專利名稱：：天然產(chǎn)物及相關(guān)合成化合物在治療心血管疾病中的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及天然產(chǎn)生的酚類化合物及相關(guān)合成化合物在治療或預(yù)防心血管疾病中的用途，本發(fā)明還涉及新的酚類化合物及其在治療和預(yù)防心血管疾病中的用途。
背景技術(shù)：
：在澳大利亞和多數(shù)發(fā)達國家，心血管疾病是嚴重的健康問題，并且是主要的死亡因素。已有報道，鈣是心血管功能的中樞，即鈣離子控制心肌收縮和血管的緊張性。某些藥物已經(jīng)用于增加細胞內(nèi)的鈣，以刺激衰竭的心臟(強心劑)。過去用于充血性心力衰竭的主要藥物是從洋地黃中得到的，是植物例如洋地黃中天然產(chǎn)生的。但是，其升高細胞中內(nèi)鈣的作用是間接的，因為它們抑制Na+、K+-ATPase，從而導(dǎo)致細胞內(nèi)Na+的增加，然后刺激細胞外的鈣流入，并繼而刺激衰竭的心臟。這些藥物并不理想，因為僅在略高于強心治療濃度的劑量時，它們即是有毒的。近年來還對其它強心劑進行了活性研究，并且仍然需要治療和預(yù)防各種心血管疾病的有效藥物。在多數(shù)動物細胞中，Ca2+具有多種功能。胞漿間隙中的游離鈣離子(Ca2+)濃度在電子和非電子應(yīng)機細胞中均起著細胞內(nèi)信使的作用。Ca2+的這種重要作用與細胞收縮和增生有關(guān)，特別是與心臟收縮和舒張有關(guān)。Ca2+穿過細胞的移動受到各種機制的調(diào)節(jié)。如果有一種從藥理學(xué)上控制這些過程的方法，則可以改變細胞內(nèi)游離Ca2+的含量，從而改變細胞的應(yīng)答。在相當(dāng)多的鈣儲庫可以提供胞漿間隙中的Ca2+濃度。兩個重要的儲庫是細胞外儲庫和細胞內(nèi)儲庫，后者也稱作肌漿網(wǎng)(SR)儲庫。細胞外Ca2+的進入，降低其電化學(xué)梯度，不僅僅升高細胞內(nèi)的Ca2+，也引發(fā)從SR儲庫中釋放Ca2+。這種現(xiàn)象解釋了細胞的快速收縮。細胞內(nèi)Ca2+的升高通過各種機制得到補償以從胞漿間隙中除去Ca2+，或者通過由鈣離子泵從細胞中擠出Ca2+得到補償(擠出的Ca2+與Ca2+-ATPase和Ca2+/Na+交換器生物化學(xué)上偶合)，或者通過SRCa2+-ATPase將Ca2+反儲于SR儲庫中。這些去除機理是能量依賴過程，利用ATP作為能量來源。本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，一些天然產(chǎn)生的酚類化合物和相關(guān)合成化合物控制血漿膜Ca2+-ATPase過程(下文稱作血漿膜Ca2+-ATPase)。預(yù)期它們可以改變SRCa2+-ATPase，使該酶與這種血漿膜Ca2+-ATPase類似。所發(fā)現(xiàn)的化合物可以抑制血漿膜Ca2+-ATPase，后者可引起細胞內(nèi)游離Ca2+的含量升高。同時，可以選擇一些化合物刺激SRCa2+-ATP-ase，從而增加攝取到細胞內(nèi)SR儲庫中的Ca2+，并且使更多的Ca2+可以從SR中釋放出來。這些化合物的總體作用是增加心細胞(特別是衰竭的心細胞)的收縮率和收縮力。已有報道，許多非特異性藥物抑制血漿膜Ca2+-ATPase。還有報道，多數(shù)長鏈醇、氯化血紅素和非氯化血紅素鐵以及脂肪酸部分抑制紅細胞膜的Ca2+-ATPase。已表明，Retinoids具有抗調(diào)鈣蛋白作用，因此間接作用于Ca2+-泵酶。已發(fā)現(xiàn)，倍半萜內(nèi)酯thapdsig-argin是外骨骼肌肉內(nèi)漿網(wǎng)的Ca2+-ATPase的特異性抑制劑。本發(fā)明的公開一方面，本發(fā)明提供了式(I)化合物、其可藥用鹽或酯在抑制Ca2+-ATPase酶中的用途其中，Ar是芳環(huán)系，它含有一個或多個任意取代或不取代的苯基環(huán)，該苯基環(huán)可以是不與其它環(huán)連接或稠合的，也可以是任意地與一個或多個其它任意取代或不取代的苯基環(huán)或者與一個或多個5或6元的、任意地被取代或不取代的雜環(huán)(其中雜原子是氧)連接或稠合；和其中的環(huán)系含有1-4個苯基環(huán)，和其中Ar可以通過基團X與另一個Ar連接，其中Ar是獨立選擇的；其中的X可以是任意地取代或不取代的C1-20亞烷基、C2-20亞烯基或C2-20亞炔基；R是氫；C1-20烷基、C2-20鏈烯基、C2-20鏈炔基、C2-20鏈烷?；2-20鏈烯?；?、C2-20鏈炔酰基，它們各自可以被取代或不取代；R1獨立地選自氫；任意取代或不取代的C1-12烷基、C2-12鏈烯基、C2-12鏈炔基；-COOR′、-NR′R′、鹵素、-OR′、-COR′、-CONR′R′、＝O、-SR′、-SO3R′、-SO2NR′R′、-SOR′、SO2R′、-NO2、-CN、苷、甲硅烷基；其中R′獨立地為氫；各自任意地被取代或不取代的烷基、鏈烯基或鏈炔基；和其中兩個基團R1可以連接在一起；其中任意的取代基可以是一個或多個獨立地選自下列基團的取代基C1-10烷基、C2-10鏈烯基、C2-10鏈炔基；-COOR″、-NR″R″、鹵素、-OR″、-COR″、-CONR″R″、-SR″、＝O、-SO3R″、-SO2NR″R″、-SOR″、SO2R″、-NO2、-CN；其中R″獨立地為氫、烷基、鏈烯基或鏈炔基；n＝1、2或3m＝1、2、3或4。優(yōu)選式(I)化合物用于抑制血漿膜Ca2+-ATPase。第二方面，本發(fā)明提供了式(I)化合物、其可藥用鹽或酯在治療或預(yù)防心血管疾病中的用途。第三方面，本發(fā)明提供了新的式(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)化合物或其可藥用的衍生物其中l(wèi)＝1、2或3r＝7-14，其中l(wèi)＝18-16，其中l(wèi)＝2或3R2是(1)2-羥基(2)2-羥基-4′-羥基(3)2-羥基-3-甲基(4)4-羥基-3-甲基(5)2，4-二羥基(6)3，5-二羥基-4-甲基(7)2，6-二羥基-4-甲基(8)2，4-二羥基-3-甲基(9)3-羥基-4-甲基條件是(1)當(dāng)R2是2-羥基并且1＝1時，r不是7-10，和(2)當(dāng)1＝3且R2是3，5-二羥基-4-甲基時，n不是14，和(3)當(dāng)1＝2且R2是2-羥基-3-甲基時，n不是10，和(4)當(dāng)1＝2且R2是2，4-二羥基時，r不是8-10和13，和(5)當(dāng)1＝2且R2是4-羥基-3-甲基時，r不是10；其中s＝8-16其中t＝6-15其中p＋q＝12其中p＋q＝12第四方面，本發(fā)明提供了制備式(II)化合物的方法，該方法包括(a)如果1＝1且R2是OH，則(i)如下用合適的試劑處理相應(yīng)的二酸，得到酰二氯(ii)如下用苯酚處理相應(yīng)的酰二氯(iii)如下重排二?；?iv)然后還原?；玫绞?II)化合物；(b)如果1＝2且，R2是OH，則(i)用氯化鋅和間苯二酚處理相應(yīng)的二酸；和(ii)然后還原?；?，得到式(II)化合物；(c)如果1＝2，R2是2-羥基-3-甲基，則進行上述(a)步驟(i)-(iv)，只是在(ii)中用鄰甲酚代替苯酚；(d)如果1＝2且R2是3-羥基-4-甲基，則(i)將下式相應(yīng)的二酮化合物硝化，得到相應(yīng)的二-3-硝基化合物(ii)還原二-3-硝基化合物得到二-3-氨基化合物，然后(iii)進行重氮化和水解，得到二-3-羥基化合物(iv)然后還原酮基到所需的二-3-羥基化合物；(e)如果1＝3且R2是2，6-二羥基-4-甲基(i)用LDA處理下式化合物得到二價離子，然后(ii)用下式的所需被護鏈烷醛進行處理得到(iii)脫水、脫羧化，然后還原，得到下式的中間體化合物(iv)氧化，得到(v)然后用步驟(i)的二價陰離子處理，得到(vi)脫水、脫羧化，然后脫保護，并還原，得到所需的產(chǎn)物；(f)如果1＝3且R2是3，5-二羥基-4-甲基，則(i)在四氫呋喃和六甲基磷酰胺(HMPA)中用二異丙基酰胺鋰(LDA)處理α-N，N-二甲基氨基-α-氰基-(3，5-二甲氧基-4-甲基)亞芐基，得到陰離子，然后(ii)用α，ω-二溴烷烴處理，得到(iii)與30％草酸水溶液一起回流，得到相應(yīng)的二?；衔?iv)還原酰基(v)然后在乙酸中用溴化氫脫甲基，得到式(II)化合物；(g)如果1＝3，且R2是2，4-二羥基-3-甲基，則(i)進行的(b)中的步驟(i)和(ii)，只是在(i)中用2-甲基間苯酚代替間苯二酚；(h)如果1＝2且R2是4-羥基-3-甲基，則(i)在多磷酸存在下，用鄰甲酚處理相應(yīng)的二酸，得到相應(yīng)的二?；衔?ii)然后還原?；?，得到式(II)化合物。第五方面，本發(fā)明提供了制備式(III)化合物的方法，該方法包括(i)用合適的試劑處理相應(yīng)的二酸，得到酰二氯(ii)用2-萘酚處理相應(yīng)的酰二氯，然后(iii)重排二酰基，和(iv)然后還原?；?，得到式(III)化合物。第六方面，本發(fā)明提供了制備式(IV)化合物的方法，該方法包括在酸催化劑存在下，用乙酰乙酸乙酯處理4-烷基間苯二酚，得到式(IV)化合物。優(yōu)選的是，Ar是苯基、萘、蒽、并四苯或菲。更優(yōu)選的是Ar是苯基。所有烷基、鏈烯基或鏈炔基的碳鏈可以是直鏈或支鏈的。鹵素包括溴、氯、氟或碘。5或6-元雜環(huán)可以是飽和的、部分不飽和的或不飽和的?？伤幱玫难苌锇伤幱玫拿?、酯和酸加成鹽。式(II)化合物的制備中，優(yōu)選通過用亞硫酰氯處理相應(yīng)的二酸而形成二氯酸?？梢栽囉萌魏纹渌m合的試劑。在式(IV)化合物的制備中，優(yōu)選的催化劑是三氟化硼醚合物或類似物。酰基重排到在苯基環(huán)上的所需位置優(yōu)選使用CS2和AlCl3作為催化劑進行。催化劑一般可以是任何Lewis酸如BF3、ZnCl2、FeBr3等。?；倪€原反應(yīng)優(yōu)選使用汞齊化鋅和鹽酸與任意的乙酸的混合物進行。硝化反應(yīng)優(yōu)選按照常規(guī)方法，使用硝酸與硫酸(HNO3/H2SO4)進行。硝酸鹽還原成胺優(yōu)選使用氯化亞錫和鹽酸(SnCl2/HCl)進行。重氮化優(yōu)選通過用硫酸/亞硝酸鈉水溶液處理進行，水解一般通過用10％硫酸進行。脫水脫羧化作用優(yōu)選通過使用N-乙氧基羰基-2-乙氧基-1，2-二氫喹啉進行，脫保護通過使用p-TsOH/MeOH進行。另一面，本發(fā)明提供了式(I)化合物或其可藥用的衍生物以用于制備抑制Ca2+-ATPase、優(yōu)選血漿膜Ca2+-ATPase用的藥物。本發(fā)明的再一方面是提供式(I)化合物或其可藥用衍生物以用于制備治療或預(yù)防心血管疾病用的藥物。本發(fā)明的簡要說明圖1表明合成烷基酚的濃度對血漿膜抑制作用的依賴關(guān)系?！?-壬基酚▲3-壬基酚●2-辛基酚○4-辛基酚_2-癸基酚■4-壬基酚_4-癸基酚圖2表明合成二(羥基苯基)烷烴的濃度對紅細胞漿膜抑制作用的依賴關(guān)系?！?，10-二(2-羥基苯基)癸基□1，12-二(2-羥基苯基)十二烷○1，14-二(2-羥基苯基)十四烷▲1-(2-羥基苯基)-10-(4-羥基苯基)癸基_1-(2-羥基苯基)-12-(4-羥基苯基)十二烷△1-(2-羥基苯基)-14-(4-羥基苯基)十四烷■1，10-二(4-羥基苯基)癸基_1，14-二(4-羥基苯基)十四烷圖3表明間苯二酚衍生物的濃度對紅細胞漿膜抑制作用的依賴關(guān)系。