專利名稱：殺體內(nèi)寄生蟲組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及吡喹酮和依西太爾用于增強在殺體內(nèi)寄生蟲(endoparasiticidal)組合物中環(huán)縮肽類(depsipeptides)的殺體內(nèi)寄生蟲的活性之用途。
吡喹酮，即2-(環(huán)己基羰基)-1，2，3，6，7，11b-六氫-4H-吡嗪并[2，1-a]異喹啉-4-酮及其抗體內(nèi)寄生蟲活性被公開在英國專利1441554中。
依西太爾，即2-(環(huán)己基羰基)-2，3，6，7，8，12b-六氫吡嗪并[2，1-a][2]-苯并氮雜-4(1H)-酮及其抗體內(nèi)寄生蟲活性被公開在EP-OS[歐洲公開說明書]134984，EP-OS[歐洲公開說明書]185012中。
環(huán)縮肽PF1022及其抗體內(nèi)寄生蟲活性被公開在EP-OS[歐洲公開說明書]382173中。
其他環(huán)縮肽類及其殺體內(nèi)寄生蟲活性是未先公開的專利申請(德國專利申請P4317432.9；P4317457.4P4317458.2)的研究主題。
本發(fā)明涉及吡喹酮和依西太爾用于增強由氨基酸和羥基羧酸作為環(huán)組成部分所組成的并具有6至30個環(huán)原子的環(huán)縮肽類的殺體內(nèi)寄生蟲活性地用途。
本發(fā)明進一步涉及含有吡喹酮和依西太爾以及由氨基酸和羥基羧酸作為環(huán)組成部分所組成的并具有6至30個環(huán)原子的環(huán)縮肽類的殺體內(nèi)寄生蟲組合物。
本發(fā)明進一步涉及吡喹酮和依西太爾以及由氨基酸和羥基羧酸作為環(huán)組成部分所組成的并具有6至30個環(huán)原子的環(huán)縮肽類用于制備殺體內(nèi)寄生蟲組合物的用途。
優(yōu)選的環(huán)縮肽類是具有18至24個環(huán)原子的環(huán)縮肽類。
具有18個環(huán)原子的縮肽類包括通式(I)化合物及其旋光異構(gòu)體和外消旋體，
其中
R1、R3和R5彼此獨立地代表氫、具有最多至8個碳原子的直鏈或支鏈烷基、羥基烷基、鏈烷酰氧基烷基、烷氧基烷基、芳氧基烷基、巰基烷基、烷硫基烷基、烷基亞硫?；榛⑼榛酋；榛Ⅳ然榛?、烷氧羰基烷基、芳基烷氧羰基烷基、氨基甲?；榛?、氨基烷基、烷基氨基烷基、二烷基氨基烷基、可被一個或兩個芐氧羰基或被一個、兩個、三個或四個烷基任意取代的胍基烷基、烷氧羰基氨基烷基、9-芴基甲氧羰基(Fmoc)氨基烷基、鏈烯基、環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基和任意取代的芳烷基，可以提及的取代基是鹵素、羥基、烷基和烷氧基；
R2、R4和R6彼此獨立地代表氫、具有最多至8個碳原子的直鏈或支鏈烷基、羥基烷基、巰基烷基、鏈烷酰氧基烷基、烷氧基烷基、芳氧基烷基、烷硫基烷基、烷基亞硫酰基烷基、烷基磺酰基烷基、羧基烷基、烷氧羰基烷基、芳基烷氧羰基烷基、氨基甲酰基烷基、氨基烷基、烷基氨基烷基、二烷基氨基烷基、烷氧羰基氨基烷基、鏈烯基、環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、任意取代的芳基或芳烷基，可以提及的取代基是鹵素、羥基、烷基和烷氧基。
優(yōu)選的式(I)化合物是下式化合物及其旋光異構(gòu)體和外消旋體，
其中
R1、R3和R5彼此獨立地代表直鏈或支鏈的C1-C8烷基，特別是甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、異戊基、仲戊基、己基、異己基、仲己基、庚基、異庚基、仲庚基、叔庚基、辛基、異辛基、仲辛基，羥基-C1-C6烷基，特別是羥甲基、1-羥基乙基、C1-C4鏈烷酰氧基-C1-C6烷基，特別是乙酰氧基甲基、1-乙酰氧基乙基，C1-C4烷氧基-C1-C6烷基，特別是甲氧基甲基、1-甲氧基乙基，芳基-C1-C4-烷氧基-C1-C6烷基，特別是芐氧基甲基、1-芐氧基乙基，巰基-C1-C6烷基，特別是巰基甲基，C1-C4烷硫基-C1-C6烷基，特別是甲硫基乙基，C1-C4烷基亞硫酰基-C1-C6烷基，特別是甲基亞硫?；一?，C1-C4烷基磺?；?C1-C5烷基，特別是甲磺?；一?，羧基-C1-C6烷基，特別是羧甲基、羧乙基，C1-C4烷氧羰基-C1-C6烷基，特別是甲氧羰基甲基、乙氧羰基乙基，C1-C4芳基烷氧羰基-C1-C6烷基，特別是芐氧羰基甲基，氨基甲?；?C1-C6烷基，特別是氨基甲?；谆?、氨基甲酰基乙基，氨基C1-C6烷基，特別是氨基丙基、氨基丁基，C1-C4烷氨基-C1-C6烷基，特別是甲氨基丙基、甲氨基丁基，C1-C4二烷基氨基-C1-C6烷基，特別是二甲基氨基丙基、二甲基氨基丁基，胍基-C1-C6烷基，特別是胍基丙基，C1-C4烷氧羰基氨基-C1-C6烷基，特別是叔丁氧羰基氨基丙基、叔丁氧羰基氨基丁基，9-芴基甲氧羰基(Fmoc)氨基-C1-C6烷基，特別是9-芴基甲氧羰基(Fmoc)氨基丙基、9-芴基甲氧羰基(Fmoc)氨基丁基，C2-C8鏈烯基，特別是乙烯基、烯丙基、丁烯基，C3-C7環(huán)烷基，特別是環(huán)戊基、環(huán)己基、環(huán)庚基，C3-C7環(huán)烷基-C1-C4烷基，特別是環(huán)戊基甲基、環(huán)己基甲基、環(huán)庚基甲基，可以被選自鹵素(特別是氟、氯、溴或碘)、羥基、C1-C4烷氧基(特別是甲氧基或乙氧基)或C1-C4烷基(特別是甲基)的基團任意取代的苯基-C1-C4烷基，特別是苯甲基，
R2、R4和R6彼此獨立地代表直鏈或支鏈C1-C8烷基，特別是甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、異戊基、仲戊基、己基、異己基、仲己基、庚基、異庚基、仲庚基、叔庚基、辛基、異辛基、仲辛基，羥基-C1-C6烷基，特別是羥甲基、1-羥基乙基、C1-C4鏈烷酰氧基-C1-C6烷基，特別是乙酰氧基甲基、1-乙酰氧基乙基，C1-C4烷氧基-C1-C6烷基，特別是甲氧基甲基、1-甲氧基乙基，芳基-C1-C4-烷氧基-C1-C6烷基，特別是芐氧基甲基、1-芐氧基乙基，巰基-C1-C6烷基，特別是巰基甲基，C1-C4烷硫基-C1-C6烷基，特別是甲硫基乙基，C1-C4烷基亞硫酰基-C1-C6烷基，特別是甲基亞硫?；一?，C1-C4烷基磺酰基-C1-C6烷基，特別是甲磺酰基乙基，羧基-C1-C6烷基，特別是羧甲基、羧乙基，C1-C4烷氧羰基-C1-C6烷基，特別是甲氧羰基甲基、乙氧羰基乙基，C1-C4芳基烷氧羰基-C1-C6烷基，特別是芐氧羰基甲基，氨基甲酰基-C1-C6烷基，特別是氨基甲酰基甲基、氨基甲?；一?，氨基-C1-C6烷基，特別是氨基丙基、氨基丁基，C1-C4-烷氨基-C1-C6烷基，特別是甲氨基丙基、甲氨基丁基，C1-C4二烷基氨基-C1-C6烷基，特別是二甲基氨基丙基、二甲基氨基丁基，C2-C8鏈烯基，特別是乙烯基、烯丙基、丁烯基，C3-C7環(huán)烷基，特別是環(huán)戊基、環(huán)己基、環(huán)庚基，C3-C7環(huán)烷基-C1-C4烷基，特別是環(huán)戊基甲基、環(huán)己基甲基、環(huán)庚基甲基，可被選自鹵素(特別是氟、氯、溴或碘)、羥基、C1-C4烷氧基(特別是甲氧基或乙氧基)或C1-C4烷基(特別是甲基)的基團任意取代的苯基，苯基-C1-C4烷基，特別是苯甲基。
