHz，d6-DMSO)3.88(s，3H，-OCH3)；7.24-7.32(m，2H，Ar-4/6H)；7.41-7.49(m，2H，-NH，Ar-5H)；7.59-7.73(m，4H，-NH，Ph-3′/4′H)；8.04-8.08(dd，2H，Ph-2′H)；9.85(s，1H，-NH)；mlz270(74.6％，M+).
(b)第2步——8-甲氧基-2-苯基喹唑啉-4-〔3H〕-酮的制備將2-N-苯甲?；被?3-甲氧基苯甲酰胺(0.2g，0.74mmol)溶于氫氧化鈉水溶液中(2％w/v，2ml)，將溶液于室溫?cái)嚢?2小時(shí)。用鹽酸中和反應(yīng)混合物，過(guò)濾收集形成的白色沉淀，從甲醇/水中重結(jié)晶(0.12g，65％)m.p.252-256℃。
實(shí)施例30a8-甲氧基-2-苯基喹唑啉-4-〔3H〕-酮(化合物NU1065)另一種方法B向2-氨基-3-甲氧基苯甲酰胺(1.0g，6mmol)(來(lái)自實(shí)施例28第2步)和吡啶(0.6ml，7.8mmol)于無(wú)水THF(25ml)的溶液中逐滴加入苯甲酰氯(0.8ml，6.6mmol)于THF(2ml)中的溶液，并將混合物于氮?dú)庀聰嚢柽^(guò)夜。真空除去溶劑，將殘留的白色稀漿重新懸浮在2％氫氧化鈉水溶液中并用鹽酸水溶液中和，同時(shí)形成白色沉淀。過(guò)濾收集產(chǎn)物并從甲醇-水中重結(jié)晶(1.1g，75％)m.p.252-256℃；δH(200MHz，d6-DMSO)4.06(s，3H，-OCH3)；7.47-7.61(m，2H，Ar-4/6H)；7.63-7.69(m，3H，Ph-3′/4′H)；7.80-7.85(dd，1H，Ar-5H)；8.27-8.32(m，2H，Ph-2′H)；12.70(s，1H，-NH)；m/z252(100％，M+)；νmax/cm-13330，3190，3170，3120，3070，2950，2890，2830，1660.
元素分析實(shí)測(cè)值C71.38，H4.39，N11.17，C15H12N2O2要求值C71.42，H4.79，N11.10％。
實(shí)施例318-羥基-2-苯基喹唑啉-4-〔3H〕-酮(化合物NU1068)將來(lái)自實(shí)施例30或30a的8-甲氧基-2-苯基喹唑啉-4-〔3H〕-酮(0.5g，2mmol)于BBr3(1.0M，于CH2Cl2中)的溶液(6ml，6mmol)在氮?dú)庀禄亓骷訜?4小時(shí)。減壓蒸餾除去溶劑并用氫氧化鈉溶液(10％w/v)水解余下的殘余物。用鹽酸水溶液酸化得到白色沉淀，將其除去。用乙酸乙酯萃取濾液(3×30ml)，干燥(MgSO4)并減壓除去溶劑。從丙-2-醇重結(jié)晶，得到目標(biāo)產(chǎn)物(0.187mg，67％)m.p.280-284℃；δH(200MHz)，d6-DMSO)7.73-7.50(m，2H，Ar-6/7H)；7.66-7.72(m，4H，Ar-5H.Ph-3′/4′H)；8.51-8.54(dd，2H，Ph-2H)；9.75(bs，1H，-OH)；12.60(bs，1H，-NH)；δC(d6-DMSO)；116.01，118.68(Ar-6/7C)；122.03(C-Ph)；127.43-128.76(Ph-1′/2′/3′/4′C)；137.98(Ar 8aC)；150.72(Ar-8C)；153.31(Ar-4aC)；162.62(C＝O)；m/z238(100％，M+)；νmax/cm-1(approx.values)3380(br)，3180，3120，3050，2940，1640.
元素分析實(shí)測(cè)值C69.54，H4.05，N11.46，C14H10N2O2要求值C70.58，H4.23，N11.76％。
實(shí)施例32
2，8-二甲基喹唑啉-4-〔3H〕-酮(化合物NU1069)向2-氨基-3-甲基苯甲酰胺(0.5g，3.3mmol)(按-般方法制得)和吡啶(0.35ml，4.3mmol)于無(wú)水THF(15ml)的溶液中逐滴加入乙酰氯(0.36ml，5.0mmol)于THF(2ml)中的溶液，并在氮?dú)庀聦⒒旌衔飻嚢柽^(guò)夜。真空除去溶劑并將殘余的白色稀漿重新懸浮在2％的氫氧化鈉水溶液中，用鹽酸水溶液中和，同時(shí)生成白色沉淀。收集固體，從甲醇-水中重結(jié)晶，得到所需的喹唑啉酮(0.47g，81％)m.p.217-220℃；δH(200MHz，d6-DMSO)2.44(s，3H，-CH3)；2.57(s，3H，-CH3)；7.36-7.44(t，1H，Ar-6H)；7.68-7.72(dd，1H，Ar-7H)；7.97-8.01(dd，1H，Ar-5H)；12.25(brs，1H，-NH)；m/z174(100％，M+)；νmax/cm-13325，3180，3040，2990，2910，2880，2795，1680，1620.