□3，5-二溴-2，4-二羥基-6-壬基苯甲酸乙酯●3，5-二溴-2，4-二羥基-6-癸基苯甲酸乙酯△2，4-二羥基-6-壬基苯甲酸乙酯▲2，4-二羥基-6-癸基苯甲酸乙酯圖4表明了叔丁酚的濃度對紅細胞漿膜抑制作用的依賴關(guān)系?！?，3-二叔丁基-4-甲基酚□2，6-二叔丁基酚▲2，4，6-三叔丁基酚圖5表明2-壬基酚衍生物的濃度對Ca2+-ATPase抑制作用的依賴關(guān)系。●2-壬基酚/○(+CaM)_3-甲基-6-壬基酚/_(+CaM)■4-甲基-6-壬基酚/□(+CaM)●4-硝基-2-壬基酚/○(+CaM)_4-溴-2-硝基-6-壬基酚(+CaM)□2-溴-4-硝基-6-壬基酚(+CaM)▲4-溴-2-壬基酚/△(+CaM)■4-壬基間苯二酚圖6表明α，ω-二[2-羥基(3、4和5-甲基)苯基]烷烴的濃度對Ca2+-ATPase抑制作用的依賴關(guān)系。●1，8-二(2-羥基苯基)辛烷/○(+CaM)_1，9-二(2-羥基苯基)辛烷/_(+CaM)■1，10-二(2-羥基苯基)癸烷/□(+CaM)▲1，12-二(2-羥基苯基)十二烷/△(+CaM)◆1，10-二(2-羥基-3-甲基苯基)癸烷/◇(+CaM)●1，10-二(2-羥基-4-甲基苯基)癸烷/○(+CaM)■1，10-二(2-羥基-3-甲基苯基)癸烷/□(+CaM)圖7表明α，ω-二[2，4-二羥基苯基]烷烴的濃度對Ca2+-ATPase抑制作用的依賴關(guān)系。●1，8-二(2，4-二羥基苯基)辛烷/○(+CaM)_1，10-二(2，4-二羥基苯基)辛烷/_(+CaM)■1，11-二(2，4-二羥基苯基)十一烷/□(+CaM)▲1，12-二(2，4-二羥基苯基)十二烷/△(+CaM)圖8表明α，ω-二[羥基(甲基)苯基和萘基]癸烷的濃度對Ca2+-ATPase抑制作用的依賴關(guān)系。◆1，10-二(3-羥基苯基)癸烷/◇(+CaM)●1，10-二(3-羥基-4-甲苯基)癸烷/○(+CaM)_1，10-二(4-羥基-3-甲苯基)癸烷/_(+CaM)■1，10-二(2-羥基-1-萘基)癸烷/□(+CaM)▲1，1-二(2-羥基苯基)癸烷/△(+CaM)圖9表明酚類天然產(chǎn)物的濃度對Ca2+-ATPase抑制作用的依賴關(guān)系。5，7，2′，6′-四羥基-8-熏衣草烷基(lavandulyl)黃烷酮5，7，6′-三羥基-8-熏衣草烷基黃烷酮5，2′，6′-三羥基-8-熏衣草烷基-7-甲氧基黃烷酮實施本發(fā)明的方式式(I)化合物包括天然產(chǎn)生的化合物和合成制備的相關(guān)化合物。式(I)的天然產(chǎn)生化合物的是采用標準文獻的技術(shù)，從Proteaceae科的地方性澳大利亞植物中提取出來的，例如參見RitchieE，TaylorWC和VautinSTK(1965)，ProteaceaeI的化學(xué)研究Aust.J.Chem.，18，2015-2020；RasmussenM等(1968)Proteace-aeIII的化學(xué)研究Aust.J.Chem.，21，2989-3000和RidleyDD等(1970)ProteaceaeIV的化學(xué)研究Aust.J.Chem.，23，147-183。從Grevillea和Persoonia中提取代鏈烷基酚。從在澳大利亞，悉尼(Sydney，Australia)收集的Graviilearobusta中提取并分離具有結(jié)構(gòu)式(II)和(III)的新化合物。從Sydney大學(xué)的DepartmentofPharmacy的檢查部(inspection)得到有保證的樣品。簡單地說，通過用氯仿/乙醇(1∶1)滲濾3天，提取出2公斤樣品。真空濃縮提取物后，使用短硅膠柱對殘余物進行真空色譜。其它落入式(I)范圍的化合物可以按照文獻的方法制備或者可以購買到。合成的原料是可以購買到的或者可以按照文獻的方法制備。按照公開的方法制備2-和4-取代的烷基酚和α，ω-二(羥基苯基)烷烴(參見EMillerandWHHartung，Organicsynth-eses(1943)，collectivevolumeII，543-545andRRReadandJWood，Organicsyntheses(1955)，collectivevolumeIII，444-446)。合成分三個階段連續(xù)進行首先，由酸和苯酚形成酯；第二，用AlCl3作催化劑重排?；蛊湮挥诒椒迎h(huán)上相對于羥基的2-和4-位；以及第三，用汞齊化鋅和鹽酸還原?；Ｖ嘏攀菚r間依賴反應(yīng)，并且一般在短時間內(nèi)得到位于對羥基的4-位的酰基。在每一合成反應(yīng)階段，使用短柱真空色譜以從反應(yīng)混合物中分離和純化產(chǎn)物。還使用TLC法來鑒定產(chǎn)物以及確定柱色譜所需的洗脫溶劑。每一階段產(chǎn)物還需通過NMR和CI-MS分析確定其特征。按照另一種方法制備3-取代的苯酚衍生物，該方法描述于ItokawaH，etal(1989)，Aquantitativestructureactivityrelationshipforantitumorlong-chainphenolsfromGinkgobilobaL.Chem.Pharm.Bull.37，1619-1621中d該方法用于制備3-壬基酚，以用于將其與2-和4-取代的異構(gòu)體進行Ca2+-ATPase抑制活性比較。由此，可以確定酚環(huán)上的取代基對于Ca2+-ATPase抑制作用的重要性。采用與上述對烷基酚所述類似的方法制備、分離和純化聯(lián)苯酚化合物，不同的是分兩個步驟制備酯。其中R2是2-羥基-3-甲基的式(II)化合物按照與二羥基苯基烷類似的方法制備，不同的是按照KKaKemi等在AntioxidantsIIIYakugakuZasshi86[9]，791-796(1966)中所述的方法，使用鄰甲酚代替苯酚。按照上述KKakemi等所述的方法，采用與制備α，ω-二-(3-羥基苯基)烷烴類似的方法，制備式(II)的3-羥基-4-甲基化合物，不同的是使用α，ω-二(4-甲基苯基)-α，ω-鏈烷二酮代替α，ω-聯(lián)苯基-α，ω-鏈烷二酮。在氯化鋅存在下，通過間苯二酚與相應(yīng)的二羧酸反應(yīng)得到中間體鏈烷二酮，然后將其還原而制備(II)的2，4-二羥基化合物。按照SOhta等在AtotalsynthesisofgrifolinChem.Phar.Bull.36[6]2239-2243(1988)中所述的方法，采用與制備奇果菌至素類似的方法，制備其中R2是2，6-二羥基-4-甲基的式(II)化合物。按照上述SOhta等的方法，得到步驟(e)(i)中的起始化合物。通過用芐基溴(或芐基碘)將式X-CH2-(CH2)r-6CH2-OR(其中R＝H，X＝Cr或Br)的市售化合物烷基化，得到其中R＝CH2Ph的中間體化合物，然后將其水解得到HOCH2(CH)r-6CH2OCH2Ph，然后氧化得到OH(CH2)r-6CH2OCH2Ph而制備步驟(e)(ii)中的醛。按照與上述K.Takahashi等在J.Org.Chem.1983，48，1909-1912中所述類似的方法，制備其中R2是3，5-二羥基-4-甲基的式(II)化合物。按照與上述J.vonBraun等在Ber.(1941)，74B，1772-1783中所述類似的方法，制備其中R2是2，4-二羥基-3-甲基的式(II)化合物，不同的是用2-甲基間苯二酚代替間苯二酚?？刂芀.Kakemi等在YakugakuZasshi(1966)，86，791-796中的所述的方法，采用與制備α，ω-二(2-羥基苯基)烷烴的類似的方法，制備式(III)化合物。按照SPStarkov，GAGoncharenko和AIPanasenko在Zh.Obshch.Khim(1993)，63(5)，1111-1115中所述的方法，采用與制備6-烷基-7-羥基-4-甲基香豆素類似的方法，制備(IV)化合物。其它式(I)化合物按照下列文獻中的方法制備雙酚類1，10-二(2-羥基苯基)癸基和1，10-二(3-羥基苯基)癸烷AntioxidantsIII.KKakemi，TArita，RHori，andHTakenakaYakugakuZasshi86(1966)791-7961，10-二(4-羥基苯基)癸烷α，ω-二-p-羥基苯基烷烴EMRichardsonandEEReidJ.Am.Chem.Soc.(1940)62413-415癸二酸與酚類縮合物的Fries轉(zhuǎn)變1，8-二苯甲?；镣镴PVarmaandJSAggarwalJ.IndianChem.Soc.(1959)3641-45α，ω-二(對羥基烷烴)的合成YEDoroshenkoandVASergeevZh.OrganKhim.(1965)1(9)1602-16041，12-二(4-羥基苯基)十二烷α，ω-二(對-羥基烷烴)的合成YEDoroshenkoandVASergeevZh.Organ.Khim(1965)1(9)1602-16041，14-二(4-羥基苯基)十四烷HGoldmannetal.J.Am.Chem.Soc.(1988)110(20)6811-68171，10-二(4-羥基-3-甲基苯基)癸烷PSchlackandWKollerGer.1,086,711Aug11，1960.1，1-二(2-羥基苯基)癸烷GCasiraghietal.JCHem.Soc.PerkinTrans1(1982)，3805-808.烷基酚芳族羥基酮的合成。I.具有正C4-C9鏈的鄰和對?；?。GSandulescoandAGirardBull.Soc.Chim.Fr(1930)47(4)1300-1314殺真菌活性和化學(xué)組成DWoodJ.Chem.Soc.(1955)，4391-4393用1-十二烷和1-癸醇使苯酚烷基化。文獻勘誤BCampbell，SDonaldetal.Bull.Cnem.Soc.Japan(1990)63(12)3665-3669癸基酚和十二烷基酚環(huán)己基酚(鄰和對)在三氟化硼存在下用環(huán)己烯將苯酚直接烷基化HLejebureandELevasCompt.Rend.(1945)220782-784and826-827HLejebureandELevascompt.Rend.(1945)221301-303α，ω-二(2，4-二羥基)化合物的合成。脂族二羧酸與間苯二酚的反應(yīng)，JvonBraunetalBer.74B1772-1783(1941)。癸二酸與酚類縮合物的Fries轉(zhuǎn)變1，8-二苯基酰辛烷，JPVarmaetal，J.IndianChem.Soc.3641-45(1959).位于血漿膜上的Ca2+-刺激的、Mg2+-依賴性腺苷三磷酸酶(Ca2+-ATPase)根據(jù)其電化學(xué)Ca2+梯度排出Ca2+。已有報道，Ca2+-ATPase不僅僅在總的細胞Ca2+濃度調(diào)節(jié)中起著根本的作用，而且還調(diào)節(jié)和介導(dǎo)Ca2+移動激素和神經(jīng)傳遞質(zhì)的作用。(參見PripicV，GreenKC，BlackmorePRandExtonJHVasopressin-，angi-otensinII-，andα1-adrenergic-inducedinhibitionofCa2+-transportationbyratliverplasmamembranevesicles，(1984)J.Biol.Chem.259，1382-1385andRegaAF，Gara-hanPJ，(1986)TheCaPumpofPlasmamembranes，CRCPresInc.，F(xiàn)lorida.