特別優(yōu)選的式(I)化合物是下列式(I)化合物及其旋光異構(gòu)體和外消旋體，其中
R1、R3和R5彼此獨立地是直鏈或支鏈的C1-C8烷基，特別是甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、仲丁基、戊基、異戊基、仲戊基、己基、異己基、仲己基、庚基、異庚基、仲庚基、辛基、異辛基、仲辛基，羥基-C1-C6烷基，特別是羥甲基、1-羥基乙基、C1-C4鏈烷酰氧基-C1-C6烷基，特別是乙酰氧基甲基、1-乙酰氧基乙基，C1-C4烷氧基-C1-C6烷基，特別是甲氧基甲基、1-甲氧基乙基，芳基-C1-C4-烷氧基-C1-C6烷基，特別是芐氧基甲基、1-芐氧基乙基，C1-C4-烷氧羰基氨基-C1-C6烷基，特別是叔丁氧羰基氨基丙基，叔丁氧羰基氨基丁基，C2-C8鏈烯基，特別是乙烯基、烯丙基，C3-C7環(huán)烷基，特別是環(huán)戊基、環(huán)己基、環(huán)庚基，C3-C7-環(huán)烷基-C1-C4烷基，特別是環(huán)戊基甲基、環(huán)己基甲基、環(huán)庚基甲基，可被一個或多個相同或不同的上述基團任意取代的苯基-C1-C4烷基，特別是苯甲基；
R2、R4和R6彼此獨立地是直鏈或支鏈C1-C8烷基，特別是甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、異戊基、仲戊基、己基、異己基、仲己基、庚基、異庚基、仲庚基、叔庚基、辛基、異辛基、仲辛基，羥基-C1-C6烷基，特別是羥甲基、芳基-C1-C4-烷氧基-C1-C6烷基，特別是芐氧基甲基、1-芐氧基乙基，羧基-C1-C6烷基，特別是羧甲基、羧乙基，C1-C4烷氧羰基-C1-C6烷基，特別是甲氧羰基甲基、乙氧羰基乙基，C1-C4芳基烷氧羰基-C1-C6烷基，特別是芐氧羰基甲基，C1-C4烷基氨基-C1-C6烷基，特別是甲氨基丙基、甲氨基丁基，C1-C4二烷基氨基-C1-C6烷基，特別是二甲基氨基丙基、二甲基氨基丁基，C2-C8鏈烯基，特別是乙烯基、烯丙基、丁烯基、C3-C7環(huán)烷基，特別是環(huán)戊基、環(huán)己基、環(huán)庚基，C3-C7環(huán)烷基-C1-C4烷基，特別是環(huán)戊基甲基、環(huán)己基甲基、環(huán)庚基甲基，可被一個或多個相同或不同的上述基團任意取代的苯基、苯基-C1-C4烷基，特別是苯甲基。
非常優(yōu)選的式(I)化合物是下列式(I)化合物及其旋光異構(gòu)體和外消旋體，其中
R1、R3和R5彼此獨立地是直鏈或支鏈的C1-C8烷基，特別是甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、仲丁基、戊基、異戊基、仲戊基、己基、異己基、仲己基、庚基、異庚基、仲庚基、辛基、異辛基、仲辛基，C2-C8鏈烯基，特別是烯丙基，C3-C7環(huán)烷基-C1-C4烷基，特別是環(huán)己基甲基，苯基-C1-C4烷基，特別是苯甲基，
R2、R4和R6彼此獨立地是直鏈或支鏈的C1-C8烷基，特別是甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、仲丁基、戊基、異戊基、仲戊基、己基、異己基、仲己基、庚基、異庚基、仲庚基、辛基、異辛基、仲辛基，C2-C8鏈烯基，特別是乙烯基、烯丙基，C3-C7環(huán)烷基-C1-C4烷基，特別是環(huán)己基甲基，可被一個或多個相同或不同的上述基團任意取代的苯基-C1-C4烷基，特別是苯甲基。
在本發(fā)明意義上可以使用以旋光立體異構(gòu)形式或以外消旋混合物形式存在的通式(I)的所有化合物。然而，本發(fā)明優(yōu)選使用旋光立體異構(gòu)形式的通式(I)化合物。
可以個別例舉下列通式(I)化合物，其中基團R1至R6具有下面給出的定義
Me＝甲基Phe＝苯基。
可提到的另一縮肽是化合物PF1022，它被公開在EP-OS[歐洲公開說明書]382173中并具有下式
可提到的其它縮肽類是PCT申請WO93/19053中公開的化合物。
可特別提到的PCT申請WO93/19053的化合物是下式化合物
其中，Z代表N-嗎啉基、硝基、氨基、-或二甲氨基。
另外可提到的化合物是下式化合物
其中，R1、R2、R3和R4彼此獨立地代表氫、C1-C10烷基或芳基，特別是苯基，每個基團被羥基、C1-C10烷氫基或鹵素任意取代。
某些通式(I)化合物是已知的或者可以通過文獻中所述的方法制得(通過分離，參見例如R.Zocher等人，J.Antibiotics 45(1992)pp.1273-1277[恩鐮孢菌素A、B和C]；Hiroshi Tomoda等人，J.Antibiotics 45(1992)pp.1207-1215[恩鐮孢菌素A、A1、B、B1、D、E和F]；通過合成，參見例如P.Quitt等人，Helv.Chimica Acta 46(1963)pp.1715-1720；P.Quitt等人，Helv.Chimica Acta 47(1964)pp.166-173[恩鐮孢菌素A]；Pl.A.Plattner等人，Helv.Chimica Acta 46(1963)pp.927-935[恩鐮孢菌素B]；Yu.A.Ovchinnikov等人，Tetrahedron Lett.2(1971)pp.159-162；R.W.Roeske等人，Biochem.Biophys.Res.Commun.57(1974)pp.554-561[白僵菌素]；Yu.A.Ovchinnikov等人，Zh.Obshch.Khim.42(10)(1972)pp.2320-2334；參見C.A.78.5877K)。
式(I)化合物可以通過U.Schmidt等人用于大環(huán)肽生物堿的方法合成(參見例如U.Schmidt等人，Synthesis(1991)pp.294-300[didemnin A、B和C]；Angew.Chem.96(1984)pp.723-724[dolastatin 3]；Angew.Chem.102(1990)pp.562-563[fenestin A]；Angew.Chem.97(1985)pp.606-607[ulicyclamid]；J.Org.Chem.47(1982)pp.3261-3264)。
式(I)化合物的制備可如下進行
a)在氫化催化劑存在下，在堿性反應(yīng)助劑及稀釋劑的存在下，使通式(II-a)的羧基活化的開鏈六縮肽類進行環(huán)化反應(yīng)，
