專利名稱：造影劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及造影劑，特別涉及經(jīng)聚電解質(zhì)包覆的金屬氧化物造影劑顆粒，它可用于MR、X-射線、EIT和磁性研究，尤其是該金屬氧化物顆粒具有超順磁性。
已知可將造影劑用于醫(yī)療診斷技術(shù)中以加強(qiáng)組織間明暗對(duì)比或者有利于對(duì)體內(nèi)過程的研究。該方法中造影強(qiáng)度根據(jù)不同的成像方式而有所不同，但在磁共振成像中，多數(shù)常用的造影劑的造影能力是由它們對(duì)組織的選擇時(shí)間的影響而得到的。
MR成像的一大優(yōu)點(diǎn)是由組織弛豫時(shí)間所表現(xiàn)出的顯著的內(nèi)部組織對(duì)比效果。最初的看法是即使不加入造影劑，利用弛豫參數(shù)也可以區(qū)分出正常組織和病變組織(見Damadian，Science 1711151-1153(1971))。然而根據(jù)由Lauterbur(見Nature 242190-191(1973))所得的第一次MR成像發(fā)現(xiàn)無法明確分辨出病變組織和正常組織。因此，近來更為關(guān)心的是對(duì)那些通過影響關(guān)鍵對(duì)比參數(shù)而增進(jìn)對(duì)比效果的材料的應(yīng)用。Lauterbur等人首先描述了MR造影劑在動(dòng)物體中的應(yīng)用(見Lauterbur等人，F(xiàn)rontiers of Biological Energetics，New Yook，Academic Press 1978；752頁)。Carr等人在1984年描述了靜脈內(nèi)使用的造影劑在臨床診斷中應(yīng)用的可能性(見Carr等人，AJR143215-224(1984))，而且在1988年，最初的MR造影劑Gd DTPA被批準(zhǔn)用于臨床。
目前已證明將Gd DTPA及其類似物質(zhì)如GdDTPA-BMA，GdHPD03A和GdDOTA用于增進(jìn)中樞神經(jīng)系統(tǒng)成像是安全有益的。由于它們的低分子量和親水特性，這些金屬螯合物可在細(xì)胞外分布并能很快被腎清除。目前，針對(duì)更特殊的器官或疾病分布，正在開發(fā)其它具有改進(jìn)的藥物代謝特性的造影劑。
一般說來，改進(jìn)MR造影劑向靶區(qū)域的傳送可有兩種方法。常用的一種方法是采用順磁性標(biāo)記的天然存在或合成的分子或大分子的直接作用，這些分子具有特殊的定位和聚集特性(例如對(duì)肝膽和血管部位起作用的造影劑、卟啉)。另一方法是采用強(qiáng)磁性的標(biāo)記，如超順磁性顆粒，可以通過顆粒的特性或通過將它們與特殊分子靶向結(jié)合而使它們聚集在所需的部位。一般超順磁性造影劑的診斷用靶區(qū)域/背景之比明顯高于順磁性造影劑的該比例，而且超順磁性造影劑在較低的組織濃度下即可被監(jiān)測(cè)(見Weissleder等人，Magn.Reson.Quart 855-56(1992))。
將經(jīng)理想配合得到的超順磁性制劑用作MR造影劑可以影響組織內(nèi)信號(hào)的強(qiáng)度，從而得到較強(qiáng)的對(duì)比增強(qiáng)效果并使其具有較高的特定靶向性。顆粒造影劑的靶向可能性多依賴于給藥途徑和顆粒材料的理化性質(zhì)，尤其是其粒度和表面特性。兩種主要的施用方式是用于胃腸道研究的腸道給藥，以及用于對(duì)其生理分布的血管部位和/或網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)和區(qū)域(例如肝、脾、骨髓和淋巴結(jié))的研究而進(jìn)行的非腸道給藥。與常用的較大氧化鐵顆粒相比，直徑約小于30nm的極小氧化鐵顆粒具有較長的血管內(nèi)半衰期。該氧化鐵顆粒除一般可使T2縮短之外，該極小顆粒還可使T1縮短從而增強(qiáng)血管中的信號(hào)。最近還嘗試對(duì)受體配體或抗體/抗體片斷進(jìn)行開發(fā)。Fahlvik等人提供了應(yīng)用不同超順磁性制劑的概述，見JMRI3187-194(1993)。
迄今為止，在超順磁性造影劑方面所開展的工作的重點(diǎn)主要在于優(yōu)選其對(duì)比效率和生物動(dòng)力學(xué)參數(shù)。而很少注意到與各組織有關(guān)的藥物組合物或該顆粒制劑的安全性。
但對(duì)于非腸道給藥的顆粒制劑來說，具有足夠高的對(duì)比效能和生物動(dòng)力學(xué)參數(shù)本身是不夠的，還需克服某些問題。例如已經(jīng)臨床試驗(yàn)測(cè)試的常用的氧化鐵-葡聚糖制劑表現(xiàn)出較低的膠體穩(wěn)定性。該顆粒在使用前必須經(jīng)再分散和/或稀釋及過濾，并且該制劑在給藥時(shí)需通過一管線過濾器緩慢輸入以防止嚴(yán)重的毒性作用。
雖然可對(duì)顆粒進(jìn)行包覆使其具有足夠的穩(wěn)定性，但非經(jīng)腸道給藥的顆粒制劑的表面積很大，并且我們發(fā)現(xiàn)，那些被認(rèn)為是完全無毒的常用包覆材料如可儲(chǔ)存型多糖淀粉和葡聚糖及其衍生物本身會(huì)對(duì)心血管參數(shù)、血小板減少、凝血時(shí)間和對(duì)補(bǔ)體系統(tǒng)均具有有害影響。
但我們發(fā)現(xiàn)，通過采用低于常用包覆濃度的某些聚電解質(zhì)包覆材料如合成聚氨基酸、合成聚合物、特別是結(jié)構(gòu)型多糖，可以避免或減少該顆粒造影劑的這些問題。
因此，本發(fā)明的一個(gè)方面是提供一種診斷劑，它含有復(fù)合顆粒材料，其中的顆粒包含診斷有效的、基本為水不溶性的金屬氧化物結(jié)晶材料，以及聚離子包覆材料，其中所述的顆粒粒度小于300nm，所述的結(jié)晶材料的晶體大小為1-100nm，所述的結(jié)晶材料與所述的包覆材料的重量比為1000∶1至11∶1，所述的包覆材料選自天然及合成的結(jié)構(gòu)型多糖、合成多氨基酸、生理上可耐受的合成聚合物及其衍生物。
多糖廣泛存在于自然界中，它一般可被分為兩類可貯存型多糖(如淀粉、糖元、葡聚糖及其衍生物)以及結(jié)構(gòu)型多糖，如果膠和果膠片斷如聚半乳糖醛酸、葡糖氨基聚糖及類肝素(例如肝素、乙酰肝素、角質(zhì)素、皮膚素、軟骨素和透明質(zhì)酸)、纖維素，和海生多糖如藻酸鹽、角叉菜膠和聚氨基葡糖及它們的衍生物。
本發(fā)明所涉及的第二類多糖包括天然及合成類型的多糖，并且包含經(jīng)碎化或化學(xué)修飾的這類多糖，例如在連接點(diǎn)鍵合入金屬氧化物晶體。
特別優(yōu)選的聚離子多糖包覆材料是天然及合成的類肝素多糖，如肝素、軟骨素(例如，軟骨素-4-硫酸鹽)，以及海生多糖藻酸鹽、角叉菜膠和聚氨基葡糖。
非優(yōu)選的合成聚離子聚合物例如聚氨基酸、聚丙烯酸酯、和聚苯乙烯磺酸酯(以及在EP-A-580818中述及的其它合成聚合物)也可用作包覆材料。聚氨基酸中優(yōu)選賴氨酸、谷氨酸和天冬氨酸及其酯類(例如其甲酯和乙酯)的均聚物和共聚物。
包覆材料一般應(yīng)包含多個(gè)離子基，例如胺、羧基、硫酸基、磺酸基、膦酸基或磷酸基，它們彼此間隔地位于聚合物上，從而可在多個(gè)位點(diǎn)與金屬氧化物晶體表面連接以構(gòu)成總體具有凈電荷(優(yōu)選是負(fù)電荷)、并具有可測(cè)的Zeta電勢(shì)的復(fù)合顆粒。多位連接確保得到了穩(wěn)定的抗壓熱連接并使其具有貯存穩(wěn)定性，凈電荷則有助于增加該顆粒進(jìn)入脈管系統(tǒng)以后的生物耐受性。
聚離子包覆材料的分子量一般在500-2,000,000D的范圍內(nèi)，特別是1000至500000、尤其是1500至250000，最優(yōu)選2000至150000D。
該表面結(jié)合包覆材料僅占整個(gè)復(fù)合顆粒的一小部分，結(jié)晶材料與包覆材料的重量比優(yōu)選在1000∶1至15∶1，特別是500∶1至20∶1、尤其是100∶1至25∶1，對(duì)于用肝素或軟骨素包覆，最優(yōu)選該重量比至少為20∶1。
一般經(jīng)一步或兩步包覆法來生產(chǎn)復(fù)合顆粒。在一步法中，在包覆材料存在下加入堿，使結(jié)晶材料在高pH值(例如高于9，優(yōu)選高于11)的條件下形成沉淀，在兩步法中，則先形成結(jié)晶材料再進(jìn)行包覆。
因此，本發(fā)明的另一方面是提供一種生產(chǎn)本發(fā)明造影劑的方法，所述方法包括(i)在pH高于9的條件下，對(duì)1-100nm的診斷有效的、基本為水不溶性的金屬氧化物晶體和包覆材料進(jìn)行共沉淀。(ii)用包覆材料對(duì)1-100nm的診斷有效的、基本水不溶的金屬氧化物晶體進(jìn)行包覆。從而得到粒度低于300nm的復(fù)合顆粒，并且晶體與表面包覆材料的重量比為1000∶1至11∶1，所述的包覆材料選自天然或合成的結(jié)構(gòu)類多糖及其衍生物，合成聚氨基酸以及生理可耐受的合成聚合物，總之，優(yōu)選的包覆材料應(yīng)是結(jié)構(gòu)類多糖。
共沉淀法或沉淀后包覆法是公知的，并且在文獻(xiàn)中已被廣泛描述，如在以下文獻(xiàn)中有所描述(見例如US-A-4795698和US-A-4452773)。
由于不是全部包覆材料能沉淀出來，因此為達(dá)到所需的包覆密度，需要采用1.5至7倍、一般是2倍過量的包覆材料(相對(duì)于100％包覆結(jié)合的需要量)。
本發(fā)明組合物中結(jié)晶材料的特性是由所要達(dá)到的功能來決定的。本發(fā)明一般適于將基本不溶性的晶體材料用于非腸道給藥，然后希望其進(jìn)行特定的靶向釋放或者擴(kuò)散于血管中，特別適于采用金屬氧化物診斷造影劑，尤其是具有超順磁性的金屬氧化物。該氧化物可在EIT和磁性試驗(yàn)中、尤其是在MR成像過程中用作診斷造影劑。