測定天然和合成的式(I)化合物影響人紅細胞血漿膜Ca2+-ATP-ase的能力。先前對人紅血細胞漿膜中的酶Ca2+-ATPase進行過研究，并且已經(jīng)公開了通過調(diào)鈣蛋白的刺激作用和通過類脂的活化作用以及蛋白分解作用和其主要的結(jié)構(gòu)(參見CarafoliE(1991)，血漿膜鈣泵，PhysiologicalReviews71，129-153)。式(I)化合物抑制Ca2+-ATPase的活性示于表1中，并且圖示于圖1、2、3和4。表1天然和合成式(I)化合物的結(jié)構(gòu)和抑制Ca2+-ATPase的IC50值(以100μm的濃度測定抑制％)Ca2+-ATPase的抑制作用化合物來源百分數(shù)(％)IC502-辛基酚b100322-壬基酚b95302-壬酰酚b32＞1002-癸基酚b8542壬基酚(市售)a10027.54-辛基酚b28924-叔辛基酚a94603-壬基酚b69644-壬基酚b221144-癸基酚b241702-環(huán)己基酚h281864-環(huán)己基酚h162711，10-二(2-羥基苯基)b100i7.6-癸烷1，12-二(2-羥基苯基)e100i8.3-十二烷1，14-二(2-烴基苯基)十四烷e8428Ca2+-ATPase的抑制作用化合物來源百分數(shù)(％)IC501-(2-羥基苯基)-10-(4-羥基苯基)e100j12-癸基1-(2-羥基苯基)-12-(4-羥基苯基)e9918.8十二烷1-(2-羥基苯基)-14-(4-羥基苯基)e6081-十四烷1，10-二(4-羥基苯基)b5293-癸烷注i-在25μMj-在50μMk-在37μMCa2+-ATPase的抑制作用化合物來源百分數(shù)(％)IC501-(3，5-二羥基苯基)-14-(3，5-二羥基-4-c100j17甲基苯基)十四烷(grebustol-A)1，14-二(3，5-二羥基-4-甲基苯基)f9816-十四烷(striatol)striatol-Bf10040norstriatol-Bc61k355-壬基間苯二酚f441081，14-二(4-羥基苯基)b5280-十四烷1，14-二(3，5-二羥基苯基)f35＞100十四烷(bisnorstiatol)1，14-二(3.5-二羥基苯基)c9050十四-Z-6-烯(grebustol-B)Ca2+-ATPase的抑制作用化合物來源百分數(shù)(％)IC502，4-二羥基f7362-6-壬基苯甲酸乙酯3，5-二溴2，4-二羥基f9544-6-壬基苯甲酸乙酯)grevillolc441435-癸基間苯三酚f301352，4-二羥基-6-癸基苯甲酸乙酯f60853，5-二溴-2，4-二羥基-6-f7369癸基苯甲酸乙酯2-E，E法呢基-5-甲基間苯二酚d10022.5(奇果菌素)4-E，E法呢基-5-甲基間苯二酚d10023.3(neogrifolin)4-十二烷基間苯二酚a68694-己基間苯二酚a17259Ca2+-ATPase的抑制作用化合物來源百分數(shù)(％)IC502，4，6-三-叔丁基酚a79153，5-二叔丁基-兒茶酚a76842，6-二叔丁基a6966-4-甲基酚(BHT)2，6-二-叔丁基酚a61792，6-二叔丁基-a44＞4004-甲氧基酚(BHA)2，2′-亞甲基g7445(4-甲基-6-叔丁基酚)在調(diào)用蛋白有(CaM)或沒有(-CaM)的情況下，合成的和天然的化合物在抑制Ca2+-ATPase中的活性示于下面表1A，并圖示于圖5、6、7、8和9。表1A來源化合物IC50(-CaM)(+CaM)b2-壬基酚3640b2-甲基-6-壬基酚--b3-甲基-6-壬基酚5260b4-甲基-6-壬基酚8075b2-溴-6-壬基酚--b4-溴-6-壬基酚5255b2，4-二溴-6-壬基酚--b2-硝基-6-壬基酚--b4-硝基-6-壬基酚8070表1A來源化合物IC50(-CaM)(+CaM)b2-溴-4-硝基-6-壬基酚-70b4-溴-2-硝基-6-壬基酚-65.5b4-壬基間苯二酚125NDa4-十二基間苯二酚80100b2-溴-6-壬基間苯二酚400400b4-6-溴-壬基間苯二酚400400b2，4-二溴-6-壬基間苯二酚--b1，8-二(2-羥基苯基)辛烷2424b1，9-二(2-羥基苯基)壬烷13.514表1A來源化合物IC50(-CaM)(+CaM)b1，10-二(2-羥基苯基)癸烷8.49.0e1，12-二(2-羥基苯基)十二烷12.513b1，10-二(2-羥基-3-甲基苯基)5055-癸烷b1，10-二(2-羥基-4-甲基苯基)2929-癸烷b1，10-二(2-羥基-5-甲基苯基)2220.5-癸烷b1，8-二(2-二羥基苯基)辛烷5048b1，10-二(2，4-二羥基苯基)1016癸烷表1A來源化合物IC50(-CaM)(+CaM)e1，11-二(2，4-二羥基苯基)2521.7十一烷e1，12-二(2，4-二羥基苯基)1220十二烷e1，10-二(2，4-二羥基-3-甲基100100苯基)癸烷b1，10-二(3-羥基苯基)癸烷3032e1，10-二(3-羥基-4-甲基苯基)5148癸烷b1，10-二(4-羥基-3-甲基苯基)10094癸烷b1，1-二(2-羥基苯基)癸烷7468表1A來源化合物IC50(-CaM)(+CaM)e1，10-二(2-羥基-1-萘基)9290癸烷e6-癸基-7-羥基-4-甲基香NANA豆素b2-甲基-5-壬基-間苯二酚NANAi5，7，2′，6′四羥基-8-熏衣20ND草烷基黃烷酮i5，7，，6′三羥基-8-熏衣26.5ND草烷基黃烷酮i5，2′，6′三羥基-8-熏衣45.3ND草烷基-7-甲氧基黃烷酮NA無抑制活性；ND未測來源a＝由Aldrich，Milwaukee，WI，USA出售b＝按文獻的方法合成制備c＝從Grevillea中提取d＝由ProfShibata提供的天然產(chǎn)物[MisasaH，MatsueY，VeharaH，TanakaH，IshiharaM，ShibataH，(1992)TyrosinaseinhibitorsfromAlbatrellusconflurns，Biosci.Biotech.Biochem.，561660-1661]e＝本發(fā)明的式(II)新化合物f＝由ProfWCTaylor提供的天然和合成物質(zhì)，參見第9頁第25-30行CleaverL，CroftJA，RitchieEandTaylorWC(1976)ChemicalstudiesoftheProteaceaeIXAust.J.Chem.，291980-2001]g＝由Merck，Darmstardt，Germany出售h＝由ProfKanzoSakata，ShizuokaUniversity，ShizuokaJapan提供的合成物質(zhì)[參見環(huán)己基酚(鄰和對)第17頁i＝由Assoc.Prof.CChaichantipyuth，ChulalongkornUniversi-tyofThailand提供的天然物質(zhì)(參見RuangrungsiNetal，Photochemistry，31，999-1001，1992andIinumaMetal，Photochemistry，33，203-208，1993。化合物抑制Ca2+-ATPase的能力以其單劑量的抑制％為特征，或者以由劑量應(yīng)答曲線得到的IC50值為依據(jù)。因此，最有效的化合物其曲線位于圖的左手側(cè)。由圖2可以看出，1，10-二(2-羥基苯基)癸烷和至少1，12-二(2-羥基苯基)癸烷在合成的酚類化合物中具有最強的Ca2+-ATPase抑制作用。其抑制活性是天然產(chǎn)物1，14-二(3，5-二羥基-4-甲基苯基)十四烷(striatol)的2倍高，并且優(yōu)于2-烷基酚系列。烷基酚中以2-壬基酚的活性為最大(IC50＝30μM)。壬基酚和辛基酚的結(jié)果表明烷基酚的效力順序為2-烷基酚、4-分枝的烷基酚、和4-烷基酚。類似地，在所實驗的烷基間苯二酚中，4-十二烷基間苯二酚的效力最強，并且在實驗的烷基間苯二酚和鏈烯基間苯二酚烷中，奇果菌素和新奇果菌素(neogr-ifolin)是最有效的。結(jié)果還表明，在酚的2-位取代對于加強Ca2+-ATPase抑制作用的重要性。結(jié)果表明在鄰位和對位取代的化合物之間，效力有顯著的差別，而間位取代的化合物活性居于二者之間。結(jié)果還表明合成化合物抑制效力的結(jié)構(gòu)優(yōu)勢，以及二化合物的最佳亞甲基鏈長度是十。1，10-二(2-羥基苯基)癸烷和1，10-二(2，4-二羥基苯基)癸烷在合成物質(zhì)中是最有效的血漿Ca2+-ATPase抑制劑。通常，在存在或缺乏調(diào)鈣蛋白(CaM)時，合成化合物的抑制活性沒有明顯差別(指表1A)。但是，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，較高濃度的實驗化合物對血漿膜Ca2+-ATPase比沒有CaM時有略高的抑制作用(指圖5、7、8、9)。這說明該化合物可以抑制CaM刺激活性。培養(yǎng)的血管平滑肌細胞中的45Ca流出由兩種主要機理組成；一種機理是依賴于細胞外的鈉，由Na+-Ca2+交換器介導(dǎo)(Ca2+流出依賴于Na+)，另一種機理是不依賴于細胞外的鈉，但是由Ca2+泵介導(dǎo)(Ca2+流出非依賴于Na+)。研究了striatol對培養(yǎng)物中大鼠胸主動脈平滑肌細胞中的鈣(45Ca2+)流出的作用。45Ca2+流出是在完整(全)細胞中血漿膜Ca2+-ATPase的量度(加Na+Ca2+交換器)。結(jié)果如下20μM5分鐘-部分抑制20μM10分鐘-部分抑制20μM30分鐘-完全抑制式(I)化合物對血漿膜Ca2+-ATPase具有顯著的抑制活性，并且通常適用于治療心血管疾病。由于這些化合物對Ca2+-ATPase酶的總的作用或者對NA+，K+-ATPase酶的作用，因此這些化合物是有用的。特別是，式(I)化合物質(zhì)適用于治療或預(yù)防慢性心力衰竭、絞痛、高血壓或心率失常。因此，另一方面，本發(fā)明提供了式(I)化合物或其可藥用衍生物在制備治療或預(yù)防心血管疾病用的藥物中的用途。用于上述疾病的所需活性化合物的有效量將根據(jù)給藥途徑、所治療的疾病和進行治療的主體而變化，并且最終由醫(yī)生決定。在上述治療中，活性成分優(yōu)選以藥物制劑的形式存在。本發(fā)明的藥物制劑含有活性成分和一種或多種可藥用載體以及可有可無的其它治療成分。該制劑可以方便地制成單位劑量形式，并且可以按照常規(guī)制藥技術(shù)制備。因此，該制劑可以包括一種或多種輔助成分，例如稀釋劑、緩沖劑、調(diào)味劑、粘結(jié)劑，崩解劑、表面活性劑、增稠劑、潤滑劑和防腐劑等。典型的片劑含有1-50mg活性成分、50-200mg乳糖、7-28mg小麥淀粉和0.25-1mg硬脂酸鎂。優(yōu)選地，該片劑含有1-50mg活性成分、約97mg乳糖，約14mg小麥淀粉和約0.5mg硬脂酸鎂。式(I)化合物也可以通過抑制H+，K+-ATPase(胃壁細胞中的質(zhì)子泵)，用于治療潰瘍(消化潰瘍)，或者可以用作脫色素劑、抗糖尿病、抗血栓溶解、抗動脈粥樣硬化、抗氧化劑、抗癌、抗炎或抗病毒劑。試驗-合成儀器薄層層析板通過使用UVSL-58礦質(zhì)光燈，多區(qū)域UV-254/366nm而目視測定。使用予涂層硅(PrecoatedSi)膠板(Merck，Art5554)。高效液相色譜分析是用帶有PC-3800調(diào)節(jié)器的Beckman110B溶劑組件來進行。檢測是用Spectra-PhysicsSpectra100可變波長檢測器進行。