(II-a)
其中
A代表氨基保護基團，相對于活性酯保護基例如芐基或芐氧羰基而言它可被選擇性除去，和
R1、R2、R3、R4、R5、和R6具有上述意義，或
b)在偶合劑的存在下，在堿性反應(yīng)助劑及稀釋劑的存在下，使通式(II-b)的開鏈六縮肽類進行環(huán)化反應(yīng)，
其中
A、R1、R2、R3、R4、R5、和R6具有上述意義。
在用于制備新的環(huán)六縮肽類(恩鐮孢菌素)(I)的方法a)中，如果將N-芐氧羰基-N-甲基-L-異亮氨?；?D-乳?；?N-甲基-L-異亮氨酰基-D-乳?；?N-甲基-L-異亮氨?；?D-乳酸五氟苯基酯用作式(II)化合物，則可以通過下列方程式表示該方法
H2，10％ Pd-C，4-吡咯烷子基(pyrrolidino)吡啶(催化劑)二噁烷，
乙醇，95℃
式(II)提供了作為進行方法a之起始物質(zhì)所需的開鏈六縮肽類的羧基活化衍生物的一般性定義。在此式中，A和R1至R6優(yōu)選代表關(guān)于本發(fā)明式(I)化合物的描述中作為優(yōu)選取代基已被提到的那些基團。
用作起始原料的式(II-a)的羧基活化的五氟苯基酯類可以通過文獻已知的方法制得(參見L.Kisfaludy等人，J.Org.Chem.35(1970)，p.3563；L.Kisfaludy等人，J.Org.Chem.44(1979)，pp.654-655)。其制備進一步描述如下。
可以逐一例舉下列通式(IIa)化合物，其中基團A和R1至R6具有下面給出的定義
(IIa)Bn-CH2-苯基Z-CO-O-CH2-苯基；Me＝甲基；Phe＝苯基。
式(II)化合物的環(huán)化反應(yīng)優(yōu)選在適當?shù)臍浠呋瘎┖蛪A性反應(yīng)助劑存在下使用稀釋劑來進行。
適用于進行方法a的催化劑是所有常規(guī)氫化催化劑。優(yōu)選使用貴金屬催化劑，例如鉑、氧化鉑、鈀或釕，如果需要將其載于適宜的載體上，例如碳或二氧化硅上。
可以使用的堿性反應(yīng)助劑是所有適宜的酸結(jié)合劑，如胺，特別是叔胺，和堿金屬化合物及堿土金屬化合物。
可提及的實例有鋰、鈉、鉀、鎂、鈣和鋇的氫氧化物、氧化物及碳酸鹽。此外還有其他堿性化合物，如三乙胺、三甲胺、三芐胺、三異丙胺、三丁胺、三芐胺、三環(huán)己胺、三戊胺、三己胺、N，N-二甲基苯胺、N，N-二甲基甲苯胺、N，N-二甲基對氨基吡啶、N-甲基吡咯烷、N-甲基哌啶、N-甲基咪唑、N-甲基吡咯、N-甲基嗎啉、N-甲基六亞甲基亞胺、吡啶、4-吡咯烷子基(pyrrolidino)吡啶、4-二甲氨基吡啶、喹啉、α-甲基吡啶、β-甲基吡啶、異喹啉、嘧啶、吖啶、N，N，N′，N′-四亞甲基二胺、N，N，N′，N′-四亞乙基二胺、喹喔啉、N-丙基二異丙胺、N-乙基二異丙胺、N，N′-二甲基環(huán)己胺、2，6-二甲基吡啶、2，4-二甲基吡啶、三亞乙基二胺、二氮雜雙環(huán)辛胺(DABCO)、二氮雜雙環(huán)壬烯(DBN)或二氮雜雙環(huán)十一碳烯(DBU)。
優(yōu)選使用雜芳香物質(zhì)，例如，吡啶、N-甲基咪唑或4-吡咯烷子基吡啶。
用于進行方法a的適宜的稀釋劑是所有惰性有機溶劑。
可提及的實例的鹵代烴類，特別是氯代烴類，如四氯乙烯、四氯乙烷、二氯丙烷、二氯甲烷、二氯丁烷、氯仿、四氯化碳、三氯乙烷、三氯乙烯、五氯乙烷、二氟苯、1，2-二氯乙烷、氯苯、二氯苯、氯代甲苯、三氯苯；醇類，如甲醇、乙醇、異丙醇和丁醇；醚類，如乙基丙基醚、甲基叔丁基醚、正丁基醚、二正丁基醚、二異丁基醚、二異戊基醚、二異丙基醚、苯甲醚、苯乙醚、環(huán)己基甲基醚、乙醚、乙二醇二甲醚、四氫呋喃、二噁烷和二氯二乙基醚；硝基烴類，如硝基甲烷、硝基乙烷、硝基苯、氯代硝基苯和鄰硝基甲苯；腈類，如乙腈、丁腈、異丁腈、芐腈和間氯芐腈；脂族、環(huán)脂族或芳香烴類，如庚烷、己烷、壬烷、甲基·異丙基苯、沸點在70℃至190℃的汽油餾分、環(huán)己烷、甲基環(huán)己烷、石油醚、輕石油、辛烷、苯、甲苯和二甲苯；酯類，如乙酸乙酯和乙酸異丁基酯；酰胺類，例如甲酰胺、N-甲基甲酰胺、N，N-二甲基甲酰胺和N-甲基吡咯烷酮；酮類，如丙酮和甲基乙基酮。上述溶劑和稀釋劑的混合物也是適用的。
優(yōu)選的物質(zhì)是醚類，如二噁烷，和醇與醚的混合物。
方法a是通過在氫氣存在下并在堿性反應(yīng)助劑和適當?shù)臍浠呋瘎┐嬖谙拢瑢⑹?IIa)化合物在稀釋劑中在高度稀釋條件下加熱來進行的。
反應(yīng)時間是約4至20小時。反應(yīng)在+20℃至+200℃，優(yōu)選在+70℃至+155℃的溫度下進行。該方法優(yōu)選在惰性氣體氣氛下，并在當將所述混合物加熱至所需的反應(yīng)溫度時在反應(yīng)條件下所確立的壓力下進行。
為了進行本發(fā)明方法a，將式(IIa)的N-芐氧羰基-N-甲基-L-異亮氨?；?D-乳?；?N-甲基-L-異亮氨?；?D-乳?；?N-甲基-L-異亮氨?；?D-乳酸五氟苯基酯的二噁烷溶液經(jīng)2至10小時滴加到95℃快速攪拌的等摩爾量的適當?shù)臍浠呋瘎玮Z/炭的過量二噁烷的懸浮液中，同時連續(xù)通過氫氣。作為催化劑，所述溶液通常含有0.5至2.5摩爾，優(yōu)選1.0至2.0摩爾4-吡咯烷子基吡啶和0.5至10％，優(yōu)選2至5％的醇(按溶劑計)。
除了式(IIa)的N-芐氧羰基取代的五氟苯基酯類外，還可以使用式(IIa)的N-芐基-和N-叔丁氧羰基取代的五氟苯基酯類，可以按U.Schmidt所述方法(參見例如U.Schmidt等人，Synthesis(1991)pp.294-300[didemnin A、B和C])在兩相體系中使后者環(huán)化。
當反應(yīng)完全時，使反應(yīng)混合物冷卻，將全部反應(yīng)物料真空濃縮并用有機溶劑萃取，萃取液按本身已知的方法處理。所得產(chǎn)物可按常規(guī)方式通過重結(jié)晶、真空蒸餾或柱色譜法純化。
在制備新的環(huán)六縮肽類(恩鐮孢菌素)的方法b中，如果將N-甲基-L-異亮氨?；?D-乳?；?N-甲基-L-異亮氨?；?D-乳?；?N-甲基-L-異亮氨酰基-D-乳酸用作式(IIb)化合物，則該方法可以由下列方程式表示
式(II)提供了作為進行方法b的起始物質(zhì)所需的開鏈六縮肽類的一般性定義，在此式中，R1至R6優(yōu)選代表關(guān)于本發(fā)明式(I)化合物的描述中作為優(yōu)選取代基已經(jīng)提到的那些基團。
用作起始原料的式(II)六縮肽類可以通過下面進一步所述方法制得。
可以逐一例舉下列通式(IIb)化合物，其中基團R1至R6具有下面給出的定義
Me＝甲基；Phe＝苯基