元素分析實(shí)測(cè)值C68.76，H5.57，N15.90，C10H10N2O要求值C68.94，H5.76，N16.08％。
PARP抑制活性的測(cè)定本發(fā)明的化合物，特別是那些在前述實(shí)施例中詳細(xì)描述的，已用下列方法和材料在體外測(cè)定了其作為PARP抑制劑的活性。
原則上說(shuō)，PARP的測(cè)定依賴于活化含外源〔33P〕-NAD+的細(xì)胞中的內(nèi)源性PARP(如下文所述，這些外源性〔32P〕-NAD+是在開(kāi)始的預(yù)處理步驟中將細(xì)胞懸浮在〔32P〕-NAD+溶液中并使之透過(guò)細(xì)胞而引入的。由酶合成的多聚(ADP-核糖)可用三氯乙酸(TCA)沉淀，并測(cè)定其中結(jié)合的放射性標(biāo)記32P。例如，在特定的實(shí)驗(yàn)條件下使用閃爍計(jì)數(shù)器測(cè)定PARP活性。在各種待測(cè)化合物的存在下，在同種條件下，以相同步驟重復(fù)實(shí)驗(yàn)。從而可以通過(guò)測(cè)定TCA沉淀的多聚(ADP-核糖)中〔32P〕的減少量來(lái)確定酶的活性，酶活性的降低程度代表待測(cè)化合物的抑制效果。
測(cè)定結(jié)果可用一種待測(cè)物的一個(gè)或多個(gè)，濃度對(duì)活性抑制或降低的百分率來(lái)表示，也可用降低酶活性50％的待測(cè)化合物濃度，即IC50值來(lái)表示。因此，用一系列不同的化合物可以獲得一系列可比較的抑制活性的值。
事實(shí)上，常用鼠白血病細(xì)胞L1210作為PARP酶的來(lái)源。這些鼠白血病L1210細(xì)胞經(jīng)過(guò)低滲緩沖液和驟冷處理從而對(duì)外源性〔32P〕NAD+具有通透性。在提出的優(yōu)選技術(shù)中，將一定量的合成的小寡聚核苷酸，尤其是帶有回文序列CGGAATTCCG的單鏈寡核苷酸引入細(xì)胞懸液中可以激活PARP酶，使測(cè)定結(jié)果更具精確性和重現(xiàn)性。這種寡聚核苷酸序列自身回折形成帶有單鏈平整末端的雙鏈分子并為PARP的活性提供了有效的底物。其作為酶強(qiáng)力激動(dòng)劑的過(guò)程在進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)中已得到證實(shí)。
在所采用的實(shí)驗(yàn)方案中，引入了作為特定的PARP抑制劑的如上述的合成寡聚核苷酸來(lái)區(qū)分細(xì)胞中PARP和其它單聚-ADP-核糖基轉(zhuǎn)移酶。因此，這種合成寡聚核苷酸的引入導(dǎo)致了對(duì)結(jié)合的放射性活性的5-6倍的刺激，并且這些完全歸因于PARP的活性。
更詳細(xì)的測(cè)定細(xì)節(jié)如下材料
所用材料如下DDT(二巰基丁二醇)配制100mM(15.4mg/ml)的DTT液(作為抗氧化劑)，分裝成每管500微升，貯存于-20℃。
低滲緩沖液9mM Hepes (214mg/100ml)4.5％葡聚糖(4.58/100ml)4.5mM MgCl2(92mg/100ml)以上各組分溶于大約80ml蒸餾水中，調(diào)pH至7.8(NaOH/HCl)，用蒸餾水定容至100ml，貯存于冰箱中，使用前加入DTT至5mM(50微升/ml)等滲緩沖液40mM Hepes (1.9g/200ml)130mM Kcl (1.94g/200ml)4％葡聚糖 (8g/200ml)2mMEGTA(152mg/200ml)2.3mM MgCl2(94mg/200ml)225mM蔗糖 (15.39g/200ml)將上述組分溶解在大約150ml蒸餾水中，調(diào)pH至7.8(NaOH/HCl)，用蒸餾水定容至200ml，貯存于冰箱中，臨使用前加入DTT至2.5mM(25微升/ml)。
NAD預(yù)先稱量的等分試樣固體NAD貯存于20℃。測(cè)定前臨時(shí)將其配制成大約6mM(4-4.5mg/ml)的溶液，于260mm測(cè)定光密度(O.D)以精確摩爾濃度。由水稀釋原液至濃度為600微摩爾/升并加入少許32P標(biāo)記的NAD(如2-5微升/ml)。