分析柱是Activonexsil100/10ODS，250×4.6mm內(nèi)經(jīng)(反相C18)。制備性短柱為連結(jié)有一個一升玻璃鐘罩的70×65mm內(nèi)徑的柱。1H-和13C-NMR譜是使用CDCl3作溶溶劑并以四甲基硅烷為參照物，在VarianGemini300和JoelFX90Q(用于銀樺醇)分光計上獲得。UV譜是在PerKin-ElmerLambda5UV/VIS分光光度計上測量?；瘜W(xué)離子和電子沖擊質(zhì)譜是在FinniganTSQ46分光計上完成。所有的化學(xué)離子譜都是用甲烷作為試劑體來完成的。材料乙酸乙酯和石油(70-75℃)在使用前蒸餾。亞硫酰氯在75-80℃蒸餾。二氯甲烷、氯仿、甲醇為HPLC級。Merck硅膠60H(Art.7736)用于制備TLC和短柱色譜。3，4，5-三甲氧基苯甲醛，n-丁基鋰，十一烷二酸，1，6-二溴己烷，1，8-二溴辛烷，1，10-二溴癸烷，1，12-二溴十二烷，2-甲基間苯二酚，1，10-癸烷二羧酸和1，12-十二烷二羧酸購自ALdrich化學(xué)公司。I、合成烷基苯酚1、制備2-和4-辛烷基苯酚1.1、制備苯基辛酸酯通過將亞硫酰氯(10ml)慢慢加入到純苯酚(6.5g)和辛酸(10g)的混合物中而制備酯。加熱反應(yīng)混合物以除去二氧化硫和氯化氫氣體。粗品混合物在95-100℃/5mmHg蒸餾。苯基壬酸酯和苯基癸酸酯同樣制備。所得酯在105-110℃和120-125℃/5mmHg分別蒸餾。酯的產(chǎn)率為81-84％。1.2、制備2-和4-辛?；椒訉o水氯化鋁(7g)和二硫化碳置于裝有回流冷凝器、50ml滴液漏斗和強磁力攪拌器的三頸圓底燒瓶中。苯基辛酸酯(10g)通過滴液漏斗慢慢加入到攪拌的懸液中。在所有酯加畢后，混合物再用蒸汽浴加熱至輕微回流直至幾乎停止產(chǎn)生氯化氫(約1/2Hr)?；亓骼淠鬓D(zhuǎn)為向下并蒸餾出二硫化碳。蒸汽浴改為油浴，將其加熱至140℃并在140-150℃保持一小時?；旌衔镒兂聿⒆罱K凍凝成為樹脂狀物質(zhì)。冷卻固體，通過先慢慢加入濃鹽酸(6ml)和水(6ml)的混合物再加入水(10ml)將鋁的復(fù)合物分解?；旌衔锓胖眠^夜，收集表面的大的固體部分(主要是4-辛酰基苯酚)。液體部分用乙酸乙酯萃取。萃取物與固體部分合并，所得混合物用無水硫酸鈉干燥，過濾并蒸發(fā)得到粗品混合物。2-和4-辛?；椒赢a(chǎn)品根據(jù)其極性不同通過短柱真空色譜分離。2-辛?；椒赢a(chǎn)率為29-34％，4-辛?；椒訛?6-50％。產(chǎn)品再通過NMR和CI-MS分析鑒定(參考表3&4)。通過短柱真空色譜分離產(chǎn)品粗品混合物先溶解于二氯甲烷(一份)然后溶于石油(四份)。所得混合物(25ml)在真空下置于(直徑70mm×30mm)的硅膠床上并用石油(40ml)連續(xù)洗滌。用于分離產(chǎn)品的洗脫液溶劑混合物為石油溶劑油/乙酸乙酯自9∶1至1∶1(20級分)的梯度溶劑。在UV光下通過TLC檢測餾分以確定產(chǎn)品間的分離程度。對餾分#5-10(確定為2-辛?；椒?和#14-20(確定為4-辛?；椒?進行NMR和CI-MS分析。1.3、制備2-和4-辛基苯酚將汞齊化鋅(10g)置于100ml裝有攪攔器和回流冷凝器的圓底燒瓶中。加入乙酸(10ml)和濃鹽酸(10ml)的混合物，然后加入2-辛?；椒?2g)(或4-辛?；椒?的乙酸(5ml)溶液?；旌衔飻嚢璨⒒亓?天。加入20％(w/v)的氯化鈉水溶液(20ml)，用石油(20ml)提取混合物，石油部分用無水硫酸鈉干燥，過濾并通過短柱真空色譜純化。得到82-84％的產(chǎn)率。所用柱色譜方法按照上述相同的方法。通過NMR和CI-MS分板檢定產(chǎn)品(參考表3&4)。注1鋅在反應(yīng)瓶中的通過用氯化汞(0.2g)的水(15ml)溶液淹沒并在30分鐘內(nèi)偶爾攪拌而轉(zhuǎn)化成汞齊化的形式。傾去溶液并用水漂洗鋅一次。2加入20％(w/v)的氯化鈉水溶液以增加水相的離子強度，以便辛基苯酚能被萃取到有機相中。壬基和癸基按照辛基苯酚的描述制備。每個階段的產(chǎn)品通過NMR和CI-MS分析鑒定(參考表3&4)。2、制備3-壬基苯酚2.1、制備3-芐氧基苯甲醛在100ml圓底燒瓶中裝入3-羥基苯甲醛(5g)、芐基氯(6g)、碘化鈉(8g)和碳酸鉀(10g)。反應(yīng)混合物密封并攪拌一天。粗產(chǎn)品用乙酸乙酯(20ml)萃取。有機部分用蒸餾水洗滌兩次以除去所有水溶性物質(zhì)。乙酸乙酯部分用無水硫酸鈉干燥并蒸發(fā)得到粗品固體。通過按照辛基苯酚描述的柱色譜方法純化該固體。通過NMR和CI-MS分析鑒定產(chǎn)品(參考表3&4)。2.2、制備3-壬基苯酚在無水乙醚(5ml)中用鎂(248mg)和1-溴辛烷(1.8)制備格利雅(Grignard)試劑。加入微量的固體碘以引發(fā)反應(yīng)。再加入乙醚(10ml)。反應(yīng)攪拌至所有鎂溶解，再將3-芐氧基苯甲醛(10g)加入到反應(yīng)混合物中。反應(yīng)在室溫回流4小時。然后加入冰水。分離有機相并用含有1.5M硫酸(2×25ml)、10％碳酸鉀(2×25ml)、水(20ml)、1M鹽酸(20ml)的氯化鈉溶液洗滌，用無水硫酸鈉干燥并蒸發(fā)得到產(chǎn)品(產(chǎn)率79％)。部分產(chǎn)品(500mg)在含濃硫酸(10滴)的乙酸乙酯(50ml)中，在10％披鈀碳(130mg)上催化還原而氫化。反應(yīng)混合物在室溫攪拌一天，混合物然后過濾，蒸發(fā)并通過柱色譜方法純化。通過NMR和CI-MS分析鑒定產(chǎn)品(參考表3&4)。II、合成α，ω-二(羥基苯基)烷烴1、制備二苯基癸烷雙酸制備、分離及純化的方法與辛基苯酚的描述相似，除酯的制備如上所示是兩個分離的步驟中完成，以代替苯基辛酸酯中所述的一步法。首先，酰基二氯通過二羧酸(5g)和亞硫酰氯(20ml)的混合物在60-70℃回流兩小時而制備。然后通過蒸發(fā)除去亞硫酰氯，剩余的產(chǎn)品溶于甲苯(5ml)。蒸發(fā)甲苯以除去全部痕量的亞硫酰氯。其次，苯酚(?；鹊?×克分子)加入?；戎小?zé)峄旌衔镆猿ヂ然瘹錃怏w。冷卻固化產(chǎn)品并通過柱色譜純化。酯的產(chǎn)率為96-98％。2、制備1，10-二(羥基苯基)癸烷-1，10-二酮3、制備1，10-二(2-羥基苯基)癸烷產(chǎn)器通過NMS和CI-MS分析鑒定(參考NMR和CI-MS表3&4)。III、合成α，ω-二[2-羥基-(3-，4-或5-甲基苯基]烷烴按照KKakemi等在《抗氧化劑(Antioxidants)III.》KKake-mi，YArita，RHori和HTakenaka.YakugakuZashi86，791-796(1966)所述脂肪族二羧酸酰氯(1摩爾)(如癸二酰氯)加入到含有無水氯化鋁(2.5摩爾)的苯酚(2.2摩爾)的四氯乙烷溶液中?；旌衔镌?0-80℃攪拌5-6小時。用冰水和濃鹽酸(1∶1)分解產(chǎn)品。分離有機層并減壓濃縮。殘余物用乙酸乙酯萃取并用水洗滌兩次。除去溶劑后，產(chǎn)品進行梯度色譜以分離相應(yīng)的二酮，用Clemmensen還原該二酮得到標題化合物。產(chǎn)品自石油或石油-乙酸乙酯中重結(jié)晶得到無色晶狀固體。此方法與制備二(2-羥基-1-萘基)癸基的相似。IV、1，10-二(4-羥基-3-甲基苯基)癸烷制備是通過Schlack和Koller在《芳基脂肪基二酮》，PSchl-ack和WKoller.Ger.1086711Aug.11，1960中報道的方法。標題化合物通過在多磷酸(3摩爾)存在下以癸二酸(1摩爾)處理鄰甲酚(2.2摩爾)而制備?；旌衔镌?0℃攪拌4小時并冷卻后倒入冰水中。沉淀物過濾、溶解于乙酸乙酯中并用水洗滌三次。蒸發(fā)除去溶劑得到粗品1，10-二(4-羥基-3-甲基苯基)癸烷-1，10-二酮，然后將其進行Clemmensen還原得到標題化合物。產(chǎn)品重結(jié)晶得到無色白色結(jié)晶。V、合成α，ω-二[2，4-二羥基-(3-甲基)苯基]烷烴按照《脂肪族二羧酸與間苯二酚反應(yīng)》JvonBraun，EAnton和FMeyer.Ber.74B，1772-1783(1941)的文獻中記載的方法制備脂肪族二羧酸(1摩爾)與無水二氯化鋅(2摩爾)在140℃加熱，然后分批加入間苯二酚(10摩爾)。攪拌混合物，在140-160℃(除2-甲基間苯二酚在170℃攪拌外)維持4-5小時。用冰水分解產(chǎn)品。在真空中收集固體，用10％的碳酸鈉洗滌然后用水洗滌。粗品進行Clemmensen還原得到標題化合物，由乙醇-水中重結(jié)晶得到無色晶體。VI、合成1，10-二[3-羥基-4-甲基苯基]癸烷按照上述(III)制備1，10-二(4-甲基苯基)癸烷-1，10-二酮。將該二酮溶于濃硫酸中，在-5℃，將其逐漸加入到發(fā)煙硝酸和濃硫酸(2∶1)的混合物中?；旌衔镌?℃攪30拌分鐘，并倒入冰水中。過濾沉淀物并自乙酸乙酯中重結(jié)晶得到1，10-二(3-硝基-4-甲基苯基)癸烷-1，10-二酮，然后在濃鹽酸的存在下在90℃的高混下將其SnCl2·2H2O進行的30分鐘。收集冷卻形成的沉淀物，用鹽酸洗滌并溶于氫氧化鈉中。收集加入稀鹽酸后的固體沉淀并自乙醇中重結(jié)晶得到1，10-二(3-氨基-4-甲基苯基)癸烷-1，10-二酮。此產(chǎn)品在5℃用NaNO2的3M硫酸溶液重氮化。混合物再用10％硫酸在160℃水解。所得溶液用乙酸乙酯萃取，蒸發(fā)除去溶劑得到1，10-二(3-羥基-4-甲基苯基)癸烷-1，10-二酮，將其進行Cle-mmensen還原得標題化合物，自石油-二氯甲烷中重結(jié)晶。VII、合成α，ω-二[2，5-二羥基-4-甲基苯基]烷烴a、3，5-二甲氧基-4-甲基苯甲醛是按照公布在《3，4，5-三甲氧基-苯甲醛和二甲基乙縮醛的配向性還原烷基化》(UAzzena，SCossu，TDenurra，GMelloni和AMPiroddi，Sythesis1990，313)和《3，4，5-三甲氧基-苯甲醛的衍生物的親電取代的配向性還原》(UAzzena，GMelloni，AMPiriddi，EAzara，SCon-tini和EFenude.J.Org.Chem57，3101-3106(1992)中的方法而制備。二乙縮醛中間體在130℃/0.8mmHg蒸餾，3，5-二甲氧基-4-甲基苯甲醛(化合物A)自石油中重結(jié)晶。b、制備α-N，N-二甲基氨基-α-氰基-(3，5-二甲氧基-4-甲基)亞芐基(化合物B)(見《通過堿金屬的α-二甲基氨基-苯乙腈的芐基化作用及相關(guān)的烷化作用》CRHauser，HMTaylor和TGLedford.J.Chem.Soc.82，1786(1960))。在攪拌的亞硫酸氫鈉(1摩爾)的400ml水溶液中，加入在甲醇中的化合物A(1摩爾)，然后加入無水二甲胺(1.2摩爾)的甲醇(80％)水溶液。反應(yīng)混合物冷卻后加入氰酸鈉(1.2.摩爾)水液。混合物在室溫攪拌20小時，然后再加入乙醚(50ml)。乙醚層用水洗滌兩次并蒸發(fā)得到化合物B(＞90％)，其純度足以在下步反應(yīng)。c、制備α，ω-二[3，5-二甲氧基-4-甲基苯基]烷烴-α，ω-二酮(見《通過α-氨基-α-芳基乙腈與烷基二溴化物反應(yīng)合成對稱的二酮有效方法》KTakahashi，MWatsuzaki，KOgura和HIida.J.Org.Chem.48，1909-1912(1983))。在無水氮氣氛中，將二異丙基胺(1.5，9mmol)溶于分別為5ml的無水THF和HMPA的混合物中，用n-丁基鋰(4ml2.5M己烷溶液，10mmol)在-78℃處理。