已知有大量具有超順磁性且晶體大小低于單域粒度的金屬氧化物，并在例如US-A-4827945(Groman)、EP-A-525199(Meito Sangyo)、和EP-A-580878(BASF)中均有所描述?；旌翔F氧體含有一種以上的金屬物質(zhì)，例如由BASF出品的晶體顆粒在弛豫期內(nèi)就特別有效。本發(fā)明可采用這些不同的金屬氧化物，但特別優(yōu)選超順磁性氧化鐵晶體，例如式(FeO)nFe2O3的化合物，其中n是0至1、典型的如鐵紅(γ-Fe2O3)和鐵黑(Fe3O4)及其混合物。所采用的這些鐵氧化物晶體一般經(jīng)網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)吸收代謝，其代謝物不會(huì)釋放出異常的毒性金屬，該鐵一般進(jìn)入體內(nèi)的鐵儲(chǔ)備中。
超順磁性晶體的大小一般在2-50nm的范圍內(nèi)，特別是3-35nm，尤其是4-20nm。晶體/包覆材料復(fù)合顆?？梢詢H含晶體，若需要，可為復(fù)合簇狀晶體。在后一種情況下，復(fù)合顆粒的簇狀體“核”的粒度應(yīng)小于100nm。
可采用標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)如電子顯微鏡、激光散射或流體色譜法，例如在下文中實(shí)施例以前的部分所討論的方法可容易地測(cè)定出晶體、簇狀體和復(fù)合顆粒的粒度。
可采用元素分析法如感應(yīng)耦合等離子體分析法、例如將金屬氧化物中金屬的信號(hào)同與包覆材料相連的硫酸鹽中的硫元素的信號(hào)相比較(或者，若不是硫酸鹽，則與包覆材料中其它相似的特征分子或基團(tuán)相比較)可容易地測(cè)定出金屬氧化物晶體與包覆材料的重量比。相似地，也可采用重量分析法測(cè)定該比例。
包覆化合物的多離子特性可以使每個(gè)聚合物分子與晶體表面的多個(gè)位點(diǎn)相連。這樣可以使包覆材料與晶體之間形成牢固的結(jié)合，從而可以經(jīng)受對(duì)診斷劑的常規(guī)熱壓條件(121℃下15分鐘)，并且所得產(chǎn)品(如上所述的葡聚糖氧化鐵產(chǎn)品)不會(huì)具有較差的膠體穩(wěn)定性。
由于包覆材料的多離子特性使該復(fù)合顆粒具有凈電荷，從而具有可測(cè)的非零Zeta電勢(shì)。尤其當(dāng)包覆材料濃度較低時(shí)，包覆材料上的凈電荷會(huì)中和掉金屬氧化物晶體上的電荷，還發(fā)現(xiàn)在等電點(diǎn)時(shí)，顆粒的穩(wěn)定性較差，并且顆粒粒度超過1000nm時(shí)會(huì)發(fā)生聚集現(xiàn)象。該現(xiàn)象是我們所不希望的，但由于包覆水平對(duì)顆粒粒度的影響易于監(jiān)測(cè)，所以可避免發(fā)生聚集現(xiàn)象。Zeta電勢(shì)的絕對(duì)值一般至少為10mV(即≤-10mV或≥+10mV)，特別優(yōu)選20-100mV，尤其是30-70mV。
因此在本發(fā)明造影劑的優(yōu)選實(shí)施方案中包含鐵氧化物核，并且它經(jīng)聚離子多糖或聚氨基酸包覆和穩(wěn)定化。經(jīng)包覆的鐵氧化物顆粒在高溫、經(jīng)稀釋及長時(shí)間貯存的條件下表現(xiàn)出良好的穩(wěn)定性。與經(jīng)貯存型多糖葡聚糖(或其衍生物)和淀粉包覆和穩(wěn)定化的常規(guī)鐵氧化物制劑相比，新造影劑具有較低的毒性和較高的生物適應(yīng)性。
要制得具有特殊化學(xué)組成和結(jié)構(gòu)的鐵氧化物制劑，需要仔細(xì)控制制備條件。在現(xiàn)有技術(shù)中記述了鐵氧化物膠體懸浮液(亞鐵溶液)的多種工業(yè)用途，如用作染料和涂料成分及用于機(jī)電裝置中。存在多種合成工業(yè)用鐵氧化物及使其穩(wěn)定的方法，但它們均不適于用作藥用鐵氧化物，主要是因?yàn)樗鼈兊姆撬匦院?或由于其中所使用的包覆材料和表面活性劑的毒性造成的。
用于標(biāo)記和區(qū)分生物分子和細(xì)胞的超順磁性鐵氧化物造影劑的最常用合成方法，最初由Molday描述(見Molday和Mackinzie，J.Immunol.Meth52353-367(1982)和US-A-4452773(Molday))。這種被稱作Molday法或一步共沉淀法的方法是根據(jù)鐵氧化物在含有水溶性多糖(優(yōu)選葡聚糖)的堿溶液中會(huì)發(fā)生沉淀作用的原理而產(chǎn)生的。該膠體粒度的復(fù)合顆粒含有一種或多種包在葡聚糖中的或用葡聚糖包覆的鐵氧化物晶體。晶體一般為鐵黑或鐵黑/鐵紅結(jié)構(gòu)，粒度為3-30nm。而整個(gè)顆粒的直徑可由低至約10nm到高為數(shù)百nm。經(jīng)Molday法制備的鐵氧化物制劑一般是非均勻的，并且在這些制劑中會(huì)發(fā)現(xiàn)多種粒度的顆粒部分?？刹捎秒x心、過濾或膠體或?yàn)V方法以將顆粒分離到更均一的粒度范圍內(nèi)(見Weissleder等人，Radiology 175489-493(1990))。
經(jīng)實(shí)驗(yàn)測(cè)定，常用于肝脾造影劑的包覆鐵氧化物顆粒的直徑一般為50-1000nm。分離的較小顆粒在血液中的半衰期增長并且通過毛細(xì)血管壁的能力增加。這些制劑的用途很多，如用于淋巴結(jié)和骨髓的成像、用于心臟/血管部位的成像和自動(dòng)靶向傳遞。含葡聚糖的制劑較不穩(wěn)定，從而具有明顯的不利作用。例如，不能將目前正用于臨床試驗(yàn)的制劑配制成備用產(chǎn)品。在使用前才對(duì)劑量單元進(jìn)行稀釋，并經(jīng)管線內(nèi)過濾器緩慢注入以減輕不利作用(如血壓抑制、下背疼痛和血液變化)的發(fā)生頻率和嚴(yán)重程度。
我們發(fā)現(xiàn)，與常規(guī)顆粒相比，本發(fā)明中的顆粒具有改進(jìn)的穩(wěn)定性和毒性。可采用例如普通的兩步法合成本發(fā)明中所采用的顆粒，其中第1步是金屬氧化物顆粒從堿溶液中沉淀出來，第2步是采用具有聚電解質(zhì)特性的聚合物對(duì)晶體包覆，或者也可通過金屬氧化物晶體和聚電解質(zhì)包覆聚合物的共沉淀作用合成該顆粒。
當(dāng)向含可溶性金屬鹽的水溶液中加入堿時(shí)，金屬氧化物一般會(huì)從該溶液中沉淀出來。向含鐵鹽混合物的水溶液中快速加入堿至pH值10以上，同時(shí)經(jīng)劇烈攪拌或經(jīng)超聲波振蕩，則超順磁性鐵氧化物晶體會(huì)從該水溶液中沉淀出來?？刹捎枚喾N鐵鹽如FeCl2·nH2O、FeCl3·nH2O、檸檬酸鐵(III)、葡糖酸鐵(II)、FeSO4·nH2O、Fe2(SO4)3、草酸鐵(II)、Fe(NO3)3、乙酰丙酮鐵(II)、乙二胺硫酸鐵(II)、反丁烯二酸鐵(II)、磷酸鐵(III)、焦磷酸鐵(III)、檸檬酸鐵(III)銨、硫酸鐵(II)銨、硫酸鐵(III)銨和草酸鐵(II)銨。二價(jià)鐵和三價(jià)鐵之比優(yōu)選在1∶5至5∶1。所沉淀出的鐵氧化物晶體可由下式表示(FeO)x·Fe2O3其中x為0≤x≤1，x值較低時(shí)代表鐵紅γ-Fe2O3，x值較高時(shí)代表鐵黑Fe3O4。
所采用的堿選自多種無機(jī)或有機(jī)強(qiáng)堿，如NaOH、NH4OH、LiOH、KOH、三乙胺和胍。金屬和堿的反離子一般應(yīng)是生理可接受的，從而可以將由需被清除的沉淀晶體所產(chǎn)生的毒副作用減至最小。
可以在水、水和有機(jī)溶劑混合物中或在粘性介質(zhì)中進(jìn)行鐵氧化物的沉淀或鐵氧化物和聚合物的共沉淀。例如，可采用的有機(jī)溶劑有甲醇、乙醇、丙酮、醚和己烷。粘性介質(zhì)中可含有多糖或多胺的水凝膠、三碘化芳香化合物、甘油或聚乙二醇、和聚丙二醇。優(yōu)選在不含非生理可接受鹽混溶劑的水溶液中重復(fù)進(jìn)行沉淀，從而可使后生產(chǎn)中的純化過程減少。
基于對(duì)穩(wěn)定性和毒性方面的觀點(diǎn)，作為新的鐵氧化物制劑的組分之一的包覆材料具有多電解質(zhì)結(jié)構(gòu)是有利的。聚電解質(zhì)包括那些可通過多個(gè)連接點(diǎn)與鐵氧化物表面牢固結(jié)合的聚陰離子及聚陽離子化合物或其混合物。
包覆材料可按它們所帶電荷和所包含的官能團(tuán)來分類，如帶負(fù)電荷并具有含有三價(jià)磷原子或硫原子或羥基官能團(tuán)的聚合物，和帶正電荷并具有含有氮原子官能團(tuán)的聚合物。帶負(fù)電荷的聚合物的實(shí)例包括某些改性羥基纖維素、藻酸鹽、角叉菜膠、聚半乳糖醛酸鹽、肝素和類肝素化合物如軟骨素-4-硫酸鹽、硫酸皮膚素、硫酸角質(zhì)素和透明質(zhì)酸鹽，合成聚合物如聚苯乙烯磺酸酯以及聚氨基酸如聚谷氨酸和聚天冬氨酸。帶正電荷的聚合物包括聚氨基葡糖和多熔素。
如上所述，當(dāng)主要考慮顆粒的毒性和穩(wěn)定性時(shí)，該聚電解質(zhì)聚合物的取代程度和電荷密度不應(yīng)過低。因此該聚合物應(yīng)含有多個(gè)(一個(gè)以上)官能團(tuán)以確保與金屬氧化物之間存在多個(gè)連接點(diǎn)，從而使顆粒表面帶電。
超順磁性鐵氧化物核的直徑一般為約4nm至約100nm。較小的核僅含有一個(gè)子域的超順磁性晶體，而較大的核會(huì)含有簇狀晶體?？刹捎蒙倭康头肿恿炕蚋叻肿恿康木酆衔飳?duì)小直徑的單晶體核進(jìn)行穩(wěn)定化，而對(duì)于簇狀晶體，由于其密度和每個(gè)顆粒所帶的高磁性，需要采用大量聚合物對(duì)其包覆和穩(wěn)定化。根據(jù)制備條件和聚合物的分子量、結(jié)構(gòu)和數(shù)量，復(fù)合顆粒的直徑(包括鐵氧化物核和聚合物包覆層)一般應(yīng)為約5nm至300nm。
含超順磁性鐵氧化物晶體的顆粒的弛豫性將隨核和包覆顆粒的尺寸和組分而有所不同。在0.5T下，T1弛豫性(r1)可低至5，高至200，T2弛豫性(r2)可為5至500(所給的弛豫性為S-1mM-1Fe)。r2/r1之比可為1至100，優(yōu)選2至10。小單晶體顆粒的r2/r1之比較低，而大顆粒和多晶顆粒的該比例較高。鐵氧化物晶體具有超順磁性時(shí)，顆粒的磁化強(qiáng)度基本與顆粒本身和晶體大小無關(guān)。在1T下，磁化強(qiáng)度約為20-100，優(yōu)選30-90emu/g鐵氧化物。