寡聚核苷酸帶有回文序列CGGAATTCCG的寡聚核苷酸用常規(guī)方法合成，真空干燥并以塊狀貯存于冰箱中。使用前用10mMTris/HCl配成200微克/ml，pH7.8，使每塊核苷酸徹底溶解在50ml緩沖液中。將溶液于水浴中加熱至60℃，15分鐘，然后慢慢冷卻確保其正確退火。加入9.5ml緩沖液后，用一稀釋樣品在260mM測(cè)光密度來(lái)確定濃度。再將主體溶液稀釋成200微克/毫升，分裝成500微升/管，置冰箱，備用。
TCA將TCA(三氯乙酸)溶液配成兩種濃度10％TCA＋10％焦磷酸鈉；1％TCA＋1％焦磷酸鈉。
細(xì)胞作為PARP酶來(lái)源的L1210細(xì)胞是保存在RPMA培養(yǎng)基＋10％小牛血清＋谷氨酰胺和抗菌素(青霉素和鏈霉素)中的懸浮培養(yǎng)物，再加入HEPES和碳酸氫鈉細(xì)胞接種于100ml培養(yǎng)基中，使之在取出測(cè)定時(shí)濃度達(dá)到大約8×105/ml。
方法一般是將待測(cè)化合物配制成在DMSO(二甲基亞砜)中的濃縮液。這些化合物的溶解度測(cè)定方法如下加入一定量的二甲基亞砜溶液于一定量的等滲緩沖液中，采用最終用于測(cè)定操作中的比例，稍許后，用顯微鏡檢查看溶液中是否有任何晶狀物形成的跡象。
然后將所需量的已用血球計(jì)數(shù)器計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸液離心(在Europa 24M中離心1500轉(zhuǎn)/分，5分鐘)，除去上清液，將得到的沉淀塊重新懸浮在20ml 4℃的DulA溶液中，再在4℃離心1500轉(zhuǎn)/分。除去上清液，將細(xì)胞重新以冰冷的低滲緩沖液以3×107細(xì)胞/ml的濃度懸浮，置冰上30分鐘，然后加入九倍體積的冰冷等滲緩沖液，此刻這種已對(duì)外源性NAD+具有可滲透性的細(xì)胞可在一小時(shí)內(nèi)進(jìn)行測(cè)定試驗(yàn)。在這段時(shí)間內(nèi)，細(xì)胞的通透性可通過(guò)如下方法測(cè)定加入雙倍量的細(xì)胞到一等體積的臺(tái)盼藍(lán)溶液中，放置5分鐘，再在血球計(jì)數(shù)器下計(jì)數(shù)。
測(cè)定操作可方便地在15ml的錐形底塑料管中進(jìn)行，此管放置于此酶的最適溫度--26℃的振蕩水浴中。一典型的測(cè)定操作如下所用的寡聚核苷酸液濃度為5微克/毫升，而待測(cè)化合物/DMSO溶液的濃度為2％，試驗(yàn)一式四份平行進(jìn)行。在每一測(cè)定管中加入5微升寡聚核苷酸液，50微升的500微摩爾/升NAD+〔32P〕-NAD溶液，8微升待測(cè)化合物DMSO溶液和37微升水。在開(kāi)始實(shí)驗(yàn)前，這些“雞尾酒”般的溶液需在26℃預(yù)熱7分鐘，細(xì)胞懸液也要如此。在混合液中加入300微升細(xì)胞懸液后反應(yīng)開(kāi)始，終止反應(yīng)時(shí)需加2ml 10％TCA＋10％焦磷酸鈉溶液。
此外，通常還另需6支測(cè)定管作為空白對(duì)照，它們含有同樣的上述組分，但在加入細(xì)胞懸液前，加TCA溶液以阻止任何反應(yīng)的發(fā)生。這可以校正標(biāo)記物對(duì)所用濾器的任何非特異性吸附(如下述)。
分別間隔一定時(shí)間加入細(xì)胞懸液于各測(cè)定管后恰5分鐘時(shí)，分別加入4℃的10％TCA＋10％焦磷酸鈉。將各管置于冰上，至少1小時(shí)，將每個(gè)試管的內(nèi)容物通過(guò)各個(gè)漏斗濾器分別過(guò)濾，抽濾器皿使用事先用10％TCA濕潤(rùn)的GF/C過(guò)濾元件(粗面朝上)。過(guò)濾每管的內(nèi)容物并用1％TCA＋1％焦磷酸鈉液輕輕洗滌，將濾器小心移去，干燥，放置于各個(gè)閃爍瓶中。另備4個(gè)含有10微升600微摩爾/NAD+〔32P〕-NAD液的閃爍瓶作為參比標(biāo)準(zhǔn)，在每一瓶中加入10ml閃爍體。在-β計(jì)數(shù)器上計(jì)數(shù)2分鐘，以獲得32P的存在量，進(jìn)而得到多聚(ADP-核糖)的量和PARP酶的活性。