加入溶于THF(2ml)的化合物B(8mmol)，反應(yīng)混合物在-78℃攪拌15會鐘，在0℃攪拌1小時。向冷卻至-20℃的混合物中滴加α，ω-二溴烷烴(4mmol)?；旌衔镌?20℃攪拌20分鐘后，在室溫攪拌過夜。反應(yīng)混合物倒入冰水中并用乙醚(3×50ml)萃取。用鹽水洗滌合并的乙醚層并減壓濃縮。殘余物溶于分別為3ml的THF和30％草酸水溶液中，回流90分鐘然后用乙醚萃取。蒸發(fā)溶劑后，產(chǎn)品自乙醇中重結(jié)晶得到二酮(化合物C)。d、制備α，ω-二[3，5-二羥基-4-甲基苯基]烷烴化合物C進行Clemmensen還原，然后用在乙酸中的47％的HBr在130℃去甲基化10小時。產(chǎn)品進行梯度色譜并自苯中重結(jié)晶得到無色結(jié)晶。1，1-二(2-羥基苯基)癸烷按照GCasiraghi，等《在配向性中的金屬酚鹽的反應(yīng)中合成2，2-亞烷基二苯酚》，GCasiraghi，GCasnati，APochini和RUngaro.J.Chem.Soc.，PerkinTrans.11982)，3，805-808的方法制備。產(chǎn)品在210℃/0.4mmHg蒸餾。6-十二烷基-7-羥基-4-甲基香豆素是按照SPStar-kov等《在三氟化硼乙醚化合物存在下乙酰乙酸乙酯和苯甲酰乙酸乙酯與4-烷基間苯二酚的縮合》(SPStarkov，GAGoncharenko和AIPanasenko.Zh.Obshch.Khim.(1993)，63(5)，1111-1115)中的方法制備。產(chǎn)品自乙醇中重結(jié)晶。2-壬基苯酚的溴化是按照DERearson等《苯酚的鄰位溴化》(DERearson，RDWysong和CVBreder.J.Org.Chem.(1967)，35(19)，3221-3231)文獻中的方法進行。壬基苯酚的硝基化是按照DSRoss等《通過氮的低價氧化物催化芳族硝基化》(DSRoss，GpHum和WGBlucher.J.Chem.Comm.1980，532-533)的方法進行。4-十二烷基間苯二酚的溴化是按照EKiehlmann和RWLauener《溴代間苯三酚及其甲基醚》(EKiehlm-ann和RWLauenerCan.J.Chem.(1989)，67，335-344)中的方法進行。4-溴-6-十二烷基間苯二酚是按照上述的方法8《鄰位溴代苯酚》(DERearson，RDWysong和CVBreder.J.Org.Chem.(1967)，35(19)，3221-3231)中的方法制備。*Clemmensen還原按如下進行酮化合物溶于甲苯中，將其加入到含汞齊化鋅的濃鹽酸和乙酸(1∶1)的混合物中。反應(yīng)混合物在劇烈攪拌下回流10小時或在室溫攪拌2天。表2合成酚的產(chǎn)物化合物(No)％產(chǎn)率2-辛基苯酚(1)2-癸基苯酚(3)19.8-23.34-辛基苯酚(4)m.p.40-42℃4-壬基苯酚(5)m.p.27-38℃31.5-34.24-癸基苯酚(6)m.p.53-55℃3-壬基苯酚(7)10.01，14-二(2-羥基苯基)20.8-23.3十四烷(14)1-(2-羥基苯基)-10-(4-羥基苯基)癸基(9)1-(2-羥基苯基)-12-(4-羥基苯基)十二烷(12)22.5-251-(2-羥基苯基)-14-(4-羥基苯基)十四烷(15)表2(續(xù))合成酚的產(chǎn)物化合物(No)％產(chǎn)率1，10-二(4-羥基苯基)癸基(10)1，12-二(4-羥基苯基)十二烷(13)6.7-8.31，14-二(4-羥基苯基)十四烷(16)表2續(xù)化合物熔點℃％產(chǎn)率2-壬基苯酚(2)liq.58-602-甲基-6-壬基苯酚liq.563-甲基-6-壬基苯酚liq.524-甲基-6-壬基苯酚liq.502-溴-6-壬基苯酚liq.404-溴-6-壬基苯酚45-4785表2續(xù)化合物熔點℃％產(chǎn)率2，4-二溴-6-壬基苯酚liq.＞952-硝基-6-壬基苯酚liq.454-硝基-6-壬基苯酚liq.382-溴-4-硝基-壬64-65基苯酚＞90a4-溴-2-硝基-壬61-63基苯酚4-壬基間苯二酚70-71802-溴-6-十二烷基68-6970b間苯二酚4-溴-6-十二烷基61-6282間苯二酚表2續(xù)化合物熔點℃％產(chǎn)率2，4-二溴-6-十二烷基58-59＞95間苯二酚6-十二烷基-7-羥基135-13675-4-甲基香豆素1，8-二(2-羥基苯基)74辛烷1，9-二(2-羥基苯基)64-65壬烷40-451，10-二(2-羥基苯基)81-82烷基(8)1，12-二(2-羥基苯基)88.5-十二辛烷(11)1，10-二(2-羥基-3-82-8338甲基苯基)癸烷表2續(xù)化合物熔點℃％產(chǎn)率1，10-二(2-羥基-4-102-10340甲基苯基)癸烷1，10-二(2-羥基-5-8625甲基苯基)癸烷1，8-二(2，4-二羥基167-168苯基)辛烷1，10-二(2，4-二羥基155-156苯基)癸烷75-801，11-二(2，4-二羥基136-137苯基)十一烷1，12-二(2，4-二羥基146-147苯基)十二烷1，10-二(2，4-二羥基138-14070-3-甲基苯基)癸烷表2續(xù)化合物熔點℃％產(chǎn)率1，10-二(3-羥基71-73苯基)癸烷18-201，10-二(3-羥基100-102-4-甲基苯基)癸烷1，10-二(4-二羥基82-8378-3-甲基苯基)癸烷1，1-二(2-羥基liq70苯基)癸烷1，10-(2-羥基101-10340-1-萘基)-癸烷2-甲基-5-壬基-91-9270間苯二酚1，8-二(3，5-二羥基173-175-4-甲基苯基)癸基表2續(xù)化合物熔點℃％產(chǎn)率1，10-二(3，5-二羥基139-140-4-甲基苯基)癸基65-701，12-二(3，5-二羥基123-124-4-甲基苯基)十二烷1，14-(3，5-二羥基-4-甲基苯基)十四烷130-131合成的烷基苯酚和α，ω-二(羥基苯基)烷基的結(jié)構(gòu)表3合成產(chǎn)物的1H-NMR譜縮略字是s，單峰；d，雙重峰；t，三重峰；m，多重峰；b，寬譜。中間產(chǎn)物的1H-NMR譜注只有芳香族質(zhì)子的偶合常數(shù)有報道表3續(xù)注只有芳香族質(zhì)子的偶合常數(shù)*13C-NMR(δppm)譜的概略2-壬基苯酚衍生物13C-NMRofn-C9H19鏈14.19(1C)；22.75(1C)；29.41(1C)；29.55(1C)；29.58(1C)；29.64(2C)；30.86(1C)；31.97(1C)；取代苯酚的芳族13C-NMR2-溴-6-壬基苯酚110.52(1C)；121.30(1C)；129.34(1C)；129.63(1C)；130.75(1C)；150.1(1C).4-溴-2-壬基苯酚1ol.112.71(1C)；116.83(1C)；129.59(1C)；131.07(1C)；132.68(1C)；150.09(1C).2，4-二溴-6-壬基苯酚ol.110.(1C)；125.08(1C)；125.52(1C)；129.62(1C)；132.1(1C)；150.2(1C).2-硝基-6-壬基苯酚119.31(1C)；122.6(1C)；132.37(1C)；134.04(1C)；137.41(1C)；153.36(1C).4-硝基-2-壬基苯酚115.19(1C)；119.3(1C)；123.54(1C)；126.02(1C)；130.73(1C)；159.47(1C).4-溴-2-硝基-6-壬基苯酚109.92(1C)；125.07(1C)；125.51(1C)；131.18(1C)；141.26(1C)；155.58(1C).4-十二烷基間苯二酚衍生物13C-NMRofn-C12H25chain.14.13(1C)；22.7(1C)；29.37(1C)；29.41(1C)；29.53(1C)；29.62(1C)；29.65(1C)；29.68(2C)；29.85(1C)；30.17(1C)；31.93(1C).取代的間苯二酚的芳族13C-NMR2-溴-6-十二烷基間苯二酚99.63(1C)；107.37(1C)；122(1C)；129.38(1C)；150.24(1C)；150.61(1C).4-溴-6-十二烷基間苯二酚100.52(1C)；103.17(1C)；123(1C)；132.17(1C)；150.79(1C)；154(1C).2，4-二溴-6-十二烷基間苯二酚98.68(1C)；99.62(1C)；123.46(1C)；131.1(1C)；147.3(1C)；150.52(1C)6-十二烷基-7-羥基-4-甲基香豆素(n-C12H35的13C-NMR與間苯二酚的相似)芳族13C.102.62(1C)；110.7(1C)；112.37(1C)；125(1C)；127.28(1C)；153.35(1C)；159.12(1C)；162.3(1C).1，11-二(2，4-二羥基苯基)十一烷29.37(2C)；29.41(2C)；29.43(3C)；29.46(2C)；30.13(2C)；102.93(2C)；106.68(2C)；120.50(2C)；130.29(2C)；155.24(2C)；155.57(2C).1，12-(2，4-二羥基苯基)十二烷28.91(2C)；29.02(2C)；29.05(4C)；29.09(2C)；29.69(2C)；102.39(2C)；105.79(2C)；119.68(2C)；129.54(2C)；155.11(2C)；155.45(2C).1，10-二(2，4-二羥基-3-甲基苯基)癸烷8.51(2C)；29.43(2C)；29.47(2C)；29.49(2C)；29.86(2C)；30.06(2C)；107(2C)；110.42(2C)；119.76(2C)；126.6(2C)；152.65(2C)；153.55(2C).1，10-二(3-羥基-4-甲基苯基)癸烷15.31(2C)；29.25(2C)；29.46(2C)；29.5(2C)；31.41(2C)；35.47(2C)；114.92(2C)；120.59(2C)；120.76(2C)；130.72(2C)；142.31(2C)；153.52(2C).2-甲基-5-壬基間苯二酚7.73(1C)；14.12(1C)；22.69(1C)；29.3(1C)；29.35(1C)；29.54(1C)；31.21(1C)；31.91(1C)；107.31(1C)；107.8(2C)；142.05(1C)；154.46(2C).1，8-二(3，5-二羥基-4-甲基苯基)辛烷8.37(2C)；29.93(2C)；30.18(2C)；32.11(2C)；36.24(2C)；107.34(2C)；107.47(4C)；141.59(2C)；156.89(4C).1，10-二(3，5-二羥基-4-甲基苯基)癸烷8.34(2C)；29.94(2C)；30.32(4C)；32.13(2C)；36.25(2C)；107.34(2C)；107.45(4C)；141.59(2C)；156.9(4C).1，12-二(3，5-二羥基-4-甲基苯基)十二烷8.37(2C)；29.97(2C)；30.26(2C)；30.34(2C)；30.38(2C)；32.15(2C)；36.27(2C)；107.34(2C)；107.45(4C)；141.58(2C)；156.9(4C).表4合成烷基苯酚及α，ω-二(羥基苯基)烷烴的化學(xué)電離質(zhì)譜中間產(chǎn)物的質(zhì)譜m/e強度(％)結(jié)論2-辛?；椒?614M＋4124911M＋29221100M＋11276喪失苯酚2-壬?