另一方面，本發(fā)明提供了診斷用的組合物，它含有本發(fā)明的診斷劑和至少一種生理上可接受的載體或賦形劑，例如，注射用水。
本發(fā)明的組合物可為任何常規(guī)的藥物劑型，如混懸劑、分散劑、粉劑等，并且可含有水載體(如注射用水)和/或調(diào)節(jié)滲透性、pH、粘度和穩(wěn)定性的組分。該組合物最好是混懸劑，該混懸劑應(yīng)與血液是等滲的和等氫離子的。例如，可通過加入氯化鈉、低分子量糖如葡萄糖(右旋糖)、乳糖、麥芽糖，或甘露醇或聚合物包覆材料片可溶性部分或它們的混合物來制備等滲混懸劑?？赏ㄟ^加入酸如鹽酸來得到等氫離子混懸劑，如還要輕度調(diào)節(jié)pH，則可加入堿如氫氧化鈉。也可使用緩沖劑，如磷酸鹽、檸檬酸鹽、乙酸鹽、硼酸鹽、酒石酸鹽和葡糖酸鹽緩沖劑?？赏ㄟ^加入抗氧劑如抗壞血酸或焦硫酸鹽以及螯合劑如檸檬酸、EDTA鈉鹽和EDTA鈣鹽鈉鹽來改善顆?；鞈覄┑幕瘜W(xué)穩(wěn)定性。也可加入賦形劑來改善制劑的物理穩(wěn)定性。非腸道用混懸劑中最常用的賦形劑是表面活性劑如聚山梨酸酯、卵磷脂或脫水山梨醇酯，粘度改進(jìn)劑如甘油、丙二醇和聚乙二醇(macrogols)，或者濁點(diǎn)改進(jìn)劑，優(yōu)選非離子表面活性劑。
本發(fā)明的組合物適宜含有診斷有效金屬濃度的金屬氧化物，該濃度一般為0.1至250 mg Fe/ml，優(yōu)選1至100mg Fe/ml，特別優(yōu)選5至75mg Fe/ml。
本發(fā)明還提供了一種可增強(qiáng)對(duì)人體或非人類軀體(優(yōu)選是哺乳動(dòng)物)成像效果的方法，所述方法包括給予所述軀體以本發(fā)明的造影劑混懸液，優(yōu)選經(jīng)非腸道給藥，特別優(yōu)選經(jīng)靜脈內(nèi)給藥，從而可在該造影劑所分散的軀體內(nèi)的至少一部分經(jīng)例如MR、ET或磁性測(cè)定成像。
本發(fā)明方法中所采用的劑量應(yīng)為成像方式所需采用的造影有效劑量。一般該劑量為1至500μmol Fe/kg，優(yōu)選2至250μmol Fe/kg，且特別優(yōu)選5至50μmol Fe/kg。
可采用本領(lǐng)域中常用的劑量和濃度。
已知許多按照現(xiàn)有技術(shù)制備的鐵氧化物制劑在靜脈注射時(shí)都會(huì)產(chǎn)生顯著的有害作用。最常見的是全身血壓抑制和急性血小板減少。我們發(fā)現(xiàn)，這些副作用是對(duì)由顆粒誘發(fā)的補(bǔ)體系統(tǒng)活化的生理和血液反應(yīng)。常用的鐵氧化物顆粒會(huì)強(qiáng)力活化補(bǔ)體級(jí)聯(lián)，這時(shí)本發(fā)明的復(fù)合顆粒對(duì)循環(huán)血小板的數(shù)目不產(chǎn)生影響或影響很小，同時(shí)常用制劑會(huì)造成急性顯著的和暫時(shí)性的血小板減少癥。碳水化合物類(如未改性葡聚糖和某些改性的葡聚糖)的外表面是類似于許多革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌菌株的有效的補(bǔ)體活化劑。由于親核表面基團(tuán)(如OH)可以與C36補(bǔ)體蛋白形成共價(jià)鍵，所以這類外表面可以活化其它旁路(見Immunology(第二版)，Gower Medical出版，New York，1989；13.3)。在發(fā)生膿毒癥的情況下，補(bǔ)體系統(tǒng)的活化是有益的，因?yàn)檠a(bǔ)體系統(tǒng)是人體對(duì)損傷(如感染物質(zhì)侵入)所作出的反應(yīng)的重要部分。但在注射了顆粒造影劑后，補(bǔ)體的活化是有害的而不是有益的。
意想不到的是，本發(fā)明中的包覆顆粒對(duì)補(bǔ)體系統(tǒng)或與補(bǔ)體系統(tǒng)有關(guān)的參數(shù)(如血壓和血小板數(shù))不起作用。所選擇的包覆材料在與常用顆粒相同條件下不會(huì)使顆粒表面引發(fā)補(bǔ)體活化。同樣，與常規(guī)顆粒相比，用于穩(wěn)定該顆粒的少量聚電解質(zhì)聚合物也具有抑制補(bǔ)體活化的作用，這是由于調(diào)節(jié)素作用的變化(調(diào)節(jié)素程度和類型的變化)引起的。
將參考以下非限定性的實(shí)施例進(jìn)一步說明本發(fā)明。
在以下實(shí)施例中，鐵氧化物顆粒被消化后，經(jīng)ICP分析測(cè)定出鐵濃度。采用裝配有Orion Sureflow Ross pH電極的Beckmanφ10 pH測(cè)試儀測(cè)定pH值?？刹捎昧黧w色譜法(HDC)(見Small and Langhorst，Analytical Chem.54892A-898A(1982))或采用Malvern Zetasizer 4經(jīng)激光散射法(PCS)測(cè)定粒度分布。也可通過Malvern Zetasizer 4來測(cè)定顆粒表面電荷，通過Zeta-電勢(shì)和電泳淌度來表示。在37℃和0.47T(Minispec PC-20)條件下，采用含水樣品測(cè)定T1和T2的弛豫性r1和r2。T1采用IR脈沖結(jié)果，T2采用CPMG結(jié)果(TE＝4ms)。室溫下，在磁場為+1至-1T條件下，采用振動(dòng)樣品磁性儀(Molspin)得到磁化強(qiáng)度曲線。參考實(shí)施例1將平均分子量為9000D的葡聚糖(5g，Sigma出品)溶于水(10ml)中。在60℃溫度下，將FeCl3·6H2O(1.35g)和FeCl2·4H2O(0.81g)溶于該糖溶液中，然后在超聲波振蕩下將該混合物在0.18MNaOH(100ml)中緩慢沉淀。繼續(xù)經(jīng)10分鐘超聲波振蕩，然后在4000rpm轉(zhuǎn)速下離心5分鐘。收集上清液，并用0.9％NaCl(5×1L)進(jìn)行部分滲析。經(jīng)HDC測(cè)定，葡聚糖顆粒具有多種粒度分布，有小于12nm的部分，也有大于300nm的部分。參考實(shí)施例2(根據(jù)US-A-5314679的實(shí)施例7.3)向FeCl3·6H2O(1.17g)和FeCl2·4H2O(0.53g)的水溶液(8.5ml)中加入1M碳酸鈉，使pH值達(dá)到2.3，然后加入平均分子量為9000D(5.00g)的葡聚糖。將溶液加熱至60-70℃，然后冷卻到約40℃。加入7.5％NH4OH至pH值約為9.5，然后將混懸液加熱至95℃15分鐘。用水(5×1L)對(duì)該分散液進(jìn)行滲析(截止到15000道爾頓)。參考實(shí)施例3(根據(jù)US-A-54770183的實(shí)施例6.1)經(jīng)3分鐘向50ml 7.5％NH4OH中加入50ml含0.28M FeCl3、0.16M FeCl2和6.25g平均分子量為70000D(Pharmacia，Uppsala，Sweden)的溶液。攪拌該混懸液5分鐘，然后在700℃下加熱30分鐘。在5000rpm轉(zhuǎn)速下離心15分鐘，上清液用水(5×1L)滲析。參考實(shí)施例4將平均分子量為70000D的淀粉(3g，Reppe Glucose，Sweden)溶于水(10ml)中。在60℃下，將FeCl3·6H2O(2.7g)和FeCl2·4H2O(4.5g)溶于該糖溶液中，然后在60℃、超聲波振蕩下將該混合物在1.2M NaOH(50ml)中緩慢沉淀。繼續(xù)經(jīng)10分鐘超聲波振蕩，然后在5000rpm轉(zhuǎn)速下離心5分鐘。收集上清液，并用0.9％NaCl水溶液滲析。由磁化強(qiáng)度曲線可知該淀粉顆粒為超順磁性顆粒。經(jīng)PCS測(cè)定粒度為450nm。測(cè)定出鐵黑晶體大小約為10nm。參考實(shí)施例5a)將實(shí)施例1a中制備的鐵黑顆粒分散體(相當(dāng)于0.3g鐵黑顆粒)用水(50ml)稀釋，將溶于水(30ml)的平均分子量為65000D的羧基葡聚糖(30mg，Pharmacia Ab，Uppsala，Sweden)加入該分散體中。將該分散體經(jīng)超聲波振蕩，在5000rpm轉(zhuǎn)速下離心13分鐘，濾出上清液(0.22μm過濾器)。經(jīng)HDC測(cè)定出羧基葡聚糖顆粒的平均直徑為88nm。測(cè)出的Zeta電勢(shì)為-26mV。b)將實(shí)施例1a中制備的鐵黑顆粒分散體(相當(dāng)于0.3g鐵黑顆粒)用水(50ml)稀釋，將溶于水(5ml)的平均分子量為65000D的羧基葡聚糖(50mg，Pharmacia Ab，Uppsala，Sweden)加入該分散體中。將該分散體經(jīng)超聲波振蕩，在5000rpm轉(zhuǎn)速下離心13分鐘，濾出上清液(0.22μm過濾器)。經(jīng)HDC測(cè)定出羧基葡聚糖顆粒的平均直徑為74nm。測(cè)出的Zeta電勢(shì)為-32mV。r1為35.2(mM.秒)-1，r2為358(mM.秒)-1。c)將實(shí)施例1a中制備的鐵黑顆粒分散體(相當(dāng)于0.3g鐵黑顆粒)用水(50ml)稀釋，將溶于水(1.5ml)的分子量為3000-4000的羧基葡聚糖(15mg)加入該分散體中。將該分散體經(jīng)超聲波振蕩，在5000rpm轉(zhuǎn)速下離心13分鐘，濾出上清液。參考實(shí)施例6a)將實(shí)施例1a中制備的鐵黑顆粒分散體(相當(dāng)于0.5g鐵黑顆粒)用水(85ml)稀釋，將溶于水(5ml)的平均分子量為74000D的磷酸葡聚糖(50mg，Phamacia Ab，Uppsala，Sweden)加入該分散體中。將該分散體經(jīng)超聲波振蕩，離心并濾出上清液(0.22μm過濾器)。磁化強(qiáng)度曲線表明，該磷酸葡聚糖顆粒為超順磁性顆粒。經(jīng)PCS測(cè)定其粒度為74nm。b)將實(shí)施例1a中制備的鐵黑顆粒分散體(相當(dāng)于0.3g鐵黑顆粒)用水(50ml)稀釋，將溶于水(5ml)的平均分子量為71800D的磷酸葡聚糖(50mg，TdB Consultancy AS，Uppsala，Sweden)加入該分散體中。