可用于進行方法b的偶合劑是適于產(chǎn)生酰胺鍵的所有試劑(參見例如Houben-Weyl，Methoden der Organischen Chemie[Methodsin Organic Chemistry]，Vol 15/2；Bodanszky等人，PeptideSynthesis 2nd ed，(Wiley & Sons，New York 1976)或Gross，Meienhofer，The PeptidesAnalysis Synthesis，biology(Academic Press，New York 1979)。優(yōu)選使用下列方法活性酯方法，用五氯苯酚(Pcp)和五氟苯酚(PfP)，N-羥基琥珀酰亞胺、N-羥基-5-降冰片烯-2，3-二羧酰胺(HONB)、1-羥基苯并三唑(HOBt)或3-羥基-4-氧代-3，4-二氫-1，2，3-苯并三嗪作為醇組分，與碳化二亞胺類如二環(huán)己基碳化二亞胺(DCC)通過DCC加成法偶合，或用N-丙烷膦酸酐(PPA)和混合酐法，使用新戊酰氯、氯甲酸乙酯(EEDQ)和氯甲酸異丁酯(IIDQ)，或與磷鎓試劑偶合，如六氟磷酸苯并三唑-1-基氧基三(二甲氨基鏻)(BOP)、雙(2-氧代-3-噁唑烷基)膦酰氯(phosphinic chloride)(BOP-Cl)，或與膦酸酯試劑偶合，如氰基膦酸二乙酯(DEPC)和二苯基磷?；B氮(DPPA)，或與脲陽離子試劑偶合，如四氟硼酸2-(1H-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲陽離子(TBTU)。
優(yōu)選與磷鎓試劑如雙(2-氧代-3-噁唑烷基)膦酰氯(phosphinic chloride)(BOP-Cl)，六氟磷酸苯并三唑-1-基氧基三(二甲氨基鏻)(BOP)的偶合，和與膦酸酯試劑如氰基膦酸二乙酯(DEPC)或二苯基磷?；B氮(DPPA)的偶合。
可用于進行方法b的堿性反應(yīng)助劑是在方法a中提到的叔胺，特別是三烷基胺，如三乙胺、N，N-二異丙基乙胺或N-甲基嗎啉。
用于進行方法b的稀釋劑是方法a中提到的鹵代烴類，特別是氯代烴類。
方法b的進行是在一種上述偶合劑存在下并在堿性反應(yīng)助劑存在下，在高度稀釋條件下將式(II)化合物在稀釋劑中混合，并攪拌混合物。反應(yīng)時間是4至72小時。反應(yīng)在-5℃至+100℃，優(yōu)選-5℃至+50℃，特別優(yōu)選在0℃至室溫下進行。該方法是在大氣壓下進行的。
為進行本發(fā)明方法b，通常每摩爾式(II)N-甲基-L-異亮氨?；?D-乳酰基-N-甲基-L-異亮氨?；?D-乳酰基-N-甲基-L-異亮氨?；?D-乳酸使用1.0至3.0摩爾，優(yōu)選1.0至1.5摩爾的偶合劑。
當反應(yīng)完全時，洗滌反應(yīng)溶液直至呈弱堿性，分出有機相，干燥并真空濃縮。所得產(chǎn)物可按常規(guī)方法通過重結(jié)晶、真空蒸餾或柱色譜法純化。
用作起始化合物的開鏈縮肽類可以通過自身已知的方法制備，例如H.-G.Lerchen和H.Kunz所述方法(Tetrahedron Lett.26(43)(1985)pp.5257-5260；28(17)(1987)PP.1873-1876)。使用由B.F.Gisin所述的酯化方法(Helv.Chim.Acta 56(1973)p.1476)。
具有24個環(huán)原子的環(huán)縮肽類包括通式(Ia)化合物及其旋光異構(gòu)體和外消旋體
其中
R1a、R2a、R11a和R12a彼此獨立地代表C1-8烷基、C1-8鹵代烷基、C3-6環(huán)烷基、芳烷基和芳基，
R3a、R5a、R7a和R9a彼此獨立地代表氫或直鏈或支鏈C1-8烷基，該烷基可被羥基、C1-4烷氧基、羧基
，羧酰胺基
、咪唑基、吲哚基、胍基、-SH或C1-4烷硫基任意取代，并且還代表芳基或芳烷基，每個基團可以被鹵素、羥基、C1-4烷基或C1-4烷氧基取代；
R4a、R6a、R8a和R10a彼此獨立地代表氫、直鏈C1-5烷基、C2-6鏈烯基、C3-7環(huán)烷基，每個基團可被羥基、C1-4烷氧基、羧基、羧酰胺基、咪唑基、吲哚基、胍基、SH或C1-4烷硫基任意取代，并且還代表芳基或芳烷基，每個基團可以被鹵素、羥基、C1-4烷基或C1-4烷氧基取代。
所使用的優(yōu)選的式(Ia)化合物是下列式(Ia)化合物，其中
R1a、R2a、R11a、和R12a彼此獨立地代表甲基、乙基、丙基、異丙基、正-、仲-、叔丁基或苯基，所述基團可被鹵素C1-4烷基、OH或C1-4烷氧基任意取代，或代表芐基或苯乙基，每個基團可以被對于苯基所給出的基團任意取代；和
R3a至R10a具有上述定義。
特別優(yōu)選的式(Ia)化合物是下列式(Ia)化合物，其中
R1a、R2a、R11a和R12a彼此獨立地代表甲基、乙基、丙基、異丙基或正-、仲-或叔丁基；
R3a、R5a、R7a和R9a代表氫、直鏈或支鏈C1-8烷基，特別是甲基、乙基、丙基、異丙基和正-、仲-或叔丁基，每個基團可以被C1-4烷氧基，特別是甲氧基、乙氧基、咪唑基、吲哚基或C1-4烷硫基，特別是甲硫基和乙硫基任意取代，此外還代表苯基、芐基或苯乙基，每個基團可以被鹵素特別是氯任意取代；和
R4a、R6a、R8a和R10a彼此獨立地代表氫、甲基、乙基、正丙基、正丁基、乙烯基或環(huán)己基，每個基團可以被甲氧基、乙氧基、咪唑基、吲哚基、甲硫基或乙硫基任意取代，還代表異丙基和仲丁基，此外還代表苯基、芐基或苯乙基，每個基團可被鹵素任意取代。
式(Ia)化合物的制備可以通過在稀釋劑和偶合劑存在下，使式(IIc)的開鏈八縮肽類進行環(huán)化反應(yīng)
其中，R1a至R12a具有上述定義。
適宜的偶合劑是適于形成酰胺鍵的所有化合物(參見，例如Houben-Weyl，Methoden der Organischen Chemie[Methods inOrganic Chemistry]，Vol.15/2；Bodanszky等人，PeptideSynthesis 2nd Ed.(Wiley/Sons，New York 1976)。
優(yōu)選適宜的是下列試劑和方法活性酯法，用五氟苯酚(Pfp)、N-羥基琥珀酰亞胺、1-羥基苯并三唑、與碳化二亞胺類如二環(huán)己基碳化二亞胺或N′-(3-二甲氨基丙基)-N-乙基碳化二亞胺(Ebc)偶合，及混合酐法，或與磷鎓試劑偶合，如六氟磷酸苯并三唑-1-基氧基三(二甲氨基鏻)(BOP)、雙(2-氧代-3-噁唑烷基)次膦酰氯(BOP-Cl)，或與膦酸酯試劑偶合，如氰基膦酸二乙酯(DEPC)和二苯基磷?；B氮(DPPA)。
特別優(yōu)選在1-羥基苯并三唑(HOBt)存在下與雙(2-氧代-3-噁唑烷基)次膦酰氯(BOP-Cl)和N′-(3-二甲氨基丙基)-N-乙基碳化二亞胺(EDC)的偶合。
反應(yīng)在0-150℃、優(yōu)選在20至100℃，特別優(yōu)選在室溫的溫度下進行。