體外PARP抑制研究的結(jié)果上面簡(jiǎn)述的PARP酶測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)步驟除了用于根據(jù)本發(fā)明的一系列化合物外，出于比較的考慮，它也適用于某些已被證明有一定PARP抑制活性的苯甲酰胺類(lèi)化合物，特別是對(duì)3-羥基苯甲酰胺，3-甲氧基苯甲酰胺和3-氨基苯甲酰胺。一系列已制得和/或研究過(guò)的化合物連同使用上述方法測(cè)定不同濃度化合物的不同實(shí)驗(yàn)中所得到的PARP抑制分析結(jié)果已列成表如下述表III所示。
考察此表，已知的PARP抑制劑3-氨基苯甲酰胺，3-甲氧基苯甲酰胺和3-羥基苯甲酰胺可看作為參照化合物。雖然在活性上有相當(dāng)大的不同，且在某些情況下由于低溶解度的緣故，至少不能得到高濃度的待測(cè)化合物水溶液，但總的說(shuō)來(lái)，所測(cè)的本發(fā)明化合物顯示了具有前景的活性，物別有意義的是苯并噁唑類(lèi)似物，尤其是已提到的NU1056，NU1040，NU1051以及NU1054化合物即使在低濃度下也顯示出相對(duì)高的抑制活性。作為強(qiáng)力PARP抑制劑，那些已特別提及的NU1025，NU1057，NU1063，NU1068和NU1069喹唑啉酮衍生物也是有同樣重要的意義。
在相似的濃度且用同樣方法的測(cè)定中，本發(fā)明化合物在很多的情況下顯示出的PARP酶抑制活性要比其它已知的苯酰胺類(lèi)PARP抑制劑的平均抑制值高得多，或至少相當(dāng)，如果不是相當(dāng)好的話，研究的多種煙酰胺類(lèi)似物表現(xiàn)出沒(méi)有抑制活性或僅表現(xiàn)出很低的抑制活性。
進(jìn)一步的生物學(xué)活性研究利用鼠白血病L1210細(xì)胞系培養(yǎng)物進(jìn)行生長(zhǎng)抑制實(shí)驗(yàn)以評(píng)價(jià)化合物的細(xì)胞抑制效果，進(jìn)行克隆存活測(cè)定實(shí)驗(yàn)以估價(jià)其細(xì)胞毒性，特別是與DNA損傷性細(xì)胞毒劑如細(xì)胞毒性抗腫瘤藥劑或者高能量的放射結(jié)合使用的化合物的細(xì)胞毒性。DNA損傷以及PARP抑制劑在DNA鏈斷裂和修復(fù)過(guò)程中的作用也可通過(guò)DNA鏈斷裂分析并按照已發(fā)表的堿性洗脫技術(shù)進(jìn)行監(jiān)測(cè)來(lái)評(píng)價(jià)。
通過(guò)實(shí)施例給出一些進(jìn)一步的細(xì)節(jié)，使用上述NU1025和NU1057的喹唑啉化合物(由相應(yīng)的苯并噁唑類(lèi)化合物經(jīng)分子重排衍生而來(lái))作為抑制PARP的本發(fā)明化合物的典型例進(jìn)行下述研究，也作為與已知的PARP抑制劑3-氨基苯甲酰胺(3AB)以及苯甲酰胺(BZ)的對(duì)照比較。還報(bào)道了使用烷基化劑temozolomide(TM)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，將其作為細(xì)胞毒DNA損傷抗腫瘤藥的一個(gè)有說(shuō)服力的例子，并且在某些研究中使用γ-射線照射損傷細(xì)胞。
在生長(zhǎng)抑制測(cè)定中，典型的操作是將L1210細(xì)胞以1×104/ml一式三份接種于24孔培養(yǎng)板，24小時(shí)后加入選擇性結(jié)合和濃度的待測(cè)化合物或者藥物。此時(shí)，取一系列樣品用庫(kù)爾特計(jì)數(shù)器計(jì)數(shù)(N0)，48小時(shí)后余下樣品再進(jìn)行計(jì)數(shù)(N1)，從而確定藥物處理過(guò)的樣品的生長(zhǎng)抑制百分率(％)。在藥物組合實(shí)驗(yàn)中尋找那些對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)或克隆形成有協(xié)同作用的證據(jù)，一個(gè)單一的固定濃度的細(xì)胞毒性藥物如TM作為參比值。