將該分散體經(jīng)超聲波振蕩，在5000rpm轉(zhuǎn)速下離心13分鐘，濾出上清液(0.22μm過濾器)。經(jīng)HDC測(cè)定出該磷酸葡聚糖顆粒的平均直徑為48nm。測(cè)定出的Zeta電勢(shì)為-51mV。r1為37(mM.秒)-1，r2為342(mM.秒)-1。c)將實(shí)施例1a中制備的鐵黑顆粒分散體(相當(dāng)于0.3g鐵黑顆粒)用水(50ml)稀釋，將溶于水(1.5ml)的平均分子量為71800D的磷酸葡聚糖(15mg，TdB Consultancy AB，Uppsala，Sweden)加入該分散體中。將該分散體經(jīng)超聲波振蕩，在5000rpm轉(zhuǎn)速下離心13分鐘，濾出上清液(0.22μm過濾器)。經(jīng)HDC測(cè)定出該磷酸葡聚糖顆粒的平均直徑為48nm。測(cè)定出的Zeta電勢(shì)為-36mV。參考實(shí)施例7將實(shí)施例1a中制備的鐵黑顆粒分散體(相當(dāng)于0.3g鐵黑顆粒)用水(50ml)稀釋，將溶于水的平均分子量為500000D的硫酸葡聚糖(30mg，Sigma，D-6001)加入該分散體中。將該分散體經(jīng)超聲波振蕩，在5000rpm轉(zhuǎn)速下離心13分鐘，濾出上清液(0.22μm過濾器)。磁化強(qiáng)度曲線表明硫酸葡聚糖顆粒為超順磁性顆粒，經(jīng)HDC測(cè)定出其平均直徑為42nm。測(cè)定出的Zeta電勢(shì)為-57mV。56％硫酸葡聚糖被顆粒表面吸附。r1弛豫性為37.7(mM·秒)-1，r2為307(mM·秒)-1。實(shí)施例1a)在劇烈攪拌條件下，迅速將NH4OH(28-30％，72ml)加入FeCl2·4H2O(12.50g，6.29×10-2mol)和FeCl3·6H2O(33.99g，1.26×10-1mol)的水溶液(500ml)中至pH達(dá)10，鐵黑顆粒從其中沉淀下來。在磁場作用下收集該顆粒，用水洗滌至pH6-7。將這些顆粒分散于約200ml水中。除潷析和再分散外，該反應(yīng)混合物應(yīng)在氮?dú)鈼l件下保存。用HCl(pH 3.5)穩(wěn)定裸露的鐵黑顆粒，其平均流體力學(xué)直徑為97nm。測(cè)定出的Zeta電勢(shì)為+36mV。r1為27.8(mM·秒)-1，r2為324(mM·秒)-1。b)將實(shí)施例1a中制備的鐵黑顆粒分散體(相當(dāng)于0.5g鐵黑顆粒)用水(70ml)稀釋，向其中加入肝素(2ml，Heparin 5000 1U/ml，Prod.noF1 NA，Nycomed Pharma，Oslo，Norway)。將該分散體經(jīng)超聲波振蕩，在4000rpm轉(zhuǎn)速下離心13分鐘，濾出上清液(0.22μm過濾器)。磁化強(qiáng)度曲線表明肝素顆粒為超順磁性顆粒，且經(jīng)HDC測(cè)定出其平均直徑為48nm。經(jīng)電子顯微鏡測(cè)定出鐵黑晶體的大小約為10nm。測(cè)定出的Zeta電勢(shì)為-61mV。54％的肝素被顆粒表面吸附。相當(dāng)于10μg硫/mg鐵。r1為40.5(mM·秒)-1，r2為304(mM·秒)-1。c)將實(shí)施例1a中制備的鐵黑顆粒分散體(相當(dāng)于0.5g鐵黑顆粒)用水(90ml)稀釋，向其中加入分子量為4000-6000D的低分子量肝素(0.8ml Fragmin 10000 1U/ml，Kabi Pharmacia AB，Sweden)。將該分散體經(jīng)超聲波振蕩，在4000rpm轉(zhuǎn)速下離心13分鐘，并濾出上清液(0.22μm過濾器)。磁化強(qiáng)度曲線表明肝素顆粒為超順磁性顆粒。測(cè)定出飽和磁化強(qiáng)度為78emu/g鐵氧化物。經(jīng)PCS測(cè)出粒度為85nm。測(cè)出的Zeta電勢(shì)為-40mV。16％所加入的聚電解質(zhì)被顆粒表面吸附。d)將實(shí)施例1a中制備的鐵黑顆粒分散體(相當(dāng)于0.5g鐵黑顆粒)用水(70ml)稀釋，向其中加入肝素(1ml，Heparin 5000 IU/ml，Prod.no.F1 NA，Nycomed Pharma，Oslo，Norway)。將該分散體經(jīng)超聲波振蕩，在4000rpm的轉(zhuǎn)速下離心13分鐘并濾出上清液(0.22μm過濾器)。磁化強(qiáng)度曲線表明該肝素顆粒為超順磁性顆粒，經(jīng)PCS測(cè)出其平均直徑為64nm。69％的肝素被顆粒表面吸附，相當(dāng)于7μg硫/mg鐵。r1為38(mM·秒)-1，r2為273(mM·秒)-1。實(shí)施例2將實(shí)施例1a中制備的鐵黑顆粒分散體(相當(dāng)于0.3g鐵黑顆粒)用水(50ml)稀釋，向其中加入溶于水(5ml)的硫酸皮膚素(36mg，Sigma C-2413)。將該分散體經(jīng)超聲波振蕩，在5000rpm轉(zhuǎn)速下離心13分鐘并濾出上清液(0.22μm過濾器)。經(jīng)HDC測(cè)出硫酸皮膚素的直徑為49nm。40％的硫酸皮膚素被顆粒表面吸附。測(cè)出的Zeta電勢(shì)為-58mV。實(shí)施例3將實(shí)施例1a中制備的鐵黑顆粒分散體(相當(dāng)于0.3g鐵黑顆粒)用水(50ml)稀釋，向其中加入溶于水(6ml)的透明質(zhì)酸(60mg，Sigma H-4015)。將該分散體經(jīng)超聲波振蕩，在5000rpm轉(zhuǎn)速下離心13分鐘并濾出上清液(0.22μm過濾器)。磁化強(qiáng)度曲線表明透明質(zhì)酸顆粒為超順磁性顆粒，經(jīng)HDC測(cè)出其平均直徑為123nm。測(cè)出的Zeta電勢(shì)為-55mV。r1為33.7(mM·秒)-1，r2為318(mM·秒)-1。
實(shí)施例4將實(shí)施例1a中制備的鐵黑顆粒分散體(相當(dāng)于0.3g鐵黑顆粒)用水(50ml)稀釋，向其中加入溶于水(5ml)的軟骨素-4-硫酸鹽(60mg，Sigma C-8529)。將該分散體經(jīng)超聲波振蕩，在5000rpm轉(zhuǎn)速下離心13分鐘并濾出上清液(0.22μm過濾器)。磁化強(qiáng)度曲線表明軟骨素-4-硫酸鹽顆粒為超順磁性顆粒，經(jīng)HDC測(cè)出其平均直徑為54nm。測(cè)出的Zeta電勢(shì)為-52mV。29％的軟骨素-4-硫酸鹽被顆粒表面吸附。r1為40.4(mM·秒)-1，r2為314(mM·秒)-1。實(shí)施例5在試管中用人體血漿培養(yǎng)參考實(shí)施例7(硫酸葡聚糖鐵氧化物)和實(shí)施例1b和d(肝素鐵氧化物)的鐵氧化物組合物，其濃度相當(dāng)于1mgFe/kg的劑量，并采用CephotestTM(Nycomed Pharma AS)來研究它們對(duì)凝聚參數(shù)-凝血因子III部分活化時(shí)間(APTT)的作用。實(shí)施例1b和d的肝素鐵氧化物組合物分別以4.5和2.5的系數(shù)以肝素劑量依賴方式延長了APTT。這清楚地表明將所采用的包覆密度減至最低的客觀需要。參考實(shí)施例7的組合物以2.7為系數(shù)延長了APTT。實(shí)施例6給鼠(n＝3)靜脈注射劑量為1mg Fe/kg(只對(duì)實(shí)施例1b)和2mgFe/kg的實(shí)施例1b和d的鐵氧化物組合物(肝素鐵氧化物)，并在注射前和注射后10、30和60分鐘時(shí)抽取血樣。采用ChepotestTM(NycomedPharma AS)體外研究該組合物對(duì)凝聚參數(shù)-凝血因子III部分活化時(shí)間(APTT)的作用。該組合物以劑量依賴方式和時(shí)間依賴方式延長了APTT。在注射過后10分鐘和30分鐘，2mg Fe/kg的實(shí)施例1b和d的組合物在凝血因子分別以4和1.5的系數(shù)延長了APTT。在注射后10分鐘，1mg Fe/kg的實(shí)施例1b的組合物以1.3的系數(shù)延長了APTT。實(shí)施例7將實(shí)施例1a中制備的鐵黑顆粒分散體(相當(dāng)于0.1g鐵黑顆粒)用水(15ml)稀釋，向其中加入溶于水的硫酸類肝素(20mg，Sigma H-7641)。將該分散體經(jīng)超聲波振蕩和離心。收集上清液。實(shí)施例8將實(shí)施例1a中制備的鐵黑顆粒分散體(相當(dāng)于0.1g鐵黑顆粒)用水(15ml)稀釋，向其中加入溶于水的硫酸角質(zhì)素(15mg，Sigma K-3001)。將該分散體經(jīng)超聲波振蕩和離心。收集上清液。實(shí)施例9a)將實(shí)施例1a中制備的鐵黑顆粒分散體(相當(dāng)于0.3g鐵黑顆粒)用水(50ml)稀釋，向其中加入溶于水(3ml)的λ-角叉菜膠(30mg，Sigma C-3889)。將該分散體經(jīng)超聲波振蕩，在4000rpm轉(zhuǎn)速下離心13分鐘，并過濾(0.22μm過濾器)。經(jīng)HDC測(cè)出該λ-角叉菜膠顆粒的平均直徑為53nm。測(cè)出的Zeta電勢(shì)為-56mV。b)將實(shí)施例1a中制備的鐵黑顆粒分散體(相當(dāng)于0.3g鐵黑顆粒)用水(50ml)稀釋，向其中加入溶于水(5ml)的λ-角叉菜膠(50mg，Sigma C-3889)。將該分散體經(jīng)超聲波振蕩，在4000rpm轉(zhuǎn)速下離心13分鐘，并過濾(0.22μm過濾器)。經(jīng)HDC測(cè)出該λ-角叉菜膠顆粒的平均直徑為61nm。測(cè)出的Zeta電勢(shì)為-61mV。r1為38.6(mM·秒)-1，r2為309(mM·秒)-1。c)將實(shí)施例1a中制備的鐵黑顆粒分散體(相當(dāng)于0.3g鐵黑顆粒)用水(50ml)稀釋，向其中加入溶于水(1.5ml)的λ-角叉菜膠(15mg，Sigma C-3889)。將該分散體經(jīng)超聲波振蕩，在4000rpm轉(zhuǎn)速下離心13分鐘，并過濾(0.22μm過濾器)。