適宜的稀釋劑是所有惰性有機溶劑。它們包括特別是脂族和芳族烴類，任意鹵代的烴類，如戊烷、己烷、庚烷、環(huán)己烷、石油醚、汽油、輕石油、苯、甲苯、二氯甲烷、氯化乙烯、氯仿、四氯化碳、氯苯和鄰二氯苯，此外還包括醚類，如乙醚、二丁醚、乙二醇二甲醚和二甘醇二甲醚、四氫呋喃和二噁烷，還包括酮類，如丙酮、甲基乙基酮、甲基異丙基酮和甲基異丁基酮，酯類，如乙酸甲酯和乙酸乙酯，腈類，如乙腈和丙腈、芐腈和戊二腈，此外還包括酰胺類，如二甲基甲酰胺、二甲基乙酰胺和N-甲基吡咯烷酮，以及二甲亞砜、四氫噻吩砜和六甲基磷酰三胺。
式(IIc)化合物與偶合劑彼此之間的用量比為1∶1至1∶1.5。優(yōu)選接近等摩爾比。
當反應(yīng)完全時，將稀釋劑蒸掉，按常規(guī)方法如色譜法純化式(Ia)化合物。
式(IIc)開鏈八縮肽類(其中各基團具有上述定義)
(IIc)是通過使式(IIIa)化合物在稀釋劑和催化劑存在下進行氫解反應(yīng)來制得的，
(IIIa)其中A代表芐基，
B代表OH，和
R1a至R12a具有上述定義。
式(IIIa)化合物(其中各基團具有上述定義)
(IIIa)是通過使式(IVa)化合物進行水解反應(yīng)制得的，
(IVa)其中各基團具有上述定義。
式(IVa)化合物及其立體異構(gòu)體是通過使式(Va)的四縮肽類和式(VIa)的四縮肽類在稀釋劑和偶合劑存在下，進行縮合反應(yīng)制得的，
其中A代表芐基，
Z代表OH，和
R1a、R2a、R3a、R4a、R5a和R10a具有上述定義，
其中D代表氫，
B代表叔丁氧基，和
R6a、R7a、R8a、R9a、R11a和R12a具有上述定義。
式(Va)四縮肽類是通過在稀釋劑和質(zhì)子酸存在下將式(VIIa)四縮肽類水解來制得的，
其中A代表芐基，
B代表叔丁氧基，和
R1a、R2a、R3a、R4a、R5a和R10a具有上述定義。
式(VIa)四縮肽類
其中D代表氫，和
B代表叔丁氧基，其余的基團具有上述定義，是通過在稀釋劑和催化劑存在下，使式(VIIa)四縮肽類經(jīng)過氫解反應(yīng)制得的，
其中A代表芐基，
B代表叔丁氧基，和
R1a、R2a、R3a、R4a、R5a和R10a具有上述定義。
式(VIIa)四縮肽類是通過使式(VIIIa)二縮肽類和式(IXa)二縮肽類，在稀釋劑中在偶合劑存在下經(jīng)過縮合反應(yīng)制得的，
其中A代表芐基，
Z代表OH，和
R1a、R3a和R10a具有上述定義，
其中D代表氫，
B代表叔丁氧基，和
R2a、R4a和R5a具有上述定義。
盡管對溫血物種具有低毒性，本發(fā)明的組合物適于殺滅存在于人和動物中的病原性體內(nèi)寄生蟲，所述動物有畜牧生產(chǎn)中飼養(yǎng)的動物和喂養(yǎng)的牲畜、喂養(yǎng)動物、動物園動物、實驗室動物、試驗動物和供玩賞的動物。在這方面，本發(fā)明組合物具有抗有害動物發(fā)育的所有階段或各個階段的活性，并且具有抗抵抗性和正常敏感性物種的活性。通過殺滅病原性體內(nèi)寄生蟲，可以減少疾病、死亡及減少處理操作(例如，在肉、奶、羊毛、皮革、蛋類、蜂蜜等的生產(chǎn)中)，從而通過使用所述活性化合物能夠更經(jīng)濟和簡便地飼養(yǎng)動物。病原性體內(nèi)寄生蟲包括絳蟲、吸蟲、線蟲和棘頭蟲(Acantocephala)，特別是
選自假葉目，例如二葉槽蟲屬、Spirometra spp.、裂頭絳蟲屬、舌屬、Bothridium spp.、Diphlogonoporus spp.。
選自圓葉目，例如中殖孔絳蟲屬、裸頭絳蟲屬、Paranoplocephalaspp.、蒙尼(絳蟲)屬、繸體絳蟲屬、繸體(絳蟲)屬、Avitellina spp.，Stilesia spp.、鳴絳蟲屬、Andyra spp.、伯特絳蟲屬、帶絳蟲屬、棘球絳蟲屬、泡尾絳蟲屬、斧鉤絳蟲屬、瑞立絳蟲屬、膜殼絳蟲屬、Echinolepis spp.、Echinocotyle spp.；兩睪絳蟲屬、復(fù)孔絳蟲屬、Joyeuxiella spp.、雙孔絳蟲屬。
選自單殖亞綱，例如，三代蟲屬、指環(huán)蟲屬、多盤吸蟲屬。
選自復(fù)殖亞綱，例如復(fù)口吸蟲屬、Posthodiplostomum spp.、血吸蟲屬、毛睪吸蟲屬、鳥畢吸蟲屬、澳裂體吸蟲屬、巨裂體吸蟲屬、彩蚴吸蟲屬、短咽吸蟲屬、棘口吸蟲屬、棘緣吸蟲屬、棘隙吸蟲屬、低頸吸蟲屬、片吸蟲屬、擬片形吸蟲屬、姜片蟲屬、環(huán)腸吸蟲屬、盲腔屬、同口屬、杯殖吸蟲屬、殖盤吸蟲屬、Gigantocotyle spp.、菲吸蟲屬、Gastrothylacus spp.、背孔吸蟲屬、Catatropis spp.、斜睪吸蟲屬、前殖吸蟲屬、雙腔吸蟲屬、闊口吸蟲屬、隱孔吸蟲屬、并殖吸蟲屬、餅吸蟲屬、鮭隱孔吸蟲屬、后睪吸蟲屬、支睪吸蟲屬、次睪吸蟲屬、異形吸蟲屬、后殖吸蟲屬。
選自嘴刺目，例如鞭蟲屬、毛細線蟲屬、Trichomosoides spp.、旋毛線蟲屬。
選自小桿亞綱目，例如Micronema spp、糞類圓線蟲屬。
選自圓線蟲科目，例如，圓線蟲屬、三齒線蟲屬、Oesophagodontusspp.、毛線線蟲屬、似六齒線蟲屬、Cylindropharynx spp.、杯線蟲屬、Cyclococercus spp.、 Cylicostephanus spp.、結(jié)節(jié)線蟲屬、Chabertiaspp.、腎線蟲屬、鉤口線蟲屬、鉤蟲屬、仰口線蟲屬。
球頭線蟲屬、比翼線蟲屬、Cyathostoma spp.、后圓線蟲屬、網(wǎng)尾線蟲屬、米勒線蟲屬、原圓肺蟲屬、新圓線蟲屬、Cystocaulusspp.、肺圓線蟲屬、Spicocaulus spp.、Elaphostrongylus spp.、Parelaphostrongylus spp.、環(huán)體線蟲屬、副環(huán)體線蟲屬、Angiostrongylusspp.、Aelurostrongylus spp.、絲蟲屬、副絲蟲屬、毛圓線蟲屬、血矛線蟲屬、Ostertagia spp.、馬歇爾線蟲屬、古柏線蟲屬、細頸線蟲屬、下圓線蟲屬、Obeliscoides spp.、裂口線蟲屬、Ollulanus spp.。
選自尖尾科目，例如尖尾線蟲屬、蟯蟲屬、栓尾線蟲屬、管狀線蟲屬、Aspiculuris spp.、異刺線蟲屬。
選自雞蛔蟲屬目，例如蛔蟲屬、弓蛔線蟲屬、弓蛔蟲屬、副蛔蟲屬、無飾線蟲屬、蛔屬。
選自旋尾目，例如顎口線蟲屬、泡翼屬、吸吮線蟲屬、筒線蟲屬、麗線蟲屬、副麗線蟲屬、德斯線蟲屬、龍線屬。
選自絲蟲科目，例如，冠絲蟲屬、副絲蟲屬、腹腔線蟲屬、非洲絲蟲的一個屬、惡絲蟲屬、光絲蟲屬、布魯線蟲屬、吳策線蟲屬、盤尾屬。
選自大棘吻科目，例如Filicollis spp.、念珠棘蟲屬、巨吻棘蟲屬、Prosthenorchis spp.。
生產(chǎn)性家畜和飼養(yǎng)動物包括哺乳動物，例如牛、馬、羊、豬、山羊、駱駝、水牛、驢、兔子、黇鹿、馴鹿、帶有毛皮的動物，例如水貂、栗鼠、浣熊；鳥類，例如雞、鵝、火雞、鴨、鴕鳥；淡水和咸水魚類，例如鱒魚、鯉魚、鰻鱺；爬行動物類；昆蟲類，例如蜜蜂和蠶。
實驗室動物和試驗動物包括小鼠、大鼠、豚鼠、金倉鼠、狗和貓。
供玩賞的動物包括狗和貓。
所述活性化合物可被預(yù)防性以及治療性給藥。