；椒?755M＋4126310M＋29235100M＋11419喪失苯酚2-癸?；椒?895M＋4127716M＋29249100M＋115515喪失苯酚121162-OH-苯甲酰基陽離子4-辛酰基苯酚221100M＋112713喪失苯酚1136喪失庚烷4-壬?；椒?35100M＋12215喪失甲基1416喪失苯酚1357喪失庚烷4-癸?；椒?895M＋4127712M＋29249100M＋12218喪失乙烯15510喪失苯酚1358喪失辛烷3-芐氧基苯甲醛2535M＋4124112M＋29213100M＋113516喪失苯二苯基癸烷雙酸酯3837M＋2935512M＋1261100喪失苯酚二苯二十二烷雙酸酯41120M＋293835M＋1289100喪失苯酚二苯基十四烷雙酸酯43915M＋294114M＋1317100喪失苯酚1，10-二(2-羥基苯基)庚烷-1，10-二酮3836M＋29355100M＋126110喪失苯酚1，12-二(2-羥基苯基)十二烷-1，12-二酮4238M＋4141120M＋29383100M＋12895喪失苯酚1，14-二(2-羥基苯基)十四烷-1，14-二酮4516M＋4143916M＋29411100M＋13175喪失苯酚1-(2-羥基苯基)-10-(4-羥基苯基)癸烷-1，10-二酮3838M＋29355100M＋132710喪失28質(zhì)量單位26114喪失苯酚13525C6H4(OH)COCH2+離子12115C6H4(OH)CO+離子1-(2-羥基苯基)-12-(4-羥基苯基)十二烷-1，12-二酮4238M＋4141120M＋29383100M＋128910喪失苯酚1215C6H4(OH)CO+離子1-(2-羥基苯基)-14-(4-羥基苯基)十四烷-1，14-二酮4516M＋4143918M＋29411100M＋135518喪失丁烯31710喪失苯酚1，10-二(4-羥基苯基)癸烷-1，10-二酮3956M＋4138315M＋29355100M＋12618喪失苯酚12115C6H4(OH)CO+離子1-12-二(4-羥基苯基)十二烷-1，12-二酮4236M＋4141116M＋29383100M＋12898喪失苯酚13718C6H4(OH)C(OH)+CH312312C6H4(OH)C(OH)+H1-14-二(4-羥基苯基)十四烷-1，14-二酮4515M＋4143918M＋29411100M＋13178喪失苯酚121124-OH-苯甲?；栯x子烷基苯酚和α，ω-二(羥基苯基)烷烴的質(zhì)譜2-和4-辛基苯酚2478M＋4123516M＋29207100M＋110720C6H4(OH)CH2+離子2-，3-和4-壬基苯酚2616M＋4124912M＋29221100M＋110718C6H4(OH)CH2+離子2-和4-癸基苯酚2755M＋4126316M＋29235100M＋110716C6H4(OH)CH2+離子1，10-二(羥基苯基)癸烷和1-(2-羥基苯基)-10-(4-羥基苯基)癸烷3676M＋4135520M＋29327100M＋110715C6H4(OH)CH2+離子1，12-二(羥基苯基)十二烷和1-(羥基苯基)-12-(4-羥基苯基)十二烷3955M＋4138320M＋29355100M＋11076C6H4(OH)CH2+離子1，14-二(羥基苯基)十四烷和1-(2-羥基苯基)-14-(4-羥基苯基)十二烷4235M＋4141120M＋29383100M＋11075C6H4(OH)CH2+離子注強度小于5％的信號未列入表4續(xù)</tables>注強度低于5％的信號未列入天然產(chǎn)物實驗來自銀樺的新的間苯二酚及其對紅細胞Ca2+-ATP的酶的抑制活性總的提取和分離的實驗方法流動相為MeOH/H2O(82∶18)。流速為1.0ml/min；用安裝有254nm的AltexUV測器Aetex100溶劑傳遞系統(tǒng)進行制備性HPLD，并使用9×500mm的ActivonPartis-ilODS-3柱。流動相的梯度是在60分鐘內(nèi)從MeOH/H2O(3∶7)到MeOH，或者流動相為65％的CH3CN在水中的常液流動相，流速為2.5ml/min，通過這些系統(tǒng)分離6251，6252。植物材料從澳大利亞、悉尼，收集銀樺莖。確證樣品購自theDepartmentofPharrmacy，TheUniversityofSydney的檢定處。用電刨將直徑為5-10cm的木莖切成薄片并在空氣中干燥。提取和分離通過滲濾用CHCl3/EtOH(1∶1)將2kg樣品提取3天共兩次。在真空濃縮提取液后，將殘渣(20g)經(jīng)硅膠短柱真空色譜層析法進行色譜層析，收集250ml餾分。在0.5mg/ml濃度下進行Ca2+-ATP酶測定，獲得50％的抑制活性。用石油醚/EtcAc(9∶1-2∶1)洗脫餾分1到4(3.82g)。在測定中，由CHCl3/MeOH(2∶1)洗脫的餾分7-9(11.91g)是非活性的。對他們不再進行研究。分別用CHCl3/EtoAc(2∶1)、CHCl3/MeOH(9∶1)、(8∶2)洗脫餾分5(2.78g)、6(0.13g)、6b(1.38g)并獲得強的抑制活性。將餾分5用CHCl3/EtOH(95∶5)進一步進行短柱真空色譜層析并得到銀樺酚。將餾分6b用CH2Cl2/EtoAc(4∶1)進行類似的色譜層析獲得6b2(37.4mg)。將餾分6用石油醚/EtoAc(2∶1)、CH2Cl2/EtoAc(2∶1)、(1∶1)、(1∶2)、EtoAc、EtoAc/CH3CN(1∶1)類似地分成10個餾分(各50ml)。僅由CH2Cl2/EtoAc(2∶1)洗脫的餾分4-5(63.5mg)具有強的抑制活性。在0.04mg/ml濃度時，為74％的抑制活性。然后將該餾分用梯度HPLC分離而獲得突觸(Synapic)醛(623，1.8mg)和非極性餾分625，餾分625通過制備性TLC、用CHCl3/EtOH(95∶5)作溶劑最終分成6251(6.6mg)和6252(1.3mg)。甲基化和臭氧分解是來自BarrowRA，CaponRJ(1991)AlkylandalkenylresorcinolSfromanAustralianmarine，sponge，HaliclonaSP.Aust.J.Chem441393-1409的一種方法。在室溫下，將要甲基化的樣品(2-8mg)在含有K2CO3(200mg)和CH3I(0.5ml)的丙酮(3ml)中攪拌20小時。通過制備性TLD，將甲基化產(chǎn)物用CHCl3/EtOH(9.3∶0.7)分出6b2，用石油醚/EtoAc(8∶2)分出6251，6252。在-78℃溫度下，將甲基化的化合物(0.5-1mg)的CS2(2ml)液用O3氣流進行臭氧分解并加入三苯基膦(2mg)。用CI-MS直接分析反應(yīng)混合物。暴露在I2蒸汽中并在實驗臺放置過夜后，長鏈間苯二酚在TLC上產(chǎn)生有特征的紫色，而間苯二酚、間苯二甲酸(resorcinylicacid)和苔黑酚產(chǎn)生灰棕色。Grebustol-A(6251)呈無色油狀；RfO.51(CHCl3/EtOH9∶1)；1H-NMR(CDCl3，ppm)1.26-1.35(m，12H，CH2)，1.55(m，4H，ArCH2CH2)，2.00(m，4H，CH＝CHCH2)，2.10(s，3H，ArCH3)，2.42-2.50(m，4H，ArCH2)，4.70(br.s.，OH)，5.32-5.39(m，2H，CH＝CH)，6.17(t，J＝2.0Hz，1H，ArH)，6.24(br.s.，4H，ArH)；13C-NMR156.5，154.4，142.6，142.0，130.0，129.7，108.1，107.9，100.2，35.9，35.6，31.3，31.1，29.8，29.7，29.6，29.4，29.2，29.1，27.2，7.9；CI-MS(CH4)m/z427{M＋1}，397，285，257，229，207；UVmax(MeOH)208.4(log∈4.48)，274.4(3.35)，279.4(3.33).甲基化Grebustol-A(6251m)-1H-NMR1.26-1.38(m，12H，CH2)，1.55(m，4H，ArCH2CH2)，2.00(m，4H，＝CHCH2)，2.06(s，3H，ArCH3)，2.55(m，4H，ArCH2)，3.78(s，6H，2XOCH3)，3.81(s，6H，2XOCH3)，5.32-5.41(m，2H，CH＝CH)，6.29(t，J＝2.3Hz，1H，2-H)，6.34(d，J＝2.3Hz，2H，4，6，-H)，6.36(s，2H，4′6′-H)；CI-MS{M＋1}＋483，EI-MS482{M}+(32)，410(6)，386(13)，368(8)，353(3)，341(8)，149(12)，109(9)；Ozonolysisof6251m，1H-NMR3.81，3.78，9.76，9.77(CHO)，CI-MS279，237.Norstriatol-B(6252)-呈無色油狀oil，Rf0.55(CHCl3/EtOH9∶1)；1H-NMR(CDCl3，ppm)1.25(m，12H，CH2)，1.58(m，4H，CH2)，1.91(m，4H，＝CHCH2)，2.26(m，2H，1-CH2)，2.60(m，2H，14-CH2)，5.30(m，2H，CH＝CH)，4.66(br.s.，OH)，6.45-6.49(m，4H，ArH)；CI-MS411{M＋1}+，317，285，257；UVmax(MeOH)206.4(log∈4.61)，279.2(3.49).甲基化norstriatol-B(6252m)-1H-NMR1.25(m，12H，CH2)，1.54(m，4H，CH2)，1.87(m，4H，CH＝CHCH2)，2.23(m，2H，1-CH2)，2.66(m，2H，14-CH2)，3.68(d，J＝3.0Hz，3H，22-OCH3)，3.69(d，J＝1.40Hz，6H，17，19-OCH3)，3.83(d，J＝1.45Hz，3H，24-OCH3)，5.30(m，2H，CH＝CH)，6.42-6.45(m，4H，ArH)；CI-MS467{m＋1}+；EI-MS466{m}+(100)，451(2)，302(5)，149(10)；13C-NMR，56.0，56.1，96.5，104.8，105.0；甲基化striatol-B-13C-NMR56.0，56.1，96.5，105.0，130.3，145.5.結(jié)果與討論Grebustol-A(6251)化合物(II)Grebustol-A(6251)(6.6mg，3.3ppm)，分子量426(CI-MS)，UV最大量吸收峰274nm，是不同于striatol，如1H-NMR在5.32-5.99ppm(m，2H)和2.10PPm(S，3H)信號所示，它在烷基鏈具有雙鍵和一個單個苯基甲基基團。甲基化產(chǎn)物的質(zhì)譜和1H-NMR譜揭示了存在有4個OCH3基團(EI-MS482)，1H-NMR3.78ppm(S，6H)，3.81(S，6H)，1H-NMRH-HCOSY發(fā)現(xiàn)信號1.6-1.55，1.26-2.00，1.55-2.42，2.00-5.35ppm的偶合，但沒有信號1.55和2.00ppm間的偶合。這排除了C-10，11位上有雙鍵的可能性。1H-NMR數(shù)據(jù)表明了非對稱結(jié)構(gòu)。臭氧分解產(chǎn)物的CI-CM表明分子量278和236的醛，與C-8，9(m＝7，n＝5)或C-9，10(m＝8，n＝4)位上的雙鍵相一致。Norstriatol-B(6252)化合物(III)Norstriatol-B(6252)(1.3mg，0.65ppm)是一種striatol-B的脫甲基產(chǎn)物。