經(jīng)HDC測(cè)出該λ-角叉菜膠顆粒的平均直徑為52nm。測(cè)出的Zeta電勢(shì)為-50mV。實(shí)施例10a)將實(shí)施例1a中制備的鐵黑顆粒分散體(相當(dāng)于0.3g鐵黑顆粒)用水(50ml)稀釋，向其中加入溶于水(3ml)的ι(iota)-角叉菜膠(30mg，F(xiàn)luka Prod 22045)。將該分散體經(jīng)超聲波振蕩，在5000rpm下離心13分鐘，并過濾(0.22μm過濾器)。經(jīng)HDC測(cè)定出該ι-角叉菜膠顆粒的平均直徑為63nm。測(cè)出的Zeta電勢(shì)為-47mV。b)將實(shí)施例1a中制備的鐵黑顆粒分散體(相當(dāng)于0.3g鐵黑顆粒)用水(50ml)稀釋，向其中加入溶于水(1.5ml)的ι-角叉菜膠(15mg，F(xiàn)luka 22045)。將該分散體經(jīng)超聲波振蕩，在5000rpm下離心13分鐘，并過濾(0.22μm過濾器)。經(jīng)HDC測(cè)定出該ι-角叉菜膠顆粒的平均直徑為54nm。測(cè)出的Zeta電勢(shì)為-39mV。實(shí)施例11a)將實(shí)施例1a中制備的鐵黑顆粒分散體(相當(dāng)于0.5g鐵黑顆粒)用水(80ml)稀釋，將溶于水(10ml)的平均分子量約為180000D的藻酸鹽Protanal LF 10/60(50mg，Pronova，Drammen Norway)加入該分散體中。將該分散體經(jīng)超聲波振蕩，在5000rpm轉(zhuǎn)速下離心13分鐘，濾出上清液(0.22μm過濾器)。經(jīng)HDC測(cè)出該藻酸鹽顆粒的平均直徑為57nm。測(cè)出的Zeta電勢(shì)為-63mV。r1為39.9(mM·秒)-1，r2為305(mM·秒)-1。b)將實(shí)施例1a中制備的鐵黑顆粒分散體(相當(dāng)于0.5g鐵黑顆粒)用水(80ml)稀釋，將溶于水(10ml)的平均分子量約為325000D的藻酸鹽Protanal LF 60(25mg，Pronova，Drammen Norway)加入該分散體中。將該分散體經(jīng)超聲波振蕩，在5000rpm轉(zhuǎn)速下離心13分鐘，濾出上清液(0.22μm過濾器)。經(jīng)HDC測(cè)出該藻酸鹽顆粒的平均直徑為67nm。測(cè)出的Zeta電勢(shì)為-58mV。c)將實(shí)施例1a中制備的鐵黑顆粒分散體(相當(dāng)于0.5g鐵黑顆粒)用水(50ml)稀釋，將溶于水(15ml)的平均分子量約為380000D的藻酸鹽Protanal LFR 5/60(15mg，Pronova，Drammen Norway)加入該分散體中。將該分散體經(jīng)超聲波振蕩，在5000rpm轉(zhuǎn)速下離心13分鐘，濾出上清液(0.22μm過濾器)。經(jīng)HDC測(cè)出的該藻酸鹽顆粒的平均直徑為62nm。測(cè)出的Zeta電勢(shì)為-53mV。實(shí)施例12a)將實(shí)施例1a中制備的鐵黑顆粒分散體(相當(dāng)于0.3g鐵黑顆粒)用水(50ml)稀釋，向其中加入溶于水(3ml)的羧基纖維素鈉(30mg)，將該分散體經(jīng)超聲波振蕩，在5000rpm轉(zhuǎn)速下離心13分鐘，并濾出上清液(0.22μm過濾器)。經(jīng)HDC測(cè)出該羧基纖維素鈉顆粒的平均直徑為56nm。測(cè)出的Zeta電勢(shì)為-57mV。r1為40.1(mV·秒)-1，r2為303(mV·秒)-1。b)將實(shí)施例1a中制備的鐵黑顆粒分散體(相當(dāng)于0.3g鐵黑顆粒)用水(50ml)稀釋，向其中加入溶于水(1.5ml)的羧基纖維素鈉(15mg)，將該分散體經(jīng)超聲波振蕩，在5000rpm轉(zhuǎn)速下離心13分鐘，并濾出上清液(0.22μm過濾器)。經(jīng)HDC測(cè)出該羧基纖維素鈉顆粒的平均直徑為65nm。測(cè)出的Zeta電勢(shì)為-53mV。實(shí)施例13a)將實(shí)施例1a中制備的鐵黑顆粒分散體(相當(dāng)于0.3g鐵黑顆粒)用水(50ml)稀釋，將溶于1％乙酸(4.5ml)的平均分子量約為2000000D的聚氨基葡糖(30mg，F(xiàn)luka 22743)加入該分散體中。將該分散體經(jīng)超聲波振蕩，在5000rpm轉(zhuǎn)速下離心13分鐘，并濾出上清液(0.22μm過濾器)。磁化強(qiáng)度曲線表明該聚氨基葡糖顆粒為超順磁性顆粒。經(jīng)PCS測(cè)出其粒度為64nm。測(cè)出的Zeta電勢(shì)為+48mV。r1為35.1(mM·秒)-1，r2為281(mM·秒)-1。b)將實(shí)施例1a中制備的鐵黑顆粒分散體(相當(dāng)于0.3g鐵黑顆粒)用水(50ml)稀釋，將溶于1％乙酸(7.5ml)的平均分子量約為2000000D的聚氨基葡糖(50mg，F(xiàn)luka 22743)加入該分散體中。將該分散體經(jīng)超聲波振蕩，在5000rpm下離心13分鐘并濾出清液(0.22μm過濾器)。磁化強(qiáng)度曲線表明該聚氨基葡糖顆粒為超順磁性顆粒。經(jīng)PCS測(cè)出其粒度為64nm。測(cè)出的Zeta電勢(shì)為+47mV。c)將實(shí)施例1a中制備的鐵黑顆粒分散體(相當(dāng)于0.3g鐵黑顆粒)用水(50ml)稀釋，將溶于1％乙酸(7.5ml)的平均分子量約為2000000D的聚氨基葡糖(15mg，F(xiàn)luka 22743)加入該分散體中。將該分散體經(jīng)超聲波振蕩，在5000rpm下離心13分鐘，濾出上清液(0.22μm過濾器)。磁化曲線表明該聚氨基葡糖顆粒為超順磁性顆粒。經(jīng)PCS測(cè)出其粒度為64nm。測(cè)出的Zeta電勢(shì)為+47mV。實(shí)施例14a)將實(shí)施例1a中制備的鐵黑顆粒分散體(相當(dāng)于0.3g鐵黑顆粒)用水(50ml)稀釋，將溶于1％乙酸(7.5ml)的平均分子量約為750000D的聚氨基葡糖(50mg，F(xiàn)luka 22742)加入該分散體中。將該分散體經(jīng)超聲波振蕩，在5000rpm下離心13分鐘，濾出上清液(0.22μm過濾器)。磁化強(qiáng)度曲線表明該聚氨基葡糖顆粒為超順磁性顆粒。經(jīng)PCS測(cè)出其粒度為62nm。測(cè)出的Zeta電勢(shì)為+48mV。r1為33.4(mM·秒)-1，r2為279(mM·秒)-1。b)將實(shí)施例1a中制備的鐵黑顆粒分散體(相當(dāng)于0.3g鐵黑顆粒)用水(50ml)稀釋，將溶于1％乙酸(7.5ml)的平均分子量約為750000D的聚氨基葡糖(15mg，F(xiàn)luka 22742)加入該分散體中。將該分散體經(jīng)超聲波振蕩，在5000rpm轉(zhuǎn)速下離心13分鐘，并濾出上清液(0.22μm過濾器)。磁化強(qiáng)度曲線表明該聚氨基葡糖為超順磁性顆粒。經(jīng)PCS測(cè)出其粒度為64nm。測(cè)出的Zeta電勢(shì)為+49mV。實(shí)施例15a)將實(shí)施例1a中制備的鐵黑顆粒分散體(相當(dāng)于0.3g鐵黑顆粒)用水(50ml)稀釋，將溶于1％乙酸(4.5ml)的平均分子量約為70000D的聚氨基葡糖(30mg，F(xiàn)luka 22742)加入該分散體中。將該分散體經(jīng)超聲波振蕩，在5000rpm下離心13分鐘，濾出上清液(0.22μm過濾器)。磁化強(qiáng)度曲線表明該聚氨基葡糖顆粒為超順磁性顆粒。經(jīng)PCS測(cè)出其粒度為62nm。測(cè)出的Zeta電勢(shì)為+49mV。r1為34.3(mM·秒)-1，r2為327(mM·秒)-1。b)將實(shí)施例1a中制備的鐵黑顆粒分散體(相當(dāng)于0.3g鐵黑顆粒)用水(50ml)稀釋，將溶于1％乙酸(2.25ml)的平均分子量約為70000D的聚氨基葡糖(15mg，F(xiàn)luka 22742)加入該分散體中。將該分散體經(jīng)超聲波振蕩，在5000rpm下離心13分鐘，濾出上清液(0.22μm過濾器)。磁化強(qiáng)度曲線表明該聚氨基葡糖顆粒為超順磁性顆粒。經(jīng)PCS測(cè)出其粒度為64nm。測(cè)出的Zeta電勢(shì)為+48mV。實(shí)施例16a)將實(shí)施例1a中制備的鐵黑顆粒分散體(相當(dāng)于0.3g鐵黑顆粒)用水(50ml)稀釋，將溶于水(3ml)的聚(苯乙烯-4-磺酸鈉)(30mg，Janssen 22.227.14)加入該分散體中。將該分散體經(jīng)超聲波振蕩，在5000rpm轉(zhuǎn)速下離心13分鐘，濾出上清液(0.22μm過濾器)。經(jīng)HDC測(cè)出該聚(苯乙烯-4-磺酸鈉)顆粒的平均直徑為43nm。測(cè)出的Zeta電勢(shì)為-53mV。b)將實(shí)施例1a中制備的鐵黑顆粒分散體(相當(dāng)于0.3g鐵黑顆粒)用水(50ml)稀釋，將溶于水(1.5ml)的聚(苯乙烯-4-磺酸鈉)(15mg，Janssen 22.227.14)加入該分散體中。將該分散體經(jīng)超聲波振蕩，在5000rpm轉(zhuǎn)速下離心13分鐘，濾出上清液(0.22μm過濾器)。經(jīng)HDC測(cè)出該聚(苯乙烯-4-磺酸鈉)顆粒的平均直徑為36nm。測(cè)出的Zeta電勢(shì)為-49mV。實(shí)施例17a)將實(shí)施例1a中制備的鐵黑顆粒分散體(相當(dāng)于0.3g鐵黑顆粒)用水(50ml)稀釋，將溶于水(3ml)的平均分子量約為2000-15000D的聚L-谷氨酸(30mg，Sigma，p-4636)加入該分散體中。將該分散體經(jīng)超聲波振蕩，在4000rpm轉(zhuǎn)速下離心13分鐘，濾出上清液(0.22μm過濾器)。磁化強(qiáng)度曲線表明該聚-L-谷氨酸顆粒為超順磁顆粒并經(jīng)HDC測(cè)出其顆粒的平均直徑為37nm。測(cè)出的Zeta電勢(shì)為-68mV。