所述活性化合物的施用可以直接地或以適當?shù)闹苿┬问?，?jīng)腸、腸胃外、經(jīng)皮、經(jīng)鼻、通過環(huán)境處理、或藉助于含活性化合物的成型制品如條、板、帶、柱(collars)、耳戳、翅膀帶(limb bands)、標示器材等。
所述活性化合物可經(jīng)腸例如口服給藥，其劑型有粉劑、片劑、膠囊劑、糊劑、飲劑、粒劑，或可以口服給藥的溶液、懸浮液及乳液，或boli，加藥的飼料或飲水。施行經(jīng)皮給藥，例如以浸漬、噴霧或澆注及點撒(spotting-on)的形式。施行腸胃外給藥，例如以注射(肌內(nèi)、皮下、靜脈內(nèi)、腹膜內(nèi)注射)形式或通過移入物進行。
適當?shù)闹苿┦?br> 溶液，如注射液、口服溶液、稀釋后用于口服給藥的濃縮液、用于皮膚上或體腔內(nèi)的溶液、澆注及點撒制劑、凝膠；
口服或經(jīng)皮給藥及注射用的乳液和懸浮液；半固體制劑；
活性化合物加在乳油基中或加在水包油或油包水乳液基中的制劑
固體制劑，如粉劑、預(yù)混物(premixes)或濃縮物、粒劑、小丸劑、片劑、boli、膠囊劑；
氣霧劑和吸入劑，含活性化合物的成型制品。
注射液被靜脈內(nèi)、肌內(nèi)和皮下給藥。
注射液的制備是將活性化合物溶于適當?shù)娜軇┲?，如果需要加入添加劑，如加溶劑、酸、堿、緩沖鹽、抗氧化劑和防腐劑。將溶液無菌過濾并抽出。
作為溶劑可提及下列物質(zhì)生理學(xué)上可接受的溶劑，如水、醇類如乙醇、丁醇、芐醇、甘油、丙二醇、聚乙二醇、N-甲基吡咯烷酮，及它們的混合物。
如果需要，也可以將活性化合物溶于適于注射用的生理學(xué)上可接受的植物油或合成油中。
作為加溶劑可提及下列物質(zhì)增強活性化合物在主要溶劑中溶解的溶劑，或防止其沉淀的溶劑。實例有聚乙烯吡咯烷酮、聚氧乙烯化的蓖麻油、聚氧乙烯化的脫水山梨糖醇酯。
防腐劑有芐醇、三氯丁醇、對羥基苯甲酸酯類、正丁醇。
口服溶液直接給藥。濃縮物是事先稀釋到給藥濃度后再口服給藥的?？诜芤汉蜐饪s物按上面對注射溶液所述方法制備，即能夠在無菌條件下操作給藥。
用在皮膚上的溶液被滴加施用、刷上、擦入、噴灑上或噴霧上。這些溶液按上述注射溶液的方法制備。
在制備過程中最好加入增稠劑。增稠劑有無機增稠劑，如膨潤土、膠體二氧化硅、單硬脂酸鋁；有機增稠劑，如纖維素衍生物、聚乙烯醇類及其共聚物、丙烯酸酯類和甲基丙烯酸酯。
將凝膠施于或刷在皮膚上，或引入體腔內(nèi)。凝膠的制備是將按對注射溶液所述方法制備的溶液用一定量的增稠劑處理，以形成具有類似乳油稠度的澄清物質(zhì)。所用增稠劑是上述增稠劑。
澆注及點撒制劑被澆注或噴灑在皮膚的限定區(qū)域上，活性化合物滲透入皮膚并系統(tǒng)地起作用。
澆注和點撒制劑的制備是將活性化合物溶于、懸浮于或乳化于為皮膚所耐受的適當溶劑或溶劑混合物中。如果需要，加入其他輔助劑，如著色劑、吸收促進劑、抗氧化劑、光穩(wěn)定劑和粘合劑。
可被提到的溶劑有水、鏈烷醇類、乙二醇類、聚乙二醇類、聚丙二醇類、甘油、芳醇類如芐醇、苯乙醇、苯氧基乙醇；酯類，如乙酸乙酯、乙酸丁酯、苯甲酸芐基酯；醚類如亞烷基二醇烷基醚類，如二丙二醇單甲醚、二甘醇單丁醚；酮類，如丙酮、甲基乙基酮；芳香和/或脂族烴類，植物油或合成油，DMF，二甲基乙酰胺、N-甲基吡咯烷酮，2，2-二甲基-4-氧基亞甲基-1，3-二氧戊環(huán)。
著色劑是允許用在動物體上并可以溶解或懸浮的所有著色劑。
吸收促進劑的實例是DMSO，成膜油劑如十四烷酸異丙酯，壬酸二丙二醇酯，硅油類，脂肪酸酯類，三酸甘油酯類，脂肪醇類。
抗氧化劑是亞硫酸鹽或偏亞硫酸氫鹽，如偏亞硫酸氫鉀，抗壞血酸，丁基羥基甲苯，丁基羥基苯甲醚，生育酚。
光穩(wěn)定劑的實例是苯基苯并咪唑磺酸(novantisolic acid)。
粘合劑的實例是纖維素衍生物、淀粉衍生物、聚丙烯酸酯類，天然聚合物，如藻酸鹽類，明膠。
乳液可以通過口服、經(jīng)皮或以注射液形式給藥。
乳液可為油包水型或水包油型。
乳液的制備是將活性化合物溶于疏水或親水相中，并藉助于適當?shù)娜榛瘎┯昧硪幌嗟娜軇⒋讼嗑?，如果需要還可藉助于其他輔助劑，如著色劑、吸收促進劑、防腐劑、抗氧化劑、光穩(wěn)定劑、增加粘度的物質(zhì)。
作為疏水相(油)可提及下列物質(zhì)石蠟油，硅油，天然植物油，如芝麻籽油、杏仁油、蓖麻油，合成的三酸甘油酯類，如辛酸/癸酸二酸甘油酯，與鏈長C8-12的植物脂肪酸或與其他特異選擇的天然脂肪酸的三酸甘油酯混合物，還可含有羥基的飽和或不飽和脂肪酸的部分甘油酯混合物，及C8/C10脂肪酸的單酸甘油酯和二酸甘油酯；
脂肪酸酯類，如硬脂酸乙酯，己二酸二正丁酯，月桂酸己酯，壬酸二丙二醇酯，中等鏈長的支鏈脂肪酸與鏈長C16-C18的飽和脂肪醇的酯，肉豆蔻酸異丙酯，棕櫚酸異丙酯，鏈長C12-C18的飽和脂肪醇的辛/癸酸酯，硬脂酸異丙酯，油酸油醇酯，油酸癸酯、油酸乙酯，乳酸乙酯，蠟狀脂肪酸酯，如合成的鴨的尾脂腺脂肪，鄰苯二甲酸二丁酯，己二酸二異丙酯，與后者有關(guān)的酯混合物，等等；
脂肪醇類，如異十三烷基醇，2-辛基十二烷醇，十六烷基十八烷醇，油醇；
脂肪酸類，如油酸及其混合物。
作為親水相可提及下列物質(zhì)水、醇類，如丙二醇、甘油、山梨糖醇及其混合物。
作為乳化劑可提及下列物質(zhì)非離子表面活性劑，例如聚氧乙烯化蓖麻油、聚氧乙烯化脫水山梨糖醇一油酸酯，脫水山梨糖醇一硬脂酸酯，硬脂酸單甘油酯，聚氧乙基(polyoxyethyl)硬脂酸酯，烷基苯酚聚乙二醇醚類；
兩性表面活性劑，如N-十二烷基-β-亞氨基二丙酸二鈉或卵磷脂；
陰離子表面活性劑，如十二烷基硫酸鈉，脂肪醇醚硫酸鹽，單/二烷基聚乙二醇醚正磷酸酯的單乙醇胺鹽；
陽離子表面活性劑，如氯化十六烷基三甲基銨。
作為其他輔助劑可提及下列物質(zhì)增加粘度的物質(zhì)和使乳液穩(wěn)定的物質(zhì)，如羧甲基纖維素、甲基纖維素和其他纖維素和淀粉衍生物，聚丙烯酸酯類，藻酸鹽，明膠，阿拉伯樹膠，聚乙烯吡咯烷酮，聚乙烯醇，甲基乙烯基醚和馬來酸酐的共聚物，聚乙二醇類，蠟，膠體二氧化硅，或上述物質(zhì)的混合物。
懸浮液可以通過口服、經(jīng)皮或以注射液形式給藥。其制備是通過將活性物質(zhì)懸浮在賦形劑液體中，如果需要可加入其他輔助劑，如濕潤劑、著色劑、吸收促進劑、防腐劑、抗氧化劑、光穩(wěn)定劑。
可提及的賦形劑液體是所有均一溶劑和溶劑混合物。
可提及的濕潤劑(分散劑)是上述表面活性劑。
可提及的其他輔助劑是上述輔助劑。
半固體制劑可以通過口服或經(jīng)皮給藥。它們只是通過其較高的粘度區(qū)別于上述懸浮液和乳液。
為了制備固體制劑，將活性化合物與適當?shù)馁x形劑混合，如果需要，可以加入輔助劑，并將混合物按需要配制。
可以提到的賦形劑是所有生理學(xué)上可接受的固體惰性物質(zhì)。就其本身而言適當?shù)氖菬o機和有機物質(zhì)。無機物質(zhì)的實例是氯化鈉，碳酸鹽如碳酸鈣、碳酸氫鈣，氧化鋁，二氧化硅，粘土，沉淀或膠體二氧化硅，及磷酸鹽。