CI-MS(CH4試劑氣體)揭示其分子量為410。UV極大吸收峰279nm。norstriatol-B的1H-NMR，UV，質(zhì)譜與所報導(dǎo)的striatol-B的數(shù)據(jù)相一致[RidleyDD，等(1970)ChemicalStudiesoftheProteaceaeIVAust.J.Chem.23，147-183]并與StriatolB的可信樣品相一致。它是聯(lián)二苯衍生物而不是象robus-tol的二苯基醚衍生物[CannomJR，等(1973)Phenolicconstitue-ntsofGrevillearobusta(proteaceae).TheStructureofrobustol，anovelmacrocyclicphenolAust.J.Chem.，26，2257-2275]。norstriatol-B的甲基化獲得四甲基norstriatol-B，它與可信的Striatol-B甲基化所形成的物質(zhì)相同。表1表明，銀樺醇對Ca2+-ATP酶的抑制效果是弱的。最強的化合物是Striatol和grebustol-A，其IC50分別為16和17μm。如在grebustol-B中沒有芐甲基基團時，其活性是弱的。Bisnorstriat-ol在500μm濃度時的抑制率僅為69.1％。酚羥基甲基化之后，gre-bustolB失去活性。用純化的紅細胞Ca2+-ATP酶證實了Striatol的抑制活性。這些結(jié)果表明酚羥基對產(chǎn)生抑制作用是必要的。羥基之間的芐甲基增強這種活性。烷基鏈中的雙鍵也增強對Ca2+-ATP酶的抑制活性。紅細胞膜按WSPrice，BDRoufogalis，PWKuchel(1989)在ASim-pleandinexpensivemethodforpreparingerythrocytememb-ranesbyfilfrationthroughahollow-filtersytem，Anal.Biochem.，179，190-193所述方法，通過Ashahi血漿分離器。連續(xù)濾過空心纖維而制備缺失調(diào)鈣蛋白的紅細胞膜。從悉尼NewSouthWalesRedCrossTramsfusinService，獲得包裝細胞。整個制備都在40℃溫度下進行。用含有130mMKCl，20mMTris-HCl(PH7.4)的等滲緩沖液洗滌1單位的包裝紅細胞3次，并在4,000RPM下離心分離收集細胞。用含1mMEDTA，10mMTris-HCl(PH7.4)，0.5mMPMSF(苯甲基磺酰氟)的緩沖液使細胞溶血。將細胞溶血物混合物通過空心纖維系統(tǒng)直到細胞膜呈白色，然后用10mMHep-es鉀(PH7.4)洗滌。經(jīng)在10,000RPM下離心分離20分鐘收集細胞膜，將該細胞膜重新懸浮在含130mNKCl、2mMdithiothreitol、0.5mMMgCl220mMHepes鉀(PH7.5)的貯備緩沖液中。在-80℃溫度下貯存其濃度為1.5-5.4mg/ml蛋白質(zhì)的膜，備用。Ca2+-ATP酶測定試驗在總體積為0.4ml的65mMKCl、20mMHepes鉀、5mMMgCl2、50μMCaCl2、0.1μm調(diào)鈣蛋白、0.1mMEGTA溶液中并在37℃溫度下，將紅細胞膜(0.071-0.098mg/ml)培養(yǎng)1小時。加入2mMATP(PH7.4)開始反應(yīng)。按BURaess，F(xiàn)FVincenzi(1980)(ASemi-automatedmethodforthedeterminationofmultiplemenbr-aneATPaseactivities，J.PharmacologicalMethocls4，273-283)的方法，光譜測定釋放到介質(zhì)中的磷酸酯。由Ca2+存在下所分析的總活性中減去Mg2+-ATP酶的活性(不加CaCl2下測定的)。將苯酚溶解在二甲基亞砜(DMSO)中，樣品混合物中DMSO的最終濃度為2.5％。DMSO本身對ATP酶活性沒有影響。在加入ATP前，將試驗物質(zhì)的濃溶液加到反應(yīng)介質(zhì)中。按OHLowrg，NJRosebrough，ALFarr，RJRandall(1951)(J.Bio.Chem.193，265-275)的方法測定蛋白質(zhì)濃度；用牛血清白蛋白作標準。使用DAGoldstein(1979)(CalculationoftheConcentrationsoffreecationsandCation-ligandcomplexesinSolutionscontainingmulti-pledivalentcationsandligands，Biophys.J.，26，235-742)的程序，用計算機計算游離Ca2+的濃度。對照的ATP酶特異活性為(單位nmodes/mg蛋白質(zhì)/min)Ca2+-ATP酶為25.8±4.0(n＝20)，調(diào)鈣蛋白刺激的Ca2+-ATP酶為63.5±7.9(n＝16)，而Mg2+-ATP酶為7.4±1.0(n＝20)。如A.Minocher-bomjee，BDRoufogalis(1982)(SelectiveantagonismoftheCatransportATPaseoftheredcellmembrancebyN-(4-azi-do-2-nitrophenyl)-2-aminoethylsulfonate(NAP-taurine).J.Biol.Chem.257，5426-5430)所示，該酶在25μm濃度下被NAP-牛磺酸抑制60％。Ca2+-ATP酶測定(微滴板法)在37℃溫度下，在總體積60μl的65mMKCl，50mMHEPES(PH＝7.4)，5mMMgCl2，50μMCaCl2，0.1mMEGTA并在調(diào)鈣蛋白(0.3μm)不存在和存在下，將紅細胞膜培養(yǎng)1小時。將試驗化合物溶于二甲基亞砜DMSO中并在加入ATP之前，將其2μl加到測定混合物中。DMSO在測定混合物中的最終濃度為3％。加入2mMATP(PH＝7.4)后開始反應(yīng)。培養(yǎng)1小時后，加入著色劑(180μl)并在37℃溫度下培養(yǎng)1/2小時。用微滴板讀數(shù)器在750nm光譜法測定釋放到測定樣品介質(zhì)中的磷酸酯。從Ca2+存在下測得的總活性中減去Mg2+-ATP酶的活性(在不加CaCl2下測定)。結(jié)果示于表1A中。縮寫ATP三磷酸腺苷ATPase三磷酸腺苷酶BHT2，6-二-叔丁基-4-甲基苯酚CI-MS化學(xué)電離質(zhì)譜DMSI二甲基亞砜EI-MS電子撞擊質(zhì)譜EGTA1，2-亞乙基二(氧亞乙基次氮基)四乙酸HEPES4-(2-羥乙基)-1-哌嗪乙烷磺酸HPLC高效液相色譜LDA二異丙酰胺鋰NAPN-(4-疊氮-2-硝基苯基)-2-氨基乙烷磺酸NMR核磁共振PMSF苯甲基磺?；鶶DS十二烷基硫酸鈉TLC薄層色譜層析毒性鹽水小蝦測定(brineshrimpassay)用鹽水小蝦測定法確定活性化合物的LC50值。用對鹽水小蝦(ArtemiaSalinaLeach)的毒性證實已知化合物廣譜活性。使用許多測定，包括毒性物質(zhì)、麻醉劑、嗎啡樣物質(zhì)和佛波醇酯協(xié)同致癌性的分析。測定表明某些細胞毒性和其作為用于最近已證實的某些抗腫瘤活性的預(yù)篩選物之間具有良好的相關(guān)性。選擇DMSO(二甲基亞砜)作為溶劑，這是因為其良好的溶解特性，也因為在Ca2+-ATP酶抑制研究中的酚物質(zhì)早已使用DMSO制備。試驗所用溶劑的毒性的方法基本上是按J.LMclaughlin在MethodsofPlantBiochemisfry(1991)，Vol.6(K.Hostettman，ed.)，AcademPress，London，1-32中所報道的。將要試驗的物質(zhì)的DMSO溶液直接加到含有鹽水小蝦的小瓶中。我們希望使用的DMSO濃度高于推薦的1％(v/v)，所以，DMSO的毒性試驗是必需的。表5中列出了在小蝦上試驗的DMSO濃度，以及重復(fù)實驗的測定結(jié)果。表5所試驗的DMSO濃度濃度(％v/v)％死亡00102030405971291811571396151002010025100在24小時期間內(nèi)，鹽水中DMSO的濃度直到4％(v/v)時，未觀察到對鹽水小蝦有毒性。生物測定分析了鹽水小蝦毒性，除了某些小的修改以外，按照McLaurh-lin等在BrineShrimp中所報道的方法(Aconvenientgeneralbi-oassayforactiveDlantconstituents，BNMeyer，NRFerr-igni，JEPutman，LBJacobsen，DENhols和JLMclaughlin.PlantaMedica(1982)，45，31-34和CrowngalltumoursonpotatodiscsandbrineShrimpLethalityTwosimplebioas-sayforhigherplantScreeningandfractionation，JLMcl-aughlin，MethodsofPlantBiochemistry(1991)，Vol.6(KHo-stettmaned.)，AcademPress，London，1-32)。將10個小蝦轉(zhuǎn)移加到各個小瓶中并將體積調(diào)至4.9ml。各劑量重復(fù)三次，包括對照。在試驗溶液達到合適體積之前，快速連續(xù)地將另外適當(dāng)體積的DMSO加到各劑量中，使DMSO最終濃度達到2％。將小瓶輕輕混合并記錄時間。24小時后，計算存活數(shù)并確定％死亡率。試驗化合物的測定濃度為100μm、25μm、5μm、1μm和0.2μm(而適當(dāng)?shù)臐舛葹?.04μm和0.08μm)。不供食物之下，鹽水小蝦能在小瓶中存活24小時以上，所以是不喂的。使用Sigmaplot計算機程序來繪制劑量效能曲線并由曲線與50％死亡率線的交叉點計算LC50值。LC50是以μm和μg/ml兩種單位表示。表6由鹽水小蝦生物測定獲得的Lc50值分子量化合物L(fēng)C50μMμg/ml2062-辛基苯酚1.50.312202-基苯酚0.480.112342-癸基苯酚0.680.162203-壬基苯酚0.320.0702204-基苯酚0.400.0882344-癸基苯酚0.270.0642342-壬?；椒?.630.152344-壬?