b)將實(shí)施例1a中制備的鐵黑顆粒分散體(相當(dāng)于0.3g鐵黑顆粒)用水(50ml)稀釋，將溶于水(5ml)的平均分子量約為2000-15000D的聚L-谷氨酸(50mg，Sigma，P-4636)加入該分散體中。將該分散體經(jīng)超聲波振蕩，在4000rpm轉(zhuǎn)速下離心13分鐘，濾出上清液(0.22μm過濾器)。經(jīng)HDC測(cè)出該聚-L-谷氨酸顆粒的平均直徑為38nm。測(cè)出的Zeta電勢(shì)為-66mV。r1為40.4(mM·秒)-1，r2為281(mM·秒)-1。c)將實(shí)施例1a中制備的鐵黑顆粒分散體(相當(dāng)于0.3g鐵黑顆粒)用水(50ml)稀釋，將溶于水(1.5ml)的平均分子量約為2000-15000D的聚-L-谷氨酸(15mg，Sigma，P-4636)加入該分散體中。將該分散體經(jīng)超聲波振蕩，在4000rpm轉(zhuǎn)速下離心13分鐘，濾出上清液(0.22μm過濾器)。經(jīng)HDC測(cè)出該聚-L-谷氨酸顆粒的平均直徑為38nm。測(cè)出的Zeta電勢(shì)為-65mV。實(shí)施例18a)將實(shí)施例1a中制備的鐵黑顆粒分散體(相當(dāng)于0.3g鐵黑顆粒)用水(50ml)稀釋，將溶于水(3ml)的平均分子量約為15000-50000D的聚-L-谷氨酸(30mg，Sigma，P-4761)加入該分散體中。將該分散體經(jīng)超聲波振蕩，在4000rpm轉(zhuǎn)速下離心13分鐘，濾出上清液(0.22μm過濾器)。經(jīng)HDC測(cè)出該聚-L-谷氨酸顆粒的平均直徑為37nm。測(cè)出的Zeta電勢(shì)為-66mV。b)將實(shí)施例1a中制備的鐵黑顆粒分散體(相當(dāng)于0.3g鐵黑顆粒)用水(50ml)稀釋，將溶于水(5ml)的平均分子量約為15000-50000D的聚-L-谷氨酸(50mg，Sigma，P4761)加入該分散體中。將該分散體經(jīng)超聲波振蕩，在4000rpm轉(zhuǎn)速下離心13分鐘，濾出上清液(0.22μm過濾器)。經(jīng)HDC測(cè)出該聚-L-谷氨酸顆粒的平均直徑為36nm。測(cè)出的Zeta電勢(shì)為-66mV。r1為41.7(mM·秒)-1，r2為286(mM·秒)-1。c)將實(shí)施例1a中制備的鐵黑顆粒分散體(相當(dāng)于0.3g鐵黑顆粒)用水(50ml)稀釋，將溶于水(1.5ml)的平均分子量約為15000-50000D的聚-L-谷氨酸(15mg，Sigma，P4761)加入該分散體中。將該分散體經(jīng)超聲波振蕩，在4000rpm轉(zhuǎn)速下離心13分鐘，濾出上清液(0.22μm過濾器)。經(jīng)HDC測(cè)出該聚-L-谷氨酸顆粒的平均直徑為36nm。測(cè)出的Zeta電勢(shì)為-63mV。實(shí)施例19a)將實(shí)施例1a中制備的鐵黑顆粒分散體(相當(dāng)于0.3g鐵黑顆粒)用水(50ml)稀釋，將溶于水(3ml)的平均分子量約為50000-100000D的聚-L-谷氨酸(30mg，Sigma，P-4886)加入該分散體中。將該分散體經(jīng)超聲波振蕩，在4000rpm轉(zhuǎn)速下離心13分鐘，濾出上清液(0.22μm過濾器)。磁化強(qiáng)度曲線表明該聚-L-谷氨酸顆粒為超順磁性顆粒。經(jīng)HDC測(cè)出其平均直徑為40nm。測(cè)出的Zeta電勢(shì)為-70mV。r1為39.6(mM·秒)-1，r2為289(mM·秒)-1。b)將實(shí)施例1a中制備的鐵黑顆粒分散體(相當(dāng)于0.3g鐵黑顆粒)用水(50ml)稀釋，將溶于水(1.5ml)的平均分子量約為50000-100000D的聚-L-谷氨酸(15mg，Sigma，P-4886)加入該分散體中。將該分散體經(jīng)超聲波振蕩，在4000rpm轉(zhuǎn)速下離心13分鐘，濾出上清液(0.22μm過濾器)。經(jīng)HDC測(cè)出該聚-L-谷氨酸顆粒的平均直徑為39nm。測(cè)出的Zeta電勢(shì)為-66mV。實(shí)施例20a)將實(shí)施例1a中制備的鐵黑顆粒分散體(相當(dāng)于0.3g鐵黑顆粒)用水(50ml)稀釋，將溶于水(3ml)的平均分子量約為15000-50000D的聚-L-谷氨酸(30mg，Sigma，P-6762)加入該分散體中。將該分散體經(jīng)超聲波振蕩，在4000rpm轉(zhuǎn)速下離心13分鐘，濾出上清液(0.22μm過濾器)。經(jīng)HDC測(cè)出該聚-L-谷氨酸顆粒的平均直徑為42nm。測(cè)出的Zeta電勢(shì)為-65mV。b)將實(shí)施例1a中制備的鐵黑顆粒分散體(相當(dāng)于0.3g鐵黑顆粒)用水(50ml)稀釋，將溶于水(5ml)的平均分子量約為15000-50000D的聚-L-谷氨酸(50mg，Sigma，P6762)加入該分散體中。將該分散體經(jīng)超聲波振蕩，在4000rpm轉(zhuǎn)速下離心13分鐘，濾出上清液(0.22μm過濾器)。經(jīng)HDC測(cè)出該聚-L-谷氨酸顆粒的平均直徑為40nm。測(cè)出的Zeta電勢(shì)為-67mV。r1為40.8(mM·秒)-1，r2為332(mM·秒)-1。c)將實(shí)施例1a中制備的鐵黑顆粒分散體(相當(dāng)于0.3g鐵黑顆粒)用水(50ml)稀釋，將溶于水(1.5ml)的平均分子量約為15000-50000D的聚-L-谷氨酸(15mg，Sigma，P-6762)加入該分散體中。將該分散體經(jīng)超聲波振蕩，在4000rpm轉(zhuǎn)速下離心13分鐘，濾出上清液(0.22μm過濾器)。經(jīng)HDC測(cè)出該聚-L-谷氨酸顆粒的平均直徑為44nm。測(cè)出的Zeta電勢(shì)為-66mV。實(shí)施例21a)將實(shí)施例1a中制備的鐵黑顆粒分散體(相當(dāng)于0.3g鐵黑顆粒)用水(50ml)稀釋，將溶于水(3ml)的平均分子量約為5000-15000D的聚-L-天冬氨酸(30mg，Sigma，P5387)加入該分散體中。將該分散體經(jīng)超聲波振蕩，在4000rpm轉(zhuǎn)速下離心13分鐘，濾出上清液(0.22μm過濾器)。經(jīng)HDC測(cè)出該聚-L-天冬氨酸顆粒的平均直徑為38nm。測(cè)出的Zeta電勢(shì)為-67mV。r1為41.1(mM·秒)-1，r2為303(mM·秒)-1。b)將實(shí)施例1a中制備的鐵黑顆粒分散體(相當(dāng)于0.3g鐵黑顆粒)用水(50ml)稀釋，將溶于水(5ml)的平均分子量約為5000-15000D的聚-L-天冬氨酸(50mg，Sigma，P5387)加入該分散體中。將該分散體經(jīng)超聲波振蕩，在4000rpm轉(zhuǎn)速下離心13分鐘，并過濾(0.22μm過濾器)。經(jīng)HDC測(cè)出該聚-L-天冬氨酸顆粒的平均直徑為37nm。測(cè)出的Zeta電勢(shì)為-70mV。c)將實(shí)施例1a中制備的鐵黑顆粒分散體(相當(dāng)于0.3g鐵黑顆粒)用水(50ml)稀釋，將溶于水(1.5ml)的平均分子量約為5000-15000D的聚-L-天冬氨酸(15mg，Sigma，P5387)加入該分散體中。將該分散體經(jīng)超聲波振蕩，在4000rpm轉(zhuǎn)速下離心13分鐘，濾出上清液(0.22μm過濾器)。經(jīng)HDC測(cè)出該聚-L-天冬氨酸顆粒的平均直徑為37nm。測(cè)出的Zeta電勢(shì)為-65mV。實(shí)施例22a)將實(shí)施例1a中制備的鐵黑顆粒分散體(相當(dāng)于0.3g鐵黑顆粒)用水(50ml)稀釋，將溶于水(3ml)的平均分子量約為2000D的聚丙烯酸(30mg，Aldrich 32，366-7)加入該分散體中。將該分散體經(jīng)超聲波振蕩，在5000rpm轉(zhuǎn)速下離心13分鐘，濾出上清液(0.22μm過濾器)。經(jīng)HDC測(cè)出該聚丙烯酸顆粒的平均直徑為50nm。測(cè)出的Zeta電勢(shì)為-36mV。r1為29.1(mM·秒)-1，r2為323(mM·秒)-1b)將實(shí)施例1a中制備的鐵黑顆粒分散體(相當(dāng)于0.3g鐵黑顆粒)用水(50ml)稀釋，將溶于水(5ml)的平均分子量約為2000D的聚丙烯酸(50mg，Aldrich 32，366-7)加入該分散體中。將該分散體經(jīng)超聲波振蕩，在5000rpm轉(zhuǎn)速下離心13分鐘，濾出上清液(0.22μm過濾器)。經(jīng)HDC測(cè)出該聚丙烯酸顆粒的平均直徑為57nm。測(cè)出的Zeta電勢(shì)為-29mV。c)將實(shí)施例1a中制備的鐵黑顆粒分散體(相當(dāng)于0.3g鐵黑顆粒)用水(50ml)稀釋，將溶于水(3ml)的平均分子量約為90000D的聚丙烯酸(30mg，Aldrich 19，205-8)加入該分散體中，將該分散體經(jīng)超聲波振蕩，離心并濾出上清液。實(shí)施例23a)將實(shí)施例1a中制備的鐵黑顆粒分散體(相當(dāng)于0.3g鐵黑顆粒)用水(50ml)稀釋，將溶于水(3ml)的平均分子量約為25000-50000D的聚半乳糖醛酸(30mg，F(xiàn)luka 8 1325)加入該分散體中，并滴加入1M NaOH。將該分散體經(jīng)超聲波振蕩，在5000rpm轉(zhuǎn)速下離心13分鐘，濾出上清液(0.45μm過濾器)。經(jīng)HDC測(cè)出該聚半乳糖醛酸顆粒的平均直徑為55nm。測(cè)出的Zeta電勢(shì)為-60mV。b)將實(shí)施例1a中制備的鐵黑顆粒分散體(相當(dāng)于0.3g鐵黑顆粒)用水(50ml)稀釋，將溶于加有幾滴1M NaOH的水(1.5ml)的平均分子量約為25000-50000D的聚半乳糖醛酸(15mg，F(xiàn)luka 81325)加入該分散體中。將該分散體經(jīng)超聲波振蕩，在5000rpm轉(zhuǎn)速下離心13分鐘，濾出上清液(0.45μm過濾器)。