作為得到的一個(gè)具有說(shuō)明力的結(jié)果，從生長(zhǎng)抑制實(shí)驗(yàn)測(cè)定的單獨(dú)使用以及與一固定濃度(100微摩爾/升)的TM聯(lián)合使用上述PARP抑制劑的Ic50值示于本說(shuō)明書(shū)最后的表I中。雖未明確指出，但可以看出單獨(dú)將細(xì)胞置于TM中引起細(xì)胞生長(zhǎng)抑制的IC50值為361±25微摩爾/升。而且表1證實(shí)了將細(xì)胞置于100μM TM與濃度不斷增加的PARP抑制劑中，則在一定濃度范圍內(nèi)對(duì)生長(zhǎng)抑制起到了協(xié)同作用。
從表1還可看出，單獨(dú)使用NU1025化合物抑制細(xì)胞活性所需濃度要比與100微摩爾/升TM結(jié)合使用所需濃度高10-20倍。例如，單獨(dú)使用NU1025化合物其IC50為0.41mM，而有TM存在時(shí)則降至0.04mM。與此相比，這種差異在3AB和BZ中只有2-3倍，這是由于該化合物本身的生長(zhǎng)抑制作用及其與TM聯(lián)合使用的作用之間存在著相當(dāng)大的重迭。當(dāng)比較該化合物作為PARP抑制劑的有效性和其抑制細(xì)胞生長(zhǎng)的能力時(shí)發(fā)現(xiàn)它們處于同一水平，這至少說(shuō)明PARP的功能是細(xì)胞生長(zhǎng)所必需的。
在克降存活測(cè)定實(shí)驗(yàn)中，典型的操作是將L1210細(xì)胞置不同濃度的TM±一固定濃度的PARP抑制劑溶液中16小時(shí)，然后計(jì)數(shù)并接種，在無(wú)藥物的0.12-0.15％的瓊脂糖培養(yǎng)基中使克隆形成。7-10天后，將克隆用0.5mg/ml的MTT染色并在光柵盒上用肉眼計(jì)數(shù)。繪制存活曲線并將得到的典型的DEF10值列于下述表II中(DEF10定義為將存活率降至10％所需的TM濃度除以在固定濃度的PARP抑制劑存在下將存活率降至10％的TM濃度的值。)表II中每個(gè)DEF10值代表平均比值±S.E.(標(biāo)準(zhǔn)誤差)。這個(gè)比率±S.E.是使克隆的平均存活率降至10％時(shí)所需的單獨(dú)使用的TM的濃度(675±31微摩爾/升，它是從22條獨(dú)立的存活曲線中得出的)除以至少?gòu)娜龡l獨(dú)立存活曲線中得出的在固定濃度的抑制劑存在下每個(gè)使細(xì)胞存活率降為10％的TM的濃度而來(lái)的。
單獨(dú)使用TM的IC50和LD50值分別為361±25微摩爾/升和251±13微摩爾/升，發(fā)現(xiàn)了細(xì)胞生長(zhǎng)抑制效應(yīng)和細(xì)胞毒性效應(yīng)間的相關(guān)性，而無(wú)論暴露時(shí)間長(zhǎng)短(生長(zhǎng)抑制48小時(shí)和細(xì)胞毒性16小時(shí))。在培養(yǎng)物中，TM的半衰期為約40分鐘，所以在每一實(shí)驗(yàn)的極短的暴露時(shí)間前它都將充分地發(fā)揮作用。所有的化合物均對(duì)TM的細(xì)胞毒性有增強(qiáng)效應(yīng)，但NU1025化合物卻在比3AB和BZ低得多的濃度下表現(xiàn)出了相同的DEF10值。比如，50微摩爾/升的NU1025化合物和5mM的3AB的DEF10值都約為4。NU1025化合物對(duì)細(xì)胞毒性的最大增強(qiáng)效果達(dá)到0.7％。還發(fā)現(xiàn)3AB和NU1025化合物均阻斷這種修復(fù)作用。
本發(fā)明還研究了單獨(dú)抑制PARP活性的化合物的細(xì)胞毒性效應(yīng)。在一組實(shí)驗(yàn)中將L1210細(xì)胞置于待測(cè)化合物中24小時(shí)，測(cè)得的LD50分別為14±1.0mM(3AB)；6.0±1.5mM(BZ)和1.6±0.1mM(Nu1025化合物)。它們的LD50值比IC50值差＜3倍，但作為PARP抑制劑的效力來(lái)說(shuō)卻維持在相同的水準(zhǔn)。與生長(zhǎng)抑制實(shí)驗(yàn)的數(shù)據(jù)相一致，促使TM達(dá)到最大細(xì)胞毒性效應(yīng)所需的Nu1025的濃度與其自身產(chǎn)生細(xì)胞毒性所需的濃度之間的差別＞10倍以上。