；椒?.100.0241762-環(huán)己基苯酚＞25＞4.4表6(續(xù))由鹽水小蝦生物測定獲得的Lc50值分子量化合物L(fēng)C50μMμg/ml1764-環(huán)己基苯酚＞25＞4.42981，8-二(2-羥基苯基)30.89辛基3261，10-二(2-羥基苯基)1.90.62癸基3261，10-(3-羥基苯基)30.98癸基3261，1-二(2-羥基苯基)144.6癸基3541，10-(2-羥基-4145-甲基苯基)癸烷3541，10-二(2-羥基-35.82.1-甲基苯基)癸烷表6(續(xù))由鹽水小蝦生物測定獲得的Lc50值分子量化合物L(fēng)C50μMμg/ml3541，10-二(3-羥基-4113.9-甲基苯基)癸烷3541，10-二(4-羥基-34.21.5-甲基苯基)癸烷3541-(2-羥基-3-甲2.20.78基苯基)-10-(4-羥基-3-甲基苯基)癸烷3541，12-二(2-羥基苯基)2.60.94十二烷3821，14-二(2-羥基苯基)1.90.72十四烷3261，10-二(4-羥基苯基)0.810.26癸烷表6(續(xù))由鹽水小蝦生物測定獲得的Lc50值分子量化合物L(fēng)C50μMμg/ml3541，12-二(4-羥基苯基)3.81.4十二烷3821，14-二(4-羥基苯基)7.93.7十四烷3261-(2-羥基苯基)-10-0.350.11(4-羥基苯基)癸烷3541-(2-羥基苯基)-2-0.0540.019(4-羥基苯基)十二烷3821-(2-羥基苯基)-143.71.4-(4-羥基苯基)十四烷4261，10-二(2-羥基-1＞25＞11-萘基)癸烷表6(續(xù))由鹽水小蝦生物測定獲得的Lc50值分子量化合物L(fēng)C50μMμg/ml3581，8-二(3，5-二羥基-4＞25＞9-甲基苯基)辛烷3861，10-二(3，5-二羥基-4＞25＞9.7-甲基苯基)癸烷4141，12-二(3，5-二羥基-4＞25＞10-甲基苯基)十二烷4421，14-二(3，5-二羥基-4114.9-甲基苯基)十四烷(striatol)4141，14-二(3，5-二羥基苯4017基)十四烷(bisnorstriatal)3301，8-二(2，4-二羥基7424苯基)辛烷表6(續(xù))由鹽水小蝦生物測定獲得的Lc50值分子量化合物L(fēng)C50μMμg/ml3581，10-二(2，4-二羥基3713苯基)癸烷3721，11-二(2，4-二羥基＞25＞9.3苯基)十一烷3861，12-二(2，4-二羥基145.4苯基)十二烷3861，10-二(2，4-二羥基-3＞25＞9.7-甲基苯基)癸烷1944-己基間苯二酚62122364-壬基間苯二酚102.42784-十二烷基間苯二酚8.82.4表6(續(xù))由鹽水小蝦生物測定獲得的Lc50值分子量化合物L(fēng)C50μMμg/ml1805-戊基間苯二酚＞100＞18(olivetol)2365-壬基間苯二酚＞100＞182502-甲基-5-壬基8.32.1間苯二酚2745-癸基間苯二酚54152925-十三烷基間苯二酚2.80.80(grevillol)3485-十七烷基間苯二酚＞100＞183082，4-二羥基-6-壬基2.60.8苯甲酸乙酯表6(續(xù))由鹽水小蝦生物測定獲得的Lc50值分子量化合物L(fēng)C50μMμg/ml4663，5-二溴-2，4-二羥0.780.36基-6-壬基苯甲酸乙酯3222，4-二羥基-6-癸基2.30.75苯甲酸乙酯4803，5-二溴-2，4-二羥0.780.37基-6-癸基苯甲酸乙酯3246-十二烷基-7-羥基＞25＞8.1-4-甲基香豆素328奇果菌素2.30.75328新奇果菌素289.04245，7，2′，6′-四羥基-＞100＞428-熏衣草基黃烷酮表6(續(xù))由鹽水小蝦生物測定獲得的Lc50值分子量化合物L(fēng)C50μMμg/ml414鬼臼毒3.81.6*(5.8)(2.4)溶劑二甲基亞砜(DMSO)11％v/v*LC50是用Meyer等(Plantamedica(1982)，45，31-34)的方法測定討論在本生物測定中，試驗化合物的LC50估計值表明其對鹽水小蝦的毒性。通過觀察表6中所列的μM而不是μg/ml濃度，可更好地比較其效能。具有某些烷基鏈長度的簡單烷基苯酚是很毒的。與所測量的所有化合物中活性最大的1-(2-羥基苯酚)-12(4-羥基苯酚)十二烷(LC50＝0.054μM)相比較，所測量的烷基苯酚中活性最大的是4-癸基苯酚(LC50＝0.27μM)。發(fā)現(xiàn)酮基苯酚的毒性比簡單的烷基酚高，如，4-壬?；椒?LC50＝0.10μM)。除5-十三烷基間苯二酚(gr-evillol)(LC50＝2.8μM)具有中等毒性之外，4-和5-烷基間苯二酚呈低的毒性。α，ω-二羥基苯烷烴，如1，10-二(2-羥基苯基)癸烷(LC50＝1.9μM)具有中等毒性。1，10-(2-羥基-4-甲基苯基)癸烷(LC50＝14μM)和在苯基上有甲基的其它物質(zhì)的毒性降低。α，ω-雙間苯二酚烷烴，包括Striatol(LC50＝11μM)，bisnor-striatol(LC50＝40μM)和1，10-二(2，4-二羥基苯基)癸烷(LC50＝37μM)顯示相當(dāng)?shù)偷亩拘?。在奇果菌素和新奇果菌素之間存在著顯著不同的毒性(分別為LC50＝2.3μM和LC50＝28μM)。新奇果菌素比奇果菌素約弱10倍。另一方面。這兩個化合物的對Ca2+-ATP酶的抑制作用都較強并且是一樣的(奇果菌素(IC50為22.5μM而新奇果菌素的IC50＝23.3μM)。為了檢查生物測定結(jié)果是否類似于Meyer等中所用的那些化合物，對鬼臼毒進行了試驗。該研究中LC50為3.8μM，合理地接近于Meyer等測定的LC50值5.8μM。權(quán)利要求1.式(I)化合物或其可藥用衍生物在制備抑制Ca2+-ATPase酶用的藥物中的用途其中，Ar是芳環(huán)系，它含有一個或多個以任意取代或不取代的苯基環(huán)，該苯基環(huán)可以是不與其它環(huán)連接或稠合的，也可以是任意地與一個或多個其它任意取代或不取代的苯基環(huán)或者與一個或多個5或6元的、任意地被取代或不取代的雜環(huán)(其中雜原子是氧)連接或稠合；和其中的環(huán)系含有1-4個苯基環(huán)，和其中Ar可以通過基團X與另一個Ar連接，其中Ar是獨立選擇的；其中的X可以是任意地取代或不取代的C1-20亞烷基、C2-20亞烯基或C2-20亞炔基；R是氫；C1-20烷基、C2-20鏈烯基、C2-20鏈炔基、C2-20鏈烷基、C2-20鏈烯酰基、C2-20鏈炔?；?，它們各自可以被取代或不取代；R1獨立地選自氫；任意取代或不取代的C1-12烷基、C2-12鏈烯基、C2-12鏈炔基；-COOR′、-NR′R′、鹵素、-OR′、-COR′、-CONR′R′、＝O、-SR′、-SO3R′、-SO2NR′R′、-SOR′、SO2R′、NO2、-CN、苷、甲硅烷基；其中的R′獨立地為氫；各自任意地被取代或不取代的烷基、鏈烯基或鏈炔基；和其中兩個基團R1可以連接在一起；其中任意的取代基可以是一個或多個獨立地選自下列基團的取代基C1-10烷基、C2-10鏈烯基、C2-10鏈炔基；-COOR″、-NR″R″、鹵素、-OR″、-COR″、-CONR″R″、SR″、=O、-SO3R″、-SO2NR″R″、-SOR″、SO2R″、-NO2、-CN；其中R″獨立地為氫、烷基、鏈烯基或鏈炔基；n＝1、2或3m＝1、2、3或4。2.權(quán)利要求1的用途，其中的酶是血漿膜Ca2+-ATPase。3.權(quán)利要求1定義的式(I)化合物在制備治療或預(yù)防心血管疾病用的藥物中的用途。4.權(quán)利要求1、2或3的用途，其中式(I)化合物是式(V)化合物或式(VI)化合物。5.權(quán)利要求1、2或3的用途，其中式(I)化合物是5，7，2′，6′-四羥基-8-熏衣草烷基黃烷酮、5，7，6′-三羥基-8-熏衣草烷基黃烷酮，5，2′，6′-三羥基-8-熏衣草烷基-7-甲氧基黃烷酮或其可藥用的衍生物。6.式(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)化合物或其可藥用的衍生物其中，l＝1、2或3r＝7-14，其中l(wèi)＝18-16，其中l(wèi)＝2或3R2是(1)2-羥基(2)2-羥基-4′-羥基(3)2-羥基-3-甲基(4)4-羥基-3-甲基(5)2，4-二羥基(6)3，5-二羥基-4-甲基(7)2，6-二羥基-4-甲基(8)2，4-二羥基-3-甲基(9)3-二羥基-4-甲基條件是(1)當(dāng)R2是2-羥基并且1＝1時，r不是7-10，和(2)當(dāng)1＝3且R2是3，5-二羥基-4-甲基時，n不是14，和(3)當(dāng)1＝2且R2是2-羥基-3-甲基時，n不是10，和(4)當(dāng)1＝2且R2是2，4-二羥基時，r不是8-10和13，和(5)當(dāng)1＝2且R2是4-羥基-3-甲基時，r不是10；其中s＝8-16其中t＝6-15其中p＋q＝12其中p＋q＝12.7.權(quán)利要求6所定義式(II)化合物的制備方法，包括(a)如果1＝1且R2是OH，則(i)如下用合適的試劑處理相應(yīng)的二酸，得到酰二氯(ii)如下用苯酚處理相應(yīng)的酰二氯(iii)如下重排二酰基(iv)然后還原?；?，得到式(II)化合物；(b)如果1＝2，R2是OH，則(i)用氯化鋅和間苯二酚處理相應(yīng)的二酸；和(ii)然后還原?；?，得到式(II)化合物；(c)如果1＝2，R2是2-羥基-3-甲基，則進行上述(a)步驟(i)-(iv)，只是在(ii)中用鄰甲酚代替苯酚；(d)如果1＝2且R2是3-羥基-4-甲基，則(i)將下式相應(yīng)的二酮化合物硝化，得到相應(yīng)的二-3-硝基化合物(ii)還原二-3-硝基化合物得二-3-氨基化合物，然后(iii)進行重氮化和水解，得到二-3-羥基化合物(iv)然后還原酮基，得到所需的二-3-羥基化合物；(e)如果1＝3且R2是2，6-二羥基-4-甲基(i)用LDA處理下式化合物得到二價離子，然后(ii)用下式的所需被護鏈烷醛進行處理得到(iii)脫水、脫羧化，然后還原，得到下式的中間體化合物(iv)氧化，得到(v)然后用步驟(i)的二價陰離子處理，得到(vi)脫水、脫羧化，然后脫保護，并還原，得到所需的產(chǎn)物；(f)如果1＝3且R2是3，5-二羥基-4-甲基，則(i)在四氫呋喃和六甲基磷酰胺(HMPA)中用二異丙基酰胺鋰(LDA)處理α-N，N-二甲基氨基-α-氰基-(3，5-二甲氧基-4-甲基)亞芐基，得到陰離子，然后(ii)用α，ω-二溴烷烴處理，得到(iii)與30％草酸水溶液一起回流，得到相應(yīng)的二?；衔?iv)還原?；?v)然后在乙酸中用溴化氫脫甲基，得到式(II)化合物；(g)如果1＝3，且R2是2，4-二羥基-3-甲基，則(i)按(b)中的步驟(i)和(ii)進行，只是在(i)中用2-甲基間苯二酚代替間苯二酚；(h)如果1＝2且R2是4-羥基-3-甲基，則(i)在多磷酸存在下，用鄰用酚處理相應(yīng)的二酸，得到相應(yīng)的二?；衔?ii)然后還原?；?，得到式(II)化合物。8.權(quán)利要求6所定義的式(III)化合物的制備方法，該方法包括(i)用合適的試劑處理相應(yīng)的二酸，得到酰二氯(ii)用2-萘酚處理相應(yīng)的酰二氯，然后(iii)重排二?；?，和(iv)然后還原?；?，得到式(III)化合物。9.權(quán)利要求6所定義的式(IV)化合物的制備方法，該方法包括在酸催化劑存在下，用乙酰乙酸乙酯處理4-烷基間苯二酚，得到式(IV)化合物。10.抑制患者Ca2+-ATPase酶作用的方法，該方法包括給患者施用權(quán)利要求1所定義的式(I)化合物。11.權(quán)利要求10的方法，用于抑制血漿膜Ca2+-ATPase。12.治療或預(yù)防患者心血管疾病的方法，該方法包括給患者施用權(quán)利要求1所定義的式(I)化合物。13.權(quán)利要求10、11或12的方法，其中式(I)化合物是式(V)化合物或式(VI)化合物。14.藥物制劑，該制劑含有式(II)、(III)、(IV)、(V)或(VI)化合物或其可藥用的衍生物以及可藥用載體。15.藥物制劑，該制劑含有5，7，2′，6′-四羥基-8-熏衣草烷基黃烷酮、5，7，6′-三羥基-8-熏衣草烷基黃烷酮、5，2′，6′-三羥基-8-熏衣草烷基-7-甲氧基黃烷酮或其可藥用的衍生物以及可藥用的載體。全文摘要式(I)化合物、其可藥用衍生物在制備用于抑制Ca文檔編號A61K31/365GK1124922SQ94192317公開日1996年6月19日申請日期1994年6月3日優(yōu)先權(quán)日1993年6月3日發(fā)明者巴茲爾·D·魯弗格里斯,科林·C·杜克,李鉗申請人:悉尼大學(xué)