經(jīng)HDC測(cè)出該聚半乳糖醛酸顆粒的平均直徑為61nm。測(cè)出的Zeta電勢(shì)為-55mV。實(shí)施例24a)將實(shí)施例1a中制備的鐵黑顆粒分散體(相當(dāng)于0.3g鐵黑顆粒)用水(50ml)稀釋，將溶于水(3ml)的平均分子量約為1000-4000D的聚-L-賴氨酸(30mg，Sigma P-0879)加入該分散體中。將該分散體經(jīng)超聲波振蕩，在4000rpm轉(zhuǎn)速下離心13分鐘，濾出上清液(0.45μm過濾器)。經(jīng)PCS測(cè)出該聚-L-賴氨酸顆粒的平均直徑為102nm。測(cè)出的Zeta電勢(shì)為+47mV。b)將實(shí)施例1a中制備的鐵黑顆粒分散體(相當(dāng)于0.3g鐵黑顆粒)用水(50ml)稀釋，將溶于水(1.5ml)的平均分子量約為1000-4000D的聚-L-賴氨酸(15mg，Sigma P-0879)加入該分散體中。將該分散體經(jīng)超聲波振蕩，在4000rpm下離心13分鐘，濾出上清液(0.45μm過濾器)。經(jīng)PCS測(cè)出該聚-L-賴氨酸顆粒的平均直徑為108nm。測(cè)出的Zeta電勢(shì)為+46mV。實(shí)施例25a)將實(shí)施例1a中制備的鐵黑顆粒分散體(相當(dāng)于0.3g鐵黑顆粒)用水(50ml)稀釋，將溶于水(5ml)的平均分子量約為15000-30000的聚-L-賴氨酸(50mg，Sigma P-7890)加入該分散體中。將該分散體經(jīng)超聲波振蕩，在4000rpm下離心13分鐘，濾出上清液(0.22μm過濾器)。磁化強(qiáng)度曲線表明該聚-L-賴氨酸顆粒為超順磁性顆粒。經(jīng)PCS測(cè)出溫水粒度為78nm。測(cè)出的Zeta電勢(shì)為+56mV。r1為38.3(mM·秒)-1，r2為295(mM·秒)-1。b)將實(shí)施例1a中制備的鐵黑顆粒分散體(相當(dāng)于0.3g鐵黑顆粒)用水(50ml)稀釋，將溶于水(1.5ml)的平均分子量約為15000-30000的聚-L-賴氨酸(15mg，Sigma P-7890)加入該分散體中。將該分散體經(jīng)超聲波振蕩，在4000rpm轉(zhuǎn)速下離心13分鐘，濾出上清液(0.22μm過濾器)。經(jīng)PCS測(cè)出該聚-L-賴氨酸顆粒的平均直徑為89nm。測(cè)出的Zeta電勢(shì)為+57mV。實(shí)施例26a)將實(shí)施例1a中制備的鐵黑顆粒分散體(相當(dāng)于0.3g鐵黑顆粒)用水(50ml)稀釋，將溶于水(3ml)的平均分子量約為70000-150000D的聚-L-賴氨酸(30mg，Sigma P-1274)加入該分散體中。將該分散體經(jīng)超聲波振蕩，在4000rpm轉(zhuǎn)速下離心13分鐘，濾出上清液(0.22μm過濾器)。經(jīng)PCS測(cè)出該藻酸鹽顆粒的平均直徑為94nm。測(cè)出的Zeta電勢(shì)為+57mV。b)將實(shí)施例1a中制備的鐵黑顆粒分散體(相當(dāng)于0.3g鐵黑顆粒)用水(50ml)稀釋，將溶于水(5ml)的平均分子量約為70000-150000D的聚-L-賴氨酸(50mg，Sigma P-1274)加入該分散體中。將該分散體經(jīng)超聲波振蕩，在4000rpm轉(zhuǎn)速下離心13分鐘，濾出上清液(0.22μm過濾器)。經(jīng)PCS測(cè)出該藻酸鹽顆粒的平均直徑為86nm。測(cè)出的Zeta電勢(shì)為+62mV。r1為36.9(mM·秒)-1，r2為294(mM·秒)-1。c)將實(shí)施例1a中制備的鐵黑顆粒分散體(相當(dāng)于0.3g鐵黑顆粒)用水(50ml)稀釋，將溶于水(1.5ml)的平均分子量約為70000-150000D的聚-L-賴氨酸(15mg，Sigma P1274)加入該分散體中。將該分散體經(jīng)超聲波振蕩，在4000rpm下離心13分鐘，濾出上清液(0.22μm過濾器)。經(jīng)PCS測(cè)出其粒度為96nm。測(cè)出的Zeta電勢(shì)為+61mV。實(shí)施例27a)將實(shí)施例1a中制備的鐵黑顆粒分散體(相當(dāng)于0.3g鐵黑顆粒)用水(50ml)稀釋，將溶于水(3ml)的平均分子量約為5000-15000D的1∶1聚(天冬氨酸鈉、谷氨酸鈉)(30mg，Sigma P1408)加入該分散體中。將該分散體經(jīng)超聲波振蕩，在5000rpm轉(zhuǎn)速下離心13分鐘，濾出上清液(0.22μm過濾器)。磁化強(qiáng)度曲線表明該聚(天冬氨酸鈉、谷氨酸鈉)顆粒為超順磁性顆粒。經(jīng)HDC測(cè)出其粒度為38nm。測(cè)出的Zeta電勢(shì)為-58mV。r1為40.4(mM·秒)-1，r2為277(mM·秒)-1。b)將實(shí)施例1a中制備的鐵黑顆粒分散體(相當(dāng)于0.3g鐵黑顆粒)用水(50ml)稀釋，將溶于水(1.5ml)的平均分子量約為5000-15000D的1∶1聚(天冬氨酸鈉、谷氨酸鈉)(15mg，Sigma P1408)加入該分散體中。將該分散體經(jīng)超聲波振蕩，在5000rpm轉(zhuǎn)速下離心13分鐘，濾出上清液(0.22μm過濾器)。經(jīng)HDC測(cè)出該聚(天冬氨酸鈉、谷氨酸鈉)顆粒的平均直徑為40nm。測(cè)出的Zeta電勢(shì)為-60mV。實(shí)施例28a)將實(shí)施例1a中制備的鐵黑顆粒分散體(相當(dāng)于0.3g鐵黑顆粒)用水(50ml)稀釋，將溶于乙醇(3ml)的平均分子量為70000-150000D的4∶1聚(谷氨酸、谷氨酸乙酯)(30mg，Sigma P4910)加入該分散體中，并滴加幾滴HCl。將該分散體經(jīng)超聲波振蕩和離心，并收集上清液。實(shí)施例29a)將實(shí)施例1a中制備的鐵黑顆粒分散體(相當(dāng)于0.3g鐵黑顆粒)用水(50ml)稀釋，將溶于水(5.7ml)的平均分子量約為150000-300000D的1∶4聚(谷氨酸、賴氨酸)(30mg，Sigma P0650)加入該分散體中。將該分散體經(jīng)超聲波振蕩，在5000rpm轉(zhuǎn)速下離心13分鐘，濾出上清液(0.22μm過濾器)。經(jīng)HDC測(cè)出該聚(谷氨酸、賴氨酸)顆粒的平均直徑為79nm。測(cè)出的Zeta電勢(shì)為+65mV。b)將實(shí)施例1a中制備的鐵黑顆粒分散體(相當(dāng)于0.3g鐵黑顆粒)用水(50ml)稀釋，將溶于水(9.5ml)的平均分子量約為150000-300000D的1∶4聚(谷氨酸、賴氨酸)(50mg，Sigma P0650)加入該分散體中。將該分散體經(jīng)超聲波振蕩，在5000rpm轉(zhuǎn)速下離心13分鐘，濾出上清液(0.22μm過濾器)。經(jīng)HDC測(cè)出該聚(谷氨酸、賴氨酸)顆粒的平均直徑為77nm。測(cè)出的Zeta電勢(shì)為+63mV。r1為35.5(mM·秒)-1，r2為255(mM·秒)-1。實(shí)施例30將實(shí)施例1a中制備的鐵黑顆粒分散體(相當(dāng)于0.3g鐵黑顆粒)用水(50ml)稀釋，將溶于水的dendrimer(根據(jù)US-A-4507466(The DowChemical Corporation)制備)(30mg)加入該分散體中。將該分散體經(jīng)超聲波振蕩，在5000rpm轉(zhuǎn)速下離心13分鐘并濾出上清液。穩(wěn)定性實(shí)施例31通過在121℃下熱壓15分鐘來測(cè)定下列鐵氧化物組合物的穩(wěn)定性參考實(shí)施例5b和6b、實(shí)施例1a、1b、2、3、4、9a、10a、11a、b和c、12a、13a、b和c、14b、15a、16a、17a和b、18b、19a、20a、21b、22a、23a、25a、26a、27b和29a。
實(shí)施例1a的未包覆鐵氧化物顆粒在實(shí)驗(yàn)前應(yīng)用HCl分散。其它組合物則不必處理。在熱壓前后都應(yīng)對(duì)該組合物進(jìn)行密切觀測(cè)，之后一天和一周后也應(yīng)進(jìn)行觀測(cè)。經(jīng)熱壓后，實(shí)施例1a的樣品完全離析。其它組合物則不被過熱條件影響，并且在熱壓前和熱壓后的全部觀測(cè)時(shí)間點(diǎn)均呈均一粒度分布。實(shí)施例32對(duì)本發(fā)明的聚電解質(zhì)的典型實(shí)施例-聚(苯乙烯-4-磺酸鈉)(PSSNa)的吸收情況進(jìn)行了研究。測(cè)定吸收等溫線、電泳淌度和粒度，對(duì)聚合物濃度作函數(shù)曲線。如實(shí)施例16所述，采用PSSNa對(duì)實(shí)施例1的未包覆鐵氧化物顆粒進(jìn)行包覆，但分散過程未經(jīng)超聲波振蕩。PSSNa和鐵氧化物的用量之比為9×10-3/2.5。

圖1所示為PSSNa在鐵氧化物晶體上的吸收等溫線。
經(jīng)PCS測(cè)定出來包覆的鐵氧化物顆粒的粒度為130±5nm。采用5.2g/l的顆粒密度，可通過下式估算出顆粒的表面積表面積(m2/ml)＝m.A/ρ.V其中m是每毫升顆粒質(zhì)量，ρ是顆粒密度，A和V分別是單個(gè)顆粒的面積和體積。估算出的懸浮液中的表面積是9.5×10-3m2/ml。最大吸收量為26mg/m2，指的是被吸收的聚合物形成的多層，或者是在表面形成的聚合物包線/包環(huán)。
圖2和圖3所示的是顆粒電泳淌度和其流體力學(xué)直徑對(duì)聚合物濃度所作的函數(shù)曲線。發(fā)現(xiàn)未包覆的鐵氧化物的電泳淌度為4.2±0.6μm.cm/v.s，并且隨聚合物濃度的增高而迅速降低。經(jīng)PCS測(cè)定，在高聚合物濃度時(shí)，電泳淌度為-4μm.cm/v.s，粒度穩(wěn)定在230±20nm。在下表1中對(duì)圖1-3的結(jié)果進(jìn)行說明。