有機物質(zhì)的實例是糖類，纖維素，食物和動物飼料，如奶粉、動物尸肉類、谷粉類、粗谷粉類及淀粉類。
輔助劑是如上所述的防腐劑、抗氧化劑和著色劑。
其他適宜的輔助劑是潤滑劑和滑移劑，例如硬脂酸鎂，硬脂酸，滑石，膨潤土；崩解劑如淀粉或交聯(lián)的聚乙烯吡咯烷酮；粘合劑如淀粉、明膠或線性聚乙烯吡咯烷酮，此外還有干燥的粘合劑如微晶纖維素。
在這些制劑中，活性化合物還可以與增效劑或與起著抗病原性體內(nèi)寄生蟲作用的其他活性化合物的混合物形式存在。這種活性化合物的實例是L-2，3，5，6-四氫-6-苯基咪唑并噻唑，苯并咪唑氨基甲酸酯類，噻嘧啶(pyrantel)。
隨時可用的制劑含有濃度為10ppm至20％(重量)，優(yōu)選0.1-10％(重量)的活性化合物。
給藥之前需要稀釋的制劑含有濃度為0.5-90％(重量)，優(yōu)選5-50％(重量)的活性化合物。
通常，已證實較好的給藥量是每千克體重每天約10至約100mg本發(fā)明活性化合物的混合物，以便達到有效的效果。優(yōu)選每千克體重10至50mg活性化合物混合物。
通常，組合物中吡喹酮或依西太爾與縮肽的重量比為1∶1至10，優(yōu)選1∶1至2，非常特別優(yōu)選1∶1。實施例A體內(nèi)線蟲試驗
狗的犬鉤口線蟲
用犬鉤口線蟲屬的鉤蟲使小獵兔幼犬(Beagle puppies)實驗性感染。為了使狗感染，將犬鉤口線蟲以250 L3幼蟲形式口服施用。
在潛伏期過后(或者如果檢測出抗幼蟲活性則在潛伏期過程中)，將活性化合物以純活性化合物的明膠膠囊形式口服給藥。
活性通過兩種方法評估。
1.對處理前和處理后對由糞便排泄出的蟲卵進行計數(shù)。
2.用下式計算臨界試驗中的活性百分比
在下表中，示出了劑量(mg/kg)，在此劑量下用兩種評估方法均達到100％的活性
表AMeLeuN-甲基-L-亮氨酸D-LacD-乳酸；D-PhLacD-β-苯基乳酸；D-P-MorPhLacD-β-對嗎啉代-苯基乳酸實施例B體內(nèi)線蟲試驗
貓的喇叭形鉤口線蟲(Ancylostoma tubaeforme)
用喇叭形鉤口線蟲屬的鉤蟲的L3幼蟲使小貓實驗性感染。為了此感染，口服施用250個幼蟲，或用約500個幼蟲進行皮膚施用。
潛伏期過后(或者如果檢測出抗幼蟲活性則在潛伏期過程中)，將活性化合物以純活性化合物的明膠膠囊形式口服給藥。
活性用兩種方法評估。
1.對處理前和處理后對由糞便排泄出的蟲卵進行計數(shù)。
2.用下式計算臨界試驗中的活性百分比
在下表B中示出了劑量(mg/kg)，在此劑量下用兩種評估方法均達到100％的活性
表BMeLeuN-甲基-L-亮氨酸D-LacD-乳酸；D-PhLacD-β-苯基乳酸；D-p-MorPhLacD-β-對嗎啉代-苯基乳酸
具有18個環(huán)原子的環(huán)縮肽類的制備實施例實施例1環(huán)(-N-甲基-L-異亮氨?；?D-乳?；?N-甲基-L-異亮氨?；?D-乳酰基-N-甲基-L-異亮氨?；?D-乳酰基-)
將0.99g(1.08mmol)Z-(-L-MeIle-D-Lac-)3-O-Pfp的50ml無水二噁烷溶液于6小時內(nèi)在內(nèi)溫為95℃下均勻注射到迅速攪拌著的含有12ml乙醇和160mg(1.08mmol)4-吡咯烷子基吡啶的1.5g10％鈀/炭的550ml無水二噁烷懸浮液中。在此過程中，將氫氣通過反應(yīng)溶液。然后繼續(xù)在95℃下再攪拌4小時，并在室溫下攪拌12小時。過濾混合物，并真空濃縮全部反應(yīng)混合物。將無色油狀殘余物溶于氯仿中，用5％濃度的檸橡酸洗滌兩次，用NaHCO3溶液洗滌兩次并用水洗滌兩次。用硫酸鈉干燥有機相，然后真空蒸除溶劑。剩余的粗產(chǎn)物可通過硅膠柱(硅膠60-Merck，粒度0.04-0.063mm)進行色譜法預(yù)純化，用甲苯∶乙酸乙酯(4∶1)作為洗脫劑(純度84％)。接著進行制備性HPLC純化。得到710mg(理論值的36.8％)環(huán)(-N-甲基-L-異亮氨酰基-D-乳?；?N-甲基-L-異亮氨?；?D-乳?；?N-甲基-L-異亮氨?；?D-乳?；?)。m.p.210-212℃1H-NMR(400MHz，CDCl3，δ)0.87(t，9H，-CH2-CH3；J＝7.3Hz)；0.98；1.44(2d，18H，-CH-CH3；J＝6.5Hz)；1.35-1.41(br.m，3H，-CH-CH3)；2.02-2.04(br.m，6H，-CH2-CH3)；3.03(s，9H，-N-CH3)；4.45(m，3H，N-CH-CO)；5.57-5.62(m，3H，O-CH-CO)ppm13C-NMR(100MHz，CDCl3，δ)10.9；16.0；16.6(-CH3)；24.8(-CH2-)；33.3(-CH-)； 33.9(-N-CH3)；61.9(-N-CH-)；66.4(-O-CH-)；169.3(-CO-N-)；169.9(-CO-O-)ppmFAB-MS m/z(％)5 98(M++H，12)；597(37)；541(42)；524(14)；182(100)
用類似制備LDLDLD立體異構(gòu)體形式的方法，可制備下表1中所列的式(I)化合物。表1通式(I)化合物的實施例
a)13C-NMR(100MHz，CDCl3δ)[in ppm]，F(xiàn)AB-MS或EI-MS m/z(％)
式(II)起始物質(zhì)實施例(II-1)N-芐氧羰基-N-甲基-L-異亮氨酰基-D-乳?；?N-甲基-L-異亮氨酰基-D-乳?；?N-甲基-L-異亮氨?；?D-乳酸叔丁酯
將4.7g(36.3mmol)N，N-二異丙基乙胺(“Hünig堿”)和4.6g(18.1mmol)雙(2-氧代-3-噁唑烷基)膦酰氯(BOP-Cl)在0℃下加到5.8g(16.5mmol)Z-L-MeIle-D-Lac-OH和7.8g(16.5mmol)H-(-L-MEIle-D-Lac-)2-O-tBu的150ml二氯甲烷溶液中，并將混合物攪拌4小時。用水搖動反應(yīng)溶液兩次，分離出有機相，用硫酸鈉干燥，然后真空濃縮。剩余的粗產(chǎn)物通過硅膠柱(硅膠60-Merck，粒度0.04-0.063mm)進行色譜法純化，用甲苯∶乙酸乙酯(5∶1)作為洗脫劑。得到10.3g(理論值的77.4％)N-芐氧羰基-N-甲基-L-異亮氨?；?D-乳?；?N-甲基-L-異亮氨酰基-D-乳?；?N-甲基-L-異亮氨?；?D-乳酸叔丁酯。FAB-MS m/z(％)805(M+，3)；749(M+－H2C＝CMe2，10)；732(9)；793(10)；91(100)實施例(II-2)N-芐氧羰基-N-甲基-L-異亮氨酰基-D-乳?；?N-甲基-L-異亮氨酰基-D-乳?；?N-甲基-L-異亮氨?；?D-乳酸