在有關(guān)DNA斷裂測(cè)定實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)經(jīng)過(guò)TM處理一小時(shí)引起了洗脫率的濃度依賴性增長(zhǎng)，這為DNA鏈的斷裂程度提供了一個(gè)量度。在TM濃度水平低到的150微摩爾/升的程度時(shí)，DNA鏈的斷裂水平依然能檢測(cè)到該濃度，使存活率降低了30％。檢定了所有化合物在單獨(dú)使用的情況下致DNA鏈斷裂的能力。用1mM的NU1025化合物和2mM3AB或BZ經(jīng)過(guò)24小時(shí)培養(yǎng)，與未被處理的細(xì)胞相比，對(duì)DNA鏈斷裂水平?jīng)]有顯著的作用，然而，用固定濃度的TM(150微摩爾/升)和遞增濃度的所有待測(cè)PARP抑制劑保溫1小時(shí)處理樣品的洗脫率(鏈斷裂程度)要比單獨(dú)使用TM處理的樣品有逐步增長(zhǎng)。
用繪圖參數(shù)值概括上述三個(gè)代表性的化合物的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，這個(gè)參數(shù)跟鏈斷裂程度和抑制劑濃度相關(guān)。對(duì)所有的化合物來(lái)說(shuō)，鏈斷裂的增長(zhǎng)和濃度的增長(zhǎng)線性相關(guān)，但該值在NU1025化合物濃度為100微摩爾/升時(shí)開(kāi)始顯著性增長(zhǎng)，而對(duì)于BZ和3AB該值卻分別需要在3mM和5mM時(shí)方才出現(xiàn)顯著性增長(zhǎng)。而且，這些化合物在DNA鏈斷裂測(cè)定中的水平和效價(jià)證明跟體外實(shí)驗(yàn)中的PARP抑制效價(jià)呈極好的相關(guān)性。
總而言之，進(jìn)行的研究工作表明本發(fā)明化合物的PARP抑制特性反映了這些化合物能促進(jìn)某些細(xì)胞毒性抗腫瘤藥劑和放療中使用的射線等DNA損傷劑的細(xì)胞毒性的能力。相應(yīng)地，這些化合物特別適于與這些細(xì)胞毒性藥物或放療聯(lián)合使用，并促進(jìn)它們?cè)谌缜笆龅尼t(yī)學(xué)治療中的效果。
總結(jié)固然，從總體上看本發(fā)明應(yīng)看作是包括每一個(gè)新穎性的特征或者說(shuō)是在本文中描述的特征的結(jié)合體，但從廣義的但并非排它的角度來(lái)說(shuō)本發(fā)明的主要方面包括(i)這里定義的新的式(I)，(II)或者(IV)的化合物；(ii)如前述的帶有取代基的式(I)，(II)或(IV)的化合物(包括它們的鹽)作為治療或用于醫(yī)學(xué)和醫(yī)藥制劑生產(chǎn)中的用途，比如作為PARP抑制劑與細(xì)胞毒性藥物或放療聯(lián)合使用增強(qiáng)后者在腫瘤治療中的效果；(iii)這里所定義的新的式(I)，(II)或(IV)的化合物的制備方法，包括在這些過(guò)程中產(chǎn)生的所有的新中間體化合物；(iv)包括這里所定義的式(I)，(II)或者(IV)的化合物以及藥用載體的藥物制劑；(v)一個(gè)如(iv)所述的藥物制劑的制備過(guò)程，比如這里所涉及的方法；(vi)如這里所公開(kāi)的可能代表式(iv)的分子重排化合物的式(II)的喹唑啉酮化合物作為治療或者應(yīng)用于醫(yī)學(xué)或醫(yī)藥制劑生產(chǎn)中的用途，比如作為PARP抑制劑與細(xì)胞毒性藥物或放療聯(lián)合使用來(lái)提高后者在腫瘤治療中的效果，并且藥物中包括所說(shuō)的喹唑啉酮化合物。
表I
表II
表III
表III(續(xù))
表III(續(xù))
表III(續(xù))
表III(續(xù))
表III(續(xù))
表III(續(xù))
表III(續(xù))
權(quán)利要求