圖4所示的為未包覆的鐵氧化物顆粒和PSSNa包覆顆粒的電泳淌度測(cè)定結(jié)果對(duì)該混懸液pH所作的函數(shù)曲線。未包覆的鐵氧化物表面具有典型的兩性特性，在低pH時(shí)具有高電泳淌度正值，在pH較高時(shí)就變?yōu)椴粩嘣龃蟮碾娪咎识蓉?fù)值。等電點(diǎn)位于pH為7處。當(dāng)用PSSNa包覆時(shí)，顆粒表面的特性徹底變?yōu)楹愣ㄋ嵝?。該表面即使在低pH時(shí)也具有較高的電泳淌度負(fù)值，在高pH時(shí)，表面會(huì)具有更高的負(fù)值。圖4的結(jié)果與圖1至3的結(jié)果相結(jié)合表明在該聚合物濃度下，采用酸性聚合物分子可以完全包覆未包覆氧化物的表面。表1不同的PSSNa濃度對(duì)鐵氧化物膠體混懸液的影響聚合物濃度 觀測(cè)結(jié)果＜0.01mg/ml 高電泳淌度正值，混懸液穩(wěn)定，0-0.5mg聚合物/m20.03-0.10mg/ml 淌度接近0，混懸液不穩(wěn)定，1-5mg聚合物/m20.3mg/ml以上 高電泳淌度負(fù)值，混懸液穩(wěn)定10-20mg聚合物/m2圖1膠體鐵氧化物對(duì)PSSNa的吸收情況。吸收量(mg/ml)為PSSNa濃度(mg/ml)的函數(shù)曲線?！龊汀羰墙?jīng)離心的部分，▲是經(jīng)過濾的部分。圖2膠體鐵氧化物的電泳淌度(μm.cm/V.s)對(duì)PSSNa濃度(mg/ml)所作的函數(shù)曲線。圖3膠體鐵氧化物的粒度(nm)對(duì)PSSNa濃度(mg/ml)所作的函數(shù)曲線。圖4純膠體鐵氧化物(X)的電泳淌度(μm.cm/V.s)和經(jīng)PSSNa包覆的膠體鐵氧化物(X)的電泳淌度(μm.cm/V.s)對(duì)pH所作的函數(shù)曲線。實(shí)施例33研究了鐵氧化物顆粒對(duì)典型的聚電解質(zhì)-肝素的吸收情況。測(cè)定鐵氧化物的電泳淌度和粒度，對(duì)肝素濃度作函數(shù)曲線。用HCl穩(wěn)定實(shí)施例1a的裸露顆粒，如實(shí)施例1b所示用肝素包覆，但采用旋轉(zhuǎn)攪拌30秒鐘而不是超聲波振蕩。圖5和6所示的為電泳淌度和粒度對(duì)肝素濃度所作的曲線。
電泳淌度和粒度對(duì)肝素用量所作的曲線表明顆粒表面對(duì)聚合物的吸收情況。在帶正電荷的鐵氧化物表面上不斷增加的帶負(fù)電荷分子會(huì)先使顆粒的電泳淌度下降，然后變?yōu)橄喾措娦?。接近等電點(diǎn)時(shí)，該混懸液不穩(wěn)定。圖5電泳淌度(μm.cm/V.s)對(duì)所加入肝素的濃度(μl/ml)所作的曲線。圖6粒度(μm)對(duì)所加入肝素的濃度(μl/ml)所作的曲線。安全性實(shí)施例34將參考實(shí)施例4(淀粉鐵氧化物)和實(shí)施例1b(肝素鐵氧化物)的鐵氧化物組合物以濃縮團(tuán)塊形式迅速靜脈注射給于家兔(n4-5)。注射1、2.5和10mg Fe/kg的劑量，注射后記錄60分鐘內(nèi)平均全身動(dòng)脈壓(SAP)和平均肺動(dòng)脈壓(PAP)。參考實(shí)施例4的組合物對(duì)PAP具有劑量依賴作用。在1mg Fe/kg劑量時(shí)未發(fā)現(xiàn)任何變化，在2.5mgFe/kg劑量時(shí)記錄下微小變化，從20±1mm Hg到23±1mm Hg。在10mgFe/kg劑量時(shí)，平均PAP從22±3mm Hg變?yōu)?3±6mm Hg。較高劑量會(huì)使平均SAP從129±10mm Hg緩慢降至117±8mm Hg。在注射后3-4分鐘時(shí)記錄到對(duì)PAP和SAP的最大作用，且反應(yīng)時(shí)間短(10分鐘內(nèi))。實(shí)施例1b的組合物對(duì)記錄到的流體力學(xué)參數(shù)不起作用。實(shí)施例35將參考實(shí)施例1(葡聚糖鐵氧化物)、4(淀粉鐵氧化物)5b(羧基葡聚糖鐵氧化物)，和6b(磷酸葡聚糖鐵氧化物)以及實(shí)施例1b(肝素鐵氧化物)、4(軟骨素-4-硫酸鹽鐵氧化物)和25a(聚-L-賴氨酸鐵氧化物)的鐵氧化物制劑經(jīng)靜脈注射給予鼠(n＝2-3)，劑量為1mg Fe/kg。注射后3、5、10和15分鐘記錄循環(huán)血小板數(shù)。參考實(shí)施例1和4的組合物使血小板數(shù)在注射后3分鐘和5分鐘時(shí)顯著降至注射前數(shù)值的10-17％。參考實(shí)施例5b和6b的組合物在注射后3分鐘和5分鐘也會(huì)造成血小板數(shù)的顯著減少，相當(dāng)于對(duì)照值的50-60％。所有鼠的該反應(yīng)都會(huì)迅速恢復(fù)，血小板數(shù)在15分鐘內(nèi)會(huì)重新達(dá)到對(duì)照值的75-100％。實(shí)施例1b、4和25a的組合物對(duì)循環(huán)血小板數(shù)不起作用或作用很小。實(shí)施例36在37℃下將參考實(shí)施例1(葡聚糖鐵氧化物)、4(淀粉鐵氧化物)、5b(羧基葡聚糖鐵氧化物)和6b(磷酸葡聚糖鐵氧化物)，以及實(shí)施例1b、3a(肝素鐵氧化物)、4(軟骨素-4-硫酸鹽鐵氧化物)、11a(藻酸鹽鐵氧化物)、13a(聚氨基葡糖鐵氧化物)、17a(聚-L-谷氨酸鐵氧化物)和25a(聚-L-賴氨酸鐵氧化物)在試管中用人體血清培養(yǎng)60分鐘，其濃度相當(dāng)于1mg Fe/kg(全部物質(zhì))的劑量和10mg Fe/kg(參考實(shí)施例4和5b)的劑量。全部組合物經(jīng)自動(dòng)熱壓滅菌，且不含內(nèi)毒素。采用酶免疫測(cè)試來測(cè)定人體SC5b-a補(bǔ)體復(fù)合體(TCC)(Bering)，以用來研究補(bǔ)體的活化情況。采用酵母聚糖A(Sigma)作為陽性對(duì)照物，將右旋糖(5％)或水作為陰性對(duì)照物。參考實(shí)施例的組合物均使TCC水平顯著升高。參考實(shí)施例5b的樣品作用最明顯，與陰性對(duì)照物相比，即使在較低劑量1mg Fe/kg時(shí)也會(huì)使TCC增高至6倍。發(fā)現(xiàn)參考實(shí)施例1和4的組合物對(duì)TCC具有劑量依賴作用。測(cè)定出在低劑量對(duì)TCC增至2倍，在高劑量時(shí)TCC增至6倍。參考實(shí)施例6b的組合物在低劑量1mg Fe/kg時(shí)使TCC增至3倍。與陰性對(duì)照物相比，其它被測(cè)組合物對(duì)TCC不起作用或作用很小。
權(quán)利要求
1.一種診斷劑，它含有復(fù)合顆粒材料，其中的顆粒包含診斷有效的、基本為水不溶性的金屬氧化物結(jié)晶材料，以及聚離子包覆材料，其中所述的顆粒大小小于300nm，所述的結(jié)晶材料的晶體大小為1-100nm，所述結(jié)晶材料與所述包覆材料的重量比為1000∶1至11∶1，所述的包覆材料選自天然及合成的結(jié)構(gòu)型多糖、合成多氨基酸、生理上可耐受的合成聚合物及其衍生物。
2.權(quán)利要求1的診斷劑，其中所述的包覆材料是天然或合成的結(jié)構(gòu)型多糖，它選自果膠、聚半乳糖醛酸、葡糖氨基聚糖、類肝素、纖維素，以及海生多糖。
3.權(quán)利要求2的診斷劑，其中所述的包覆材料選自皮膚素、肝素、乙酰肝素、角質(zhì)素、透明質(zhì)酸、角叉菜膠和聚氨基葡糖。
4.權(quán)利要求2的診斷劑，其中所述的包覆材料是軟骨素。
5.權(quán)利要求1的診斷劑，其中所述的包覆材料是天冬氨酸、谷氨酸或賴氨酸的均聚物或共聚物。
6.權(quán)利要求1至5的任一診斷劑，其中所述包覆材料的分子量為500至2,000,000D。
7.權(quán)利要求1至6的任一診斷劑，其中所述的金屬氧化物晶體與同表面相結(jié)合的包覆材料的重量比至少為15∶1。
8.權(quán)利要求1至6的任一診斷劑，其中所述的金屬氧化物晶體與同表面相結(jié)合的包覆材料的重量比為500∶1至20∶1。
9.權(quán)利要求1至6的任一診斷劑，其中所述的金屬氧化物晶體與同表面相結(jié)合的包覆材料的重量比為100∶1至25∶1。
10.權(quán)利要求1至9的任一診斷劑，其中所述的金屬氧化物晶體為超順磁性的。
11.權(quán)利要求10的診斷劑，其中所述的超順磁性晶體為鐵氧化物晶體。
12.權(quán)利要求1至11的任一診斷劑，其中所述的顆粒具有低于-10mV或高于+10mV的Zeta電勢(shì)。
13.一種診斷劑組合物，它包含權(quán)利要求1至12的任一診斷劑和至少一種生理上可接受的載體或賦形劑。
14.一種生產(chǎn)權(quán)利要求1的診斷劑的方法，所述方法包括(i)在pH高于9的條件下，對(duì)1-100nm的診斷有效的、基本為水不溶性的金屬氧化物晶體和包覆材料進(jìn)行共沉淀或(ii)采用包覆材料對(duì)1-100nm的診斷有效的、基本為不溶于水的診斷劑進(jìn)行包覆，從而得到粒度低于300nm的復(fù)合顆粒，并且晶體與表面結(jié)合包覆材料的重量比為1000∶1至11∶1，所述的包覆材料選自天然或合成的結(jié)構(gòu)型多糖及其衍生物，合成聚氨基酸和生理可耐受的合成聚合物。
15.一種可增強(qiáng)人體和非人體對(duì)比成像效果的方法，所述方法包括向所述軀體內(nèi)施用權(quán)利要求1至13的任一造影劑的混懸液，從而可在該造影劑所分布的軀體內(nèi)的至少一部分成像。
全文摘要
本發(fā)明涉及顆粒造影劑,特別是用于MR成像的造影劑,它包含金屬氧化物核,優(yōu)選是超順磁性鐵氧化物核,采用低包覆密度的聚電解質(zhì)包覆材料對(duì)核進(jìn)行包覆,包覆材料選自結(jié)構(gòu)型多糖和合成聚合物,特別是聚氨基酸。與常用的包覆顆粒不同的是,新顆粒減小對(duì)心血管參數(shù)、血小板減少、補(bǔ)體活化和凝血的作用或?qū)ζ洳黄鹱饔谩?br> 文檔編號(hào)A61K49/06GK1174510SQ9419520
公開日1998年2月25日 申請(qǐng)日期1994年9月27日 優(yōu)先權(quán)日1994年9月27日
發(fā)明者A·K·法爾維克, A·內(nèi)維斯塔, H·甘德森, P·斯特蘭德, J·克拉芬尼斯, A·杰科森 申請(qǐng)人:尼科梅德成像有限公司