將干燥的氯化氫氣體通入冷卻至0℃的9.2g(11.2mmol)Z-(-L-MeIle-D-Lac-)3-O-tBu的150ml無水二氯甲烷溶液中達20分鐘。接著將混合物在室溫下攪拌大約16小時，并真空濃縮全部反應(yīng)混合物。得到7.1g(理論值的82.9％)N-芐氧羰基-N-甲基-L-異亮氨酰基-D-乳?；?N-甲基-L-異亮氨酰基-D-乳?；?N-甲基-L-異亮氨酰基-D-乳酸，它無需進一步純化則可進行進一步的反應(yīng)。MS m/z(％)749(M+，10)；721(1)；693(2)；533(0.5)；91(100)實施例(II-3)N-芐氧羰基-N-甲基-L-異亮氨?；?D-乳?；?N-甲基-L-異亮氨?；?D-乳?；?N-甲基-L-異亮氨?；?D-乳酸五氟苯基酯
將5.0g(6.67mmol)Z-(L-MeIle-D-Lac)3-OH和1.23g(6.67mmol)五氟苯酚一起溶于125ml無水乙酸乙酯中(惰性氣氛)。在0℃下向其中加入1.38g(6.67mmol)二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)，在此溫度下再繼續(xù)攪拌4小時。濾除沉淀出的二環(huán)己基脲后，將濾液真空蒸發(fā)至干，殘余物通過預(yù)先干燥的硅膠柱(硅膠60-Merck，粒度0.04-0.063mm)進行色譜法純化，用甲苯∶乙酸乙酯(10∶1)作為洗脫劑。得到3.3g(理論值的54％)N-芐氧羰基-N-甲基-L-異亮氨?；?D-乳?；?N-甲基-L-異亮氨?；?D-乳?；?N-甲基-L-異亮氨酰基-D-乳酸五氟苯基酯，為無色油狀物。FAB-MS m/z(％)915(M+，2)；914(M+-H，4)；859(9)；814(I)；780(5)；91(100)實施例(II-4)N-甲基-L-異亮氨?；?D-乳?；?N-甲基-L-異亮氨酰基-D-乳?；?N-甲基-L-異亮氨酰基-D-乳酸
將1.0g(1.33mmol)Z-(-L-MeIle-D-Lac-)3-OH在20ml乙醇中在0.15g Pd(OH)2/炭[Pd含量20％]存在下氫化，直至氫氣的吸收停止(大約2小時)。濾除催化劑后，真空濃縮全部反應(yīng)溶液。得到0.81g(理論值的100％)N-甲基-L-異亮氨?；?D-乳酰基-N-甲基-L-異亮氨?；?D-乳酰基-N-甲基-L-異亮氨?；?D-乳酸，它無需進一步純化則可進行環(huán)化反應(yīng)。EI-MS m/z(％)615(M+，3)；600(1)；558(7)；472(8)；386(14)；100(100)
用類似制備LDLDLD立體異構(gòu)體的方法，可制備下表2中所列的通式(II)化合物。表2式II化合物的實施例
表2續(xù)表2續(xù)a)FAB-MS或EI-MS m/z(％)
具有24個環(huán)原子的環(huán)縮肽類化合物的制備實施例1.式(Ia)化合物的制備
在0℃下，將BOP-Cl(0.124mmol)加到式IIc化合物(0.104mmol)和Hünig堿(02258mml))的二氯甲烷(100m))溶液中，在室溫下繼續(xù)攪拌混合物24小時。此后，加入相同量的BOP-Cl和堿，再將混合物攪拌24小時。用飽和碳酸氫鈉溶液洗滌溶液兩次，用硫酸鈉干燥并濃縮。殘余物通過柱色譜法純化，用環(huán)己烷∶乙酸乙酯2∶1作為洗脫劑。
得到式(Ia)化合物，其中各取代基具有下列含義(表3)表3Me＝甲基Et＝乙基Bu＝丁基Bn＝芐基Pr＝丙基
式(IIc)化合物的制備實施例
將式(IIIa)的開鏈八縮肽(1.222mmol)的乙醇(50ml)溶液在Pd(OH)2/C(20％200mg)存在下氫化，直至氫氣的吸收停止(大約2小時)。濾除催化劑后，得到純的式IIc化合物，它無需進一步純化則可進行進一步的反應(yīng)。
按照此方法，得到式(IIc)化合物，其中各取代基具有列于表4中的定義。表4Me=甲基Et＝乙基s-Bu＝仲丁基Bn=芐基
式(IIIa)化合物的制備
在0℃下，將HCl氣體通入式(IVa)的叔丁基酯(1.609mmol)的二氯甲烷(40ml)溶液中達1.5小時。接著將混合物加熱至室溫，繼續(xù)攪拌12小時。在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上蒸發(fā)溶液，殘余物在高真空下干燥。殘余物無需進一步純化即可進行反應(yīng)。
類似地可得到式(IIIa)化合物，其中各取代基具有以下所給含義(表5)表5Me＝甲基Et＝乙基s-Bu＝仲丁基Bn＝芐基
式(IVa)化合物的制備
將乙基二異丙基胺(0.912mmol)和BOP-Cl(0.438mmol)的溶液在0℃下加到分別為2.52mmol的式(VIa)和(Va)的四縮肽類的二氯甲烷(15ml)溶液中。在0℃下繼續(xù)攪拌1小時，在室溫下攪拌1.5小時。用20ml二氯甲烷稀釋混合物，用少量水洗滌兩次，用Na2SO4干燥并濃縮。殘余物通過硅膠純化，用環(huán)己烷∶t-BuOMe＝2∶1作為洗脫劑。
式(Va)化合物的制備
在0℃下，將HCl氣體通入式(VIIa)的四縮肽(2.848mmol)的二氯甲烷(50ml)溶液中達2小時。接著在室溫下繼續(xù)攪拌8小時。將混合物濃縮并在高真空下干燥。殘余物無需進一步純化則可進行反應(yīng)。
式(VIa)化合物的制備
用Pd(OH)2/C(20％)(0.6g)處理式(VIIa)的四縮肽(9.53mmol)的乙醇(37ml)溶液，在室溫和常壓下將混合物氫化大約3小時。將反應(yīng)混合物過濾并濃縮，殘余物通過硅膠分離，用t-BuOMe/環(huán)己烷/乙醇＝1∶1∶0.5作為洗脫劑。
式(VIIa)化合物的制備
用二異丙基乙基胺(57.3mmol)和BOP-Cl(29.8mmol)處理冷卻至0℃的二縮肽IXa(22.9mmol)和二縮肽VIIIa(27.5mmol)的二氯甲烷(80ml)溶液。并將混合物在0℃下攪拌1小時，在室溫下攪拌1小時。濾除沉淀后，用二氯甲烷稀釋溶液，用少量水洗滌三次，用硫酸鈉干燥并濃縮。殘余物通過硅膠分離，用環(huán)己烷/乙酸乙酯＝15∶1作為洗脫劑。
權(quán)利要求
1.吡喹酮和依西太爾用于增強由氨基酸和羥基羧酸作為環(huán)組成部分所組成的并具有6至30個環(huán)原子的環(huán)縮肽類的殺體內(nèi)寄生蟲活性的用途。
2.含有吡喹酮和依西太爾以及由氨基酸和羥基羧酸作為環(huán)組成部分所組成的并具有6至30個環(huán)原子的環(huán)縮肽類的殺體內(nèi)寄生蟲組合物。
3.吡喹酮和依西太爾以及由氨基酸和羥基羧酸作為環(huán)組成部分所組成的并具有6至30個環(huán)原子的環(huán)縮肽類用于制備殺體內(nèi)寄生蟲組合物的用途。
全文摘要
本發(fā)明涉及吡喹酮和依西太爾用于增強殺體內(nèi)寄生蟲組合物中環(huán)縮肽類的殺體內(nèi)寄生蟲活性的用途。
文檔編號A61K31/41GK1121429SQ95101158
公開日1996年5月1日 申請日期1995年1月11日 優(yōu)先權(quán)日1994年1月11日
發(fā)明者N·門克, A·哈德, P·耶斯克 申請人:拜爾公司