1.一種化合物，其選自(A)具有通用結(jié)構(gòu)式I的3-取代苯甲酰胺化合物 或其藥學(xué)上可接受的鹽，以及(B)具有通用結(jié)構(gòu)式II的喹唑啉酮化合物 或其藥學(xué)上可接受的鹽。其特征在于在結(jié)構(gòu)式I中(i)Y為氫，并且X為-CH2-Z其中Z代表烷基、可選擇性取代的芳烷基、-CH＝CHR(其中R為H、烷基或選擇性取代的苯基基團(tuán))、環(huán)己基、或具有結(jié)構(gòu)式III的基團(tuán) 其中R1為選自H、烷氧基、NO2、N3、NH2、NHCOR3(R3為烷基或芳基)、CO2R4(R4為H或烷基)、烷基、羥基烷基、CW3或W(W為鹵素)、以及CN，并且其中R2為H，或者其中R1和R2一起代表與相鄰環(huán)的C橋連的-O-CHR5-O-基團(tuán)，而R5為H、烷基或選擇性取代的芳烷基或芳基；(ii)Y為氫，并且X為-(CH2)n-Z其中n在5至12的范圍內(nèi)，并且Z為鹵素或嘌呤-9-基基團(tuán)；(iii)Y和X一起形成橋-Y-X-，其代表基團(tuán) 或- 或 其中R5如上所述，并且在結(jié)構(gòu)式II中X′代表羥基、烷基、烷基基或選擇性取代的芳基(例如苯基)或芳烷基(例如苯甲基)基團(tuán)。并且Y′代表氫、烷基或選擇性取代的芳基(例如苯基)或芳烷基(例如苯甲基)基團(tuán)。
2.如權(quán)利要求1中所要求的化合物，其中烷基或每個(gè)烷基基團(tuán)，作為基團(tuán)或者作為烷氧基或其它基團(tuán)的一部分，當(dāng)化合物具有結(jié)構(gòu)式I時(shí)在基團(tuán)Z和/或基團(tuán)R5中，或者當(dāng)化合物形成結(jié)構(gòu)式II時(shí)在基團(tuán)X′和Y′中，烷基或每個(gè)烷基基團(tuán)含有1-6個(gè)碳原子。
3.如權(quán)利要求1中所要求的化合物，它是具有結(jié)構(gòu)式IV的苯噁唑-4-羧酰胺化合物
4.如權(quán)利要求3中所要求的化合物，其中R5為選自烷自烷基、苯基、萘基和吡啶基。
5.如權(quán)利要求3中所要求的化合物，其中R5為C1-6烷基基團(tuán)。
6.如權(quán)利要求3中所要求的化合物，它是下面的化合物中的一個(gè)(a)2-甲基苯并噁唑-4-羧酰胺；(b)2-叔丁基苯異噁唑-4-羧酰胺；(c)2-苯基苯并噁唑-4-羧酰胺；(d)2-(4-甲氧基苯基)苯并噁唑-4-羧酰胺；或者是上述化合物(a)至(d)中任-個(gè)的藥學(xué)上可接受的鹽。
7.如權(quán)利要求1或2所要求的具有通式I的化合物，其中X為苯甲基或取代的苯甲基基團(tuán)。
8.如權(quán)利要求1或2所要求的具有通式I的化合物，其中X為具有選自2-NO2、4-CH3、4-CO2H、4-CO2CH3、4-CONH2、4-CN、4-CH2OH和4-NHCOPh的取代基的苯甲基基團(tuán)。
9.如權(quán)利要求1中所要求的化合物，它是下面的化合物中的-個(gè)(a)3-芐氧基苯甲酰胺，(b)3-(4-甲氧基芐氧基)苯甲酰胺，(c)3-(4-硝基芐氧基)苯甲酰胺，(d)3-(4-疊氮基芐氧基)苯甲酰胺，(e)3-(4-溴代芐氧基)苯甲酰胺，(f)3-(4-氟代芐氧基)苯甲酰胺，(g)3-(4-氨代芐氧基)苯甲酰胺，(h)3-(3-硝基芐氧基)苯甲酰胺，(i)3-(3，4-亞甲基二氧代苯基甲基氧基)苯甲酰胺或3-(胡椒基氧代)苯甲酰胺，(j)3-(N-乙酰基-4-氨基芐氧基)苯甲酰胺，(k)3-(4-三氟甲基芐氧基)苯甲酰胺，(l)3-(4-氰基芐氧基)苯甲酰胺，(m)3-(4-羧基甲基芐氧基)苯甲酰胺，(n)3-(2-硝基芐氧基)苯甲酰胺，(o)3-(4-羧基芐氧基)苯甲酰胺?；蛘呤巧鲜龌衔?a)至(o)中任-個(gè)的藥學(xué)上可接受的鹽。
10.如權(quán)利要求1中要求的化合物，它是下面的化合物中的-個(gè)(a)3-(5-溴代戊氧基)苯甲酰胺，(b)3-(8-腺苷-9-基辛氧基)苯甲酰胺，(c)3-〔5-(6-氯代嘌呤-9-基)戊氧基〕苯甲酰胺，(d)3-(5-腺苷-9-基戊氧基)苯甲酰胺，(e)3-〔8-(6-氯代嘌呤-9-基)辛氧基〕苯甲酰胺，(f)3-〔12-(6-氯代嘌呤-9-基)十二烷氧基〕苯甲酰胺，(g)3-(12-腺苷-9-基十二烷氧基)苯甲酰胺?；蛘呤巧鲜龌衔?a)至(g)中任一個(gè)的藥學(xué)上可接受的鹽。
11.如權(quán)利要求1中所要求的化合物，其為3-烯丙基-氧基苯甲酰胺、3-肉桂基氧基苯甲酰胺，或其藥學(xué)上可接受的鹽。
12.如權(quán)利要求1中所要求的化合物，它是下面的化合物的-個(gè)(a)3-丁氧基苯甲酰胺，(b)3-戊氧基苯甲酰胺，(c)3-己氧基苯甲酰胺，(d)3-庚氧基苯甲酰胺，(e)3-辛氧基苯甲酰胺，或者其藥學(xué)上可接受的鹽。
13.如權(quán)利要求1或2中所要求的化合物，它是具有通用結(jié)構(gòu)式II的喹唑啉酮化合物，其中Y′為苯基或具有選自-NO2、-NH2、-OH或烷基的取代基的苯基基團(tuán)。
14.如權(quán)利要求13中所要求的化合物，其中X′為羥基。
15.如權(quán)利要求1或2中所要求的化合物，它是具有通用結(jié)構(gòu)式II的喹唑啉酮化合物，其中X′為羥基而Y′為烷基。
16.如權(quán)利要求13至15中任意一項(xiàng)要求的化合物，它是通過(guò)苯并噁唑-4-羧酰胺化合物的分子重排生產(chǎn)的。
17.通過(guò)權(quán)利要求3中要求的化合物苯并噁唑-4-羧酰胺的分子重排生產(chǎn)的喹唑酮衍生物。
18.如權(quán)利要求1中要求的喹唑啉酮化合物，它是選自下列化合物中的一個(gè)(a)8-羥基-2-甲基喹唑啉-4-〔3H〕酮；(b)8-羥基喹唑啉-4-〔3H〕酮；(c)8-羥基-2-(4-硝基苯基)-喹唑啉-4-酮；(d)8-甲氧基-2-甲基喹唑啉-4-〔3H〕-酮；(e)8-甲氧基-2-苯基喹唑啉-4-〔3H〕-酮；(f)8-羥基-2-苯基喹唑啉-4〔3H〕-酮；(g)2，8-二甲基喹唑啉-4-〔3H〕-酮。
19.一種制備如權(quán)利要求1中所要求的化合物的方法，該方法包括在堿催化反應(yīng)條件下將3-羥基苯甲酰胺化合物與烷基化劑進(jìn)行反應(yīng)的步驟。
20.權(quán)利要求1至18中任意一項(xiàng)中所要求的化合物其作為活性的PARP-抑制物質(zhì)的治療中的應(yīng)用。
21.一種含有權(quán)利要求20中所要求的化合物的單位劑型的藥物制劑或組合物，它是為了給予需要PARP-抑制劑治療的哺乳動(dòng)物。
22.一種用于醫(yī)藥用途的藥物制劑或組合物，其含有有效PARP-抑制量的如權(quán)利要求1至18中任意一項(xiàng)所要求的化合物。
23.如權(quán)利要求21或22中所要求的藥物制劑或組合物，其在抗腫瘤治療中與細(xì)胞毒藥物結(jié)合使用。
24.如權(quán)利要求1至18的任意一項(xiàng)中所要求的化合物生產(chǎn)醫(yī)藥或獸醫(yī)用制劑的用途，用于抑制PARP活性并促進(jìn)與之結(jié)合使用的細(xì)胞毒藥物或放射治療的細(xì)胞毒性效果，從而治療哺乳動(dòng)物中的腫瘤。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一類(lèi)3-氧基苯甲酰胺化合物(I)以及相關(guān)的喹唑啉酮化合物(II)，其可以作為強(qiáng)力的DNA修復(fù)酶多聚(ADP-核糖)聚合酶或PARP酶(EC2.4.2.30)的抑制劑，并且因此其可提供有用的治療化合物，用于與DNA-損傷細(xì)胞毒藥物或放射治療結(jié)合使用以增強(qiáng)后者的效果。公開(kāi)的化合物包括3-芐氧基苯甲酰胺、3-氧基苯甲酰胺，其中5個(gè)或更多的亞甲基基團(tuán)的鏈終止于鹵素原子或嘌呤-9-基基團(tuán)、某些苯并噁唑-4-羧酰胺化合物以及某些喹唑啉酮化合物。在式(I)中X和Y可一起形成橋-X-Y-來(lái)代表(a)、(b)或(c)，其中R
文檔編號(hào)A61K31/505GK1143358SQ9519201
公開(kāi)日1997年2月19日 申請(qǐng)日期1995年3月9日 優(yōu)先權(quán)日1994年3月9日
發(fā)明者R·J·格里菲, A·H·卡拉爾特, N·J·庫(kù)爾蒂, D·R·紐維爾, B·T·高爾丁 申請(qǐng)人:鈕卡斯?fàn)柎髮W(xué)風(fēng)險(xiǎn)投資有限公司